禽源大肠杆菌的耐药性分析及β-内酰胺类耐药基因的检测

为了研究扬州大学动物医院2017年5月份收集的禽源大肠杆菌的耐药性特征和β-内酰胺类耐药基因,对50株分离菌进行药敏试验和PCR检测TEM、CTX-M-1、CTX-M-2和CTX-M-9和SHV 5种基因。药敏试验结果表示,分离菌对临床上常用的抗生素耐药性都较高,其中复方新诺明的耐药性为82%,美洛西林和头孢曲松的耐药率分别为26%和20%。PCR结果显示,50株细菌中有23株细菌携带TEM,2株细菌携带CTX-M-1型中的CTX-M-79,5株细菌携带CTX-M-9型分别为4株为CTX-M-14,1株为CTX-M-125,未检测到SHV型及CTX-M-2型。因此50株分离菌最常见的类型是TEM。     

30株鸡大肠杆菌ESBLs基因型检测及耐药性分析

采用2倍稀释法检测30株鸡大肠杆菌对常见药物耐药性,用表型筛选和确证试验检测产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)情况,并分别用TEM、SHV和CTX-M等3种通用引物进行PCR扩增以确定其基因型.结果显示23株大肠杆菌为产ESBLs株,占76.7%.PCR扩增表明TEM、CTX-M、SHV阳性率分别为73.9%、43.5%和0%,有7株同时检测出TEM和CTX-M基因(占30.4%),3株未检测出TEM、CTX-M和SHV 3种基因(占13.0%).药敏试验结果显示产ESBLs大肠杆菌对药物的多重耐药性明显比非产酶大肠杆菌严重,产酶菌对氨苄西林和头孢噻呋的耐药率最高,为95.7%,对氨基糖苷类、恩诺沙星和复方新诺明的耐药率均高于78%,氨苄西林和三代头孢与酶抑制剂联用或2种不同种类的药物联用均能明显增强抗菌活性.以上结果表明河南省76.7%的临床分离鸡大肠杆菌为产ESBLs株,其基因型主要是TEM和CTX-M,尚无SHV型,β-内酰胺类与酶抑制剂联用或不同种类药物联用是防治鸡产酶大肠杆菌感染的有效措施之一.     

贵州省猪源沙门氏菌对β-内酰胺类药耐药性及耐药基因分析

为了解贵州省猪源沙门氏菌对β-内酰胺类抗菌药物耐药性及其耐药基因的流行情况,本试验从贵州省9个地区规模养猪场中分离鉴定130株沙门氏菌,采用微量肉汤稀释法测定其对常用的8种β-内酰胺类抗菌药物的敏感性,并用PCR法对β-内酰胺酶耐药基因进行检测。结果显示,沙门氏菌对常用的β-内酰胺类抗菌药物耐药性十分严重,其中对头孢他啶的耐药率为100%,其次是氨苄西林和阿莫西林,耐药率分别为80.77%和76.15%,耐药率最低的是头孢噻呋和头孢氨苄,均为46.15%。所有菌株均为多重耐药,其中最少为二重,占总数的2.31%,最多为八重,占总数的4.62%,多重耐药主要集中在四至七重,占总数的88.46%。PCR结果显示,SHV耐药基因未检出,TEM、OXA、CTX-M 3种基因检出率分别是85%、75%和46%,细菌的耐药性与相关耐药基因的检出率基本呈正相关。结果表明,猪源沙门氏菌对β-内酰胺类药物具有普遍耐药性,其中头孢他啶尤为严重。TEM、OXA、CTX-M基因是贵州省猪源沙门氏菌主要耐药基因,临床日益严重的耐药现象与耐药基因的普遍存在有很大的关系。     

