快速检测发酵乳中葡萄糖杆菌的赖解旋酶恒温基因扩增方法的建立

建立赖解旋酶恒温基因扩增（helicase-dependent isothermal DNA amplification，HDA）快速检测发酵乳中葡萄糖杆菌的方法。选择葡萄糖杆菌ITS基因序列（基因号为KF896260.1）为目的基因，设计特异性引物，并优化反应体系中UvrD解旋酶和T4 gp32的添加量，建立最优反应体系。采用建立的HDA体系对多种菌株进行扩增和电泳检测，验证方法特异性，通过HDA法直接检测发酵乳中的葡萄糖杆菌，并确定其检出限。结果表明：采用HDA法检测发酵乳中葡萄糖杆菌，反应体系中UvrD解旋酶和T4 gp32的适宜添加量分别为0.10 μg和5.0 μg，扩增产物与设计序列长度（309 bp）一致，特异性良好，检出限为4.3×101 CFU/g。该方法用于检测发酵乳中葡萄糖杆菌的灵敏度高、耗时短。     

超高效液相色谱-串联质谱法测定牛乳、发酵乳和乳粉中四环素类药物残留

建立超高效液相色谱-串联质谱法同时检测牛乳、发酵乳和乳粉3 种基质中4 种四环素类药物残留的检测方法。对前处理方法和仪器上机条件进行研究。以EDTA-Mcllvaine缓冲液进行提取,经HLB固相萃取柱净化,甲醇-乙酸乙酯（1∶9,V/V）洗脱,氮吹后复溶,采用电喷雾离子源正离子模式、多反应监测模式进行检测。结果表明：乳粉中四环素、土霉素、金霉素和强力霉素的定量限均为10 μg/kg;液态乳和发酵乳中4 种药物的定量限均为2 μg/kg;四环素类药物添加量为2～100 μg/kg时,回收率为63.1%～1     

发酵乳中沙门氏菌依赖解旋酶恒温基因扩增快速检测方法的建立

建立依赖解旋酶恒温基因扩增（helicase-dependent isothermal DNA amplification,HDA）快速检测发酵乳中沙门氏菌方法。以沙门氏菌invA基因序列为目的基因,设计特异性引物,优化反应体系中UvrD解旋酶及T4 gp32添加量,建立最优反应体系。通过HDA方法直接检测发酵乳中沙门氏菌,扩增其产物后进行电泳检测,验证方法特异性。结果表明：采用HDA快速检测法检测发酵乳中沙门氏菌特异性良好,优化后反应体系体积50 μL时,UvrD解旋酶添加量为0.10 μg,T4 gp32添加量为5.0 μg,得到与设计序列长度（304 bp）一致的扩增产物,检出限为2.6×102 CFU/g;该方法用于快速检测发酵乳中沙门氏菌能够满足检测需求,具有较高的灵敏度、易操作,可作为一种基础且快速的方法检测发酵乳中沙门氏菌。     

不同添加剂对重庆地区杂交狼尾草高水分青贮品质的影响

为评价甲酸、乙酸、植物乳杆菌和布氏乳杆菌对“桂牧1号”杂交狼尾草高水分青贮发酵品质和青贮化学成分的影响，试验设6个处理组，分别为对照组、甲酸添加组、乙酸添加组、植物乳杆菌添加组、布氏乳杆菌添加组、植物乳杆菌组+布氏乳杆菌混合添加组。青贮60 d后开袋取样，分析青贮饲料发酵品质和化学成分。结果表明：杂交狼尾草高水分青贮中添加有机酸和乳杆菌均不能提高其营养成分。杂交狼尾草青贮料pH、乳酸、乙酸含量各处理间差异极显著（P < 0.01），丙酸（PA）及丁酸（BA）含量各处理间差异显著（P < 0.05）。有机酸添加组青贮料pH和丁酸含量均较高，青贮料品质降低，而添加乳杆菌能够有效改善青贮品质，其中，添加布氏乳杆菌能有效提高青贮料中乙酸和丙酸含量，防止青贮料霉变。 [关键词] 杂交狼尾草|添加剂|青贮     

