黔北麻羊RARs基因在不同组织中的表达分析

为研究视黄酸受体α(Retinoic Acid Receptor Alpha, RARA)、视黄酸受体β(Retinoic Acid Receptor Beta,RARB)与视黄酸受体γ(Retinoicacidreceptorgamma,RARG)基因在黔北麻羊不同组织中的表达情况,本研究提取黔北麻羊心、肝、脾、肺、肾、下丘脑、垂体、子宫、输卵管、卵巢10个组织总RNA并逆转录合成cDNA第1链,随后采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测RARA、RARB与RARG基因在黔北麻羊10个组织中的表达水平。结果显示:RARA、RARB、RARG3个基因在黔北麻羊10个组织中均有不同程度的表达,其中,RARA基因表达量由大到小依次为肝>心>下丘脑>脾>垂体>肺>输卵管>子宫>肾>卵巢,肝脏RARA基因表达量最高,卵巢RARA基因表达量最低,两者之间差异极显著。黔北麻羊RARB基因表达由大到小依次为输卵管>下丘脑>子宫>卵巢>肝>心>肺>肾>垂体>脾,其中,输卵管RARB基因的表...     

牦牛NGF基因克隆及其在生殖器官中的表达定位

旨在探究NGF基因的生物学特性及其在母牦牛生殖器官中的表达特性.本研究收集黄体期母牦牛的心、肝、脾、肺、肾以及胎牛期、卵泡期、黄体期、妊娠期母牦牛的卵巢、子宫和输卵管(n=3),利用RT-PCR克隆牦牛NGF基因,并对其序列进行生物信息学分析,利用RT-qPCR技术分析NGF基因的组织表达特性,利用免疫组化技术(IHC...     

山羊骨骼肌中miR-133及其靶基因的表达规律与功能研究

旨在研究miR-133及其靶基因SRF在山羊骨骼肌组织和细胞中的表达情况,并探讨miR-133对SRF基因的靶向调控作用。首先利用qRT-PCR分别检测miR-133及其靶基因在初生、7月龄、18月龄的安徽白山羊和波尔山羊8个组织(心、肝、脾、肺、肾、小肠、脂肪、背最长肌)以及不同代数的山羊骨骼肌卫星细胞(F6、F9、F12)中的表达变化;采用qRT-PCR及Western印迹法检测miR-133对靶基因mRNA及蛋白质表达水平的影响。qRT-PCR检测表明,miR-133在心肌和背最长肌中的表达水平明显高于其它组织,其靶基因SRF的表达水平与其相反;miR-133在山羊骨骼肌卫星细胞中的表达水平随着细胞代数的增多而表达量增加;qRT-PCR及Western印迹法证实,miR-133对SRF蛋白表达的调控发生在转录后水平。综上表明,miR-133有望成为研究山羊骨骼肌生长发育的新型标志物;miR-133通过在转录后水平抑制SRF蛋白的表达参与调控山羊骨骼肌细胞增殖和分化,进而影响山羊骨骼肌的发育。     

家兔BMP7成熟肽编码区克隆及BMP7、BMP4基因组织表达谱分析

用RT-PCR方法克隆家兔BMP 7基因成熟肽编码区cDNA序列,并对2月龄家兔BMP 7和BMP 4基因的组织表达谱进行半定量分析。结果表明,家兔BMP 7成熟肽编码序列长414 bp,与人、小鼠BMP 7的同源性分别为91.89%、89.32%,三者的同源性为94.98%。在家兔心、肝、脾、肺、肾、脑、脊髓、小肠8种组织中检测到BMP 7和BMP 4基因表达。BMP 7基因在心、脾组织以低丰度表达,在肺、脊髓、十二指肠以中等丰度表达,在肝、肾、脑中以高丰度表达;BMP 4基因在脊髓以低丰度表达,在脑、心、脾、小肠等器官组织中呈中等丰度表达,在肝、肺、肾中以高丰度表达。因此,家兔BMP 7基因成熟肽编码区在进化过程中高度保守。BMP 7和BMP 4具有广泛的组织表达谱和组织表达特异性。     