水禽源大肠杆菌耐药性及β-内酰胺类和喹诺酮类耐药基因检测分析

为了解广东珠三角地区水禽源大肠杆菌(E.coli)耐药性以及β-内酰胺类和喹诺酮类耐药基因的情况,本研究通过琼脂稀释法测定251株水禽源E.coli对β-内酰胺类和喹诺酮类药物的敏感性,采用PCR方法检测β-内酰胺类和喹诺酮类耐药基因的携带情况。药物敏感性试验结果显示,水禽源E.coli对氨苄西林和阿莫西林的耐药率均高于85%,对头孢他啶和头孢噻呋的耐药率为24.7%和31.5%,对环丙沙星、诺氟沙星、恩诺沙星和萘啶酸耐药率为62.9%~89.6%。耐药基因检测结果显示,bla_(CTX-M)、bla_(TEM)和bla_(OXA)的检出率分别为89.2%、78.4%和49.4%;251株水禽源大肠杆菌中均没有检测到qnrA;qnrB和qnrD检出率较低,仅为2.5%和4%,qnrS检出率为41.1%;另外,有43.0%的E.coli同时携带喹诺酮类和β-内酰胺类耐药基因。研究结果表明广东地区水禽源大肠杆菌对青霉素类和喹诺酮类药物耐药情况较严重,而且β-内酰胺类耐药基因(bla_(CTX-M)、bla_(TEM)和bla_(OXA))和喹诺酮类耐药基因(oqxB)的检出率均高于49%,提示临床日益严重的耐药现象与耐药基因普遍存在相关性。     

48株大肠杆菌超广谱β-内酰胺酶基因型检测

为了解重庆地区部分鸭场大肠杆菌中超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因分布情况及抗生素的应用对鸭场环境菌的影响。本试验采用PCR技术,对48株大肠杆菌(包括20株病料分离株和28株鸭场土壤分离株)的ESBLs基因TEM、SHV、CTX-M进行检测。结果表明,TEM、SHV、CTX-M型基因在病料分离株中的检出率分别为100%、30%、25%,鸭场土壤中的检出率分别为57.1%、21.4%、28.6%。不同来源的菌株均能检测出耐药基因,且部分细菌携带两种以上耐药基因;病料分离株和鸭场土壤分离株中携带的ESBLs基因均以TEM型为主。     

山东济宁地区百日鸡群沙门菌的鉴定及耐药特性研究

为评估山东地方品种百日鸡沙门菌的耐药基因、耐药表型特点以及不同血清型沙门菌间的克隆关系等,本研究对采自山东济宁禽场90枚18胚龄百日鸡死胚进行细菌的分离鉴定,并采用血清诊断试剂盒测定分离菌的血清型;采用PCR方法进行多位点序列分型(MLST)、耐药基因和Ⅰ类整合子的检测;利用K-B法测定其耐药表型。结果显示,90枚死胚共分离出46株沙门菌(鸡白痢沙门菌25株、肠炎沙门菌21株),其中12枚鸡胚存在两种沙门菌的共感染;46株沙门菌共分为3种ST型:ST11(21/46,45.65%)、ST92(20/46,43.48%)和ST2151(5/46,10.87%);分离菌形成两个克隆群CC1和CC2,亲缘关系较近,其中ST11型与人源流行株ST1558和ST1747型亲缘关系较近;对红霉素耐药的菌株达到100%(46/46),对氨苄西林耐药的菌株占89.13%(41/46),其中多重耐药菌株占93.5%(43/46),但对多粘菌素、复方新诺明、美福仙均敏感,且来自于同一死胚的鸡白痢沙门菌比肠炎沙门菌耐药谱更广;从分离菌中检测到β-内酰胺类、喹诺酮类和磺胺类耐药基因,其中磺胺类耐药基因sul3的检出率最高为100%(46/46),Ⅰ类整合子的检出率为8.69%(6/46);菌株质粒中检出了β-内酰胺类和磺胺类耐药基因bla_(PSE)(97.83%,45/46)、bla_(CTX-M)(95.65%,44/46)和sul2(97.83%,45/46)。分离菌除喹诺酮类耐药基因qnrD与其耐氧氟沙星表型存在显著相关性外,其他分离菌携带耐药基因与其耐药表型相关性不大;接合试验显示,接合子接合成功率为89.13%(41/46),接合子耐药表型全部发生改变:73.17%(30/41)的接合子耐药谱变窄,20.39%(10/41)的接合子丢失部分耐药表型并获得新的耐药表型,2.4%(1/41)的接合子耐药谱变宽;接合子共检出4种耐药基因bla_(TEM)(100%,41/41)、bla_(CTX-M)(80.49%,33/41)、sul1(58.54%,24/41)和sul3(73.17%,30/41),分离菌位于质粒上的耐药基因bla_(CTX-M)、bla_(TEM)、sul1、sul3由供体菌水平传递到了受体菌。本研究对百日鸡群沙门菌病的净化具有一定的参考意义。     

