公山羊β防御素124的表达谱分析及其在繁殖器官中的定位

旨在研究公山羊β防御素124(Goat beta-defensin 124,gDB 124)的表达谱及其蛋白在繁殖器官中的分布特点。采集1周龄、2~6月龄公羊各3只(体重相近)睾丸和附睾,以及18月龄公山羊睾丸、附睾头、附睾体、附睾尾、心、肝、脾、肺、肾和背最长肌组织。用qRT-PCR分析gDB124mRNA的表达情况;采用免疫荧光技术分析睾丸、附睾头、附睾体和附睾尾gDB 124分布特点。结果显示:除背最长肌中无表达外,gDB124mRNA在18月龄公山羊睾丸、附睾头、附睾体、附睾尾、心、肝、脾、肺和肾组织均有表达,且附睾头表达量极显著高于其他组织(P0.01);睾丸gDB124mRNA表达量6月龄时显著高于其他月龄;附睾头、附睾体和附睾尾gDB124mRNA表达量随月龄的增加呈上升趋势;1周龄公山羊睾丸和附睾gDB124mRNA表达量不存在显著差异,3、4、5、6、18月龄时附睾头gDB124mRNA表达量显著高于睾丸、附睾体和附睾尾(P0.05);免疫荧光定位技术分析显示:gDB 124在公山羊睾丸和附睾中均有分布,但主要是在附睾头上皮细胞中。根据荧光信号强度gDB 124的表达量顺序:附睾头附睾体附睾尾睾丸,该结果与qRT-PCR分析结果相一致。公山羊gDB124mRNA表达具有明显组织特异性和时间依赖性。     

乳酸脱氢酶-C4基因mRNA在绵羊睾丸和降睾中的表达研究

实验检测3乳酸脱氢酶-C4基因mRNA在绵羊睾丸和附睾中的表达情况。提取绵羊睾丸组织、附睾头、体、尾部组织总RNA，以此为模板，逆转录合成cDNA，自行设计引物，PCR扩增出347bp的目的DNA。然后，将目的片段克隆入T载体，通过菌液PCR和重组质粒酶切，鉴定重组质粒中的目的DNA。再经序列分析鉴定目的片段。同时，以β-actin为内参照物，进行RT—PCR半定量分析，比较在睾丸、附睾头、体、尾部组织中的表达量。结果表明：乳酸脱氢酶-C4在绵羊睾丸中表达量最多，尾部中表达不明显。     

Toll样受体7/8在公猪生殖系统中的表达及其配体对猪X/Y精子分选效果评价

旨在分析Toll样受体7/8(TLR7/8)在公猪精子及生殖器官中的表达情况，并探讨是否能通过其配体处理的方式分离猪X精子和Y精子。本研究采用qRT-PCR分析3头健康成年公猪睾丸、附睾头、附睾体、附睾尾以及精子中TLR7和TLR8基因的mRNA表达水平，利用免疫组化检测公猪睾丸和附睾中TLR7和TLR8蛋白的表达，并通过细胞免疫荧光分析其在不同物种(健康成年小鼠、公牛和公猪)精子中的表达情况，将其配体R848与猪精子共孵育，研究其对精子活力以及X/Y精子分离的影响。结果表明，TLR7和TLR8 mRNA在公猪睾丸、附睾头、附睾体、附睾尾组织以及精子中均表达；免疫组化结果显示，TLR7/8蛋白在睾丸中主要表达于生殖细胞，在附睾中主要表达于柱状细胞微绒毛中；细胞免疫荧光结果表明，TLR7和TLR8蛋白只表达于小鼠和牛X精子尾部，Y精子中不表达，但TLR7和TLR8蛋白在公猪X和Y精子中都表达且表达模式无显著差异，TLR7蛋白主要表达于猪精子头部顶体区域，TLR8蛋白主要表达于猪精子尾部；与对照组相比，用TLR7和TLR8配体R848孵育猪精子后，精子活力降低，但上层精子的性别比例无显著差...     