牦牛FHL2基因的克隆、组织表达与蛋白定位分析

旨在获得牦牛FHL2基因序列，阐明该基因序列、蛋白质结构与性质、mRNA的组织表达模式、在雌性生殖器官及颗粒细胞的蛋白表达特性。本研究以5头健康空怀成年母牦牛的心、肝、脾、肺、肾、卵巢、子宫、输卵管组织及5头妊娠2个月左右母牦牛的子宫、输卵管和卵巢为研究材料，利用逆转录PCR(RT-PCR)技术克隆FHL2基因，并使用在线分子生物学软件分析其生物信息学特性；利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术分析FHL2基因的组织表达特性；应用免疫组化(IHC)和免疫荧光(IF)技术检测FHL2蛋白在雌性生殖器官的分布和颗粒细胞上的亚细胞定位。结果发现，FHL2基因CDS区全长840 bp (ON456866),编码279个氨基酸，FHL2蛋白属于弱碱性亲水不稳定蛋白，没有跨膜结构。不同物种的FHL2氨基酸序列比对和进化树分析表明，FHL2基因编码区在物种进化中比较保守。RT-qPCR结果显示，FHL2基因在检测的组织都有表达，在心的表达量极显著高于其他检测组织(P<0.01);在肺、卵巢、输卵管和子宫中的表达量极显著高于肝、脾和肾(P<0.01)。FHL2基因在妊娠期子宫中的表达...     

不同日龄大白猪骨桥蛋白基因的表达研究

本研究采用RT-PCR方法对大白猪的骨桥蛋白（osteopontin,OPN）基因在1、7、90、180、270和360日龄的心、肝、胃、脾、肾、肺、大肠、小肠、肌肉、子宫、卵巢共11个组织的表达情况进行了研究。结果表明,OPN基因是一个广谱表达基因,在所检测的11个组织、6个时间点上均表达,但是存在时间和空间上的变化。据此推测该基因的生物功能非常广泛。     

内源性逆转录病毒在五指山小型猪体内存在状况的分子微生物学调查

根据猪内源性逆转录病毒(PERV)的核心蛋白(gag)基因、多聚酶(pol)基因、囊膜(env)基因和β-肌动素(β-actin)基因核酸序列设计并筛选特异性引物6对,利用PCR方法对五指山小型猪PERV gag、pol和env基因存在情况进行系统检测;利用半定量RT-PCR方法对五指山小型猪PERV gag、pol和env基因在心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉7个组织中的表达情况进行系统检测与分析.结果显示,在202个被检样品中,gag、pol基因和envB基因亚型均存在,envA基因亚型仅3个样品未发现,envC基因亚型共检出34个,检出率为16.8%.所测试的7个组织均表达gag、pol和env基因序列,但envC仅在1头个体的组织中表达.各组织gagmuRNA丰度以肾脏为最高,其次为肺、心、肝、脾,脑和肌肉组织的丰度最低.各组织pol mRNA丰度以肾脏为最高,其次为脾、肺、肝、心,肌肉和脑组织的丰度最低.各组织envA、envBmRNA丰度信号强度分布与gag、pol信号类似,亦以肾脏为最高,脑和肌肉组织的丰度最低.各组织envC mRNA的信号强度明显低于envA、envB.以上结果表明,在五指山小型猪中存在PERV,且在各组织中的表达量有差异.     

内源性逆转录病毒在五指山小型猪体内存在状况的分子微生物学调查内源性逆转录病毒在五指山小型猪体内存在状况的分子微生物学调查 内源性逆转录病毒在五指山小型猪体内存在状况的分子微生物学调查