我国5省区部分猪、鸡源产ESBLs沙门菌的耐药差异及MLST流行特征

为了解不同地区猪鸡源沙门菌的流行分布和耐药特征，采用PCR法、药敏纸片法、微量肉汤稀释法及Bionumerics和SPSS软件等，对来自我国安徽、浙江、山东、新疆、江苏5省区的沙门菌进行血清型鉴定、ESBLs表型和基因型检测、药物敏感性试验以及数据处理。结果显示，85株沙门菌共鉴定出15种血清型；分离出25株(29.4%)产ESBLs菌株，猪源产超广谱β内酰胺酶(extended-spectrumβ-lactam, ESBLs)沙门菌检出率(4.7%)远低于鸡源(54.8%)(P<0.01);产ESBLs沙门菌对7种抗菌药的耐药率显著高于非产ESBLs的菌株(P<0.01);85株沙门菌中基因型检测结果为：TEM型44.7%(38/85),CTX-M型12.9%(11/85),OXA型10.6%(9/85),SHV型9.4%(8/85),有基因型共存现象；产ESBLs沙门菌中有19株携带4种耐药基因，相关性达到76%;各省分离菌株对氨苄西林、庆大霉素、大观霉素、头孢噻呋、四环素、头孢他啶的耐药率有极显著差异(P<0.01),对恩诺沙星的耐药率有显著差异(P<0....     

贵州省猪源沙门氏菌对β-内酰胺类药耐药性及耐药基因分析

为了解贵州省猪源沙门氏菌对β-内酰胺类抗菌药物耐药性及其耐药基因的流行情况,本试验从贵州省9个地区规模养猪场中分离鉴定130株沙门氏菌,采用微量肉汤稀释法测定其对常用的8种β-内酰胺类抗菌药物的敏感性,并用PCR法对β-内酰胺酶耐药基因进行检测。结果显示,沙门氏菌对常用的β-内酰胺类抗菌药物耐药性十分严重,其中对头孢他啶的耐药率为100%,其次是氨苄西林和阿莫西林,耐药率分别为80.77%和76.15%,耐药率最低的是头孢噻呋和头孢氨苄,均为46.15%。所有菌株均为多重耐药,其中最少为二重,占总数的2.31%,最多为八重,占总数的4.62%,多重耐药主要集中在四至七重,占总数的88.46%。PCR结果显示,SHV耐药基因未检出,TEM、OXA、CTX-M 3种基因检出率分别是85%、75%和46%,细菌的耐药性与相关耐药基因的检出率基本呈正相关。结果表明,猪源沙门氏菌对β-内酰胺类药物具有普遍耐药性,其中头孢他啶尤为严重。TEM、OXA、CTX-M基因是贵州省猪源沙门氏菌主要耐药基因,临床日益严重的耐药现象与耐药基因的普遍存在有很大的关系。     

小肠结肠炎耶尔森菌对磺胺类和β-内酰胺类抗生素的耐药性研究

为了探讨12株小肠结肠炎耶尔森菌对磺胺类和β-内酰胺类抗生素的耐药性,试验采用标准K-B纸片扩散法检测该菌对磺胺类和β-内酰胺类抗生素的耐药表型,并采用PCR法检测磺胺类耐药基因(sul1、sul2、sul3基因)和β-内酰胺类耐药基因(TEM基因)。结果表明:头孢噻吩、复方新诺明和磺胺异唑治疗效果较差,耐药率分别高达58.3%、66.7%、58.3%,但先锋霉素Ⅴ抑菌效果较好,头孢菌素次之;在菌株中检测出磺胺类耐药基因sul1、sul2和β-内酰胺类耐药基因TEM,其检出率分别为91.7%、100%、75.0%,而sul3基因未检出。     