绵羊附睾褪黑素受体1的表达与定位

为研究褪黑素受体1（MT1）在不同年龄绵羊附睾中的表达模式，选用幼龄绵羊（2~3月龄）、青年绵羊（6~8月龄）和成年绵羊（2~3岁）的附睾，采用实时荧光定量PCR和免疫组化技术检测不同年龄绵羊附睾各部位MT1基因mRNA的表达量和MT1的分布情况。结果表明：幼龄绵羊附睾尾MT1基因的转录水平极显著高于附睾头和附睾体（P<0.01）；青年绵羊附睾体和附睾尾MT1基因的转录水平显著高于附睾头（P<0.05）；成年绵羊附睾尾MT1基因的转录水平显著高于附睾头和附睾体（P<0.05），附睾各部位MT1基因的转录水平随年龄增长呈明显降低趋势；定位结果显示，MT1在各年龄组绵羊附睾的各个部位均有分布，且主要分布在附睾上皮细胞中。综合上述结果，不同年龄绵羊附睾的不同部位均有MT1表达和分布，并随年龄增长各部位的表达量降低，相同年龄绵羊附睾尾MT1的表达水平较高。     

精子受精抗原-1(FA-1) mRNA在绵羊睾丸和附睾中的表达

本研究通过RT-PCR检测了该基因在绵羊睾丸和附睾中的表达情况。首先,提取绵羊睾丸组织、附睾头、体、尾部组织总RNA,以此为模板,反转录合成cDNA,自行设计引物,PCR扩增出462 bp的目的DNA。然后,将目的片断克隆入T载体,通过菌液PCR和重组质粒酶切,鉴定重组质粒中的目的DNA。再经序列分析鉴定目的片断。同时,以β-actin为内参照物,进行RT-PCR半定量分析,比较精子受精抗原(FA-1)在睾丸、附睾头、体、尾组织中的表达量。结果表明,FA-1在绵羊睾丸和附睾中均表达。     

山羊Lcn5的表达特点及其在繁殖器官中定位

为探明附睾视黄酸结合蛋白5(Lcn 5)mRNA在公山羊体组织及不同月龄附睾中的表达特性,及其在睾丸、附睾和精子中的定位。采用实时荧光定量PCR方法检测18种组织和不同月龄附睾Lcn5mRNA表达规律;利用蛋白印迹技术对成年公羊睾丸和附睾Lcn 5蛋白表达进行定量分析;利用免疫组化技术对5月龄公羊睾丸和附睾Lcn 5进行定位,利用免疫荧光技术对精子Lcn 5进行定位。Lcn5mRNA在不同组织中均有表达,其中在性腺中的表达量最高,附睾头附睾尾附睾体睾丸;在5月龄前附睾的Lcn5mRNA表达量随月龄逐渐升高,5月龄时达到最高,随后又逐渐降低。Western blotting结果显示,Lcn 5蛋白表达量:附睾头附睾尾附睾体睾丸,支持了Lcn5mRNA定量的结果。免疫组化结果显示,5月龄山羊在附睾管壁的柱状细胞、纤毛细胞检测到较强Lcn 5蛋白表达的阳性信号,附睾尾管腔检测到较强的阳性信号。在睾丸各级生精细胞中也检测到了微弱阳性信号。Lcn 5蛋白包裹在精子头部顶体帽上。Lcn5在山羊附睾中高度表达,其表达具有时空特异性,推测其在精子成熟和维持正常生理功能方面发挥重要作用,其生物学功能需要进一步深入研究。     

