黑羽番鸭PRL、PRLR基因序列分析及表达规律研究

催乳素(Prolactin,PRL)由动物垂体前叶分泌,与其受体(Prolactin receptor,PRLR)相结合才能作用于靶细胞。为了解PRL与PRLR基因在黑羽番鸭不同繁殖阶段各组织内的时空表达规律,利用RACE扩增方法获得了PRL与PRLR基因的CDS区序列,同时应用荧光定量与免疫组化相结合的方法,对产蛋前期、产蛋期、就巢期的黑羽番鸭垂体、卵巢、子宫中PRL与PRLR基因的表达量进行了比较分析。结果显示:PRL与PRLR基因序列在多种禽类中高度同源;PRL基因在垂体、卵巢、子宫中m RNA的表达具有明显的空间特异性,PRL基因在垂体中表达量最高,极显著高于卵巢和子宫中的表达量(P0.01),这种趋势贯穿产蛋前期、产蛋期和就巢期。PRLR基因在不同时期各组织内m RNA的表达具有明显的时空特异性。PRLR基因的表达量在垂体、卵巢中的表达量普遍较低,子宫中的表达量最高。PRLR基因在不同时期垂体和卵巢中的表达量没有明显的差异(P0.05),而子宫中的表达量在就巢期显著高于产蛋前期与产蛋期(P0.05)。     

皖西白鹅催乳素受体基因表达特点的研究

采用荧光定量PCR法,研究了皖西白鹅催乳素受体基因(prolactin receptor,PRLR)在产蛋不同时期及生殖轴不同组织mRNA的表达特点。结果表明,在垂体、下丘脑和卵巢组织中,皖西白鹅产蛋前期PRLR表达水平较低,至产蛋期降至最低,抱窝期上升至极高水平,休产期再次下降至较低水平,且各组织均表现出相似的规律,但卵巢中的表达量相对较高;就巢期间,在就巢前、中、后期,PRLR mRNA表达量在各组织呈现不同的变化规律,垂体组织中表达量呈"V"形变化,在中期前下丘脑中PRLR mRNA维持稳定,到后期有所下降,卵巢中表达量呈梯形下降。PRLR mRNA表达量在不同周期及不同组织中的变化规律反应了PRLR对皖西白鹅就巢的影响,PRLR对鹅就巢的调控可能在转录时期已经开始。     

皖西白鹅繁殖期求偶、交配、产蛋行为研究

本实验旨在研究鹅的求偶、交配与产蛋行为学,以皖西白鹅为研究对象,组建多父本家系(24♂+96♀),为科学选配、提高皖西白鹅生产力提供理论依据。采用观察记录法比较分析不同年龄(1、3年龄)皖西白鹅求偶行为、交配行为、产蛋之间的差异。结果表明:鹅的求偶方式主要分为公鹅主动求偶、母鹅主动求偶以及公母鹅相互求偶,其中公鹅主动求偶是最主要的方式,年龄对于皖西白鹅的3种求偶方式没有影响,但年龄对皖西白鹅的产蛋和交配行为有显著影响;3年龄母鹅产蛋性能高于1年龄母鹅(P<0.05),1年龄鹅交尾频次大于3年龄鹅(P<0.05)。综上,年龄是影响皖西白鹅繁殖行为的重要因素之一,对其交尾和产蛋行为有显著影响,但对求偶、爬跨行为没有显著影响。     

产蛋期和就巢期峨眉黑鸡血清部分生化指标及生殖激素水平的变化

为探讨产蛋期和就巢期峨眉黑鸡生理变化规律和就巢调控的内分泌机制,试验分别选取10只产蛋期和10只就巢期峨眉黑鸡作为研究对象,通过测定血清生化指标、矿物质元素以及内分泌激素水平,对比分析产蛋期与就巢期各指标的差异。结果显示:就巢期鸡血清中总胆固醇(TC)、总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)以及矿物元素(Ca、P)含量显著低于产蛋期(P0.05),甘油三酯(TG)和Fe含量极显著低于产蛋期(P0.01),葡萄糖(Glu)含量显著高于产蛋期(P0.05);就巢期免疫球蛋白IgM和IgG含量极显著低于产蛋组(P0.01);内分泌激素方面,就巢期血清促卵泡激素(FSH)含量显著高于产蛋期(P0.05),雌二醇(E_2)、促黄体系(LH)、促性腺激素释放激素(GnRH)、孕酮(P4)含量低于产蛋期(P0.05),催乳素(PRL)、血管活性肠肽(VIP)含量高于产蛋期(P0.05)。研究表明,鸡就巢期采食量抑制会导致相关营养性血清生化指标显著降低,机体免疫力下降。     