2019年～2020年河北地区鸡源沙门菌流行病学调查及耐药性分析

为了解河北地区鸡沙门菌病的流行情况及耐药现状,本实验从河北省16个鸡场采集肛拭子样品588份,通过细菌分离培养、染色镜检和特异性基因invA的检测进行细菌鉴定,共分离到150株鸡源沙门菌,通过玻板凝集试验确定其血清型,采用纸片法对分离菌进行21种抗生素的药物敏感性试验,利用PCR方法对23种耐药基因进行检测并分析耐药表型与耐药基因的关系。药敏试验及耐药基因检测结果显示,共检测出19种耐药基因,sul2、aadA1、bla_(TEM)的检出率为81.33%～97.33%;catA1、sul1、bla OXA、aac6-Ib、aacC4、aadA2、tetB的检出率为38.67%～50.00%;qnrB、sul3、aadB、qnrS的检出率为11.33%～20.00%;bla_(PSE)、qnrA、aacC2、floR的检出率较低,为0.67%～9.33%;bla_(SHV)、bla_(CMY)、tetG和cmlA未检测出。结果显示氯霉素类、四环素类、喹诺酮类、磺胺类、β-内酰胺类和氨基糖苷类抗生素的耐药表型和耐药基因型的符合率为58.62%～99.31%,具有较强的相关性。本研究为河北地区防控和净化鸡沙门菌病提供一定的参考。     

鸡源大肠杆菌ESBLs基因型检测及其耐药性分析

采用K-B法检测30株鸡源大肠杆菌对16种抗菌药物的耐药性,根据耐药表型和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的基因型流行情况,指导临床合理用药.结果表明,24株大肠杆菌为产ESBLs株.扩增出了与预期片段大小相符的TEM型、SHV型、CTX-M型、OXA型基因.有5株同时检测出TEM和CTX-M基因.产酶大肠杆菌对氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、环丙沙星的耐药率100%.其多重耐药性明显比非产酶大肠杆菌严重.     

腹泻羔羊中大肠杆菌的分离鉴定及耐药基因检测分析

为了解我省羔羊腹泻性大肠杆菌的耐药性并检测其相关耐药基因的分布,本研究从患腹泻的不同羔羊中分离到14株大肠杆菌,经过分离培养鉴定后,对六大类抗菌药物的耐药基因进行PCR扩增鉴定分析。结果显示,14株大肠杆菌对喹诺酮类和β-内酰胺类抗生素的耐药基因携带率较高,分别为100.00%和71.43%,GyrA/GyrB/ParC喹诺酮类耐药基因是抗生素耐药基因中最为流行的基因型,β-内酰胺类耐药基因型TEM/SHV(71.43%)的检出率较高,四环素类耐药基因型TetC(71.43%)、TetA(57.14%)的检出率较高,氯霉素类耐药基因型Cat(57.14%)检出率较高,磺胺类耐药基因型Sul1/Sul2/Sul3(42.86%)中等检出率;氨基糖苷类耐药基因型aphA3/aadA/aacC2(28.57%)和aacC4(0.00)的检出率较低。结果表明,本次分离的羔羊腹泻性大肠杆菌的耐药性非常严重,同时存在多重耐药现象,提示养殖场应合理使用抗生素。     

河北地区水貂源大肠杆菌的分离鉴定及致病性与耐药性研究

为分析河北地区水貂源大肠杆菌的致病性与耐药性,本研究对河北地区送检病死水貂采集组织样品,经分离鉴定、生化鉴定和16S rDNA基因序列分析,共分离得到24株水貂大肠杆菌。对分离菌株进行致病性试验、药敏试验、毒力基因和耐药基因检测。结果显示,24株大肠杆菌感染小鼠后小鼠死亡率为20%～100%;24株分离菌中有22株检测到毒力基因,fimC毒力基因检出率最高,为70.83%(17/24);分离的24株株大肠杆菌耐药性较强,对替米考星、土霉素、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺二甲氧嘧啶、复方新诺明耐药的菌株占80%以上,对头孢曲松最敏感,敏感菌株占66.67%(16/24),且分离菌均具有多重耐药性,耐5种以上药物的菌株占比高达100%;24株大肠杆菌均检测到耐药基因,耐药基因检出率为4.17%～79.17%,其中氨基糖苷类耐药基因addA1(79.17%)、喹诺酮类耐药基因gyrA(75%)、gyrB(70.83%)检出率较高,β-内酰胺类耐药基因ctx-M(20.83%)和SHV(4.17%)检出率较低;未检测到tetA、tetC、sul1、mefA耐药基因。上述结果表明,分离菌对小鼠均具有一定的致病力,且毒力基因检出数越多的菌株对小鼠的致病力越强;β-内酰胺类、氨基糖苷类和喹诺酮类的耐药基因与耐药表型基本相符,分离菌的其余耐药基因与耐药表型不符,提示分离的大肠杆菌可能存在其他耐药机制。本研究为河北地区水貂大肠杆菌病的防治提供参考依据,为大肠杆菌的致病机制和耐药机制的研究奠定基础。     