根据猪内源性逆转录病毒（PERV）的核心蛋白（gag）基因、多聚酶（pol）基因、囊膜（env）基因和β-肌动素（β-actin）基因核酸序列设计并筛选特异性引物6对,利用PCR方法对五指山小型猪PERVgag、pol和env基因存在情况进行系统检测;利用半定量RT-PCR方法对五指山小型猪PERVgag、pol和env基因在心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉7个组织中的表达情况进行系统检测与分析。结果显示,在202个被检样品中,gag、pol基因和envB基因亚型均存在,envA基因亚型仅3个样品未发现,envC基因亚型共检出34个,检出率为16.8%。所测试的7个组织均表达gag、pol和env基因序列,但envC仅在1头个体的组织中表达。各组织gag mRNA丰度以肾脏为最高,其次为肺、心、肝、脾,脑和肌肉组织的丰度最低。各组织pol mRNA丰度以肾脏为最高,其次为脾、肺、肝、心,肌肉和脑组织的丰度最低。各组织envA、envB mRNA丰度信号强度分布与gag、pol信号类似,亦以肾脏为最高,脑和肌肉组织的丰度最低。各组织envC mRNA的信号强度明显低于envA、envB。以上结果表明,在五指山小型猪中存在PERV,且在各组织中的表达量有差异。     

CLCOK基因在母牦牛不同组织中的表达

CLOCK(Circadian locomotor output cycles kaput)是生物钟家族重要的核心基因之一,本实验提取了母牦牛的下丘脑、心、肝、脾、肺、肾、卵巢和肌肉8种组织,应用实时定量荧光PCR技术对青海高原母牦牛的八种组织中提取的RNA进行了CLOCK基因表达分析。结果显示:CLOCK基因的在八种不同的组织中均有表达,但存在差异,其中肝脏的表达量显著高于牦牛下丘脑、心脏、脾脏、肺脏、肾脏、卵巢和肌肉。     

牦牛Smad4基因mRNA组织表达谱及其miRNAs初步研究

本研究旨在了解牦牛Smad4基因mRNA组织表达谱,并探索研究可能靶定Smad4基因的miRNAs。利用RT-PCR技术对牦牛Smad4基因的mRNA在下丘脑、垂体、心、肝、脾、肺、肾、股二头肌、下颌淋巴结、卵巢、输卵管、子宫12种组织中的表达谱进行分析,并运用TargentScan和miRBase软件预测可能靶定牛Smad4基因的miRNAs,并分析其在牦牛上的组织表达谱。结果表明,Smad4基因mRNA在所检测的牦牛12种组织中均有表达,尤其是在生殖系统的卵巢、输卵管、子宫组织中广泛表达;预测到可能靶定牦牛Smad4基因的miRNA共20个,从中选择6个进行表达谱分析发现,bta-miR-106a和bta-miR-377在所检测的12种组织中均有表达,bta-miR-146a、bta-miR-224和bta-miR-1434-5p除了在输卵管中没有表达外,在其他组织均有表达,bta-miR-212只在卵巢中有表达。综上表明,Smad4基因在牦牛各组织中可能发挥重要作用,bta-miR-212可能仅在卵巢组织作用于靶定Smad4基因,并参与牦牛繁殖生理过程调控,其机制有待进一步研究证实。     

β-防御素caBD-1 mRNA在骆驼组织器官中的表达

根据已知的骆驼β-防御素caBD-1 cDNA序列设计了1对预计扩增产物为203bp的引物，通过RT—PCR检测骆驼的整个消化道黏膜、肝、胰腺、气管黏膜、肺、肾、膀胱黏膜、卵巢、子宫内膜、脾、淋巴结、心等器官内caBD-1 mRNA的表达。结果显示：caBD-1 mRNA在整个消化道、气管、膀胱、子宫等管状器官内的黏膜层有表达，而在实质性器官如心、肝、胰腺、肺、脾、淋巴结、卵巢、肾中无表达。提示，骆驼体内的这种内生性抗微生物肽有助于骆驼的黏膜宿主防御。     

山羊B4GALNT2基因的cDNA克隆及组织表达研究

根据绵羊β-1,4-N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(B4GALNT2)(登录号:KC175557)的mRNA序列设计引物,通过RT-PCR技术对高繁金堂黑山羊和单胎藏山羊卵巢组织B4GALNT2基因c DNA进行克隆、序列分析;采用Real-time PCR技术对发情前期山羊卵巢、子宫、输卵管、垂体、肝脏组织中的B4GALNT2基因的表达进行研究。结果表明:山羊B4GALNT2基因编码区全长为1 521 bp,共编码506个氨基酸,2个品种间有6处碱基差异,导致4处氨基酸差异。B4GALNT2基因mRNA在2个山羊品种卵巢、子宫、输卵管、垂体、肝脏中均有表达,在金堂黑山羊子宫和输卵管的表达量显著高于藏山羊(P0.05)。说明B4GALNT2基因在动物进化中比较保守,与山羊多羔性状的相关性有待进一步研究。     