新疆伊犁鹅繁殖周期生殖激素变化及卵巢卵泡发育规律的研究

为探究新疆伊犁鹅繁殖周期中血浆主要生殖激素、卵巢形态及卵泡发育的变化规律,试验以健康状况良好、体重相近的2岁伊犁鹅为试验对象,分别在产蛋期、就巢期及休产期各随机选取32只,采集1次血样,测定激素水平;在各时期分别选取5只采集卵巢组织,观测卵巢及卵泡发育情况。结果表明,在产蛋期,伊犁鹅的GnRH分别极显著高于就巢期和休产期16.78%和58.29%（P<0.01）;PRL显著低于就巢期13.00%（P<0.05）,极显著高于休产期28.94%（P<0.01）;FSH高于就巢期6.98%（P>0.05）,极显著高于休产期21.12%（P<0.01）;LH极显著低于就巢期8.38%（P<0.01）,极显著高于休产期16.84%（P<0.01）;E₂水平分别极显著高于就巢期和休产期29.80%和112.40%（P<0.01）;P₄水平分别极显著高于就巢期和休产期28.89%和30.34%（P<0.01）。产蛋期伊犁鹅的卵巢体积和重量均极显著大于就巢期和休产期（P<0.01）。产蛋期伊犁鹅成熟卵泡与就巢期和休产期相比明显较大,次级卵泡数量较多,初级卵泡数量较少;就巢期卵巢上生长及成熟卵泡发生闭锁,颗粒胞层收缩,向内凹陷,胞质出现空腔,各级卵泡出现萎缩;与就巢期相比,休产期卵巢上卵泡胞质空腔变大,向内凹陷程度进一步加深,大量原始卵泡均匀排列。由此可见,在产蛋期,伊犁鹅的GnRH、E₂、LH反应活跃,对卵巢卵泡发育起主导作用;在就巢期,PRL、LH维持较高的分泌水平,协同维持就巢。     

鹅FAR1基因克隆与表达分析

为探讨FAR1在不同等级卵泡和不同就巢时期卵泡中的表达规律,实验通过RT-PCR、RACE技术克隆FAR1基因mRNA序列,并用RT-qPCR检测浙东白鹅不同等级卵泡以及不同就巢时期卵泡的FAR1表达。结果表明:FAR1 mRNA包含83 bp的5'UTR,1 557 bp的开放阅读框(ORF)和229 bp的3'UTR,共编码518个氨基酸;系统进化树分析显示,浙东白鹅与鸭、鸡三者聚为一类;RT-qPCR检测显示,等级卵泡中FAR1表达量显著高于等级前卵泡(P0.05),但F4、F5等级卵泡低于卵巢组织表达量,产蛋期FAR1表达量显著高于就巢期(P0.05)。因此推测,FAR1基因与鹅生殖调控密切相关,不仅参与了鹅卵泡发育,且在产蛋期高表达。     

鹅催乳素基因外显子2变异及其遗传效应

动物垂体前叶分泌的催乳素(Prolactin,PRL)具有广泛的生理效应,在家禽中与就巢、产蛋等繁殖性能有重要关联.本试验以皖西白鹅和莱茵鹅作为研究素材,运用PCR-SSCP法检测鹅PRL基因外显子2的单核苷酸变异并分析了变异的遗传效应.检测发现在皖西白鹅中存在C196T碱基突变,在莱茵鹅群体发现C170T碱基突变.关联分析结果表明,2个品种中的PRL基因外显子2突变均对鹅的开产蛋质量有显著(P<0.05)影响.     