植物乳杆菌、布氏乳杆菌对甘蔗尾青贮品质及有氧稳定性的影响

为了研究植物乳杆菌、布氏乳杆菌对甘蔗尾青贮品质及有氧稳定性的影响。试验共分为10组,A组为对照组,添加生理盐水;B、C、D组为植物乳杆菌添加组,分别在新鲜甘蔗尾中添加10、20和30 mL/kg植物乳杆菌液;E、F、G组为布氏乳杆菌添加组,在新鲜甘蔗尾中分别添加10、20和30 mL/kg布氏乳杆菌液;H、I、J组为植物乳杆菌、布氏乳杆菌联合添加组,在新鲜甘蔗尾中分别添加10、20和30 mL/kg布氏乳杆菌和植物乳杆菌等体积混合的菌液。每组3个重复。室温青贮40 d,结束后采样测定青贮发酵品质和有氧稳定性。结果显示：与对照组相比,添加植物乳杆菌组降低了甘蔗尾青贮pH,显著增加乳酸含量（P<0.05）,且随着植物乳杆菌添加量的升高而升高。与添加植物乳杆菌相比,添加布氏乳杆菌组甘蔗尾青贮中乳酸含量显著降低（P<0.05）,乙酸含量显著升高（P<0.05）,且均随着布氏乳杆菌添加量的提高效果更显著;添加布氏乳杆菌组甘蔗尾青贮有氧稳定性较对照组提高48 h。布氏乳杆菌和植物乳杆菌联合组甘蔗尾青贮中乳酸含量显著高于对照组（P<0.05）,且干物质损失较单独添加布氏乳杆菌组有所降低,且能够提高青贮可溶性碳水化合物（WSC）利用效率。综上所述,植物乳杆菌与布氏乳杆菌联合处理（添加量达到2×10⁶ CFU/g鲜重,I组）青贮甘蔗尾能够有效提高青贮品质和有氧稳定性。     

麦麸水溶性膳食纤维对酸乳品质的影响

以小麦麸皮为原料,采用复合酶法水解制得水溶性膳食纤维（SDF）,并选择不同质量的SDF添加到原料乳和其他辅料中进行乳酸菌发酵。结果表明：在酸乳中添加麦麸SDF能显著提高酸乳中钙和必需氨基酸的含量。从酸乳感官品质和营养角度考虑,确定SDF酸乳最佳质量配方比例为：优质鲜牛乳80.0%、全脂乳粉3.0%、SDF 1.0%、蔗糖3.0%、水10.0%、发酵剂（嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌质量比1：1）2.5%、稳定剂0.5%。     

半滑舌鳎配合饵料发酵条件的优化及应用

试验旨在研究3种益生菌复合发酵半滑舌鳎配合饵料的最适比例及时间。试验以半滑舌鳎配合饵料为底物,菌种总接种量为3%,35℃下进行酿酒酵母菌、枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌的发酵处理,对照组未接种任何菌种。选取健康、平均体重（80.27±0.19） g的半滑舌鳎300尾,随机分为2组,每组3个重复,每重复50尾鱼。对照组半滑舌鳎饲喂配合饵料,试验组在配合饵料中添加10%发酵饵料（按照优化试验所得最适条件发酵饵料）。试验期56 d。结果显示,发酵后各组发酵饵料的活菌数均提高十万倍左右,3种菌种混合发酵效果显著优于对照组（P<0.05）。酿酒酵母菌∶枯草芽孢杆菌∶植物乳杆菌以1∶3∶2的比例发酵第5 d时发酵效果最优。与对照组相比,试验组半滑舌鳎体增重与特定生长率均显著提高（P<0.05）。研究表明,半滑舌鳎全价饵料在35℃下,以酿酒酵母菌∶枯草芽孢杆菌∶植物乳杆菌=1∶3∶2比例发酵5 d的效果较好,且发酵饵料可促进半滑舌鳎生长,提高饵料利用率。     

