牛卵母细胞体外成熟培养

本文着重探讨了牛卵母细胞的体外成熟培养，对卵子的发生、卵母细胞体外成熟的原理进行了阐述，叙述了从卵母细胞的回收、选择到成熟等步骤。本实验采用磷酸缓冲液(PBS)冲洗卵巢、吸卵，以含有FSH、LH、雌二醇等成分的成熟液对卵母细胞进行体外成熟培养，使卵丘细胞扩散，第一极体排出，卵母细胞达到成熟。     

影响卵母细胞体外成熟的因素

卵母细胞是胚胎工程技术研究中最为重要的一种试验材料,卵母细胞的体外成熟(maturation in vitro,IVM)可以为用体细胞核移植的方法生产大型转基因动物的研究提供大量MⅡ期卵母细胞，同样也是动物体外受精技术的关键环节。作者就卵母细胞体外成熟的影响因素做了简要的论述，主要介绍了卵母细胞来源、其培养系统、激素和生长因子等因素对卵母细胞体外成熟的影响。     

转录组揭示马卵母细胞体外成熟的重要候选基因

本研究以马GV和体外成熟的MII期卵母细胞为研究样本，进行转录组测序，旨在筛选影响马卵母细胞成熟的关键候选基因。结果表明，马卵母细胞体外成熟率为37.18%|马GV和体外成熟的MII卵母细胞具有不同的mRNA谱，其中9969个mRNA差异显著，进一步的GO和KEGG分析发现，差异表达基因（DEGs）参与了多种可能与卵母细胞减数分裂相关的生物学和信号通路。本研究提供了马卵母细胞体外成熟前后转录组的详细信息，为后续探究关键差异基因对卵母细胞成熟的影响及提高卵母细胞成熟的可行性提供理论依据。 [关键词]转录组|马|卵母细胞|体外成熟|重要候选基因     

生殖激素对哺乳动物卵母细胞体外成熟的影响

生殖激素是卵母细胞成熟培养液中必不可少的成分,它对卵母细胞的完全成熟至关重要。本文综述了其化学特性和对卵母细胞成 熟培养的影响,并对其作用机理进行了简单阐述。     

促卵泡素与促黄体素对猪卵母细胞体外成熟的影响

促卵泡素(FSH)与促黄体素(LH)是参与卵母细胞成熟的最重要的蛋白质激素,在猪卵母细胞体外成熟培养中使用较多。大部分研究已经证实了促性腺激素(FSH、LH)在猪卵母细胞体外成熟培养中的重要作用。为进一步探讨FSH与LH对猪卵母细胞体外成熟的影响,确定其对猪卵母细胞体外成熟的作     

山羊卵母细胞体外成熟体系研究进展

卵母细胞体外成熟(IVM)是山羊胚胎体外生产的关键步骤,其对山羊体外生产胚胎的数量和质量均具有非常重要的意义。此外,IVM还可以满足胚胎工程技术如体细胞核移植、转基因动物生产对卵母细胞的大量需求。然而,由于山羊卵母细胞体外成熟研究起步较晚,与牛、猪等家畜相比仍然存在不小的差距,存在诸如体外成熟率低、胚胎质量不佳、培养体系可重复性低等问题。因此,分析山羊卵母细胞体外成熟的主要影响因素,提高山羊卵母细胞体外成熟率,建立山羊卵母细胞体外成熟稳定培养体系,就成为了近年来山羊胚胎体外生产的研究重点。论文综合国内外学者近年的相关研究,对可能影响山羊卵母细胞体外成熟效率的各种因素进行了综述分析,同时对山羊卵母细胞体外成熟现存问题进行了分析,以期为建立山羊卵母细胞体外成熟体系提供理论支持。     