猪源大肠杆菌tem耐药基因的检测

为了解和掌握大肠杆菌耐药性的流行情况,从而为控制大肠杆菌的耐药性提供科学依据,用K-B法对临床分离的15株猪源大肠杆菌进行β内酰胺类抗生素药敏试验,以15株分离菌DNA为模板对β内酰胺类抗生素耐药基因tem进行PCR扩增。结果表明:15株猪源大肠杆菌对β内酰胺类抗生素均耐药,耐药率从高到低分别为头孢哌酮(82%)、头孢噻肟(24%)、头孢他啶(18%)、头孢呋辛(6%)、苯唑西林(6%);PCR扩增均检测到β内酰胺类抗生素耐药基因tem。说明β内酰胺类抗生素耐药基因tem广泛存在于猪源大肠杆菌中,与抗生素敏感性表型一致。     

西藏林芝地区牦牛源大肠杆菌的耐药性分析

本研究旨在了解西藏林芝地区牦牛源大肠杆菌的耐药情况,为有效控制牦牛大肠杆菌感染和指导临床合理使用抗菌药物提供依据。从565份牦牛粪便样品中分离到488株大肠杆菌,通过纸片扩散法对菌株进行药物敏感性分析,采用PCR检测菌株所携带的毒力基因、耐药基因以及筛查含有β-内酰胺酶基因的大肠杆菌菌株。结果显示,在488株大肠杆菌分离菌株中,31%(152/488)呈现多重耐药;毒力基因omp A、etr A的检出率较高,分别为30.2%、23.1%;耐药基因bla CTX-M、bla TEM的检出率分别达到27.6%、14.4%;此外,在产β-内酰胺酶的菌株中未发现SHV型。结果表明,西藏林芝地区牦牛大肠杆菌感染较为严重,菌株分离率高达86.4%,但产ESBLs的菌株检出率较低,且菌株耐药性严重,更呈现出多重耐药性。     

贵州两市猪源大肠杆菌产超广谱β-内酰胺酶的检测

为了解贵州安顺、遵义市猪源细菌对β-内酰胺类抗生素的耐药性,采用CLSI推荐的双纸片扩散法,调查108株临床分离的大肠杆菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌的比例。结果表明:遵义、安顺两市108株大肠杆菌确认有72株ESBLs阳性菌株,检出率66.7%(72/108),其中遵义市(79.6%,43/54)检出率高于安顺市(53.7%,29/54),两市猪源产ESBLs大肠杆菌的检测率较高,对β-内酰胺类抗生素的耐药较为严重。     

