两种检测精子活率方法的比较

精子活率是评价精液品质的一项重要指标,其在光学显微镜下的测定,操作简便、直观,仍为临床常规检查所应用。本试验就精子用伊红-苯胺黑染色法和中性红染色法两种精子活率的测定方法进行比较,以便选择一种快速又准确的方法。1材料与方法1.1材料1.1.1试剂:伊红Y、中性红染液均购自上海试剂三厂。伊红Y染液:用蒸馏水配制,浓度为0.15%;中性红染液:pH7.4PBS缓冲液配制,浓度为0.01%。1.1.2精液的采集和处理:精液采自宁夏隆德县某奶牛场。精液采集后放入37℃的恒温水浴箱内。借助光学显微镜将精液高倍稀释(以在光学显微镜下可以清楚看到精子轮廓…     

检测肉羊精子活率方法的比较

就精子加热法、伊红-苯胺黑染色法、中性红染色法3种精子活率的测定方法进行比较,以便找到一种快速又准确的方法。通过测定肉羊精液,结果表明,用以上3种方法测定精子活率,差异不显著。但在试验过程中发现,伊红染液浓度对精子活率有影响。中性红染色法能在光学显微镜下对精子进行形态描述与识别。     

2种检测精子活率方法的比较

<正>精子活率是评价精液品质的一项重要指标,其在光学显微镜下的测定,操作简便、直观,仍为临床常规检查所应用。本试验就精子用伊红-苯胺黑染色法和中性红染色法2种精子活率的测定方法进行比较,以便选择一种快速又准确的方法。     

精子活率的简易检测方法

精子活率是评价精液品质的一项重要指标，采用肉眼估测法、加热法、伊红-苯胺黑染色法、中性红染色法，其在光学显微镜下的测定，操作简便、直观，仍为临床常规检查所应用。     

培养液中不同浓度肝素对蓝狐精子体外获能的影响

采用上游法分离优化精子,以mTyrod's液作为基础培养液检测培养液中不同质量浓度肝素对蓝狐精子体外获能的影响,试验设4个肝素质量浓度:0,10,20,50 μg/mL,38.5℃、5%C02培养箱进行孵育,获能培养时间为6h.利用考马斯亮蓝染色法检测精子顶体反应率,伊红-苯胺黑染色法检测活精子比率,观测法检测精子活力...     

不同稀释液对蓝狐精子低温保存的影响

为探讨行之有效的精液保存方法,提高狐人工授精技术的效率,用4种稀释液对4只公蓝狐精液进行体外低温保存,采用伊红-苯胺黑法检测精子活率,低渗肿胀法检测精子质膜的完整性,考马斯亮蓝染色法检测精子的顶体状态。结果表明:低温保存时精子的活率、质膜的完整性、顶体的完整性明显比常温保存时比率高;氨基乙酸稀释液对精子的保存效果优于其他3种稀释液,精子活率为(63.62±2.47)%,质膜完整性为(57.00±3.17)%,顶体完整性为(65.30±2.48)%。     

公牛冻精品质检测方法比较

<正> 1.材料与方法①精液样本:中国荷斯坦牛颗粒冻精(山西省种牛站)。②染色原理:利用活精子对特定染料不着色而死精子着色的特点来区分死精子和活精子,从而得出存活率指标。通过油镜检精查子的形态和顶体,统计出畸形率和顶体完整率指标。③染色试剂:刚果红、苯胺兰、伊红、美兰、10%葡萄糖、柠檬酸钠、姬姆萨染液(姬姆萨原液:磷酸缓冲液:蒸馏水=2:3:5)、甲醇。④制片方法:先将冻精用2.9%的柠檬酸钠解冻,并置于37℃温度下,孵育2小时染片。方法1(常规染色法):(1)存活率:采用伊红法,取精液和5%伊红溶液各一滴,置于清洁载玻片一端,迅速混合均匀,制成抹片,在400～600倍显微镜下观察。     

中性红、龙胆紫和尼罗蓝在精子活率测定中的应用研究

采用不同浓度梯度的中性红、龙胆紫及尼罗蓝染液对长白公猪精子染色,根据染色现象及精子活率,探究3种染料较为理想的作用时间和浓度。结果:0.01%中性红染色2 min后活精子着红色,死亡精子不着色;0.05%龙胆紫染色1 min后活精子着淡蓝色,死亡精子深紫色;0.1%尼罗蓝染色2 min后活精子着淡蓝色,死亡精子不着色。3种情况下精子的存活率与空白对照组比较无显著差异(P0.05)。试验表明,以上3种染色条件能清晰地区分存活精子和死亡精子,可用于测定精子活率。     

