捕食线虫性真菌18S rDNA基因序列与种系发生关系研究

对捕食线虫性真菌——少孢节丛孢菌A1分离株(Arthrobotrys oligospora A1)的18S rDNA基因序列进行了研究。结果表明：其18S rDNA全基因序列为1769bp，在进化树上与同种国外分离株A．oligospora var oligospora 1最为接近，同源性为94．7％。这与二者都具有捕食性结构—菌网的特点相一致。证实捕食线虫性真菌的捕食性结构与捕食线虫性真菌种系发生有关。从少孢节丛孢菌3个分离菌株(Arthrobotrys oligospora A1、A．oligospora 1、A．oligospora2)的进化树及同源性来看。不同国家地区的丛孢菌属(Arthrobotrys)分离株确实存在差异。     

2种捕食线虫性真菌生长特性和捕食效力比较

对少孢节丛孢菌 (Arthrobotrys oligospora Strain:A1)和纺锤隔指孢菌 (Dactylella ellipsospora Strain:Da1)的生长特性和捕食效力进行了比较。结果表明 :少孢节丛孢菌菌株与纺锤隔指孢菌菌株的最佳生长温度不同 ,前者为2 0℃ ,后者为 2 5℃ ;少孢节丛孢菌菌株对无氧条件有一定的耐受性 ,而纺锤隔指孢菌菌株在无氧条件下不能很好生长 ;少孢节丛孢菌菌株与纺锤隔指孢菌菌株分别在其最佳生长温度 (2 0℃和 2 5℃ )条件下 ,对马自然混合感染的线虫第 3期幼虫平均捕食率达 78.2 %和 80 .1% ,二者相比 ,纺锤隔指孢菌菌株捕食效力稍强     

根癌农杆菌介导的少孢节丛孢菌遗传转化体系研究

根癌农杆菌介导的遗传转化法(ATMT)是一种丝状真菌常用的遗传转化手段,但目前还不能有效地应用于少孢节丛孢菌的转化。构建由PgpdA启动子调控mgfp-gus基因的真菌表达载体pCAMBIA1304'-PgpdA并转入农杆菌中,利用ATMT技术对少孢节丛孢菌进行转化。结果显示,农杆菌AGL-1介导的转化在共培养时间为60 h,温度为23℃的条件下获得了1株转化子,以其基因组为模板可以扩增出hph和gus基因片段,进行GUS组织染色能观察到蓝色,表明目的基因成功转入少孢节丛孢菌基因组中并能正常表达。初步建立了农杆菌介导的少孢节丛孢菌遗传转化方法,为少孢节丛孢菌功能新基因的研究、菌株改良等研究奠定了基础。     

低能氮离子束诱变选育捕食线虫性真菌——少孢节丛孢菌

为获取理想的生物防治捕食线虫性真菌菌株,达到利用自然天敌有效控制家畜寄生性线虫病的目的,作者利用低能氮离子注入诱变捕食线虫性真菌——少孢节丛胞菌(Arthrobotrys oligospora)的分生孢子,测定分生孢子萌发后菌丝的生长速度、产孢能力及菌株对线虫幼虫的捕食率,筛选正突变株。结果表明,低能氮离子束具有诱变少孢节丛孢菌的潜能,诱变后的1株少孢节丛孢菌的生长速度、产孢量和对线虫幼虫的捕食率呈现出了正突变效果。     

食动物线虫真菌的分离和鉴定I.从土壤中分离捕食线虫真菌

以山羊捻转血矛线虫第三期幼虫作为诱饵线虫,利用撒布分离法,对土壤中的食线虫真菌进行了分离和鉴定。结果从不同的土样中分离到了棣属于２个属,７个种的２６株捕食线虫真菌。７个真菌种分别为寡孢节丛孢菌（Ａｒｔｈｒｏｂｏｔｒｙ ｏｌｉｇｏｓｐｏｒａ）,指状节丛孢菌（Ａ．ｄａｃｔｙｌｏｄｅｓ）,蠕虫节丛孢菌（Ａ．ｖｅｒｍｉｃｏｌａ）,圆锥节丛孢菌（Ａ．ｃｏｎｏｉｄｅｓ）,白色单顶孢菌（Ｍｏｎａｃｒｏｓｐｏｒｉ     