浙东白鹅催乳素受体基因的克隆及其表达特点的研究

本研究克隆了浙东白鹅催乳素受体基因（PRLR）的部分序列,并应用荧光定量PCR技术研究了浙东白鹅在产蛋期、就巢期和恢复期时PRLR基因在下丘脑、垂体和卵巢中的表达特点,结果表明,浙东白鹅PRLR基因的表达量在产蛋期、就巢期和恢复期差异显著（P〈0.05）,就巢期表达量最高,产蛋期次之,恢复期表达量最低。对不同组织PRLR的表达量分析,垂体最多,其次是下丘脑,卵巢中的表达量最低,垂体与卵巢中的表达量、卵巢与下丘脑的表达量均有极显著的差异（P〈0.01）,垂体与下丘脑中的表达量差异不显著（P〉0.05）。     

鹅不同繁殖时期GnRH和GnIH基因表达和激素浓度变化分析

旨在研究GnRH和GnIH基因和激素在鹅繁殖过程中的重要作用,本研究以产蛋性能差异显著的四川白鹅和溆浦鹅为试验材料,利用Real-time RCR方法检测产蛋前期、产蛋期和休产期两种鹅的下丘脑、垂体和卵巢组织中GnRH和GnIH mRNA的表达量;利用放射性免疫和酶联免疫吸附测定法测定血清中的GnRH和GnIH激素变化情况。结果表明:GnRH和GnIH基因在四川白鹅和溆浦鹅的下丘脑、垂体和卵巢组织中均有表达;产蛋前期和产蛋高峰期的下丘脑和卵巢组织中,四川白鹅的GnRH mRNA表达量显著(P0.05)或极显著(P0.01)高于溆浦鹅,在产蛋高峰期和休产期四川白鹅GnRH激素浓度也极显著(P0.01)或显著高于(P0.05)溆浦鹅,在高峰期和休产期四川白鹅GnRH血清浓度分别为51.13和51.10pg·mL-1,溆浦鹅分别为49.52和49.94pg·mL-1;GnIH在两种鹅的变化比较一致,仅在产蛋高峰期,四川白鹅下丘脑组织中GnIH mRNA表达水平极显著低于(P0.01)溆浦鹅,而两种鹅之间的GnIH激素在各个时期均无显著差异。这提示随着繁殖阶段的改变,在调控两种鹅产蛋性能的作用过程中GnRH可能较GnIH发挥着更为重要的作用,为进一步研究鹅繁殖分子机制奠定基础。     

太湖鹅繁殖性能与肉质特性研究

为挖掘和利用太湖鹅遗传资源,利用太湖保种场核心群对太湖鹅的繁殖性能进行测定,在相同饲养管理条件下比较太湖鹅与四川白鹅、皖西白鹅、豁眼鹅、扬州鹅的肉质特性差异。结果表明:太湖鹅3%开产日龄188d,66周入舍母鹅产蛋76.3个,52周龄蛋重142.7g,种蛋受精率91.2%,受精蛋孵化率90.1%;太湖鹅胸肌肉水分含量与四川白鹅差异显著(P<0.05),与其它品种差异不显著,太湖鹅胸肌剪切力、肉色、系水力、pH值、粗蛋白和粗脂肪含量与其它品种间差异均不显著;太湖鹅肌纤维密度显著大于四川白鹅、豁眼鹅和扬州鹅(P<0.05),但显著小于皖西白鹅(P<0.05);太湖鹅肌纤维直径显著小于其它品种(P<0.05)。研究表明,太湖鹅经过进一步选育可以作为优质肉鹅配套系的理想母本。     