添加不同乳酸菌对青贮玉米和青贮黑麦草发酵品质、有氧稳定性的影响

[目的] 研究添加乳酸片球菌（PA）与短乳杆菌（LB）对青贮玉米和青贮黑麦草发酵品质、有氧稳定性的影响。[方法] 选用从发酵TMR中分离出的乳酸片球菌和短乳杆菌,设置对照组（添加自来水）、PA组（添加乳酸片球菌）、LB组（添加短乳杆菌）和PA+LB组（乳酸片球菌和短乳杆菌联合添加）4个处理组,进行全株玉米和黑麦草的青贮发酵试验,发酵时长为30 d。青贮饲料开封后测定pH值、乳酸含量、乙酸含量、乳酸菌和酵母菌数量等反映青贮饲料品质的指标,同时进行有氧稳定性试验。[结果] 青贮玉米在30 d开封后,4个处理组的pH值和乳酸含量差异不显著（P>0.05）;LB组和PA+LB组乙酸含量显著（P<0.05）高于对照组,PA组和PA+LB组乳酸菌数量显著（P<0.05）高于对照组;有氧稳定性试验中,PA+LB组青贮玉米5 d后腐败,其余试验组均在2.5 d以内腐败。青贮黑麦草在30 d开封后,添加乳酸菌的各试验组pH值和乙醇含量均显著（P<0.05）低于对照组,乳酸含量均显著（P<0.05）高于对照组,PA组乳酸含量最高;有氧稳定性试验中,除对照组外,添加乳酸菌的各试验组青贮黑麦草均在7 d后腐败,PA+LB组乳酸含量最高,乙酸含量显著（P<0.05）低于LB组。[结论] 向青贮玉米中单独添加乳酸菌,对于青贮品质和有氧稳定性无明显作用;联合添加乳酸菌对于青贮玉米的发酵品质无明显改善,但对其有氧稳定性有一定的改善作用。向青贮黑麦草中添加乳酸菌对发酵品质和有氧稳定性有改善作用,添加乳酸片球菌改善发酵品质作用最佳,联合添加乳酸菌既可以改善青贮黑麦草的有氧稳定性还能提高发酵品质。     

降糖乳制品的制备及其贮藏性能

以产品开发为主旨,对牛类芽孢杆菌BD3526（CGMCC No.8333）发酵乳上清分别进行体外降糖效果验证、降糖乳制品的制备及其贮藏性能研究。结果表明：牛类芽孢杆菌BD3526发酵乳上清的体外降糖活性强（α-葡萄糖苷酶活性抑制率约90%）且稳定;以该上清作为核心组分制备降糖乳清饮料、降糖乳清粉和降糖乳粉3 种降血糖乳制品,其体外α-葡萄糖苷酶活性抑制率分别为57%、48%和37%,且微生物指标均符合国标要求;在不同温度（8、25、60 ℃）下贮藏6 个月后,各组降糖乳制品的体外α-葡萄糖苷酶抑制活性基本不变,并且微生物指标显著优于对照组。     

添加糖蜜和植物乳杆菌对谷草黄贮发酵品质的影响

[目的]探究糖蜜和植物乳杆菌的添加对谷草黄贮发酵品质的影响。[方法]以内蒙古自治区农牧业科学院院内试验基地106号和107号两种谷草为研究对象,试验组添加糖蜜（鲜重1.0%）和植物乳杆菌（10⁶ CFU/g鲜重）,无添加作为对照组进行黄贮调制,每组3个重复,于10~15 ℃室温中存放90 d。开封取样,测定黄贮的pH值、营养成分、乳酸和挥发性脂肪酸含量以及乳酸/乙酸值。[结果]添加组可以极显著（P<0.01）提高2种谷草黄贮中乳酸、乙酸含量以及乳酸/乙酸值;显著（P<0.05）降低106号谷草ADF含量;极显著（P<0.01）降低107号谷草pH值。[结论]添加糖蜜和植物乳杆菌可以提高谷草黄贮发酵品质。     