节丛孢属食线虫真菌对体外奥斯特线虫幼虫的捕食效果

本文在国内首次报道了几株节丛孢菌食线虫真菌（５株寡节丛孢菌和２株葡萄串状节丛孢菌）在体外对山羊奥斯特线虫第３期幼虫的捕食效果。结果表明：７株真菌对奥斯特线虫幼虫的捕获率分别在７５．０％￣９６．４％之间,具有较高的捕杀线虫能力,食线虫真菌对线虫的作用方式主要是通过在线虫周围形成菌网。     

新疆石河子地区捕食线虫性真菌的分离鉴定

以山羊捻转血矛线虫第三期幼虫作为诱饵线虫,利用撒布分离法对新疆石河子地区土壤中的捕食线虫性真菌进行分离,并对所分离的捕食线虫性真菌进行了形态学及分子生物学鉴定.结果成功分离出了9株捕食线虫性真菌,其形态学符合少孢节丛孢菌.将分离株5.8S rDNA和ITS2基因序列与国内外已知少孢节丛孢菌菌株的对比分析,证明少孢节丛孢菌新疆分离株具有区域性特征,其捕食活性高于报道的菌株.分离出适合本地区生态环境的当地菌株对以后家畜线虫病的生物防控尤为必要.     

新疆乌鲁木齐地区捕食性真菌圆锥节丛孢菌的分离鉴定

为了给动物线虫病的防治工作提供适应本地生存的候选捕食性真菌菌株，对新疆乌鲁木齐地区采集的土壤进行筛选，采用土壤撒布法，以秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)作为诱饵线虫对土壤中的捕食性真菌进行分离鉴定，成功分离出具有捕食线虫功能的真菌1株。通过形态学观察，该菌捕食器官为黏性菌网，分生孢子无色，呈圆锥形，中央有一分隔，形态结构与节丛孢属相符。分子生物学分析显示，该分离株的ITS2基因序列与圆锥节丛孢菌(Arthrobotrys conoides)的同源性为99%～100%,判定该菌为圆锥节丛孢菌的新疆分离株。在实验室条件下，利用该菌株进行捕食线虫活力测定，结果发现该菌株在CMA培养基中对马圆形线虫三期幼虫的捕食率为97.47%,具有较强的捕食效率，可作为新疆地区动物线虫病生物防治工作的候选菌株。     

高原地区少孢节丛孢菌超微结构观察

采用玉米粉琼脂培养法,从高原地区(海拔2 000~3 000 m)土壤分离得到一株捕食线虫性真菌,根据其菌丝形态、分生孢子和捕食器官形态等结构特征,鉴定其为少孢节丛孢菌(Arthrobotrys oligospora)。为了进一步了解少孢节丛孢菌形态学特征,对少孢节丛孢菌进行了超微结构观察,结果发现该菌有隔膜,主干菌丝上隔的分布较密集,分布距离不等,分生孢子梗不分支。菌环是由瘤状突起延伸形成弧形而形成,多个菌环接连形成菌网,线虫幼虫是被捕食器菌环或菌网捕获致死。     

少孢节丛孢菌孢子批量培养及通过动物消化道的试验

试验了捕食线虫性真菌——少孢节丛孢菌(Arthrobotrys oligospora)孢子批量培养技术、孢子通过兔消化道后的活力及其对绵羊消化液的体外耐受力。结果表明，少孢节丛孢菌孢子最适合以玉米粒为基质批量培养；少孢节丛孢菌的孢子在通过兔消化道后，可以保持存活；并且在体外对绵羊瘤胃液、真胃液、十二指肠液有一定的耐受力。     