猪GV/MⅡ期卵母细胞miRNAs表达谱及Npm2基因相关miRNAs筛选

旨在探索体外成熟前后猪卵母细胞miRNAs表达谱，并筛选参与调控Npm2基因表达的miRNAs。本试验回收屠宰场猪卵巢，收集GV期卵母细胞，经体外成熟培养后获得MⅡ期卵母细胞，分别提取约130个GV期和MⅡ期卵母细胞总RNA进行Illumina HiSeqTM 2500测序，获取miRNA测序数据，每个处理重复3次，筛选差异表达microRNAs并进行靶基因GO和KEGG聚类分析。结果表明，本研究成功构建了GV期和MⅡ期猪卵母细胞miRNAs表达谱，GV期和MⅡ期卵母细胞差异表达miRNAs有95个，具有相似表达模式的miRNA聚为一类，对95个差异表达miRNAs进行靶基因预测，共得到3 967个靶基因，经GO和KEGG富集分析表明，这些靶基因被富集于5 194个GO条目和212个信号通路，其中参与卵母细胞减数分裂成熟的信号通路有2个。在差异表达miRNAs中筛选到5个与Npm2基因相关的miRNAs。采用qRT-PCR对其中2个miRNAs进行验证，证实其表达趋势与测序结果一致。本研究筛选了GV期和MⅡ期卵母细胞差异表达miRNAs，推测差异表达的miRNAs可能通过代谢、卵母细胞减数分裂相关通路、孕激素介导的卵母细胞成熟通路等途径在卵母细胞体外成熟过程中发挥作用，并筛选出调控Npm2基因表达的miRNAs，研究结果可为进一步阐明miRNA对Npm2基因的调控及其在卵母细胞成熟过程中的作用提供依据。     

OPU卵母细胞体外成熟体系的优化研究进展

近年来，体外胚胎生产(in vitro embryo production, IVP)技术取得了很大进步，尤其是卵母细胞活体采卵(ovum pick-up, OPU)技术得到广泛应用。OPU是20世纪90年代发展起来的一项新型的能获得优秀种母牛卵母细胞的技术，该技术在动物胚胎生产和发育机理研究及人类辅助生育技术临床实践中有着广阔的应用前景。可以提高种母畜和珍贵野生动物的资源保护效率，提高优良母畜的遗传潜力，为奶牛生物技术发展提供必要的支撑技术。卵母细胞的质量是IVP系统取得成功的关键，卵母细胞的体外成熟(in vitro maturation, IVM)是成功受精和胚胎发育必不可少的步骤。卵母细胞IVM完成了卵母细胞的细胞质和核成熟，准备了发育至胚胎基因组激活所必需的所有必要成分。但体外成熟的卵母细胞发育能力低于体内成熟卵母细胞，卵母细胞减数分裂和细胞核质成熟不同步，氧化应激损伤等对卵母细胞成功受精和胚胎发育非常重要，因此，需要进一步提高卵母细胞体外成熟能力，以改善牛体外胚胎生产系统。本文从卵母细胞体外成熟面临的核质成熟不同步，氧化应激等问题进行概述，同时，叙述C型钠肽、褪黑素、FLI...     

影响牛卵母细胞体外发育能力的因素

本文重点从三个方面探讨了影响卵母细胞成熟发育能力的制约因素：（1）通过分析卵母细胞核成熟和胞质成熟的过程及成熟时各细胞器的状态，指出在体外培养系统中卵母细胞的核成熟，并不代表胞质的成熟，推迟卵母细胞减数分裂的恢复能够有效促使胞质成熟；（2）针对母牛卵巢的功能结构和形态变化，卵泡发育程度及母牛发情周期的不同阶段等有关内容的实验材料，分析了卵泡发育过程中的几种关键因素对卵母细胞发育能力的影响，为了获得较多具有发育潜力的卵母细胞，提出了采集母牛卵巢的适宜情期阶段；（3）根据卵母细胞发育的不同的阶段，提出改善培养体系能提高卵母细胞的发育力。     

卵母细胞成熟的形态学特征及其调控

综述卵母细胞成熟的形态结构的特点，卵泡内环境对卵母细胞生长，发育的影响，以及卵母细胞成熟的分子调节机制。     

激素对卵母细胞体外成熟的影响

激素对卵母细胞体外成熟的影响赵伟黄夺先（江苏省农科院牧医所２１００１４）近年来，随着商业化胚胎移植的发展，卵母细胞体外成熟和体外受精作为胚胎来源的主要途径已受到关注，而直接影响胚胎数量和质量的卵母细胞体外成熟显得尤为重要。影响卵母细胞体外成熟的因素很...     