绵羊附睾褪黑素受体1的表达与定位

为研究褪黑素受体1(MT1)在不同年龄绵羊附睾中的表达模式,选用幼龄绵羊(2~3月龄)、青年绵羊(6~8月龄)和成年绵羊(2~3岁)的附睾,采用实时荧光定量PCR和免疫组化技术检测不同年龄绵羊附睾各部位MT1基因mRNA的表达量和MT1的分布情况。结果表明:幼龄绵羊附睾尾MT1基因的转录水平极显著高于附睾头和附睾体(P0.01);青年绵羊附睾体和附睾尾MT1基因的转录水平显著高于附睾头(P0.05);成年绵羊附睾尾MT1基因的转录水平显著高于附睾头和附睾体(P0.05),附睾各部位MT1基因的转录水平随年龄增长呈明显降低趋势;定位结果显示,MT1在各年龄组绵羊附睾的各个部位均有分布,且主要分布在附睾上皮细胞中。综合上述结果,不同年龄绵羊附睾的不同部位均有MT1表达和分布,并随年龄增长各部位的表达量降低,相同年龄绵羊附睾尾MT1的表达水平较高。     

不同发育阶段湖羊生殖器官脂联素受体与睾酮分泌关键基因表达模式及相关性研究

旨在探究不同发育阶段湖羊生殖器官中脂联素受体(adiponectin receptor,AdpR)及睾酮(testosterone,T)分泌相关基因mRNA的表达变化及相关性分析。选取3、9、24月龄(M)湖羊各5只,颈静脉采血并收集血清,屠宰后,采集下丘脑、垂体、睾丸、附睾头、体、尾组织;ELISA技术检测各月龄湖羊血清中脂联素(adiponectin,Adp)、T、促性腺激素释放激素(gonadotropin releasing hormone,GnRH)、促性腺激素抑制激素(gonadotropin inhibitory hormone,GnIH)浓度;qRT-PCT技术检测不同发育阶段湖羊下丘脑-垂体-性腺轴(hypothalamus-pituitary-gonad axis,HPG)中AdpR1和AdpR2及T分泌关键基因mRNA表达规律;免疫组化技术对AdpR1在湖羊睾丸和附睾中进行定位分析。结果表明:不同发育阶段湖羊血清中Adp、GnRH、GnIH浓度呈现不同的变化趋势,其中Adp含量在性成熟后(9和24月龄)显著高于性成熟前(3月龄)(P0.05)。AdpR1mRNA表达量在各个月龄睾丸和附睾尾中均显著高于AdpR2(P0.05),其中AdpR1mRNA表达量在二者中呈上升趋势,且差异显著(P0.05),而在附睾头、体差异不显著(P0.05)。AdpR1存在于睾丸间质细胞、生精细胞、曲精细管管壁肌样细胞、精子细胞以及附睾头、体、尾的上皮细胞。血清中Adp与T含量呈显著正相关(P0.05);Adp含量与GnIH负相关以及与GnRH正相关,但差异不显著(P0.05);AdpR1mRNA表达水平与StAR、3β-HSD mRNA表达水平呈显著正相关(P0.05)。综上表明,在湖羊生殖器官发育过程中,Adp通过与其受体AdpR1结合,促进T的产生,进而影响湖羊睾丸发育。     

乳酸脱氢酶-C4基因mRNA在绵羊睾丸和附睾中的表达研究

实验检测3乳酸脱氢酶-C4基因mRNA在绵羊睾丸和附睾中的表达情况。提取绵羊睾丸组织、附睾头、体、尾部组织总RNA,以此为模板,逆转录合成cDNA,自行设计引物,PCR扩增出347bp的目的DNA。然后,将目的片段克隆入T载体,通过菌液PCR和重组质粒酶切,鉴定重组质粒中的目的DNA。再经序列分析鉴定目的片段。同时,以β-actin为内参照物,进行RT-PCR半定量分析,比较在睾丸、附睾头、体、尾部组织中的表达量。结果表明:乳酸脱氢酶-C4在绵羊睾丸中表达量最多,尾部中表达不明显。     