捕食线虫性真菌的分离培养及分布规律

对自然界中的捕食线虫性真菌进行了分离和种属区分，并对分布规律进行了研究。从土壤、粪便等材料中获得了2类活性较强的捕食线虫性菌株：即套捕型(hooping)捕食线虫性真菌和粘捕型(sticking)捕食线虫性真菌。主要的代表种类有3种。这些捕食线虫性真菌在捕食性结构分生孢子形态及某些生物学特性上有一定差异。套捕型捕食线虫性真菌代表种为少孢节丛孢菌(Arthrobotrys oligospara)和梨形指环菌(Dactylaria pyriformis)，它们以菌环、菌网作为捕食性结构(器官)，以套捕方式杀灭线虫幼虫。梨形指环菌可产生多量厚垣孢子(chlamyalospore)。粘捕型捕食线虫性真菌代表种为纺锤隔指孢菌(Dactylella ellipsospora)。可形成菌结捕食线虫性结构，以粘捕的方式杀灭线虫幼虫。结果表明：捕食线虫性真菌在土壤和家畜粪便中的分离率是40．41％；此类菌适合于生存在阴暗、潮湿、富含腐植质的环境中。在温暖季节时，采用0．4g／L玉米粉琼脂培养基(CMA)易于对其进行分离培养。     

Yeasts and algae isolated from cows with mastitis in the south-eastern part of Poland

The aim of the study was to evaluate the occurrence of mycotic and protohecal mastitis in herds in south-eastern part of Poland. A total of 3091 milk samples from udder quarters with clinical and subclinical mastitis from 29 dairy herds was investigated in this survey. Milk samples were plated as soon as possible on blood agar (BA), Mac Conkey agar, aesculin-tallium acetate-crystal violet agar, and Sabouraud agar. A hundred and thirty one yeast (4.23%) and eleven Protoheca zopfii (0.35%) strains were isolated from cows with clinical and subclinical mastitis. All the isolated fungi were the yeast classified into 4 genera (Candida, Trichosporon, Saccharomyces and Rhodotorula). The most frequently isolated yeasts were Candida sp., C. kefyr, C. humicola, C. rugosa and C. inconspicua. Both fungi and algae were isolated first of all during a confinement-housing season.     

养鸡场供水线真菌的分离鉴定及毒性试验

为调查养鸡场供水线真菌污染状况,对哈尔滨市周边15家养鸡场供水线可疑采样进行真菌的分离、纯化,采用病原形态学法对其进行鉴定,同时测定所分离真菌的毒性。结果显示,从30份可疑采样中共分离到6株真菌,分别鉴定为黑曲霉、菌核曲霉、淡紫青霉、鲜绿青霉、扩展青霉和圆弧青霉;毒性试验提示6株霉菌均有弱毒性。     

箭叶橐吾内生真菌分离鉴定及组织分布特性研究

为探明有毒植物箭叶橐吾（Ligularia sagitta）的内生真菌种类及其组织分布特性，本试验对植物样品进行表面消毒后分离其内生真菌，采用形态学和内转录间隔区（Internal transcribed spacer，ITS）序列分析技术对分离到的菌株进行种属鉴定并构建系统进化树。结果显示，从箭叶橐吾中分离到21株内生真菌，属于3纲、3目、7科、9属。根据亲缘关系，将其主要分为种群I[以柄孢壳菌属（Podospora sp.）为代表]和种群II[以交链孢霉属（Alternaria sp.）为代表]，其中交链孢霉属和柄孢壳菌属均占分离菌株的19.05%，为其优势菌属，主要分布于花和叶。箭叶橐吾的内生真菌在花中分布最普遍（占分离菌株的42.86%），其次为叶（占分离菌株的38.10%）、茎（占分离菌株的14.29%）和根（占分离菌株的4.76%）。结果表明，内生真菌在箭叶橐吾中的分布存在明显组织差异。     

