细胞凋亡体外检测方法的研究进展

细胞凋亡贯穿于生物体生命活动的全部过程,在生命活动中具有重要的地位,是生命科学领域研究的热点。目前,用于检测细胞凋亡的方法很多。为了准确、快速地检测细胞凋亡,文章在介绍细胞凋亡的形态变化和生化特征、刺激细胞凋亡发生机制的基础上重点综述了常用的细胞凋亡的体外检测方法。     

细胞凋亡的特征及其检测方法

细胞凋亡是动物机体组织清除受损、衰老或多余细胞的一种自杀性过程,它对于保持机体各组织器官正常生长、发育、结构、功能动态平衡和维持内环境相对稳定等都具有重要意义。发生凋亡的细胞大多数是生物个体中多余或老化的细胞,有些也是发生肿瘤时的细胞或受到病毒或细菌感染的细胞。根据不同的检测方法来检测不同类型的细胞凋亡,进而来研究细胞凋亡的现象和发生机制,为揭示机体与细胞凋亡的关系和疾病与凋亡的关系提供理论依据。文章对凋亡细胞的特征、细胞凋亡各种检测方法的检测原理和结构判定,分别进行了概述。     

多胺与细胞凋亡

多胺与细胞生长及凋亡有密切的关系。多胺与细胞凋亡关系的研究将为细胞生长及抑癌研究提供科学的基础资料。文章主要从多胺的合成及分解 ,腐胺、精胺、ODC和 SSAT在细胞凋亡过程中的作用及 Caspase-3、P53、MAPK /JNK和原癌基因等参于多胺介导的细胞凋亡的调节机理等方面 ,对多胺与细胞凋亡间的关系进行了较为全面的介绍     

细胞凋亡的调控与检测

细胞凋亡是细胞的生理性死亡形式,受包括caspase、Bcl-2家族蛋白等在内的许多因素的调控并与其共同构成一个复杂的网络机构,诱导细胞凋亡并对其进行严密的调控。根据细胞凋亡的形态学改变和生化改变,通过显微镜和流式细胞仪等仪器设备,采用凝胶电泳及原位标记法等方法对凋亡细胞进行检测。     

细胞凋亡的信号通路和检测方法

细胞凋亡是一种主动的、高度有序的、受基因精细调控及一系列酶参与的细胞生理性死亡过程。细胞凋亡在多细胞生物的组织分化、器官发育、机体稳态的维持中有着重要意义,与疾病的发生发展密切相关。本文综述了细胞凋亡的生物学意义、机制及其检测方法。     

猪传染性胃肠炎病毒诱导PK-15细胞凋亡相关基因mRNA转录水平变化的研究

为探究PK-15细胞感染猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)后相关凋亡基因Bcl-XL、MCL-1及PUMA mRNA转录水平差异以及TGEV增殖与细胞凋亡之间的关联,本研究在TGEV感染PK-15细胞前后,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率,结果显示TGEV具有诱导PK-15细胞发生凋亡的能力;并利用建立的q PCR方法对凋亡相关基因Bcl-XL、MCL-1和PUMA mRNA的转录水平进行测定,结果显示,感染TGEV (实验组)后Bcl-XL、MCL-1和PUMA mRNA转录水平与未感染病毒组(对照组)有明显差异,进一步表明TGEV感染PK-15细胞诱导了细胞凋亡的进程。本研究为了解TGEV诱导PK-15细胞凋亡的机制提供了实验依据。     

乳腺发育和乳腺疾病中细胞凋亡基因的表达规律及其调控

阐述了细胞凋亡的形态变化、细胞凋亡的途径以及细胞凋亡在乳腺发育过程和乳腺疾病的发生及防御中的表达。研究乳腺细胞凋亡的基本规律和基因调控过程,能更好的了解乳腺发育过程,并用相关基因作为诊断乳腺疾病的指标。     

乳腺发育和乳腺疾病中细胞凋亡基因的表达规律及其调控

阐述了细胞凋亡的形态变化、细胞凋亡的途径以及细胞凋亡在乳腺发育过程和乳腺疾病的发生及防御中的表达.研究乳腺细胞凋亡的基本规律和基因调控过程,能更好的了解乳腺发育过程,并用相关基因作为诊断乳腺疾病的指标.     

