胞壁酰二肽对小鼠乳腺组织和乳腺细胞NOD2表达的影响

细菌感染是引起奶牛乳腺炎的主要原因,而胞壁酰二肽(MDP)几乎存在于所有细菌中,核苷酸结合寡聚化结构域2(NOD2)受体是天然免疫中对病原微生物的病原体相关分子模式识别的一类感受器,在机体天然免疫应答中发挥重要作用。为了研究MDP对小鼠乳腺组织和乳腺细胞NOD2表达的影响,试验以小鼠为模型,采用不同浓度的MDP在体乳腺内灌注和对体外小鼠乳腺上皮细胞用不同浓度的MDP刺激,观察小鼠乳腺组织的病理组织学变化,乳腺组织及细胞中NOD2、下游的受体作用蛋白2(RIP2)表达的变化,以及炎性细胞因子TNF-α、IL-6的表达变化。结果表明:从乳腺灌注不同浓度MDP后可引起急性乳腺炎,乳腺组织中炎性细胞增多;MDP刺激后乳腺组织及细胞中NOD2、RIP2、TNF-αmRNA表达水平明显升高,细胞IL-6 mRNA表达水平没有明显升高。说明NOD2介导信号途径促使炎性细胞因子的表达。     

细胞内模式识别受体NOD2研究进展

NOD2蛋白是一种新发现的细胞内模式识别受体,可识别细菌细胞壁的肽聚糖及其裂解产物胞壁酰二肽,广泛参与宿主对病原体的免疫应答,是联系天然免疫与特异性免疫的重要桥梁。本文在查阅、总结近年来NOD2相关研究报道的基础上,介绍了NOD2识别的配体及识别方式、NOD2信号转导通路及信号转导调控,及与NOD2相关的肠道免疫损伤等方面的研究进展。     

NOD1/NOD2介导的信号通路在小鼠金黄色葡萄球菌性乳腺炎中的作用

为研究NOD1/NOD2介导的信号通路在金黄色葡萄球菌(S.aureus)引发小鼠乳腺炎中的作用,本实验通过人工接种不同剂量的S.aureus复制小鼠乳腺炎模型,利用组织切片法观察小鼠乳腺病理变化,采用荧光定量PCR方法检测乳腺组织中NOD1、NOD2、下游的受体作用蛋白2(RIP2)、核转录因子κB(NF-κB)以及炎性细胞因子TNF-α、IL-6的m RNA转录水平。结果显示,接种S.aureus的小鼠乳腺组织中炎性细胞增多,NOD1、NOD2、RIP2、NF-κB、IL-6、TNF-α的m RNA转录水平比未接种对照组均显著升高(p0.05),TNF-α、IL-6的m RNA转录水平变化与NOD1/NOD2相一致。以上结果表明NOD1/NOD2受体及其介导的炎性信号通路参与了S.aureus感染小鼠乳腺的免疫反应。     

围产期奶牛乳房炎与E_2、P_4免疫调节作用及TLRs、NLRs介导天然免疫三者间的关系

对奶牛乳房炎现状、围产期奶牛雌激素(E2)和孕酮(P4)变化对机体免疫的调节、Toll样受体(TLRs)和NOD样受体(NLRs)在抗感染作用中的相关研究进行综述,探讨围产期奶牛乳房炎的高发与E2、P4的免疫调节作用及TLRs、NLRs介导的天然免疫三者间的关系。     

异体移植炎症因子1通过核因子κB信号促进牛乳腺上皮细胞炎症因子的释放

奶牛乳腺炎是指在不同理化因素刺激下奶牛乳腺的炎性反应,其严重影响了奶牛养殖业的健康发展。许多细胞因子是炎症调节剂,但与奶牛乳腺炎相关的关键细胞因子还未被鉴定。异体移植炎症因子1（allograft inflammatory factor-1,AIF-1）在免疫调节中扮演重要角色,并在多种炎性疾病中过量表达。因此,本研究探讨了牛AIF-1在乳腺炎中的可能作用。首先,利用ELISA试剂盒检测了乳腺炎牛奶中牛AIF-1的含量,并用RT-PCR方法克隆牛AIF-1基因,然后,用亲和层析纯化牛AIF-1蛋白。用此重组蛋白刺激牛乳腺上皮细胞,ELISA试剂盒检测肿瘤坏死因子α、白细胞介素6和单核细胞趋化蛋白1的分泌,Western blot测定IκBα的磷酸化。结果显示,患乳腺炎奶牛乳中AIF-1的平均含量显著高于健康奶牛,而抗生素治愈后的奶牛乳中AIF-1的含量回落到正常水平。这些结果提示,牛AIF-1是一个分泌型蛋白,可能与乳腺炎相关。为了进一步探索这种关系,本研究克隆了牛AIF-1基因并纯化了牛AIF-1蛋白。此蛋白上调了牛乳腺上皮细胞肿瘤坏死因子α、白细胞介素6和单核细胞趋化蛋白1的分泌,并刺激了IκBα的磷酸化。IκBα磷酸化抑制剂BAY 11-7085阻断了牛AIF-1刺激的炎性细胞因子上调。综上表明,牛AIF-1通过核因子κB信号促进了牛乳腺上皮细胞炎症因子的释放。     