广西规模化猪场猪源大肠杆菌耐药表型和耐药基因检测及相关性分析

对广西规模化猪场分离的120株猪源大肠杆菌进行了头孢菌素类、氟喹诺酮类、氨基糖苷类、四环素类、大环内酯类和酰胺醇类药物耐药表型检测,并通过PCR检测菌株的β-内酰胺酶基因(bla_(TEM)、bla_(CTX-M))、氟喹诺酮类耐药基因(qnrA、oqxA、oqxB)、氨基糖苷类耐药基因(aac(6′)-Ib-cr)、大环内酯类耐药基因(ermB)和酰胺醇类耐药基因(floR)携带情况。耐药性检测结果显示,猪源大肠杆菌对头孢西丁、头孢他啶和阿米卡星具有高敏感率(74.0%),而耐药率最高为四环素类84.2%,酰胺醇类为70.8%,氟喹诺酮类为68.9%,氨基糖苷类为49.4%,大环内酯类为43.3%,最低为头孢菌素类31.4%。猪源大肠杆菌最低对1种药物耐药,最高对18种药物耐药,111株为多重耐药菌,以11耐(15株)、8耐(13株)和7耐(12株)为主,共有82种耐药谱型。耐药基因检测结果显示,8个耐药基因的阳性率均≥50.0%,其中阳性率最高为bla_(TEM)基因(91.7%),最低为aac(6′)-Ib-cr基因(50.0%),共存在53种基因组合类型,主要为bla_(TEM)+bla_(CTX-M)+qnrA+oqxA+oqxB+aac(6′)-Ib-cr+ermB+floR(14株,11.7%)和bla_(TEM)+bla_(CTX-M)+qnrA+oqxA+oqxB+ermB+floR(13株,10.8%)。耐药基因和耐药表型相关性分析结果显示,bla_(TEM)和bla_(CTX-M)与大肠杆菌对头孢氨苄耐药情况极显著相关(P0.01),bla_(CTX-M)与大肠杆菌对头孢拉啶和头孢曲松耐药情况极显著相关(P0.01),qnrA、oqxA、oqxB和aac(6′)-Ib-cr基因与大肠杆菌对诺氟沙星、氧氟沙星、恩诺沙星和环丙沙星耐药极显著相关(P0.01),aac(6′)-Ib-cr基因与大肠杆菌对庆大霉素和卡那霉素耐药极显著相关(P0.01),floR基因与大肠杆菌对氟苯尼考耐药情况极显著相关(P0.01)。本研究结果表明广西规模化猪场猪源大肠杆菌仅对极少数抗菌药物具有较高敏感率,多重耐药情况严重,具有丰富的耐药谱型,携带多种耐药基因且具有复杂的基因组合类型,所携带的耐药基因与其耐药表型具有一定的相关性。     

犬源大肠埃希菌对β-内酰胺类药物的耐药表型和耐药基因检测

为研究犬源大肠埃希菌的耐药情况,对成都地区采集的犬肛门拭子进行细菌分离鉴定,共分离156株大肠埃希菌,同时,进行5种抗生素耐药性检测和β-内酰胺类药物耐药基因的菌株筛选。结果显示,大肠埃希菌对β-内酰胺类耐药率较高,头孢喹肟100%,氨苄西林73.1%,但对美罗培南敏感率高达95.5%。采用PCR方法检测β-内酰胺类药物常见的3种耐药基因blaCTX-M、blaSHV和blaTEM,blaCTX-M检出率最高为89.74%,blaTEM为78.84%,blaSHV无检出。耐药性和耐药基因比较表明,犬源大肠埃希菌β-内酰胺类的耐药性与耐药基因型检出率基本呈正相关,为成都犬源大肠埃希菌β-内酰胺类药物的耐药现状和疾病治疗提供了理论依据。     

一株七彩鸟肺炎克雷伯菌同时产TEM和SHV型β-内酰胺酶的基因型鉴定

用全自动细茵鉴定系统鉴定分离菌,用表型确证试验法检测超广谱β-内酰胺酶(ESBLs),并分别用TEM、SHV、CTX-M 3种特异性引物进行PCR扩增、基因克隆及测序分析,确定分离茵所产β-内酰胺酶的基因型和基因亚型.结果表明:分离茵为产ESBLs的肺炎克雷伯菌,具有多重耐药特性,其质粒上具有TEM序列和SHV序列,基因亚型分别TEM-1型和SHv-11型.     

肉鸡养殖场沙门菌与大肠杆菌耐药性的周期监测与研究

对定点肉鸡饲养场的沙门菌和大肠杆菌进行监测试验,连续跟踪3个养殖周期,对不同养殖阶段的肉鸡及环境中细菌的耐药性进行测定。结果表明,该养殖场分离到的大肠杆菌对青霉素类的耐药率尤其突出,氨苄西林为88.7%,美洛西林为83.0%。而耐药率低于10%的均为第3代头孢菌素类(头孢唑啉、头孢他啶和头孢曲松)。结果提示该养殖场的大肠杆菌中产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的菌株不多,142株大肠杆菌筛查的结果,仅有4株产ESBLs。分离到的沙门菌的耐药率总体低于大肠杆菌,尤其对青霉素类和四环素的耐药率明显低于大肠杆菌。但耐药率在10%以下的同样仅有头孢菌素类。