细胞凋亡与疾病

自1972年Kerr提出细胞凋亡这一概念后,从20世纪80年代末期开始成为肿瘤病因学、理学研究热点,近几年的研究在凋亡信号转导途径、细胞凋亡的生化反应机制及细胞凋亡的调控基因,细胞凋亡与疾病的关系等方面都取得了显著的进展。作者就细胞凋亡与疾病的情况进行了综述。     

细胞凋亡在肾脏疾病中的作用

细胞凋亡是基因调控的细胞生理性死亡形式 ,是一种主动、自发性的过程 ,是目前生物学和医学界的研究热点。文章通过对细胞凋亡的形态学、生物化学、免疫化学和分子生物学的检测方法、促进细胞凋亡和抑制细胞凋亡的基因、以及细胞凋亡与肾脏疾病的关联作一综述。旨在阐明细胞凋亡在肾小球肾炎、肾小管疾病以及继发性肾脏疾病等肾脏疾病发病机制中的重要作用     

动物细胞大规模培养中细胞凋亡检测方法的研究

为了探讨动物细胞大规模培养中细胞凋亡的检测方法,以不同浓度氯化铵诱导BHK-21细胞凋亡,每隔12 h收集细胞,采用台盼兰形态学排染法、吖啶橙和溴化乙锭双重荧光染色法、FITC-Annexin V/PI双染色荧光显微镜观察法、原位缺口末端标记法(TUNEL)、DNA凝胶电泳、流式细胞术(FCM)法进行细胞凋亡的检测。通过比较发现,不同方法检测结果都存在着显著性差异,但吖啶橙和溴化乙锭双重荧光染色法是一种简单、易行、准确、全面定性细胞凋亡的较为可靠的方法,而FITC-Annexin V/PI双染色流式细胞仪能特异地、准确地检出早期凋亡的细胞,是较为理想的凋亡定量检测方法。这2种方法的联合运用更适应于动物细胞大规模培养过程中细胞凋亡的检测。     

检测细胞凋亡的常用方法

细胞凋亡的主要形态学特征是凋亡小体的形成，过去常用普通光学显微镜和透射电子显微镜进行观察。实际上，细胞凋亡的发生远远早于典型的形态变化。怎样将病理形态和代谢结合在一起来观察细胞的凋亡，是多年来人们研究的重点。本文将近年来常用于细胞凋亡研究的十种新方法作以简介。这些方法包括碘化丙啶荧光染色法、吖啶橙荧光染色法。吖啶橙活细胞悬液染色法、Hoechst33258荧光染色法，简易末端标记法、5’末端^32P标记法、荧光原位末端标记技术、酶原位末端标记技术、PI染色的流式细胞分析术和Hoechst-P1染色的流式细胞分析术等。     

Immunohistochemical detection of extrinsic and intrinsic mediators of apoptosis in porcine paraffin-embedded tissues

Apoptosis is a strictly regulated mechanism of cell death that involves a complex network of biochemical pathways. Whether a cell undergoes apoptosis or not depends on a delicate balance of anti- and pro-apoptotic stimuli. This phenomenon can be induced by two different pathways: intrinsic and extrinsic pathways. The main aim of this study was to determine the ideal fixative and antigen retrieval method in porcine paraffin embedded tissues for the immunohistochemical detection of apoptosis mediators, from both extrinsic and intrinsic pathways. Tonsil, retropharyngeal lymph node and lung tissue samples were fixed in 10% neutral buffered formalin, Bouin solution and zinc salts fixative (ZSF) and different unmasking methods were carried out. Both 10% neutral buffered formalin and ZSF resulted as the fixatives of election to study apoptosis phenomena. Tween 20 (0.01% in PBS), citrate buffer (microwave, pH 6.0) and/or protease type XIV were the antigen retrieval methods which displayed better labelling. Our results allow to deep in the knowledge of apoptosis and its role in the pathogenesis of porcine diseases.     

口蹄疫病毒诱导BHK-21细胞产生凋亡的研究

试验利用口蹄疫病毒感染BHK-21细胞,通过MTT法、Hoechst 33258染色、原位末端标记技术(TUNEL)、流式细胞术和链特异性荧光定量RT-PCR,分别就口蹄疫病毒对BHK-21细胞生长的抑制作用、凋亡细胞的形态学和分子生物学特征、凋亡峰的出现和细胞周期的变化以及口蹄疫病毒基因组在BHK-21细胞内的复制情况进行了检测。结果表明:口蹄疫病毒可抑制BHK-21细胞的生长并诱导其产生凋亡,呈现典型的凋亡细胞特征,出现细胞凋亡峰并且细胞周期明显被阻滞在G1/G0期,同时对凋亡率和口蹄疫病毒基因组复制的关系做了初步研究。     