健康奶牛与临床型乳腺炎奶牛乳腺线粒体蛋白组差异表达分析

运用亚细胞蛋白质组学的研究策略,分离纯化亚细胞结构再进行蛋白质组学研究,可提高低丰度蛋白在双向凝胶电泳中的检出率。通过对比分析乳腺炎奶牛乳腺与正常奶牛乳腺线粒体蛋白质组的表达变化,为奶牛乳腺炎的生物学治疗及抗病育种工作筛选出目基因和蛋白。超速离心法分离线粒体,双向凝胶电泳分离蛋白,PDQuest7．4软件分析差异蛋白斑点,高效液相色谱串联离子阱质谱鉴定差异蛋白。从奶牛乳腺线粒体蛋白2-DE图谱中筛选出17个差异表达的蛋白质斑点,质谱鉴定出17个差异表达蛋白（6个蛋白在奶牛乳腺炎发生过程中下调,8个上调,1个只在正常情况下表达,2个只在乳腺炎乳腺组织中表达）。筛选出的差异蛋白质涉及到细胞的能量代谢、蛋白质合成、mRNA的加工成熟及调亡调控等许多方面,表明奶牛乳腺炎发生时乳腺线粒体组织结构和代谢状态都发生了明显的变化。     

内质网参与NLRP3炎症小体激活的机制研究进展

内质网是动态的膜系统,参与分泌蛋白的合成与折叠、调控脂类合成、维持Ca~(2+)稳态等。核苷酸结合寡聚化结构域NOD样受体家族含Pryrin结构域蛋白3(NLRP3)炎症小体是细胞内的一种多蛋白复合物,被激活后引起机体炎症反应的发生,参与天然免疫防御。错误折叠蛋白应答激活内质网应激反应从而调节NLRP3炎症小体的组装和激活。线粒体相关的内质网膜是脂质等物质转运和NLRP3炎症小体装配的重要分子平台。内质网Ca~(2+)信号转导促进NLRP3炎症小体激活。脂质通过触发Ca~(2+)信号或增强内质网膜流动性激活NLRP3炎症小体。内质网及其相关分子参与NLRP3炎症小体的组装、激活和调控的相关研究为相关疾病的发病机制及治疗靶点提供参考。     

沉默信息调节因子2相关酶1对乳脂、乳蛋白合成和乳腺炎的调节及其可能机制

沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)是Sirtuins家族成员，可以对染色质和非组蛋白进行去乙酰化，在乳脂、乳蛋白合成以及乳腺炎的调控中发挥重要作用。本文主要综述了SIRT1通过AMP依赖的蛋白激酶（AMPK）、蛋白酪氨酸激酶-2(JAK2)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）和核转录因子-κB(NF-κB)等信号通路调控奶牛乳脂、乳蛋白合成以及乳腺炎的分子机制，以期为奶牛在乳脂、乳蛋白合成以及乳腺炎的靶向治疗提供理论支撑。     

奶牛乳腺炎对奶牛血液指标的影响

为探讨乳腺炎奶牛血液成分的变化情况与奶牛乳腺炎发生发展的相关性,进一步研究奶牛乳腺炎的发病机理,为奶牛乳腺炎的防治提供血液学依据,采用动物血液细胞分析仪和全自动生化分析仪对临床型乳腺炎奶牛、隐性乳腺炎奶牛和健康奶牛的血液常规指标、多项血清生化指标进行检测分析和比较研究。结果表明:临床型乳腺炎奶牛、隐性乳腺炎奶牛与健康奶牛相比,相关血液常规指标的检测结果和血清生化指标的检测结果有变化。说明奶牛乳腺炎是一个全身性的病理过程,不仅乳腺组织遭到破坏,血液成分也发生了变化。     

奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌免疫逃避机制研究进展

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,SA）型奶牛乳腺炎是一种较难控制的慢性、亚临床型传染病,给奶牛养殖业带来巨大的经济损失。多种SA免疫逃避机制在乳腺炎发生、发展过程中起重要作用,且SA的免疫逃避机制多与菌体毒力因子相关。本文对近年研究的奶牛乳腺炎SA的免疫逃避机制进行了综述,以期为SA型奶牛乳腺炎的防治研究提供参考。     

小鼠细菌性乳腺炎模型研究进展

奶牛细菌性乳腺炎一直是困扰奶牛养殖业的一大难题,给奶牛养殖行业造成巨大经济损失,直接危害奶牛健康。为有效治疗奶牛细菌性乳腺炎,研究人员需要通过动物模型来进行相关研究,以期找到优良的治疗方法。随着动物模型多年的探索与使用,小鼠细菌性乳腺炎模型因具有省时、省力以及性价比高的优点获得了研究人员的广泛认可,被大量用于相关研究中。就此对小鼠细菌性乳腺炎模型的建立、特点以及应用进行综述,旨在为细菌性乳腺炎相关研究提供参考。     

NF-κB信号通路调控奶牛乳腺炎的分子作用机制

乳腺炎通常是由微生物感染引起的乳腺炎症反应,是奶牛最常见的疾病之一,可导致牛奶产量及品质下降,奶牛利用年限减少,严重地影响着牧场的经济效益。近年来,学者们在奶牛乳腺炎分子调节机制方面开展了大量研究,发现NF-κB及其信号通路可参与调控多个免疫相关基因的表达,在细胞炎症反应和免疫应答等过程起关键性作用,也是奶牛乳腺炎研究的热点。本文阐述了奶牛乳腺炎的病因和病理变化,以及NF-κB信号通路与机体免疫的关系,并重点综述了mRNA、非编码RNA（miRNA、lncRNA和circRNA）及生物活性物质通过NF-κB信号通路调控奶牛乳腺炎的最新研究进展,为奶牛乳腺炎的分子调控网络解析、抗乳腺炎分子育种与生物活性药物研发提供参考。     

奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌FnBPA蛋白免疫研究

为了研究奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌发病机制和治疗措施,对引起奶牛临床型和隐性乳腺炎的337株金黄色葡萄球菌进行FnBPA蛋白基因分子调查,并且表达和纯化了FnBPA蛋白,制作FnBPA蛋白疫苗进行动物免疫试验。结果表明,FnBPA蛋白基因携带率为51. 04%,临床型乳腺炎金黄色葡萄球菌FnBPA蛋白基因的携带率为68. 5%。选取分离菌株10A扩增出的FnBPA基因,进行原核表达,重组蛋白得到高效表达,获得高纯度的FnBPA蛋白,BCA法蛋白定量为2. 8 mg/mL,制作蛋白疫苗免疫3头试验奶牛,30～40 d后,ELISA检测血清抗体滴度达到高峰,最高抗体滴度达到7l og_2,该蛋白具有很好的抗原性。     

不同程度奶牛乳腺炎乳中血清淀粉样蛋白A的变化

目前国内主要通过测定乳汁体细胞数( somatic cell counts,SCC)对奶牛乳腺炎进行诊断[1],但SCC 的影响因素较多,而且不能及时地反映出奶牛乳房的炎症状态.已有研究表明,奶牛患乳腺炎时奶中急性期蛋白(acute phase protein,APP)的含量变化明显,在奶牛乳腺炎早期诊断中具有重要价值[2].因此,本试验通过检测不同程度奶牛乳腺炎乳中最为敏感的App[3]:血清淀粉样蛋白A(serum amyloid A,SAA)的浓度变化,研究乳腺炎发病程度与其之间的联系,为日后寻找和筛选一种在乳腺炎早期实时诊断和普遍适用的方法奠定了良好的基础.     

奶牛乳腺炎抗性候选基因多态性研究进展

奶牛的乳腺炎是一种极其复杂的疾病,是影响奶牛产业发展的一个重要因素。对奶牛乳腺炎抗性的研究有助于选育出有高抗性的奶牛群体,提高奶产品的数量和质量,并且可以减少抗生素的使用。近年来,随着生物信息学、分子育种技术和基因组学的发展,为奶牛的乳腺炎抗病育种提供的新的前景。本文主要介绍了牛锌指蛋白313基因、前脑锌指蛋白基因、T...     