不同培养液对蓝狐精子体外获能效果的比较试验

采用上游法分离优化精子,用mTyrod’s液(T)、BO液(B)以及高渗液(HIS)3种不同培养液,在5%CO2的培养箱中进行获能培养,获能培养时间为6h。利用考马斯亮蓝染色法检测精子顶体反应率,伊红-苯胺黑染色法检测活精子比率以及观测法检测精子活力。在培养的0、1、2、4、6h时分别检测上述指标并统计分析,从而筛选出适合蓝狐精子体外获能的培养液。结果显示:B培养液优于T、HIS培养液,最佳获能培养时间t≥6h;HIS可以提高精子顶体反应率,但较高的渗透压不利于精子保存,不建议使用。     

四种活体染色法评定家禽精子形态的研究

精子形态学检测是预测精子功能最有价值的指标之一,形态异常精子越多受精率越低。用4种伊红-苯胺黑活体染色法(Blom、Bakst、Morisson、Jaskowski)评价三黄鸡和贵妃鸡的精子形态,结果表明:染色方法显著影响精子形态,但不影响精子活率,染液对精子自然形态的保持至关重要。Blom染色法导致精子头部膨胀,畸形精子显著增多(P≤0.01),Bakst、Morisson和Jaskowski染色法均可作为评定家禽精子形态的实用方法,其中Jaskowski染色方法最简便经济,值得在家禽生产中推广应用。     

藏獒冻精畸形率检查中染色方法的比较

分别采用Giemsa染色法、曙红染色法对藏獒冷冻精液涂片染色,以检查精子畸形率.结果表明,曙红染色法对藏獒精子头部染色适中,头部轮廓清晰,顶脊清楚,项体明显,中段和尾部畸形检查清晰;两种染色方法检测的精子畸形率比较,差异不显著(P>0.05).由试验可知,曙红染色液配制简便,可作为检测藏獒精子畸形与否的优选方法.     

精子活率与精子完整率和质膜完整率的相关性分析

采用考马斯亮蓝（R250）染色法和低渗膨胀试验（HOST试验）检测精子顶体反应和质膜完整性,以检测和评价这2种方法在猪精液质量检测中的实际应用价值。结果表明,冷冻复苏后,精子活率为37.97%,精子平均速度为55.72μm/s,顶体完整率和质膜完整率分别为51.01%和39.95%。经相关性分析得出,猪精子顶体反应率和质膜完整性与精子活率相关系数为0.904 0和0.817 6,呈显著相关（P〈0.01）,而精子的平均游动速度与顶体反应率和质膜完整性相关系数为-0.056 2和-0.151 8,无明显相关性（P〉0.05）,精子活率与精子平均游动速度间也无明显相关性（P〉0.05）。     

4℃液态保存对奶山羊精子超微结构的影响

旨在探究4℃液态保存中奶山羊精子超微结构变化,为阐明影响奶山羊精子液态保存质量的相关机制提供形态学依据.采集关中奶山羊精液进行4℃液态保存,伊红染色检测保存至0、24、48、72、96、120和144 h的精子活率,扫描电镜和透射电镜观察0、48、96 h的精子超微结构.伊红染色检测结果发现,精子活率随液态保存时间延长...     

使用流式细胞仪分离精子进行仔猪性别控制的研究

本研究旨在探索流式细胞仪分离精子在猪性别控制中的应用。使用流式细胞仪分离猪XY精子,而后通过母猪输卵管授精生产"预知"性别的仔猪,并使用吖啶橙染色法检测粗分离对精子核酸含量的影响。结果,成功利用分离获得的猪X和Y精子对母猪进行输卵管授精,母猪怀孕率、产仔率均为100%;输Y精子母猪产仔雄性率100%(♂6/6),对照母猪产仔雄性率57.14%(♂8/14);3头输X精子母猪产母仔率91.67%(♀11/12),对照母猪产雌性仔猪40%(♀2/5);使用性别分离精子不影响母猪的怀孕率、产仔率,但窝产仔数较低;吖啶橙染色法检测结果表明,流式细胞仪粗分离对猪精子核酸含量没有显著影响(P>0.05)。本研究结果提示,使用流式细胞仪分离精子授精可以有效改变仔猪的性别比例。本研究结果为猪分离精子性别控制技术的推广应用奠定了基础。     

公牛冻精品质检测方法比较

精液品质检测中，精液的存活率、精子畸形率、顶体完整率是判定精液品质优劣的常用指标。在以往检测过程中，通常采用常规染色法，即每测一个指标时进行一种染色操作，这样操作过程繁琐、耗时、耗力、耗材。本试验旨在对不同染色方法进行比较，从中寻找出一种操作简便、染色效果较佳的染色方法，这样即可省去许多步骤，也可减少多次实验操作造成误差。１材料与方法１．１精液样本：中国荷斯坦牛颗粒冻精（山西省种牛站）。１．２染色原理：利用活精子对特定染料不着色而死精子着色的特点来区分死精子和活精子，从而得出存活率指标。通过油镜…     