贵州白山羊脂联素基因(ADIPOQ)序列和表达分析

为了探讨贵州白山羊脂联素基因序列变异和在不同组织中的表达分析,本研究采用PCR直接测序技术检测ADIPOQ基因部分序列的遗传多态性,通过RT-qPCR技术检测ADIPOQ基因编码mRNA在不同组织中的表达情况,同时基于遗传距离NJ法进行系统聚类分析,明确了贵州白山羊与不同物种间的遗传进化关系,结果表明,贵州白山羊与绵羊ADIPOQ基因序列间存在8个核苷酸变异,聚类结果表明贵州白山羊与其它物种间的遗传距离符合生物学进化,实时荧光定量PCR检测表明,ADIPOQ基因在所检测的贵州白山羊各组织中均有表达,其中在肺的表达量最高,其次是脾、心和肝,而在肾中的表达量较低。本研究通过ADIPOQ基因的序列和表达分析,进一步增进了对贵州白山羊的遗传多样性和发育情况的了解,对贵州白山羊的合理利用提供了参考数据。     

隆林山羊SMPX基因克隆及其组织表达谱分析

为了探究小肌肉蛋白(Small Muscle Protein X-link,SMPX)在隆林山羊中的蛋白结构和组织表达水平,本研究克隆隆林山羊SMPX,并进行生物信息和组织表达谱分析。从NCBI查找山羊SMPX基因序列设计引物,根据TRlzol法提取1月龄隆林山羊心、肝、脾、肺、肾、背肌的总RNA,反转录成cDNA,并克隆SMPX,通过qRT-PCR分析SMPX在不同组织中的表达水平,进行生物信息学分析。SMPX基因编码区序列全长253bp,共编码255个氨基酸,与NCBI上山羊编码区序列同源性达100%。SMPX蛋白的分子质量20.61ku,等电点为5.29,是酸性蛋白,其在1～22个氨基酸处具有信号肽。SMPX有11个磷酸化位点,在隆林山羊不同组织中的表达量不一样,推测它可能在不同组织中发挥不同的生物学作用。     

不同日龄大白猪甲状腺素运载蛋白基因的表达研究

本研究采用RT-PCR方法对大白猪的甲状腺素运载蛋白基因在1、90、180、270和360 d的心、肝、胃、脾、肾、肺、大肠、小肠、肌肉、子宫、卵巢共11个组织的表达情况进行了研究。结果表明,甲状腺素运载蛋白（transthyretin, TTR） mRNA在大白猪的肝脏、子宫和卵巢持续表达,且在肝脏中持续高表达,这与RBP mRNA的表达情况一致;1 d时所检的11个组织均表达,且表达量较高,而90 d时除了心脏、肝脏和胃外,其余组织的表达水平均较低。     

猪lncRNA-ENSSSCT00000018610的克隆及其在猪卵泡中的表达

为了探究lncRNA-ENSSSCT00000018610在猪卵泡发育过程中的作用,本研究采用RACE技术对lncRNA-ENSSSCT00000018610的全长序列进行了扩增克隆,用Real-time PCR进行组织表达谱分析,并分析其在梅山猪和杜洛克猪卵泡中的表达情况以及采用顺式和反式两种方法对lncRNA-ENSSSCT00000018610靶基因进行预测。结果表明,克隆获得了lncRNA-ENSSSCT00000018610全长序列1 731bp;lncRNA-ENSSSCT00000018610在肌肉、心、肝、脾、肺、肾、十二指肠、卵巢、输卵管、子宫、垂体、黄体、下丘脑中均有不同程度的表达,其中以肾、肺、子宫、卵巢表达量相对较高;lncRNA-ENSSSCT00000018610在杜洛克猪S、L卵泡中的表达量显著高于梅山猪(P0.05),在杜洛克猪M1和M2卵泡中的表达水平极显著高于梅山猪(P0.01)。lncRNA-ENSSSCT00000018610的潜在靶基因TNIP1、CYP2J2、SCARB1、IBSP等与猪产仔性状相关,并且参与猪的卵泡发育。提示其可能通过对靶基因的调控间接参与卵泡发育过程。     