蚕的细胞凋亡相关基因及其检测技术

家蚕细胞凋亡是家蚕细胞的主动死亡过程,在家蚕细胞的发育和疾病的发生中起重要的作用,同时也是一种抵御病毒感染的天然性保护机制。而病毒也在长期进化过程中获得了适应性调节细胞凋亡的能力,或通过在病毒复制早期表达凋亡抑制产物,以阻止细胞凋亡达到繁殖子代病毒的目的,或通过晚期表达凋亡诱导物诱导细胞凋亡,以快速有效地释放子代病毒。根据细胞凋亡的典型特征,已经发展出ELISA法,流式细胞仪法等分子生物学检测方法,为更深入地了解细胞凋亡的机制打下了坚实的基础。     

Apoptosis: A review of pro‐apoptotic and anti‐apoptotic pathways and dysregulation in disease

Objective – To review the human and veterinary literature on the biology of apoptosis in health and disease. Data Sources – Data were examined from the human and veterinary literature identified through Pubmed and references listed in appropriate articles pertaining to apoptosis. Human Data Synthesis – The role of apoptosis in health and disease is a rapidly growing area of research in human medicine. Apoptosis has been identified as a component of human autoimmune diseases, Alzheimer's disease, cancer, and sepsis. Veterinary Data Synthesis – Research data available from the veterinary literature pertaining to apoptosis and its role in diseases of small animal species is still in its infancy. The majority of veterinary studies focus on oncologic therapy. Most of the basic science and human clinical research studies use human blood and tissue samples and murine models. The results from these studies may be applicable to small animal species. Conclusions – Apoptosis is the complex physiologic process of programmed cell death. The pathophysiology of apoptosis and disease is only now being closely evaluated in human medicine. Knowledge of the physiologic mechanisms by which tissues regulate their size and composition is leading researchers to investigate the role of apoptosis in human diseases such as cancer, autoimmune disease and sepsis. Because it is a multifaceted process, apoptosis is difficult to target or manipulate therapeutically. Future studies may reveal methods to regulate or manipulate apoptosis and improve patient outcome.     

Apoptosis in liver damage produced by tunicamycin

OBJECTIVE: To determine whether apoptosis contributes to hepatocyte loss in tunicamycin poisoning. DESIGN: Groups of four guinea pigs were given 400 microg/kg of tunicamycin subcutaneously and killed at 24 h intervals up to 72 h post-injection. Livers were examined by routine histological methods and ancillary techniques (TUNEL staining, endonuclease activation, caspase activity, and electron microscopy) to ascertain whether any hepatocyte injury was apoptotic. RESULTS: Many hepatocytes exposed to tunicamycin showed evidence of apoptosis in the form of nuclear karyorrhexis with chromatin margination and crescent formation, TUNEL-positivity, DNA laddering, elevated caspase activity and apoptotic body formation. CONCLUSION: Tunicamycin caused the death of many hepatocytes in the livers of guinea pigs by apoptosis.     

马立克氏病病毒人工感染鸡细胞凋亡病变及凋亡机制研究

通过光镜、电镜观察以及免疫组织化学方法对马立克氏病病毒人工感染鸡的多种组织的实质细胞进行了细胞凋亡病变及凋亡机制研究。结果表明，马立克氏病病鸣肝、肾、心、脾、腺胃、卵巢、羽髓等组织、器官的实质细胞均出现明显的细胞凋亡病变。光镜观察．可见肝细胞、肾小管上皮细胞、腺胃腺上皮细胞、心肌纤维、脾脏内的淋巴细胞、卵巢内的颗粒膜细胞、羽髓细胞的细胞核裂解成大小不等的、致密浓染的球形团块。电镜观察，可见这些细胞的细胞核染色质经历凝集、边集、裂解，最后形成许多凋亡小体等不同阶段。免疫组化研究结果显示，上述细胞均有明显的FasL表达，FasL的表达表明细胞凋亡信号增强，细胞凋亡发生。     

流式细胞术在细胞凋亡研究中的应用

流式细胞术做为一种高新生物技术,在动物医学的各个领域,包括细胞生物学、病毒学、肿瘤学、免疫学和病理学中都得到广泛应用,为细胞凋亡研究提供了有效的技术手段。该技术具有简便、快速、多参数分析等优点,可针对细胞在凋亡时产生的一系列形态学、生物化学及分子生物学性质的变化,包括细胞皱缩,核染色质凝聚,细胞膜通透性改变,Caspases 激活,线粒体跨膜电位降低,膜磷酯酰丝氨酸外化,胞质 Ca2 浓度升高,DNA片段化及含量变化等特点,进行定性、定量测试分析,从而实现对细胞凋亡的准确测定。