贮藏时间对饲用燕麦种子寄藏真菌及真菌毒素的影响

为明确贮藏时间对饲用燕麦种子中寄藏真菌和真菌毒素的影响，本研究通过平板培养法、形态学观察和rDNA-ITS序列分析法，对3个燕麦（Avena sativa）品种种子携带的真菌进行了分离鉴定；通过高效液相色谱质谱联用法对优势菌属产生的毒性较强的3种真菌毒素细交链孢酮酸（TeA）、黄曲霉毒素B₁（AFB₁）和桔青霉素（CIT）进行了检测和分析。结果表明：饲用燕麦种子的带菌量随贮藏时间的增加总体呈降低趋势。从供试材料中共检出真菌16属34种，优势属为链格孢菌属、曲霉菌属和青霉菌属；带菌种类和分离率随贮藏年限的变化差异显著，不同品种的带菌情况也差异显著；3种真菌毒素随贮藏年限的延长基本呈先升后降的趋势，贮藏年限和品种间的互作对毒素含量的影响最大。综上，贮藏时间对饲用燕麦种子的带菌情况和真菌毒素检出量影响显著。     

桑树内生真菌的分离、鉴定及其多样性分析

用组织分离法从不同桑树品种的器官组织中共分离出内生真菌114株,经显微形态观察,鉴定114株内生真菌分别归属于镰孢霉属Fusarium、链格孢属Alternaria、柱霉属Scytalidium等21个属,表明桑树内生真菌具有丰富的生物多样性。不同桑树品种树体内的内生真菌分布有一定差异。同一桑树品种不同器官组织的内生真菌种类和数量差异较大,根中最多,茎中次之,叶中最少。其中:镰孢霉属为根中优势种群,链格孢属为茎、叶中的优势种群;丛梗孢属Monilia和镰孢霉属菌株在根、茎、叶中均能分离到,其它属的菌株只存在于其中的某一个或两个器官组织。研究结果有助于进一步探讨桑树内生真菌与生理活性物质的关系。     

野生型斜茎黄芪内生真菌分离鉴定及苦马豆素分析

为探明青海野生型斜茎黄芪(Astragalus adsurgens)是否存在产苦马豆素内生真菌,本试验采用植物组织表面消毒法对斜茎黄芪内生真菌进行分离培养,运用形态学观察和内部转录间隔区(Internal transcribed spacer,ITS)序列分析鉴定分离获得的内生真菌种属,并构建系统发育树,应用薄层层析法对斜茎黄芪和优势菌发酵液中的苦马豆素进行检测。结果显示,从斜茎黄芪中共分离出26株菌株,分属于5纲、5目、7科、7属,4株未定属。其中由根中分离的链格孢菌属(Alternaria sp.)是斜茎黄芪的优势菌属,分离率为23.08%。从薄层层析结果可以看出,斜茎黄芪和优势菌发酵液中均未检测到苦马豆素。上述结果表明,野生型斜茎黄芪不属于疯草类有毒植物,这为该植物的后续资源化利用提供重要理论依据。     

Omphalitis associated with Aspergillus fumigatus in poults

Omphalitis associated with aspergillosis was diagnosed in four cases of commercial turkey poults ranging in age from 3 to 9 days old. In two cases, the mycotic agent present in the yolk sac was isolated and identified as Aspergillus fumigatus. In the other two cases, the fungi were identified as Aspergillus sp. on the basis of morphologic characteristics of the fungi in tissue sections. The fungi present were further confirmed to be of the genus Aspergillus by immunohistochemistry. Omphalitis by A. fumigatus infection has not been documented before.     

沙打旺根部入侵真菌的研究

以甘肃省环县微温微干温带典型草原区种植的不同年限的沙打旺植株为研究材料,在2003年整个生长季内,于返青期、分枝期、盛花期和枯黄期分别对1龄,3龄和5龄沙打旺植株进行4次取样,并对样本根部入侵真菌进行了系统研究。研究结果表明:3个年龄沙打旺植株在分枝期和盛花期的根部带菌率均显著高于返青期,且随着沙打旺种植年限的增加其根部带菌率也不断增加;试验自沙打旺根部共分离到31种真菌,1龄23种,3龄23种,5龄22种;燕麦镰孢,腐皮镰孢和青霉3种真菌在3个年龄沙打旺各生育期植株根部均有分离。