UPLC/MS/MS测定动物尿液中9种β-受体激动剂残留量

本研究建立了动物尿液中9种β-受体激动剂（苯乙醇胺A、沙丁胺醇、特布他林、莱克多巴胺、克伦特罗、溴布特罗、马布特罗、西布特罗、喷布特罗）的液相色谱-串联质谱法（UPLC- MS/MS）。样品经醋酸铵为提取溶剂,固相萃取柱净化,用UPLC- MS/MS检测和确证,内标法定量。质谱分析采用电喷雾电离、正离子扫描、多反应监测模式。试验结果表明,9种兴奋剂在0.5～100μg/L范围内具有良好的线性,相关系数在0.995～0.999,检测限为0.1μg/L,定量限为0.2μg/L,9种兴奋剂的方法平均回收率为60.63%～94.12%,相对标准偏差在1.26%～14.74%。试验结果表明,该方法提取效果好,具有良好的灵敏度、回收率和重复性,能满足动物尿液中兴奋剂等兽药残留分析要求。     

液相色谱串联质谱测定动物肠衣中残留苯乙醇胺A

建立了高效液相色谱-串联质谱(HPLC/MS/MS)测定肠衣中的苯乙醇胺A残留的方法。肠衣样品经乙酸铵溶液提取酶解,MCX固相萃取柱净化,流动相溶解后HPLC/MS/MS进行检测。苯乙醇胺A标准曲线线性关系良好(r=0.999);回收率87.0%～93.5%,相对标准偏差为3.2%～8.4%;检出限0.2μg/kg,定量限0.25μg/kg。     

固相萃取-UPLC-MS/MS快速测定猪尿中的苯乙醇胺A

建立了-种固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法（SPE—UPLC—MS／MS）快速测定猪尿中苯乙醇胺A的方法。猪尿样品以莱克多巴胺-D,为内标,尿液经酸化后离心,上清液经OasisMCX固相萃取柱净化,超高效液相色谱-串联质谱法测定。苯乙醇胺A监测离子为m／z345〉150和m／z 345〉327。结果表明在0．2～5μg／L范围内苯乙醇胺A呈良好的线性关系,高中低浓度绝对回收率在80—110％,精密度小于15％,最低定量限0．2μg／L。本方法快速、简便,适于猪尿中苯乙醇胺A的残留测定。     

超高效液相色谱-串联质谱法快速测定禽蛋中氯霉素、氟苯尼考及其代谢物残留

建立了快速测定禽蛋中氯霉素、氟苯尼考及氟苯尼考胺的超高效液相色谱-串联质谱分析方法。禽蛋用乙腈提取后,再用正己烷液液分配除脂,浓缩后用超高效液相色谱分离,以乙腈和10%甲醇水为流动相进行梯度洗脱,MRM反应监测模式检测。结果表明在5-200μg/L的系列浓度范围内均呈良好线性关系,相关系数均大于0.999。氯霉素、氟苯尼考、氟苯尼考胺的检测限为0.5μg/kg,定量限为2.0 μg/kg,本方法在2μg/kg～20μg/kg添加浓度范围内平均回收率为60%～100%,精密度小于20%。该方法方便快捷、定性准确适于禽蛋中的氯霉素、氟苯尼考及氟苯尼考胺药物残留检测。     

苯乙醇胺A人工抗原的合成及鉴定

采用重氮化法将苯乙醇胺A分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联,制备免疫抗原苯乙醇胺A(PEAA)-BSA和检测抗原PEAA-OVA。经紫外扫描法和SDS-PAGE鉴定表明偶联成功,偶联比分别为15∶1、17.4∶1。用PEAA-BSA免疫BALB/c小鼠,采用间接ELISA法检测抗体效价,采用竞争ELISA法检测IC50值,获得了效价4.1×105以上、IC50值为0.2μg/L的多抗血清,证明合成了具有免疫原性的人工免疫原。     