Defb124基因在绵羊睾丸、附睾不同发育时期表达特性研究

文章主要研究Defb124基因在绵羊睾丸、附睾不同发育时期的表达特性。采用QRT-PCR法对绵羊不同时期睾丸、附睾中Defb124 mRNA的表达进行绝对定量分析。结果表明：2、3、6、12月龄附睾头中Defb24的表达量分别为3.190×10^-4、5.447×10^-3、6.602×10^-3、8.757×10^-3ng/μL,在附睾尾中表达量分别为1.610×10^-4、4.658×10^-3、5.443×10^-3、5.510×10^-3ng/μL,在附睾体及睾丸中的表达量很少。说明Defb124 mRNA在绵羊不同发育时期睾丸、附睾中均有不同程度的表达,在附睾头中大量表达,且表现出明显的组织依赖性和时间依赖性。     

RBP4基因在绵羊性成熟前后附睾中表达的研究

试验旨在研究视黄醇结合蛋白4(retinol binding protein 4,RBP4)基因在绵羊性成熟前和性成熟后附睾中的表达水平,探讨其在绵羊生殖机能调控方面的作用。以绵羊性成熟前和性成熟后附睾为材料,采用实时荧光定量PCR方法检测RBP4基因mRNA在绵羊性成熟前、后附睾中表达量的差异,采用免疫组化技术检测RBP4基因在绵羊性成熟前、后附睾头和附睾尾中蛋白的表达水平。结果显示,RBP4基因在绵羊附睾中性成熟前的表达量为1.3368,性成熟后的表达量为0.6450,虽然二者间的表达量差异不显著(P0.05),但性成熟前的表达量高于性成熟后的表达量。RBP4蛋白在性成熟前、后附睾头上皮层、平滑肌层、组织间质中均有阳性表达,主要位于上皮细胞质、平滑肌细胞质;在附睾尾上皮层、组织间质中有阳性表达,主要位于上皮细胞质。推测RBP4基因可能与附睾主细胞分泌功能和附睾头处的收缩功能有关,预示RBP4可能参与附睾微环境的调控,有利于精子成熟、运动和储存。     

高原地区小尾寒羊附睾细胞外基质相关蛋白分布特征研究

旨在研究高原地区小尾寒羊附睾细胞外基质相关蛋白的分布特征。应用Masson’s、Gomori’s、PAS和AB-PAS(pH=2.5)组织化学染色方法观察5只健康成年高原地区小尾寒羊附睾的组织结构特点,进而用免疫组织化学SP法观察层粘连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原蛋白(ColⅣ)和硫酸乙酰肝素蛋白多糖(HSPG)的分布特征。高原地区小尾寒羊附睾各部分管腔为柱状纤毛上皮,附睾尾间质胶原纤维和网状纤维较附睾头及附睾体明显增多。PAS反应显示附睾头和附睾尾阳性强于附睾体,AB-PAS反应显示附睾头、体、尾阳性差异较小。免疫组织化学显示,ColⅣ在附睾头和附睾体组织中表达最强,HSPG次之,LN表达较弱,HSPG和LN的阳性表达差异不显著(P0.05);而HSPG在附睾尾组织中表达最强,LN次之,ColⅣ表达较弱,HSPG和LN的阳性表达差异不显著(P0.05)。高原地区小尾寒羊附睾尾间质胶原纤维和网状纤维的分布较附睾头和附睾体多,附睾各部分中PAS的反应强弱与附睾上皮分泌功能的变化密切相关,附睾头和附睾尾输精管的分泌功能增强。附睾头上皮基细胞ColⅣ、HSPG和LN分泌增加,且ColⅣ、HSPG和LN与血管的调节作用密切相关。     

欧拉型藏羊睾丸与附睾中精子形态学观察

采集欧拉型藏羊的睾丸及附睾,对其不同区段内精子的形态指标进行观察。结果显示:睾丸及附睾不同区段的精子密度依次为:睾丸1.05╳10~7个/mL、附睾头4.31╳10~7个/mL、附睾体2.13╳10~7个/mL、附睾尾1.42╳10~8个/mL;精子畸形率分别为:睾丸14.18%、附睾头15.13%、附睾体15.7%、附睾尾15.20%;顶体完整率分别为:睾丸70.15%、附睾头70.09%、附睾体71.53%、附睾尾70.76%。结果表明,欧拉型藏羊睾丸、附睾中精子密度、顶体完整率较低,可能与藏羊所处环境中日粮、环境温度等有关,但其精子畸形率符合受精标准。     

