甘肃省燕麦主产区叶斑病调查及病原鉴定

为了明确甘肃省燕麦主产区叶斑病的发生情况及其病原种类,为防治提供理论依据。对定西市通渭县、张掖市山丹县和民乐县、武威市天祝县和甘南州合作市大面积种植的燕麦田间叶斑病发病情况进行了调查,对采集的病叶进行了病原菌的培养、分离、致病性测定及鉴定。结果表明,不同区域燕麦叶斑病的发生情况存在明显差异,其中定西市通渭县最严重,平均病叶率为96.15%,平均病情指数为70.26;武威市天祝县的叶斑病病叶率和病情指数分别为95.07%和69.16;张掖市民乐县叶斑病较轻,平均病叶率为8.78%,病情指数为2.45。分离纯化获得的真菌经致病性测定后发现发病症状与田间病害症状一致,经再次分离可得到相同的病菌。进一步通过形态学观察和rDNA-ITS序列分析表明引起甘肃省燕麦主产区叶斑病的病原菌有10种,分别为燕麦内脐蠕孢(Drechslera avenae)、燕麦核腔菌(Pyrenophora avenae)、德氏霉菌(Pyrenophora chaetomioides)、细交链格孢(Alternaria alternata)、芸薹链格孢(Alternaria brassicae)、苹果链格孢(Alternaria mali)、麦根腐平脐蠕孢(Bipolaris sorokiniana)、芽枝状枝孢菌(Cladosporium cladosporioides)、多主枝孢(Cladosporium herbarum)和黑附球菌(Epicoccum nigrum),优势菌为燕麦内脐蠕孢和细交链孢,在各调查样地均能分离出。明确了燕麦叶斑病在甘肃省主要种植区的发生情况及其病原种类,除燕麦内脐蠕孢和燕麦核腔菌外,其他均为国内燕麦叶斑病新的病原菌。     

甘肃省燕麦主产区叶斑病调查及病原鉴定

为了明确甘肃省燕麦主产区叶斑病的发生情况及其病原种类,为防治提供理论依据。对定西市通渭县、张掖市山丹县和民乐县、武威市天祝县和甘南州合作市大面积种植的燕麦田间叶斑病发病情况进行了调查,对采集的病叶进行了病原菌的培养、分离、致病性测定及鉴定。结果表明,不同区域燕麦叶斑病的发生情况存在明显差异,其中定西市通渭县最严重,平均病叶率为96.15%,平均病情指数为70.26;武威市天祝县的叶斑病病叶率和病情指数分别为95.07%和69.16;张掖市民乐县叶斑病较轻,平均病叶率为8.78%,病情指数为2.45。分离纯化获得的真菌经致病性测定后发现发病症状与田间病害症状一致,经再次分离可得到相同的病菌。进一步通过形态学观察和rDNA-ITS序列分析表明引起甘肃省燕麦主产区叶斑病的病原菌有10种,分别为燕麦内脐蠕孢(Drechslera avenae)、燕麦核腔菌(Pyrenophora avenae)、德氏霉菌(Pyrenophora chaetomioides)、细交链格孢(Alternaria alternata)、芸薹链格孢(Alternaria brassicae)、苹果链格孢(Alternaria mali)、麦根腐平脐蠕孢(Bipolaris sorokiniana)、芽枝状枝孢菌(Cladosporium cladosporioides)、多主枝孢(Cladosporium herbarum)和黑附球菌(Epicoccum nigrum),优势菌为燕麦内脐蠕孢和细交链孢,在各调查样地均能分离出。明确了燕麦叶斑病在甘肃省主要种植区的发生情况及其病原种类,除燕麦内脐蠕孢和燕麦核腔菌外,其他均为国内燕麦叶斑病新的病原菌。     

牧草根际3种平脐蠕孢菌培养性状及对营养的利用能力

首次对我国典型草原牧草根际特异平脐蠕孢菌、高粱平脐蠕孢菌及麦根腐平脐蠕孢菌3种真菌的培养特性进行了研究.结果表明,3种平脐蠕孢菌菌丝生长的温限均为10～35℃,最适温度30℃.在试验的11种碳源中,D-果糖等碳源对3种平脐蠕孢菌菌丝生长有明显的促进作用,菊糖、氯醛糖有较强的抑制作用.在试验的12种氮源中,亮氨酸、L-谷氨酸、硝酸铵有明显的促进作用,而L-精氨酸、尿素、碳酸铵、甘氨酸有较强的抑制作用.高粱平脐蠕孢菌对多种碳、氮源利用能力较强,麦根腐平脐蠕孢菌则较弱.3种平脐蠕孢菌在不同碳、氮源培养基上菌落颜色、大小、边缘整齐度有明显差异.     