C型钠肽和半胱胺前成熟处理对牛卵母细胞发育能力的影响

本研究旨在探讨C型钠肽(CNP)结合半胱胺前成熟处理牛卵母细胞对其减数分裂和发育能力的影响。以常规的体外成熟24 h培养为对照,CNP前成熟(添加或不添加半胱胺)处理牛卵母细胞6 h,然后进行常规体外成熟培养,检测卵母细胞的成熟率以及体外受精后胚胎的卵裂率、囊胚率和囊胚细胞数。结果表明:与对照组相比,不论有无添加半胱胺,CNP前处理牛卵母细胞均未显著提高牛卵母细胞的成熟率和体外受精后的卵裂率(P0.05),但显著提高了受精后囊胚细胞总数(P0.05);CNP结合半胱胺前处理牛卵母细胞显著提高了受精后的囊胚率(P0.05)。由此可见,CNP结合半胱胺前成熟处理牛卵母细胞提高了其发育潜能,可用于优化卵母细胞体外成熟培养体系。     

马卵母细胞体外成熟的研究进展

随着全球马产业的发展,马发挥的经济价值越来越大。辅助生殖技术有利于发挥优良马匹的潜在价值。马卵母细胞体外成熟(IVM)是辅助生殖技术重要的组成部分,卵母细胞的获取是体外成熟的前提,切刮法能从离体卵巢中获得较多的马卵母细胞,而活体采卵技术(OPU)则能持续地获得卵母细胞,并能较好的保存马卵母细胞的发育能力。扩张型卵母细胞的成熟率高于紧密型卵母细胞,母马的年龄会影响到其卵母细胞的质量。马卵母细胞体外存放较长时间不会影响其发育能力,现在已有较为成熟的体系能使马卵母细胞在体外保存24 h以上而不影响其成熟率。在马卵母细胞成熟体系中常用的基础培养液是M199,添加胎牛血清(FBS)、促卵泡素(FSH)、促黄体生成素(LH)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)等物质能显著提高成熟率,常用培养环境为38～39℃,5%CO_2饱和湿度下培养,培养时间30 h。成熟的卵母细胞有扩张的卵丘细胞和极体,且成熟的卵母细胞的细胞骨架及微管结构也会发生变化。本文针对马卵母细胞的采集和体外成熟培养的相关研究进行总结,重点阐述了不同采集技术的回收率以及影响马卵母细胞体外成熟率的关键因素,以期对今后马卵母细胞体外成熟的进一步研究及后期体外受精技术的发展提供借鉴与参考。     

马卵母细胞体外成熟的研究进展

随着全球马产业的发展,马发挥的经济价值越来越大。辅助生殖技术有利于发挥优良马匹的潜在价值。马卵母细胞体外成熟(IVM)是辅助生殖技术重要的组成部分,卵母细胞的获取是体外成熟的前提,切刮法能从离体卵巢中获得较多的马卵母细胞,而活体采卵技术(OPU)则能持续地获得卵母细胞,并能较好的保存马卵母细胞的发育能力。扩张型卵母细胞的成熟率高于紧密型卵母细胞,母马的年龄会影响到其卵母细胞的质量。马卵母细胞体外存放较长时间不会影响其发育能力,现在已有较为成熟的体系能使马卵母细胞在体外保存24 h以上而不影响其成熟率。在马卵母细胞成熟体系中常用的基础培养液是M199,添加胎牛血清(FBS)、促卵泡素(FSH)、促黄体生成素(LH)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)等物质能显著提高成熟率,常用培养环境为38~39℃,5%CO2饱和湿度下培养,培养时间30 h。成熟的卵母细胞有扩张的卵丘细胞和极体,且成熟的卵母细胞的细胞骨架及微管结构也会发生变化。本文针对马卵母细胞的采集和体外成熟培养的相关研究进行总结,重点阐述了不同采集技术的回收率以及影响马卵母细胞体外成熟率的关键因素,以期对今后马卵母细胞体外成熟的进一步研究及后期体外受精技术的发展提供借鉴与参考。     

脂滴在Beagle犬卵母细胞体外成熟中的研究

犬排出的卵母细胞处于GV期,其体外成熟率在20%左右,尚未获得突破,阻碍了犬体外保种及基因修饰疾病模型创制研究。犬卵母细胞含有大量脂滴,关于脂滴与卵母细胞成熟的研究鲜有报道。综述了脂滴与犬卵母细胞体外成熟的关系,尝试寻找研究犬卵母细胞体外成熟新的突破口。     

绵羊卵母细胞体外成熟的研究

研究了FSH／LH浓度、年龄和采卵季节对绵羊卵母细胞体外成熟的影响。结果表明：①FSH／LH能促进绵羊卵母细胞体外成熟，适宜的添加浓度很重妻。本实验条件下，添加量以10μg／ml为宜。②成年绵羊卵母细胞成熟率高于性成熟前绵羊，但无显著差异。③发情季节绵羊卵母细胞较乏情季节易成熟。     