RBP4基因在绵羊性成熟前后附睾中表达的研究

试验旨在研究视黄醇结合蛋白4（retinol binding protein 4,RBP4）基因在绵羊性成熟前和性成熟后附睾中的表达水平,探讨其在绵羊生殖机能调控方面的作用。以绵羊性成熟前和性成熟后附睾为材料,采用实时荧光定量PCR方法检测RBP4基因mRNA在绵羊性成熟前、后附睾中表达量的差异,采用免疫组化技术检测RBP4基因在绵羊性成熟前、后附睾头和附睾尾中蛋白的表达水平。结果显示,RBP4基因在绵羊附睾中性成熟前的表达量为1.3368,性成熟后的表达量为0.6450,虽然二者间的表达量差异不显著（P>0.05）,但性成熟前的表达量高于性成熟后的表达量。RBP4蛋白在性成熟前、后附睾头上皮层、平滑肌层、组织间质中均有阳性表达,主要位于上皮细胞质、平滑肌细胞质;在附睾尾上皮层、组织间质中有阳性表达,主要位于上皮细胞质。推测RBP4基因可能与附睾主细胞分泌功能和附睾头处的收缩功能有关,预示RBP4可能参与附睾微环境的调控,有利于精子成熟、运动和储存。     

钙敏感受体基因在大鼠不同组织的表达分析

为了研究钙敏感受体(calcium-sensing receptor,CaSR)基因在大鼠不同组织的相对表达差异,探索其在不同组织上的潜在功能,随机选取7周龄左右的雌性及雄性SD大鼠各5只,采用实时荧光定量PCR技术检测CaSR基因在大鼠胃肠道(胃、十二指肠、空肠、回肠)、代谢器官(肝脏、肾脏)及生殖器官(睾丸、附睾、子宫、卵巢)的相对表达量。结果显示:胃CaSR基因表达量显著高于其他肠段(P0.05);肾脏CaSR基因表达量显著高于肝脏(P0.05);睾丸CaSR基因的表达量显著高于附睾(P0.05);子宫与卵巢的表达量较低,且二者无显著差异(P0.05)。结果表明:CaSR基因在雌性、雄性大鼠的胃肠道、代谢器官以及生殖器官组织中均有表达,且在各组织间的表达存在显著差异。     

公山羊Protamine 1 mRNA表达特性及与精液品质相关性的研究

旨在研究雄性山羊主要繁殖器官中PRM1mRNA表达特性,分析精子PRM1mRNA表达与精液品质参数的相关性。本研究通过荧光定量PCR技术分析PRM1mRNA表达规律,利用免疫组化技术对睾丸中PRM1蛋白进行定位,并应用GraphPad Prism 5软件分析精子PRM1mRNA表达量与精液品质指标的相关性。结果显示,PRM1mRNA在睾丸中高度表达,其次是附睾,睾丸中PRM1mRNA表达量是附睾头的247倍,附睾头显著高于附睾体和尾(P0.05),在剩余其他组织中微量表达。在周岁之前,睾丸中PRM1mRNA表达量随着月龄增加而增加,12月龄的表达量显著高于9月龄的表达量(P0.05),9月龄表达量显著高于其他低月龄的表达量(P0.05)。精子PRM1mRNA的表达量与精子活力(R2=0.586 0,P=0.000 5)、精子密度(R2=0.442 2,P=0.004 9)呈显著正相关。山羊PRM1在长形精子细胞和精子细胞中表达,睾丸其他生精细胞及间质细胞中无表达。山羊PRM1mRNA表达具有时空表达特性,PRM1mRNA表达量可以作为评价公羊繁殖力的指标。     