3种牧草根际平脐蠕孢形态和生物学特性

自甘肃环县沟壑草地牧草根部常规组织分离获得特异平脐蠕孢、高粱平脐蠕孢和麦根腐平脐蠕孢，并对其生物学特性进行了研究。结果表明，3种平脐蠕孢在生物学特性上有明显差异，特异平脐蠕孢孢子萌发的温限为5～45℃，最适萌发温度为35℃，在45℃时萌发率仍高达85．1％；高粱平脐蠕孢孢子的萌发温限为5～40℃，最适萌发温度为15～30℃；麦根腐平脐蠕孢孢子的萌发温限为5～45℃，最适温度15～25℃，在45℃时萌发率仅为2．3％；不同pH值时特异平脐蠕孢孢子萌发率均较后2种高，且前者孢子萌发的最适pH值为5．59～6．47，后两者pH值均为6．47；土壤液等4种营养液对特异平脐蠕孢孢子萌发率在4h后有促进作用，对高粱平脐蠕孢在最初2h有促进作用，而对麦根腐平脐蠕孢则有抑制作用；3种菌萌发均需要液态水，但对光不敏感。     

西藏秋播燕麦苗期褐斑病病原鉴定及生物学特性研究

通过病原菌的分离、回接及病原菌形态学鉴定,将西藏秋播燕麦褐斑病的病原鉴定为麦根腐平脐蠕孢（Bipolaris sorokiniana）。病菌菌丝在5～35℃均可生长,最适生长温度30℃;在10～30℃均可产孢,20℃时的产孢量最大。培养温度不同,孢子大小亦不同,20℃时孢子最大;15℃时孢子隔膜数最多。分生孢子在10%...     

冰草根际蟋蟀草平脐蠕孢菌的研究

对冰草根际分离获得的蟋蟀草平脐蠕孢(Bipolaris eleusinea J.H.Peng et J.Y.Lu)的形态特征、培养性状及生物学特性进行研究,以期了解牧草根部平脐蠕孢菌的生长发育特点,并为该菌引起的牧草根病防治提供依据.结果表明:蟋蟀草平脐蠕孢分生孢子萌发的温度范围为5℃~40℃,适宜温度20℃~30℃;在各酸度下均能萌发,最适为pH 6.47;其分生孢子的萌发需要液态水,在相对湿度100%时分生孢子萌发率仅为3.2%,而相对湿度低于100%时孢子不萌发;低稀释倍数的土壤悬液、麦根浸出液、羊粪浸出液和蔗糖溶液[0]及高稀释倍数的麦根液和羊粪液均抑制孢子萌发,但高稀释倍数的土壤液和蔗糖液能促进孢子萌发;且孢子萌发对光不敏感.蟋蟀草平脐蠕孢菌丝生长的温度范围为10℃~40℃,最适25℃;碳源中D-木糖、氯醛糖对蟋蟀草平脐蠕孢菌生长具有明显抑制作用,而蔗糖、甘露糖和D-果糖对蟋蟀草平脐蠕孢菌丝生长具有明显促进作用;氮源中硝酸钠、亮氨酸对蟋蟀草平脐蠕孢菌丝的生长具有促进作用,而尿素等9种氮源均有抑制作用,并且此菌在含有各种碳、氮源的培养基上的菌落形态有差异.在国内首次报道此菌侵染冰草(Agropyron cristatum),为一新寄主植物.     