大豆异黄酮对产蛋后期蛋鸡卵巢机能的影响

本试验旨在研究大豆异黄酮对产蛋后期蛋鸡卵巢机能是否有改善作用。选取70周龄左右的海兰褐蛋鸡450只,随机分为3组,每组5个重复,每重复30只鸡。对照组饲喂基础饲粮,试验组分别饲喂在基础饲粮中添加10和15 mg/kg大豆异黄酮的试验饲粮。试验期28 d。结果表明:1)饲粮添加大豆异黄酮显著提高了产蛋率(P0.05),对黄体生成素、卵泡刺激素、孕酮分泌量影响均不显著(P0.05),但15 mg/kg添加组显著提高了雌二醇、β-内啡肽和卵黄蛋白原分泌量(P0.05)。2)与对照组相比,10 mg/kg大豆异黄酮添加组对等级卵泡、小黄卵泡、大白卵泡数量以及各级卵泡的闭锁率影响不显著(P0.05),但15 mg/kg大豆异黄酮添加组显著提高各卵泡数量(P0.05),且极显著提高大白卵泡和初级卵泡数量(P0.01),同时极显著降低小黄卵泡、大白卵泡、次级卵泡的闭锁率(P0.01)。3)15 mg/kg大豆异黄酮添加组极显著提高血浆和卵巢中超氧化物歧化酶活力(P0.01),显著提高肝脏中超氧化物歧化酶活力(P0.05)。由此可见,大豆异黄酮可提高产蛋后期蛋鸡的产蛋率,改善卵巢机能,其原理可能与提高雌二醇和β-内啡肽的分泌量和机体抗氧化性相关。不同剂量大豆异黄酮作用效果不一样,本研究中以15 mg/kg效果优于10 mg/kg。     

霍尔多巴吉鹅与皖西白鹅杂交的试验研究

为了解皖西白鹅与霍尔多巴吉鹅杂交后代的外貌特征和生产性能,选用皖西白鹅公鹅与霍尔多巴吉鹅母鹅进行杂交试验。结果表明,杂交鹅体型多数与霍尔多巴吉鹅一致,少数与皖西白鹅一致;成年母鹅背部有少量灰毛,其余为白色,公鹅的羽毛全部为白色。25%的公鹅头部明显有肉瘤,但比皖西白鹅的肉瘤小,另有25%的公鹅头部有肉瘤但较小,其余公鹅头部无肉瘤;母鹅头部均无肉瘤。杂交鹅1-70日龄平均增重4 795.91 g,与皖西白鹅和霍尔多巴吉鹅相比分别提高了12.70%和8.68%,差异显著（P〈0.05﹚;杂交鹅的平均产蛋量（40.4枚/只）、种蛋的受精率（90.0%）和受精蛋的孵化率（91.0%）都高于皖西白鹅,且差异显著（P〈0.05﹚,但与霍尔多巴吉鹅相比产蛋量有所下降,种蛋的受精率和受精蛋的孵化率相近。     

高、低产双黄蛋高邮鸭卵巢组织差异分析

本试验以高邮鸭为研究对象,选择双黄蛋高、低产组高邮鸭各6只,颈动脉放血致死后立即采集下丘脑、垂体、肝脏、输卵管及卵巢组织,将采集的卵巢组织通过组织切片、HE染色观察卵巢形态结构,并对双黄蛋高、低产组高邮鸭卵巢中等级卵泡进行统计对比;进行特异性标记蛋白卵泡刺激素受体（FSHR）免疫组化染色,观察两组高邮鸭卵巢阳性细胞表达情况及卵巢颗粒细胞分布;同时提取下丘脑、垂体、肝脏、输卵管及卵巢组织RNA,采用实时荧光定量PCR技术检测FSHR基因的表达。结果显示,双黄蛋高产和低产组高邮鸭卵巢在组织结构及卵泡发育上存在明显差异,高产组卵巢上的卵泡繁密且发育良好,密布着众多小黄卵泡、大白卵泡及小白卵泡,各级卵泡大小差异明显;而低产组卵巢上的卵泡稀疏且发育较为迟缓,小黄卵泡、大白卵泡及小白卵泡数量较少。实时荧光定量PCR检测结果表明,高产组高邮鸭下丘脑、垂体、肝脏及输卵管中的FSHR基因表达量极显著高于低产组（P<0.01）,而卵巢中FSHR基因表达量在两组中差异不显著（P>0.05）。本试验结果表明,双黄蛋高、低产组高邮鸭的卵巢结构及卵泡发育存在显著差异,卵巢上的微环境可能是影响高邮鸭双黄蛋产蛋性能的影响因素。     