液相色谱-单四级杆法检测奶粉中泛酸的应用

随着水解乳清蛋白原料在婴幼儿食品中的开发利用,给奶粉中泛酸检测造成了巨大的困难。开发本方法旨在解决水解蛋白对检测的干扰问题。奶粉样品经温水溶解、调节pH值、沉淀蛋白后,采用HSS T3液相色谱柱法分离,以10 mmol/L乙酸铵溶液（含0.5%甲酸）和甲醇为流动相进行梯度洗脱,电喷雾离子化后由单四极杆质谱检测,同位素内标法定量。结果表明：方法定量限为0.0141 mg/100 g,线性范围内低、中、高3 个标准添加水平的回收率为92.0%~102.7%,相对标准偏差在0.31%~2.23%;本检验方法与国标法对于羊奶粉、牛奶粉基质样品中泛酸成分的测定结果无显著差异。该方法操作过程简单、分析周期短、灵敏度高、重复性好,适用于特殊医学配方奶粉、婴幼儿配方奶粉中泛酸的测定,尤其对添加水解蛋白的奶粉样品具有理想的定量效果,具有极大应用前景。     

近红外光谱结合线性判别快速无损鉴别婴幼儿和中老年奶粉

应用近红外光谱分析技术(NIRS)并结合线性判别,对中老年和婴幼儿2种不同年龄阶段奶粉品种进行鉴别。对奶粉样本的原始光谱进行一阶微分处理后,采用Kennard-Stone法对80个样本进行挑选,选出60个作为训练集,剩余的20个作为预测集。采用留一交叉验证评价算法,选取最优主成分数2建立模型,并对测试集进行预测,正确率为100%。说明提出的方法具有很好的分类和鉴别作用,为婴幼儿奶粉的品种快速无损鉴别提供了一种新方法。     

奶粉中胆固醇的测定方法验证

为了提高日常奶粉中胆固醇的检测效率,本文建立了一种更为便捷的气相色谱法检测奶粉中的胆固醇。通过乙醇和氢氧化钾溶液对奶粉试样进行皂化反应,再以石油醚对样液中的胆固醇组分进行提取,最后通过平行浓缩仪将提取液浓缩至近干,再以正己烷定容,采用气相色谱分析法,外标法定量。本方法具有检出限低、精密度高、正确度高、操作过程简便、效率更高简便等优点。     

婴幼儿配方乳粉中磷含量的测定

为准确测定婴幼儿配方乳粉中的磷含量,对测定方法的最佳实验条件、精密度、稳定性、重现性及回收率进行研究.结果发现采用可见分光光度法测定婴幼儿配方乳粉中的磷含量,重现性好,准确度高,建立的线性方程为y=0.0372x+ 0.0039(R2=0.9997),方法的平均回收率为98.5％、RSD值为0.39％.随机抽取市售的30批次婴幼儿配方乳粉进行检测,发现不同阶段的乳粉磷含量不同,含量顺序为幼儿配方乳粉＞较大婴儿配方乳粉＞婴儿配方乳粉,具体值分别为(448±56)、(382±59)、(250±58)mg/g,不同品牌同一阶段的乳粉磷含量也存在较大差异.     

荧光定量聚合酶链反应检测乳品中肉毒梭菌

通过实时荧光定量聚合酶链反应方法检测乳粉与乳清粉中的A、B、E、F四型肉毒梭菌,对肉毒梭菌荧光定量聚合酶链反应试剂盒中的阳性对照品及10、102、103、104倍梯度稀释的阳性对照品做出AB混合型和EF混合型的标准曲线,循环域值具有极好的特异性、重复性和准确性.对通过国标方法与中华人民共和国出入境检验检疫行业标准方法检测长出疑似菌落的82份乳粉与乳清粉采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测,均检测不到样品中含A、B、E、F四型肉毒梭菌.     