宁夏地区玉米镰孢茎腐病病原菌的分离与鉴定

为明确宁夏地区玉米镰孢茎腐病病原菌的种类及优势病原菌,本研究于2020年采集宁夏地区玉米(Zea mays L.)茎腐病样品36份,对所采集样品进行组织学分离、纯化和单孢分离,参照Nelson等分类系统进行形态学鉴定,并结合镰孢菌特异性引物EF-1α进行序列分析。本研究共获得209株镰孢菌,包括禾谷镰孢复合种(Fusarium graminearum species complex)、拟轮枝镰孢(F. verticillioides)、木贼镰孢(F. equiseti)、层出镰孢(F. proliferatum)、胶孢镰孢(F. subglutinans)、半裸镰孢(F. incarnatum)、锐顶镰孢(F.acuminatum.)、黄色镰孢(F.culmorum)和燕麦镰孢(F.avenaceum),其分离频率依次为28.2%,23.9%,20.1%,8.1%,7.2%,6.7%,2.9%,1.9%和1.0%。其中,禾谷镰孢复合种在宁夏5市均有分布,且致病性强,为宁夏地区玉米镰孢茎腐病优势致病菌。     

几种真菌对3种常见冷季型草坪草的致病性测定

以我国北方常见的冷季型草坪草高羊茅(Festuca arundinacea)、多年生黑麦草(Lolium perenne)和草地早熟禾(Poa pratensis)为材料，将细交链孢(Alternaria alternata)、根腐离蠕孢(Bipolaris sorokiniana)、枝孢(Cladosporium herbarum)、新月弯孢(Curvularia lunata)、德氏霉(Drechslerasp．)、燕麦镰孢(Fusarium avenaceum)、锐顶镰孢(F．acuminatum)、尖镰孢(F．oxysporum)，腐皮镰孢(F．solani)和粉红粘帚霉(Gliocldium roseum)10种分离自草坪草的真菌接种，进行离体叶片的致病性测定。结果表明：细交链孢、根腐离蠕孢、德氏霉、腐皮镰孢、粉红粘帚霉和枝孢对高羊茅具有明显的致病性；根腐离蠕孢、燕麦镰孢和锐顶镰孢对黑麦草有明显的致病性；而仅根腐离蠕孢对早熟未有较明显的致病性。     

天祝县燕麦叶斑病的发生情况及其病原鉴定

叶斑病（Drechslera avenacea）是燕麦（Avena sativa）的重要病害之一,严重影响燕麦的品质和产量。天祝藏族自治县是甘肃省燕麦的主要种植区,为明确这一地区叶斑病的发生情况及其病原菌种类,本研究对天祝县5个村镇的燕麦田进行了叶斑病发生情况调查和病样采集,对病原菌进行了致病性测定、形态特征观察和rDNA-ITS序列分析。结果表明,5个调查区域中松山镇黑马圈河村和东大滩乡上泉村发病最严重,病叶率高达92%以上,病情指数60以上;安远镇柳树村、抓喜秀龙乡南泥沟村和东大滩乡酸茨沟村发病也较重,发病率在64%左右,病情指数23左右。经分离鉴定,发现引起天祝县燕麦叶斑病的病原菌共有4属5种,其中德氏霉属（Drechslera）2种,链格孢属（Alternaria）、附球菌属（Epicoccum）和枝孢菌属（Cladosporium）各1种。天祝县燕麦叶斑病发病较严重,共分离筛选出的5种病原菌,除德氏霉属的燕麦内脐蠕孢（Drechslera avenae）外,其它病原菌在国内燕麦上未见报道。     

玉米穗腐病样品中黄色镰孢的分离鉴定及rDNA-ITS序列分析

为了明确甘肃玉米穗腐病的病原菌,于2009年9月在甘肃省四大生态区采集玉米穗腐病样品,以组织分离法进行病原物的分离培养,对分离得到的镰孢菌菌落进行纯化和单孢分离后,以形态学为基础,参照Leisle分类系统进行鉴定。结果表明,分离到271株镰孢菌菌株中有105株经形态学鉴定为黄色镰孢,占分离镰孢菌的38.7%。分析发现黄色镰孢种群数量随采样区而异,陇东和陇南地区采集的样品中分离频率分别为52.0%,55.4%,本研究充分证明了黄色镰孢是甘肃省陇东和陇南地区玉米穗腐病的优势病原菌。按照柯赫氏法则用混合菌株接种法对沈单16和金穗96832进行致病性测定,证实了黄色镰孢对玉米果穗的致病性。随机选取3株黄色镰孢菌株进行rDNA-ITS基因序列分析,将PCR产物回收测序后在GenBank 上比对,菌株3-1-1与GenBank 中登记的黄色镰孢菌株K1004和K216、6-4-1和21-2-1与黄色镰孢菌株CBS122.73亲缘关系最近,同源性达99%。利用DNAStar 软件绘制其系统发育树状图,结果表明,菌株3-1-1与K1004和K216、菌株6-4-1和21-2-1与CBS122.73位于系统发育树的同一分支,聚为一类,与形态学的鉴定结果一致。     