奶牛乳腺炎治疗研究进展

奶牛乳腺炎导致奶牛产奶量下降,奶品质降低,甚至奶牛的早期淘汰,对奶牛业造成巨大危害。传统抗生素治疗乳腺炎花费大,治疗效果不确定,且易导致细菌耐药及抗生素残留问题。乳腺炎防治新制剂乳酸链球菌素、Aegis溶菌酶、溶葡萄球菌酶,分别针对病原菌细胞膜、骨架、生物膜而发挥治疗作用;CpGDNA有助于激活机体天然免疫系统;血小板浓缩液不仅具有抗菌作用且可促进乳腺组织修复。在乳腺炎治疗新策略方面,应用激素可调控乳腺细胞分泌及修复能力;另外,调控乳腺细胞相关信号通路及中性粒细胞可控制乳腺炎症反应,达到预防和治疗乳腺炎的目的。     

奶牛乳腺炎防治研究进展

奶牛乳腺炎是制约奶牛业发展和危害消费者健康的最主要因素。据国内外相关资料显示。近年来．各种类型的乳腺炎特别是隐性乳腺炎的发病数约占泌乳期奶牛总数的1／3，而且发病率呈不断上升的趋势。该病不仅影响奶牛的产奶量、降低牛奶品质、危害消费者健康、延长产后发情期、增加奶牛淘汰率．而且是降低奶牛业经济效益的最主要原因。     

奶牛乳腺防御研究进展

奶牛乳腺炎是影响奶牛业发展的主要疾病，采取怎样的措施来制止其发病率、提高奶牛抵抗力一直是我们亟待解决的问题。目前，全世界约有2．2亿多头奶牛，其中1／3患各种类型的乳腺炎，经济损失严重。据报道，国外奶牛乳腺炎的发病率约为25％～60％。据我国有关部门不完全统计，发病率达20％～70％，个别牛群发病率甚至更高。美国乳腺炎理事会曾对奶牛乳腺炎进行了广泛的研究，结果证明1头奶牛患乳腺炎后其用于治疗的费用、废弃低质量的牛奶、     

产后1周胎衣不下奶牛子宫内膜TLR2、TLR4和CD14的mRNA表达变化

为了探讨奶牛胎衣不下对子宫内膜先天免疫相关基因表达的影响,在产后第1天和第7天,对9头胎衣不下的奶牛和10头正常分娩的奶牛进行子宫内膜活检;每周收集子宫内容物进行需氧菌分离培养;在产后第1天和第7天,检测所有奶牛子宫内膜TLR1/6、TLR2、TLR4、TLR5、TLR9、NOD1、NOD2、CD14和MD2的基因表达。结果表明:无论奶牛有无胎衣不下,在产后21 d内大肠杆菌是子宫内容物中最常见的细菌;产后第7天与第1天相比,胎衣不下的奶牛子宫内膜TLR2、TLR4和CD14的基因表达水平明显降低(P0.05),而正常分娩的奶牛在相同时间段上述受体基因表达无明显差异,说明产后1周胎衣不下的奶牛子宫内膜TLR2、TLR4和CD14的基因表达减少可能与子宫感染炎症有关。     

中国荷斯坦奶牛CCR5基因克隆、生物信息学及表达分析

试验旨在克隆中国荷斯坦奶牛CC趋化因子受体5(C-C chemokine receptor type 5,CCR5)基因,对其进行生物信息学分析,并探究CCR5基因在奶牛炎性和健康组织中的表达水平。采用PCR技术扩增并克隆荷斯坦奶牛CCR5基因CDS区全长序列,连接pMD18-T载体并转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,通过蓝白斑方法筛选阳性克隆并测序,对序列进行相似性比对及系统进化树构建;应用多种在线生物信息学软件对其编码蛋白进行分析,并利用实时荧光定量PCR方法检测CCR5基因在健康和炎症奶牛乳腺组织中的表达情况。结果显示,中国荷斯坦奶牛CCR5基因CDS区全长1 059 bp,编码352个氨基酸。相似性和遗传进化分析结果显示,奶牛CCR5基因与绵羊的遗传距离最近,高达96.0%,与鸡遗传关系最远,为61.0%,且在不同物种之间CCR5基因高度保守。中国荷斯坦奶牛CCR5蛋白分子质量为40.235 ku,理论等电点(pI)为9.30,为疏水性蛋白但不是分泌蛋白,主要存在于细胞质内;在CCR5蛋白二级结构中α-螺旋和无规则卷曲分别占51.14%和32.95%,三级结构模型预测结果与二级结构一致。实时荧光定量PCR结果显示,CCR5基因在健康奶牛乳腺组织中的表达量极显著低于炎性奶牛乳腺组织(P<0.01),提示其可能参与奶牛乳腺炎的发生过程。本试验结果为进一步研究奶牛CCR5蛋白的功能提供了理论依据,对探究奶牛CCR5基因在奶牛乳腺炎中的调控功能等具有重要意义。