磷酸二酯酶抑制剂对水牛卵母细胞体外成熟的影响

本研究探讨了磷酸二酯酶(PDE)抑制剂Milrinone对水牛卵母细胞成熟的影响。水牛卵母细胞在含50μmol/L Milrinone的成熟液中培养16 h后,在不含Milrinone的成熟液中培养12 h、16 h和20 h,挑选形态正常的卵母细胞受精后培养,其分裂率(分别为59.1%,48.5%和50.6%)显著高于再培养8 h(29.5%)的卵母细胞(P0.05),但与其对照组(66.2%)相近,同时其卵母细胞受精后的囊胚发育率(分别为36.9%,33.6%和23.9%)亦显著高于8 h(15.5%)的卵母细胞(P0.05),但均与正常成熟培养的对照组(33.4%)相近。结果表明Milri-none对水牛卵母细胞的成熟具有明显的可逆抑制作用,经成熟抑制后的水牛卵母细胞恢复成熟后仍可保持较高的发育潜能。     

猪卵泡卵母细胞体外成熟研究现状

猪卵泡卵母细胞体外成熟研究现状孟庆刚李光鹏曹允考（东北农业大学动物科学系１５００３０）１引言随着哺乳动物胚胎工程技术的发展，人们对猪卵母细胞体外成熟的研究也取得了很大的进展。关于猪卵母细胞体外成熟的理论和培养技术也日渐成熟。相信随此项技术的发展，人们...     

影响卵母细胞体外成熟的因素

卵母细胞体外成熟培养技术是现代生物技术中的重要内容之一。多年来科研人员为了进一步提高卵母细胞体外培养成熟率以及更深入了解卵母细胞成熟机制,对影响卵母细胞体外成熟的因素进行了大量的研究。本文较全面的综述了影响卵母细胞体外成熟培养的有关因素及其机制。     

AREG对绵羊小腔卵泡卵母细胞体外成熟的影响

旨在研究双调蛋白（AREG）对绵羊小腔卵泡卵母细胞体外成熟（IVM）的影响。本研究从屠宰场绵羊卵巢上采集小腔和中腔卵泡的卵母细胞进行试验，利用自发荧光检测卵母细胞的NAD （P） H和FAD⁺⁺水平，利用JC-1检测卵母细胞的线粒体膜电位；两种来源的卵母细胞经体外成熟后，比较其卵丘扩展指数（CEI）、第一极体排出率（MII%）；比较AREG、AREG+GDF9、AREG+BMP15、AREG+GDF9+BMP15、GDF9+BMP15对小腔卵泡卵母细胞体外成熟后的CEI、MII%及卵母细胞线粒体膜电位的影响；检测了AREG+GDF9+BMP15对小腔卵泡卵母细胞体外成熟后的NAD （P） H和FAD⁺⁺水平及其受精后发育能力的影响。结果表明，成熟前，小腔卵泡卵母细胞的线粒体膜电位和FAD⁺⁺水平均显著低于中腔卵泡卵母细胞（P<0.05）；体外成熟培养后，小腔卵泡卵母细胞的CEI和MII%均显著低于中腔卵泡卵母细胞（P<0.05）。与对照组相比，AREG+GDF9+BMP15显著提高了小腔卵泡卵母细胞体外成熟后的CEI、MII%和线粒体膜电位（P<0.05），且与中腔卵泡卵母细胞组差异不显著（P>0.05）；另外，AREG+GDF9+BMP15显著提高了小腔卵泡卵母细胞体外成熟后的NAD （P） H和FAD⁺⁺水平（P<0.05），且与中腔卵泡卵母细胞组差异不显著（P>0.05）。与对照组相比，在成熟液中添加AREG+GDF9+BMP15可以明显提高小腔卵泡卵母细胞体外受精后的卵裂率和囊胚率（分别为（43.79±3.69）%、（28.54±4.31）%和（78.99±1.12）%、（47.46±2.50）%，P<0.05），而且与中腔卵泡卵母细胞组无显著差异（P>0.05）。综上表明，绵羊小腔卵泡卵母细胞的代谢水平及IVM质量较低， AREG在GDF9和BMP15的协同作用下可以显著提高小腔卵泡卵母细胞的代谢水平及IVM质量，并进一步提高小腔卵泡卵母细胞体外受精后的发育能力。