家畜精(子)细胞染色方法的比较与评价

为进一步提高家畜精子形态检验的科学性和客观性,本文结合种公畜精液生产和质量检验,对精子形态的检验应用姬姆萨染色法、考马斯亮蓝染色法和伊红—苯胺黑染色法进行了比较、分析。结果表明,三种方法中姬姆萨染色法对精子细胞的染色效果最好,可视精液质量检验的不同要求选择不同方法。     

五种糖类对犬精液冷冻保存效果的研究

选取8只身体健康、性欲旺盛的比格公犬,采集其精液,对鲜精进行质量检测,主要包括颜色、射精量、精子活率、活力和pH。选取精子活率达到70%以上犬精液用于后续精液冷冻试验。分别将含有葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖和海藻糖的精液稀释液与精液按照1∶2的比例进行稀释。经冷冻解冻后,进行活率、活力、质膜完整性和顶体完整性的精子质量检测。通过对新鲜精液进行品质检测,结果显示5只合格用犬的平均射精量为2.85 mL,密度为2.01×10~8个/mL,pH为6.56。含有果糖的冷冻稀释液中精子活率和活力最高,分别达59.90%和54.00%;其次是添加葡萄糖和乳糖的稀释液中活率较高,分别为59.21%和56.73%,且两组稀释液中精子解冻后活力均为52.00%。进一步评估精子解冻后质膜完整率,结果显示葡萄糖和果糖组显著高于其他组,分别达48.73%和49.52%;而蔗糖添加组精子质膜完整率最低,为42.21%。稀释液中添加果糖的精子解冻后顶体完整率显著高于其他组,而添加蔗糖组顶体完整率最低。在比格犬的精液冷冻保存中,添加果糖的冷冻稀释液能显著提高精子的活率和活力,从而达到提高冻精质量的效果。     

同种和异种抗精子抗体血清对牛精子活力和顶体完整性的影响

8头黑白花成年公牛,每头采集3次精液,利用精子死活染色法和顶体染色法,评定不孕母牛抗精子抗体阳性血清(同种血清组,试验组Ⅰ)和兔抗牛精子抗体免疫血清(异种血清组,试验组Ⅱ)在0.2、4及6小时对精子活力和顶体完整性的影响,研究抗精子抗体引起牛不孕的可能机理。结果表明,在2小时,试验组Ⅰ和Ⅱ的精子活率显著低于处女牛血清组(对照组Ⅲ)和空白对照组(对照组Ⅳ,P<0.05或0.01),但在4、6小时,各组之间的差异不明显(P>0.05)。2、4和6小时对照组Ⅲ、Ⅳ的精子顶体完整率均明显高于试验Ⅰ、Ⅱ组(P<0.01或0.05)。在6小时前,相同时间间隔时,各组精子活率高于顶体完整率,随着作用时间延长,精子顶体完整率的下降幅度大于精子活率。试验表明,抗精子 抗体血清除能影响精子活力外,主要损伤精子顶体的正常形态。     

影响猪精子介导基因转移效果的因素研究

为优化猪精子载体法技术参数,利用荧光定量PCR、荧光显微镜检测和精液常规检测方法,分析不同DNA转染剂、不同孵育温度和不同形态DNA对猪精子转染外源DNA的影响。结果表明,PEI和TransFast转染剂能极显著提高猪精子转染效果,且PEI优于TransFast,而NanoFect转染剂包裹DNA不能转染精子。随着转染温度的升高,精子的活力和活率均明显下降,而转染率和内化外源DNA量基本保持稳定,而吸附外源DNA量呈下降趋势。环状DNA和线性化DNA在与精子共孵育后,两者的精子活力、活率、转染率和内化外源DNA量差异均不显著,精子吸附线性化DNA量极显著高于环状DNA量。综合分析表明,外源DNA形态对猪精子转染效果无显著影响;PEI和TransFast能够显著提高猪精子转染效果;共孵育温度以17℃为最佳,本结果为开展精子载体法制备转基因猪研究提供了基础试验依据。     

肉羊X、Y精子分离及其对超排羊腹腔镜输精卵子受精率的研究

采用电刺激采精方法收集1.5～3周岁的10只陶赛特种公羊精液,19℃水浴保存,经过1h运输后,利用流式细胞仪进行X、Y精子分离.共生产性控冷冻精液182支(X型98支,Y型84支).分离前精液活率为76％,分离后X、Y型冻精活率分别为39％和2％,有效精子数约为230万和10万,4h存活指数分别为10％和1％,畸形率分别为12％和26％.另外,结合腹腔内窥镜输精技术对19只超排母羊开展了输精,在输精后第6天采用子宫角采胚法共回收卵子104枚,其中受精胚胎53枚,受精率51％.结果表明:①分离所得X精子能够满足腹腔内窥镜低剂量输精要求;②Y精子活率检验仅为2％,失去了输精价值;③性控冷冻精液结合腹腔内窥镜输精技术应用于性控胚胎生产具有可行性.