超高效液相色谱测定猪配合饲料中苯乙醇胺A的研究

研究建立了超高效液相色谱(ultra performance liquid chromatography,UPLC)—二极管阵列检测器(PDA)测定配合饲料中苯乙醇胺A的方法。通过应用0.1%甲酸甲醇溶液提取、混合阳离子固相萃取净化及样品基质校正外标定量方法进行测量。在优化条件下,苯乙醇胺A在0.1~20.0 mg/kg浓度范围内线性关系良好,线性相关系数(R²)达到0.9945;在1.0、5.0、10.0 mg/kg等不同添加浓度下,方法回收率高于90.36%,变异系数低于5.98%;方法检测限为0.06 mg/kg,定量限为0.10 mg/kg。结果表明,该方法灵敏度高、精密度好、准确可靠且操作简单,能够满足配合饲料中苯乙醇胺A的测定需要。     

饲料中苯乙醇胺A测定方法的应用

对饲料中苯乙醇胺A采用ELISA试剂盒初筛,ELISA试剂盒提供的标准曲线范围为0.025~2.025ng/mL,饲料中苯乙醇胺A添加浓度在10.0~40.0μg/kg之间,回收率范围在74%~140%之间。采用液相色谱-质谱联用仪(LC-MS/MS)法测定苯乙醇胺A在0.01~0.50μg/mL范围内呈良好的线性关系,回收率为83%。结果表明采用ELISA试剂盒初筛操作简便,能减小工作量,但易出现假阳性;采用LC-MS/MS法测定操作复杂,是确证法,但容易污染仪器。建议先采用ELISA试剂盒初筛,检测为阳性的样品采用液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)加以确证。     

金黄色葡萄球菌肠毒素A胶体金定量检测方法的建立及应用

采用金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)免疫Balb/c小鼠,制备相应的单克隆抗体(m Ab),并以此为基础建立SEA胶体金检测方法,通过胶体金读数仪进行牛乳样品中SEA的定量分析。SEA胶体金试纸方法检测限为0.339μg/L,定量限为0.844μg/L,线性范围为1~16μg/L,相关系数R2=0.9933。采用配对t-检验分析,胶体金检测法与ELISA法无显著差异。     

磺胺二甲嘧啶药物残留ELISA检测试剂盒的研制及初步应用

本试验旨在采用重氮化法合成的免疫抗原通过免疫BALB/c小鼠进行融合,获得高特异、高灵敏度的单克隆抗体。在建立磺胺二甲嘧啶单克隆抗体(SM2 mAb)杂交瘤细胞株和阻断ELISA的基础上,初步研制出一种一步法检测磺胺二甲嘧啶(SM2)的ELISA快速检测试剂盒(SM2-Kit)。结果表明:SM2-Kit检测范围为0.5～40.5μg/L,检测时间为30 min,IC50为1.4μg/L,最低检测限达0.1μg/L。经大量现场试验,猪肉组织最低检测限为1μg/kg,猪饲料最低检测限为1μg/kg,猪尿最低检测限为1.8μg/L,牛奶最低检测限为1.5μg/L,测试的回收率平均在70%～110%。     

动物源食品中酰胺醇类药物及其代谢物残留检测超高效液相色谱-串联质谱法研究

建立了动物源食品中酰胺醇类药物(氯霉素CAP、甲砜霉素TAP、氟苯尼考FF)及其代谢物(氟苯尼考胺FFA)残留检测的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法。样品经氨化乙酸乙酯提取,正已烷脱脂,氨化乙酸乙酯反萃取,电喷雾正/负离子多反应监测(MRM)模式检测。四种药物在0.2~50μg/L的系列浓度范围呈线性相关,样品中CAP的检测限为0.1μg/kg,定量限为0.2μg/kg;TAP、FF、FFA检测限为0.5μg/kg,定量限为1.0μg/kg。在0.2~5μg/kg的添加浓度范围内平均回收均为80%~120%,变异系数均小于15%。结果表明该方法简单快速、灵敏度高、重复性好,适用于动物源食品中酰胺醇类及其代谢物残留检测。