多型FMDV VP1表位嵌入型载体pMG-SLPMultiVP1的构建及其表达产物鉴定

构建出表达载体pMG-SLPMultiVP1,并对其进行双酶切鉴定及PCR鉴定。将阳性重组质粒转入到发酵乳杆菌中进行表达,并对表达产物进行SDS-PAGE、Western blot和IFAT鉴定。多型FMDV VP1表位嵌入的SLPMultiVP1融合基因成功克隆入穿梭质粒pMG36e中,其表达产物大小约为35ku,部分表达产物位于发酵乳杆菌表面。成功构建了一个乳杆菌嵌入型表达载体pMG-SLPMultiVP1,为以发酵乳杆菌为活菌载体的表位疫苗研究奠定了基础。     

离子色谱法测定乳制品中亚硝酸盐和硝酸盐含量的方法改进

改进GB 5009.33—2016《食品安全国家标准 食品中亚硝酸盐和硝酸盐的测定》中离子色谱法测定乳制品（乳粉、生牛乳）中亚硝酸盐和硝酸盐的方法。乳制品中亚硝酸盐和硝酸盐经超纯水提取后，加入乙酸溶液沉淀蛋白，AS11-HC色谱柱分离，电导检测器检测。结果表明：在本研究条件下，亚硝酸盐和硝酸盐的标准曲线均线性关系良好，相关系数均大于0.99；纯牛乳中亚硝酸盐的定量限为0.25 mg/kg、硝酸盐的定量限为0.8 mg/kg，乳粉中亚硝酸盐的定量限为1 mg/kg、硝酸盐的定量限为5 mg/kg；乳粉和纯牛乳中亚硝酸盐、硝酸盐回收率均能达到80%～110%，方法操作便捷、成本低、回收率理想、精密度较高。该法优化了国标检测方法的条件，解决了其中可能遇到的问题，可以更加快速、准确地检测乳制品中低含量亚硝酸盐和硝酸盐。     

白灵菇乳饮料生产关键工艺及其稳定性

将鲜品白灵菇均质处理,用于白灵菇乳饮料的生产。用激光粒度仪分析不同均质时间对白灵菇浆料粒径分布的影响;以乳饮料稳定性为响应值,选取白灵菇浆料添加量、白灵菇浆料添加粒度、复配稳定剂添加量、脱脂乳粉添加量为考察因素,采用响应面法优化白灵菇乳饮料的配方。结果表明：由单因素试验确定复配稳定剂中果胶、羧甲基纤维素和单甘酯的复配比例为1.0∶1.3∶1.7（m/m）;白灵菇浆料添加量8%、白灵菇浆料粒度100 目、复配稳定剂添加量0.3%、脱脂乳粉添加量9%条件下生产的白灵菇乳饮料质地均匀、酸甜适中,稳定性最高,为（     

乳酸杆菌属对抗生素的耐药性

以分离自不同地区的发酵乳制品的44株乳杆菌为研究对象,通过对其进行16S rRNA的基因序列分析,鉴定为干酪乳杆菌、植物乳杆菌、发酵乳杆菌、瑞士乳杆菌和保加利亚乳杆菌.同时,研究了这5种乳杆菌的抗生素耐药性.结果显示,乳杆菌对不同的抗生素表现出不同的耐药性.     

基于新国标的两种微生物法测定乳粉中叶酸的比对研究

[目的]对即将实施的《GB5009.211—2022 食品安全国家标准食品中叶酸的测定》中两种微生物法测定乳粉中叶酸进行比对研究。[方法]验证试管法和微孔板法测定叶酸的准确度和重复性,根据数据的差异与试验操作过程对两种方法进行比较分析。[结果]由准确性试验可知,两种方法所测结果均与标准物质真值相符,相对标准偏差（RSD）分别为2.7%和2.9%,无明显差异。由重复性试验结果可知试管法RSD值为1.3%~3.1%,微孔板RSD值为1.6%~2.9%。[结论]新国标的两种微生物法的准确性和重复性都较好,均能对乳粉中叶酸进行有效测定;微孔板法效率更高,成本更低,适用于大批量样品的检测需求。