能量对蛋鸡卵巢促卵泡素受体mRNA表达及产蛋率的影响

为了探讨不同日粮能量水平对蛋鸡性成熟过程中卵巢促卵泡素受体(FSHR)mRNA表达及产蛋率的影响,试验选取360只体莺相近的8周龄海兰褐壳蛋鸡,采用单因素随机试验,随机分为5个组,每个组4个重复,每重复18只鸡.在蛋鸡采食其他营养成分相同的情况下,配制不同梯度的能量饲料,采用相对定量反转录-聚合酶链反应方法,测定蛋鸡性成熟过程中卵巢FSHR mRNA表达量.结果表明:高能组卵巢FSHR mRNA的表达量呈先升后降的趋势;对照组、低能组随周龄的增加鸡卵巢FSHR mRNA表达量逐渐增加.14周龄,低能Ⅱ组卵巢FSHR mRNA表达量显著低于其他4组(P<0.05);18周龄,对照组鸡卵巢FSHR mRNA表达量显著高于低能Ⅱ组(P<0.05),除对照组外的其他4组间差异不显著(P>0.05);22周龄,对照组与高能Ⅱ组和低能Ⅰ组间没有差异(P>0.05),却显著高于高能Ⅰ组和低能Ⅱ组(P<0.05).鸡22周龄卵巢FSHR mRNA表达量与22、28周龄产蛋率呈极显著正相关(P<0.01),与35周龄产蛋率呈显著正相关(P<0.05),而与46周龄产蛋率无显著相关(P>0.05).结果提示,适当的能量水平可以提高FSHR mRNA的表达,进而提高产蛋率.     

不同周龄蛋鸡卵巢机能及氧化还原状态的变化研究

本试验旨在研究不同周龄蛋鸡卵巢机能及氧化还原状态的变化规律。选择17周龄京红蛋鸡48只、78周龄京红蛋鸡24只,2只1笼为1个重复,分别饲养至36、48、97周龄采样。结果发现,随着周龄增大,蛋鸡卵巢机能衰退,表现为卵巢内等级卵泡、小黄卵泡、初级卵泡和次级卵泡数量显著减少(P<0.05),小黄卵泡、大白卵泡和次级卵泡闭锁率显著增加(P<0.05);血清中黄体生成素和孕酮的含量均呈现降低趋势,但差异不显著(P>0.05);随着周龄增大,蛋鸡机体氧化损伤加剧,表现为肝脏、卵巢中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性均显著降低(P<0.05),丙二醛(MDA)水平显著升高(P<0.05)。结果表明,蛋鸡卵巢机能衰退可能与体内(肝脏、卵巢和血清)氧化损伤加重有关。     

AA~ 种鸡产蛋率、受精率、孵化率的相关分析

对AA 肉用种鸡产蛋周(1～35周)的产蛋率、受精率、孵化率进行跟踪观测并对3个指标进行相关性分析。结果表明:产蛋率与受精率相关系数为0.864(P<0.01);产蛋率与孵化率相关系数为0.900(P<0.01);受精率与孵化率相关系数为0.992(P<0.01),产蛋率与受精率,产蛋率与孵化率,受精率与孵化率三者都呈较强正相关。其中受精率与孵化率相关性最强,产蛋率与孵化率相关性次之,产蛋率与受精率相关性较弱。     

产蛋期皖西白鹅生殖系统的形态学观察

研究采用大体解剖法、石蜡切片法、HE染色法等对20只产蛋期的皖西白鹅母鹅生殖系统的形态结构和组织结构进行了观察,结果如下:皖西白鹅母鹅的生殖系统包括卵巢和输卵管两部分,仅左侧发育正常,右侧早已退化,卵巢表面被覆生殖上皮,下方是白膜,其实质由皮质和髓质组成,皮质内含有不同发育阶段的卵泡和萎缩卵泡,大卵泡突出了卵巢表面,卵泡无卵泡腔,也无卵泡液,排卵后不形成黄体。输卵管分为漏斗部、蛋白分泌部、峡部、子宫部和阴道部5个部分,各段均由黏膜层、肌层和外膜构成,黏膜上皮有纤毛,固有层内有腺体和淋巴组织,无黏膜肌层,肌层由内环外纵两层平滑肌组成,外膜为浆膜。     