二月兰种带真菌致病性研究

二月兰是重要的地被、景观和绿肥作物。通过种子、离体叶片和温室盆栽试验，对分离自二月兰种子的链格孢菌，芸薹生链格孢，细极链格孢，黑附球菌，变红镰刀菌，顶孢哈氏霉，细基格孢属等5属7种可培养真菌进行了致病性测定。结果表明，7种真菌可致二月兰种子萌发后烂种烂芽率16.50%~68.50%，其中芸薹生链格孢、顶孢哈氏霉可引致种子发芽率降低18.18%~27.27%。7种种带真菌分别引致二月兰离体叶片出现褪绿和坏死腐烂等症状，发病率100%，病斑面积8.84%~99.38%，病情指数22.50~95.00。盆栽条件下，种带真菌均可致植物出现萎蔫褪绿和坏死叶斑等症状，病株率100%，叶片发病率41.56%~79.88%，病情指数16.22~56.93。与对照（不接种带真菌）相比，种带真菌侵染二月兰植株后第9天植物丙二醛（MDA）含量增加30.40%~204.15%，过氧化物酶（POD）活性变幅为-1.81%~82.87%，超氧化物歧化酶（SOD）活性升高18.78%~86.14%，叶绿素含量（SPAD值）降低13.24%~37.85%。致病性试验表明，芸薹生链格孢致病性最强，顶孢哈氏霉致病性最弱。     

表达Ag85基因重组卡介苗的构建

为研发一种更安全、有效的结核病疫苗,用于预防并清除结核病,本试验构建4株分别表达Ag85A、Ag85B、Ag85C、Ag85D基因的重组卡介苗,参考pMV261载体序列和Tuberculist上登录的H37Rv序列设计引物,通过PCR扩增和无缝克隆技术构建含Ag85基因片段的重组pMV261质粒。分别对重组质粒进行PCR、双酶切鉴定后,通过电击转化转染到卡介苗感受态细胞中,利用Kan耐药基因筛选获得重组卡介苗菌株。采用PCR及Western blotting鉴定Ag85A、Ag85B、Ag85C、Ag85D基因在卡介苗中的表达,再对构建成功的重组卡介苗进行培养,用于后续试验。PCR扩增结果表明,构建的重组卡介苗rBCG/Ag85A、rBCG/Ag85B、rBCG/Ag85C和rBCG/Ag85D目的基因片段大小分别为1 447、1 402、1 453和1 330 bp,与预期大小一致,表明目的基因已成功整合到卡介苗中;Western blotting结果表明,Ag85A、Ag85B、Ag85C、Ag85D基因均可在卡介苗细胞内成功表达。本试验利用基因工程技术成功获得4株分别表达Ag85A、Ag85B、Ag85C、Ag85D基因的重组卡介苗,将其分别命名为rBCG/Ag85A、rBCG/Ag85B、rBCG/Ag85C、rBCG/Ag85D。本研究可为进一步将其他抗原基因插入卡介苗细胞构建重组疫苗及疫苗研究提供材料。     

32个紫花苜蓿品种的种带真菌种类及致病性研究

植物病原菌通过种子可进一步在时间上延续和空间上传播。为确定我国目前主要种植的苜蓿品种是否携带苜蓿黄萎病菌等毁灭性病害的病菌和其他重要病菌,为苜蓿的引种调运和病害防治提供数据支撑,本研究从我国苜蓿育种者和经营进口苜蓿种子的公司收集了32个苜蓿品种,采用PDA平皿法分离并鉴定了种带真菌,采用浸种法测定了其对中苜3号的种子萌发、幼苗生长的致病性影响。结果表明,供试种子中未检测出苜蓿黄萎病菌及其他生产上的检疫性病原菌,苜蓿种子上的真菌主要为环境普遍存在的链格孢属、青霉属、曲霉属等真菌,共有19属20种;不同品种的种子带菌率有显著差异,不消毒处理下带菌率为26.18%~67.54%;消毒处理后平均种带真菌率有效降低了25.10%;枝孢霉、黑附球菌、枝顶孢、细交链孢等显著降低发芽率,篮状菌、球毛壳菌、黄曲霉、茄匍柄霉等菌对幼苗的芽和根有显著的抑制作用,严重的可引起幼苗枯萎、腐烂。     