FSHR、PGR在建昌黑山羊睾丸和附睾中的分布与发育性表达研究

采用免疫组化技术检测55、104、300和1140日龄建昌黑山羊睾丸、附睾头和附睾尾中促卵泡素受体(FSHR)和孕酮受体(PGR)分布和表达水平。结果表明:FSHR和PGR在建昌黑山羊的睾丸和附睾中均有表达,而且在睾丸和附睾的表达水平与发育日龄有关。     

成年公山羊脂质运载蛋白8基因的组织表达谱分析

为探究脂质载体蛋白(Lipocalin,Lcn)家族中Lcn8 mRNA在成年公山羊组织中的表达特点,采集3只5周岁成年公山羊的附睾头、附睾体、附睾尾、睾丸等生殖器官以及脾、肺、肾等组织器官,采用qRT-PCR对Lcn8 mRNA的组织表达特点进行研究。结果显示:Lcn8 m RNA在生殖器官中的表达量较高,其表达高峰在附睾头1;Lcn8 mRNA在气管中也有较高表达,在泌尿器官和消化器官中仅有微量表达。推测Lcn8可能与精子的发生和成熟过程有关,而且参与了机体的免疫调节功能。     

小鼠Wip1基因的表达及其对受精能力的影响

本研究旨在探讨Wip1基因的表达及其对精子受精能力的影响,为阐明Wip1基因对雄性繁殖的影响提供新的着眼点。选取相同饲养环境、同一遗传背景的8周龄左右的野生型雄鼠,利用实时荧光定量PCR技术检测Wip1基因在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脑组织及雄性生殖器官中的表达情况,利用免疫荧光技术检测Wip1蛋白在睾丸组织及精子细胞中的分布情况。以Wip1敲除型雄鼠为试验组,野生型雄鼠为对照组,利用ELISA试剂盒检测两组小鼠血清中睾酮水平;通过体外受精试验比较两组的2-细胞率及囊胚率。结果显示,Wip1基因mRNA在野生型雄鼠各组织中广泛表达,且在雄性生殖器官中表达量较高,其中睾丸中表达量最高,附睾体、附睾头、附睾尾次之;Wip1蛋白主要定位于睾丸组织中的长形精子细胞及附睾成熟精子细胞的头部。ELISA检测结果发现,与野生型雄鼠相比,Wip1敲除型雄鼠血清内睾酮含量极显著下降(P0.01)。体外受精结果表明,Wip1敲除后2-细胞率及囊胚率均极显著下降(P0.01)。结果表明,Wip1基因敲除能够引起雄性小鼠受精能力降低,这可能与Wip1基因在精子发生过程中发挥作用相关。     

高原型藏绵羊附睾细胞外基质的组织化学研究

旨在探索高原型藏绵羊附睾细胞外基质相关蛋白的分布特征。应用Masson’s、Gomori’s、PAS和ABPAS(pH 2.5)染色组织化学方法观察7只健康成年高原型藏绵羊附睾的组织结构特点,进而用免疫组织化学SP法观察层粘连蛋白(LN)、IV型胶原蛋白(Col IV)和硫酸乙酰肝素蛋白多糖(HSPG)的分布特征。高原型成年藏绵羊附睾各部分管腔为柱状纤毛上皮,附睾尾间质胶原纤维和网状纤维较附睾头及附睾体明显增多。PAS反应显示附睾尾阳性强于附睾头和附睾体,AB-PAS反应显示附睾头和附睾尾的阳性强于附睾体。免疫组织化学结果显示,LN在组织中表达最强,HSPG次之,Col IV表达较弱,HSPG和LN的阳性表达差异不显著(P0.05)。高原型成年藏绵羊附睾尾间质胶原纤维和网状纤维的分布较附睾头和附睾体多,附睾各部分中PAS的反应强弱与附睾上皮分泌功能的变化密切相关,附睾尾输精管的分泌功能增强;Col IV参与基膜的物质转运;HSPG与血-附睾屏障构成相关;LN与基膜的形成及其附睾中细胞外基质相关蛋白(ECM)的合成和分泌有关。