不同季节条件下笼养与平养蛋鸭生产性能的比较分析

本试验以山麻鸭为研究对象,比较分析在不同季节条件下笼养与平养蛋鸭生产性能的差异,以筛选出不同季节条件下蛋鸭适宜的饲养方式.结果表明,春季,平养组的产蛋率与总蛋重极显著高于笼养组(P<0.01),而平养组的料蛋比和畸形蛋率极显著低于笼养组(P<0.01);夏季,笼养组的产蛋率显著高于平养组(P<0.05),而笼养组的畸形蛋率极显著低于平养组(P<0.01),但笼养组的总蛋重与料蛋比与平养组相比差异不显著(P>0.05);秋季,笼养组的产蛋率极显著高于平养组(P<0.01),而笼养组的料蛋比显著低于平养组(P<0.05),但笼养组的总蛋重与畸形蛋率与平养组相比差异不显著(P>0.05);冬季,平养组的产蛋率和总蛋重分别显著和极显著高于笼养组(P<0.05;P<0.01),而平养组的畸形蛋率极显著低于笼养组(P<0.01),但平养组的料蛋比与笼养组相比差异不显著(P>0.05).由此可知,在春、冬季节对山麻鸭采用平养方式,可提高蛋鸭的产蛋性能;夏、秋季节对山麻鸭采用笼养方式,有利于蛋鸭生产性能的发挥.     

不同产蛋水平肉种鸡繁殖性能、肠道组织形态、卵巢功能和盲肠微生物区系差异研究

本研究旨在比较不同产蛋水平肉种鸡繁殖性能、肠道组织形态、卵巢功能和盲肠微生物区系的差异。试验选用5000只同栋舍37周龄的爱拔益加父母代肉种鸡,记录2周内每只肉种鸡的产蛋率、受精率和孵化率,分别筛选出高和平均2种不同产蛋水平的肉种鸡各90只,设为2个组,分别为平均产蛋率组[AR组,产蛋率(79.34±0.49)%]和高产蛋率组[HR组,产蛋率(90.03±0.34)%],每组10个重复,每个重复9只鸡。预试期2周,正试期6周。结果表明:与AR组相比,HR组肉种鸡产蛋率和入孵蛋孵化率显著升高(P<0.05),血清谷丙转氨酶活性显著降低(P<0.05),空肠绒毛高度显著降低(P<0.05),回肠隐窝深度显著升高(P<0.05),卵巢细胞凋亡率极显著降低(P<0.01),卵巢促凋亡蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(caspase 9)、卵泡发育相关蛋白骨形态发生蛋白受体1B(BMPR1B)、家鸡新型类催乳素(PRL?L)和转录因子GATA4表达水平显著升高(P<0.05),盲肠厚壁菌门(Firmicutes)和乳杆菌属(Lactobacillus)相对丰度显著升高(P<0.05),盲肠拟杆菌门(Bacteroidetes)和螺旋体门(Spirochaetes)相对丰度显著降低(P<0.05)。肉种鸡盲肠拟杆菌门相对丰度与卵巢BMPR1B和GATA4表达水平呈显著负相关(P<0.05),盲肠厚壁菌门相对丰度与卵巢BMPR1B、GATA4表达水平呈显著正相关(P<0.05),盲肠乳杆菌属相对丰度与卵巢caspase 9、BMPR1B、GATA4、PRL?L表达水平呈显著正相关(P<0.05),盲肠螺杆菌属(Helicobacter)相对丰度与卵巢GATA4表达水平呈极显著正相关(P<0.01)。综上所述,本试验结果表明,不同产蛋水平肉种鸡肠道组织形态、盲肠微生物区系和卵巢功能存在显著差异,盲肠厚壁菌门和乳杆菌属相对丰度与高繁殖性能密切相关。