miRNA-148a-3p的生物信息学分析及其在小鼠不同组织中的表达水平检测

旨在研究小鼠不同组织中miR-148a-3p的表达情况,并对其进行生物信息学分析,构建miR-148a-3p基因相关网络,进一步阐明其在机体中的作用.本研究以6周龄雄性C57BL/6 J小鼠胃、肺、脾、皮肤、肝、心和肾7个组织为研究材料,每组3个重复,进行3次平行试验.利用qRT-PCR技术比较小鼠不同组织中miR-1...     

从江香猪miR-143-3P克隆及组织表达

为探究miR-143-3P对从江香猪的表达调控作用,本研究通过SWChen 2.3程序筛选出PRKAA1基因3'-UTR相关的miRNAs,利用生物信息学软件分析其保守性,采用茎环法设计引物克隆miR-143-3P序列,运用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测该miRNA在从江香猪各组织中的表达水平。结果表明:通过SWChen2.3软件与高通量测序筛选出共同miRNAs有8个,以其中的miR-143-3P为研究对象;成功克隆出miR-143-3P成熟序列;生物信息学分析发现miR-143-3P在各物种中具有较高的保守性;miR-143-3P在从江香猪各组织均有表达,其中在肝、脾、胃组织中的表达量极显著高于其他组织。     

延边黄牛ANGPTL4基因组织表达规律与肌内脂肪沉积相关性研究

为分析ANGPTL4基因在延边黄牛各组织中的表达差异,进一步探讨该基因在肌内脂肪沉积中的作用,本实验利用q RT-PCR法比较分析了ANGPTL4基因在延边黄牛7个组织(心、肝、脾、肺、肾、背最长肌和后腿肌)中的表达水平及其与肌内脂肪沉积的相关性。结果表明:ANGPTL4基因在7个组织中表达水平从高到低依次为肝、肺、肾、心、脾、背最长肌和后腿肌,肝中表达量极显著高于心、脾、肺、肾、后腿肌和背最长肌组织(P0.01),肺中表达量显著高于心、脾、肾、后腿肌和背最长肌组织(P0.05);背最长肌中ANGPTL4基因的表达量与背最长肌的IMF含量呈显著正相关(P0.05),相关系数为0.924;ANGPTL4基因在后腿肌的表达量与后腿肌的IMF含量呈显著正相关(P0.05),相关系数为0.998。结果显示,ANGPTL4基因影响延边黄牛肌内脂肪沉积。     

2个山西地方猪种SLA-DRA基因多态性及组织表达谱分析

SLA-DRA基因是SLAII类基因中的一个重要功能基因,与猪的生长性能、初生体质量、30日龄体质量、繁殖性能、仔猪腹泻等密切相关。本研究运用PCR-SSCP方法检测晋汾白猪和新山西黑猪SLA-DRA基因第2外显子的多态性,结果表明,在晋汾白猪中检测到2种基因型(AA、AB),在新山西黑猪中只检测到1种基因型(AA)。利用SAS 8.1软件进行卡方独立性检验表明,晋汾白猪和新山西黑猪间基因型分布表现为差异极显著(P0.01)。用RT-PCR方法对SLA-DRA基因在2个猪种各组织中的表达情况进行分析,结果显示,晋汾白猪的SLA-DRA基因在脂肪组织中不表达,在心、肝、脾、肺、白细胞、肾、淋巴结、子宫、胃、卵巢、皮肤、肌肉、回肠、小脑、支气管、盲肠和直肠组织中均有表达;新山西黑猪的SLA-DRA基因在直肠中不表达,在心、肝、脾、肺、白细胞、肾、淋巴结、子宫、巨噬细胞、卵巢、皮肤、肌肉、脂肪、回肠、大脑、支气管和盲肠组织中均有表达。本研究为SLA-DRA基因功能方面的研究提供了参考。