家蝇体内猪繁殖与呼吸综合征病毒的初步分离与鉴定

为调查养猪场环境中家蝇携带猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)情况,2010年采集贵州某猪场家蝇样本,采用RT-PCR方法筛选阳性样本,接种Marc-145细胞分离培养病毒,对分离获得的家蝇样本的PRRSV Nsp2基因进行克隆和序列分析。针对PRRSV N基因家蝇样本扩增出377 bp的特异性片段,阳性家蝇样本接种的Marc-145细胞出现明显CPE现象,针对PRRSV Nsp2基因细胞培养物扩增出1064 bp的特异性片段,测序结果显示,家蝇样本的细胞培养物的PRRSV Nsp2基因片段与贵州猪场猪源PRRSV流行株相比具有较高的核苷酸同源性,高达97.1%~98.5%。从而初步推断家蝇也可能成为PRRSV携带者。     

华东地区部分猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒检测及其ORF5遗传变异分析

为了实时掌握猪场PRRSV的感染情况,对其遗传变异趋势进行跟踪分析,本文利用RT-PCR方法对2011—2013年采自苏北地区和上海浦东地区部分猪场疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)发病猪的血清进行PRRSV检测,并对ORF5基因进行扩增测序,分析PRRSV ORF5的遗传变异情况。试验共采集样本328份,其中苏北某猪场258份,检测阳性样本为113份,浦东地区70份,阳性样本17份。每次检测选择一个样品进行ORF5测序分析。结果表明,本文所获得的15株分离株的ORF5序列与美洲型毒株氨基酸同源性为80.2%⁹9%,与欧洲型毒株同源性为53.4%99%,与欧洲型毒株同源性为53.4%⁶0.1%,均属于美洲型。进化树分析表明,有12个ORF5序列与高致病性PRRSV参考毒株同缘关系较近,其中包括苏北某猪场10份及浦东某猪场2份。结果显示,两猪场均存在PRRSV感染情况,且高致病性PRRSV与经典PRRSV并存,病毒ORF5中和表位都有变异发生,PRRSV的分布没有呈现明显的地域性差异。本试验为进一步研究华东地区猪场PRRSV感染情况及分子流行病学特征积累了有益资料。     

鼠作为猪繁殖与呼吸综合征病毒媒介动物的基本特性

为了解家鼠在PRRSV传播中的特点和作用，进而初步评估环境生物传播PRRSV的潜在风险。捕捉猪场家鼠，收集鼠肠道粪便，提取RNA后采用RT-PCR技术扩增PRRSV的NSP2、ORF5、NSP9、NSP10基因，然后与来源于同一猪场猪源PRRSV以及其他PRRSV代表株相应的基因进行生物学信息比较，并结合Swiss-Model和ProtScale等软件对其中主要差异基因编码蛋白的三维结构及理化特点做进一步分析。结果显示，鼠肠道粪便中的PRRSV NSP2、ORF5、NSP9和NSP10基因与来源同一猪场感染猪样本中相应的PRRSV基因同属于美洲型毒株，且与高致病性PRRSV GD株亲缘关系最近，但鼠源和猪源PRRSV的NSP2、ORF5、NSP9、NSP10之间有多个氨基酸的替换和缺失。尤其是主要差异基因NSP10所编码的NSP10蛋白，三维结构分析结果显示二者具有较高的相似性，主要由疏水性氨基酸组成，但它们的无规则卷曲区和腺苷三磷酸酶结构域的ATP结合位点在氨基酸组成存在差异。研究表明鼠肠道粪便中PRRSV NSP9、NSP10、NSP2和ORF5基因和来源于同一猪场感染猪样本中的P...     

规模化猪场PRRSV抗体水平监测与分析

为掌握江苏泰州周边地区PRRSV在猪群中的感染情况,应用ELISA方法对规模化猪场的445份血清样本进行猪繁殖与呼吸综合症(PRRS)抗体水平检测,结果显示不同阶段的猪群PRRSV抗体水平,其中仔猪PRRSV抗体阳性率最低,为34.1%,育肥猪群PRRSV抗体水平其次,母猪群PRRSV抗体阳性率最高,为63.5%,平均阳性率为48.3%。对10个不同猪场进行PRRSV抗体水平检测,结果显示血清抗体平均阳性率为55.87%,此结果为当地PRRSV的综合防治提供参考依据。     

2004-2009年河北省规模猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异分析

为了解河北省规模猪场PRRSV的变异情况,采用RT-PCR方法对2004-2009年采集的16个典型发病场的病料样本进行PRRSV Nsp2基因扩增、克隆和测序,利用DNA star软件分析所测序列。结果表明,从样本中扩增的16个Nsp2基因中,有8份均在第481位和533～561缺失30个氨基酸,有8份没有缺失。表明,危害河北省规模猪场的PRRSV已经发生了较大的变异,其中2004-2005年的属低致病性PRRSV毒株,2006-2007年的属高致病性PRRSV毒株,而2008-2009年这两种毒株在规模猪场中均存在。     