二月兰种带真菌分离与鉴定

种带真菌是植物病害的重要传播途径,本研究以重要绿肥作物二月兰（Orychophragmus violaceus）为研究对象,通过室内分离培养、形态学和分子学鉴定,旨在明确二月兰种带真菌种类,探讨其种带真菌与田间病害发生的相关性。试验结果获得二月兰种带真菌5属7种,分别为链格孢属链格孢菌（Alternaria alternata）,芸薹生链格孢（A. brassicicola）,细极链格孢（A. tenuissima）,附球菌属黑附球菌（Epicoccum nigrum）,镰刀菌属变红镰刀菌（Fusarium incarnatum）,哈氏霉属顶孢哈氏霉（Harzia acremonioides）,细基格孢属（Ulocladium sp.）真菌;其中芸薹生链格孢是导致田间二月兰叶斑病的病原。通过高通量测序得到二月兰种带真菌25属30种,包括常见致病菌芸苔链格孢、十字花科白粉菌（Erysiphe cruciferarum）、孔状短小茎点霉（Phoma exigua var. exigua）、粉红单端孢（Trichothecium roseum）和大丽轮枝菌（Verticillium dahliae）等。可见,二月兰种带真菌多为常见致病菌,应进一步开展其致病性研究,关注种带真菌与田间病害发生的相关性,据此研发防治技术。     

玉米穗腐病样品中木贼镰孢菌的分离鉴定及生物学特性

为明确甘肃玉米（Zea mays L.）穗腐病的病原菌种类,在甘肃4大生态区采集玉米穗腐病样品,以组织分离法进行病原物的分离培养,对分离得到的镰孢菌（Fusarium）菌落进行纯化和单孢分离后,以形态学为基础,参照 Leisle 分类系统进行鉴定。结果表明：分离到271株镰孢菌菌株中有14株经形态学鉴定为木贼镰孢菌（F. equiseti）,占分离镰孢菌的5.17%。按照柯赫氏法则用混合菌株接种法进行致病性测定,证实木贼镰孢菌对玉米果穗的致病性。选取3株木贼镰孢菌菌株进行rDNA-ITS基因序列分析,将PCR产物回收测序后在GenBank上比对,菌株GSJC5-2-1和GSZY16-1-1的序列与GenBank上登记的木贼镰孢菌GQ505694和GQ505743;菌株GSZN7-2-2与FJ459981,HQ248199,HQ380774,AB425996和FJ459975的亲缘关系最近,同源性达99%。利用DNAStar软件绘制其系统发育树状图,菌株GSJC5-2-1,GSZY16-1-1和GSZN7-2-2分别与以上亲缘关系最近的木贼镰孢菌位于系统发育树的同一分支,聚为一类,与形态学的鉴定结果相一致。木贼镰孢菌GSJC5-2-1的生长温度范围为15～35℃,最适温度为25℃;菌落在pH值为4～10的培养基上能够迅速扩展,最适pH为6～7;碳源和氮源对木贼镰孢菌菌丝生长影响相对稳定;完全黑暗条件下,菌丝扩展最快;病原菌菌丝致死温度为60℃下10 min。     

Occurrence of Fusarium species and their mycotoxins in corn silage. 5. Fusarium infestation in corn silage

The internal mycoflora of silage maize plants was examined in several years. Average Fusarium infection of the maize plants was 10.4% and leaf sheaths and stalks were preferably colonized by the fungi. During the growing season an increase in total colonization of the maize plant by field fungi as well as by species of the genus Fusarium was observed 17 different Fusarium species were isolated from silage maize plants. Most frequently occurring species (more than 85%) in descending order were F. avenaceum, F. culmorum, F. equiseti, F. sporotrichioides, F. crookwellense, F. oxysporum, F. sambucinum var. coeruleum.     

丰都县青贮玉米品种引种栽培试验

青贮玉米引种栽培试验结果表明:青贮玉米1号、青贮玉米2号和墨西哥饲用玉米品种在试验区种植适应性好,鲜草产量为127725.0kg/hm2、131625.0kg/hm2和180465.0kg/hm2,分别比当地普通玉米增产59.8%、64.6%和125.7%,青贮后品质优良,肉牛喜食,有很重要的推广利用价值。