2016—2018年广西玉林市部分规模猪场猪繁殖与呼吸综合征病原检测与混合感染分析

为了解广西玉林市规模化猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）感染情况及其与猪瘟病毒（CSFV）、猪圆环病毒2型（PCV2）和猪伪狂犬病病毒（PRV）混合感染情况,采用RT-PCR/PCR方法,对2016—2018年采集自玉林市存栏母猪300头以上规模化猪场的661份临床健康猪血清样本和896份表现呼吸道症状和繁殖障碍发病猪只的组织样本,进行PRRSV病原检测,并对检出的PRRSV病原阳性样本进行CSFV、PCV2、PRV病原检测,并对结果进行统计分析。结果显示：2016—2018年收集的血清样本中,PRRSV病原阳性率分别为6.86%、19.33%和10.17%,场阳性率分别为25.00%、46.67%和40.00%;PRRSV血清阳性样本混合感染率分别为52.38%、65.22%和62.50%,以与PCV2、PRV混合感染为主。2016—2018年收集的病料组织样本中,PRRSV病原检出率分别为46.38%、48.24%和48.81%,场阳性率分别为42.11%、35.37%、37.10%;PRRSV病料阳性样本混合感染率分别为50.00%、52.99%和52.35%,同样以与PCV2、PRV混合感染为主。结果表明,广西玉林市规模猪场中PRRSV流行广泛且呈加重趋势,与PCV2和PRV等病原的混合感染较严重。结果提示,玉林市规模猪场应制定科学的免疫程序,加强这些疫病的综合防控。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及其分子流行病学分析

为了弄清2006年在我国南方一些猪场暴发的一种以高热、高发病率和高死亡率为特征的传染病的病因,我们从12个省市48个发病猪场采集临床样品进行了猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的分离鉴定和分子流行病学分析。结果显示从48个猪场样品中均检测出了PRRSV,通过完整的ORF5和部分Nsp2基因序列比较分析发现来自12个省市不同猪场的PRRSV高度同源,而且在Nsp2基因上都有两个相同位点的缺失;从分离的15株PRRSV中选择湖南分离株HuN4人工感染5头60日龄的健康猪,结果5头猪分别在7 d～21 d内全部死亡,感染猪的临床症状和现地所见十分相似。本次试验结果表明新出现的以Nsp2基因部分缺失为特征的PRRSV对猪是高致病性的,可能是2006年大部分猪场暴发"高热综合症"的主要病因。     

突发高热病猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒的检出及变异分析

某猪场突发猪高热病后,为确切诊断和弄清病原,采用Marc-145细胞分离病料中的病原,并通过血清中和试验、血凝试验、RT-PCR检测和变异毒株鉴定等方法进行病原鉴定,以及对其ORF7基因和NSP2部分基因开展序列分析。结果表明:从该猪场分离到了1株可使Marc-145细胞产生病变的病毒,其能与美洲型抗PRRSV血清特异性中和,而不与鸡红细胞凝集;RT-PCR检测扩增出了ORF7基因及NSP2部分基因片段;该病毒ORF7基因与PRRSV美洲型毒株VR2332的同源性为93.3%~99.5%,其系统进化树显示它们属同一个大分支;而NSP2基因编码蛋白序列与美洲型毒株VR2332及早期国内分离株比较存在30个氨基酸的缺失。结果说明该猪场高热病病原为高致病性PRRSV变异毒株,且与自2006年以来国内分离的高致病性PRRSV高度同源。     

甘肃省猪繁殖与呼吸综合征病毒流行毒株ORF5基因的遗传变异分析

为了解甘肃省地方猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)的感染情况，对2015-2020年采集的20个猪场332份疑似PRRSV感染猪的样品，首先进行血清学检测，然后通过RT-PCR方法开展病原检测，扩增PRRSV的ORF5基因；测序后利用DNA Star软件分析获得的ORF5基因及其编码的GP5氨基酸与国内外不同PRRSV毒株的遗传进化关系。血清学检测结果阳性率为93.07%,扩增获得的PRRSV ORF5基因，经核苷酸序列比对属于PRRSV美洲型，有NADC30-like毒株和NADC34 like毒株。结果表明，当前PRRSV不同流行毒株存在一定的遗传差异，为甘肃省PRRS防控提供了科学依据。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒贵州流行株GP5基因的RLFP分析

为对贵州省某养猪场猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)疑似病例进行确诊及分析其病原分子变异情况,采集该养猪场死亡猪病料样本进行猪繁殖与呼吸综合征病毒(PSSRV)的RT-PCR检测,并采用RLFP方法分析了现场流行毒株GP5基因的变异情况。结果表明,该猪场病猪样本中PRRSV的核酸检出率为100%,是由高致病性PRRSV变异毒株引起;RT-PCR扩增PRRSV贵州流行株GP5基因,经RLFP分析显示,流行株GP5基因呈1-3-3 PCR-RFLP模式;克隆测序后发现,贵州流行株GP5基因发生多个点突变,其中在第25、216、358、409和554位核苷酸的点突变,可导致一些酶切位点的丧失或显现。