实验室豚鼠保种伊氏锥虫毒力致弱株对小白鼠的最低感染量试验

经皮下注射不同数量虫体的方法测定了实验室用豚鼠保种继代至96代广西骡伊氏锥虫株对小白鼠的最低感染虫数。结果为,每只鼠注射10~6个虫组,平均4天镜检出虫,8天死亡;每只注射10~4个虫组,平均6天镜检出虫,10天死亡;每只注射10~2、10、1个虫各组,镜检3个月一直没有出虫,小鼠健活。从而初步认为该株锥虫对小白鼠的最低感染量为10~4个虫/ml左右。     

抗锥虫单克隆抗体研究简况

锥虫病是一种世界性分布的原虫病。主要流行于非洲北部、拉丁美洲及亚洲的部分地区。其中由罗德西亚锥虫(Trypanosme rhodesiense)等引起的非洲睡眠病(Sleeping disease)是人畜共患的锥虫病;由克氏锥虫(T. Cruzi)引起的南美恰氏病(Chaga's discase)是人类锥虫病。我国的锥虫病是由伊氏锥虫(T. evansi)引起的,主要危害牛、马和骆驼等家畜。近年来,随着淋巴细胞杂交瘤技术的建立和发展,对锥虫病的免疫研究已进入一个崭新的阶段。     

肠道病毒71型感染C57BL/6小鼠模型的初步建立

以1日龄C57BL/6乳鼠作为试验对象,分别通过颅内和腹腔注射肠道病毒71型(EV71)福建株感染,观察记录小鼠体重和体征,定期采集小鼠大脑、小肠、肺、肌肉4种组织,分析病毒载量,通过HE染色和免疫组化观察各种组织病理变化。结果:2种感染途径的C57BL/6乳鼠均于不同时间出现竖毛、弓背和消瘦症状。经腹腔注射感染的乳鼠能在肌肉组织中检测到病毒RNA,经颅内注射感染的乳鼠可在肌肉和肺组织中检测到病毒RNA。病理学及免疫组化结果显示:EV71福建株在骨骼肌中大量增殖,并可导致肌肉组织水肿和坏死、肺组织水肿充血以及神经元坏死等多种组织器官炎症反应。综上,初步建立通过颅内和腹腔注射感染EV71的C57BL/6乳鼠模型,为研究EV71病毒感染机制、建立更优的动物模型提供参考。     

伊氏锥虫单虫克隆的2个变异体的VSG的交叉免疫保护试验

为了考察同一克隆锥虫的不同变异体的可变糖蛋白分子 (VSG)有无交叉免疫作用 ,首先采用蛋白酶抑制剂TLCK处理 ,分离纯化伊氏锥虫安徽株单虫克隆 2个早期变异体ShTat1 1、ShTat1 2的VSG ,然后采用这 2种VSG进行交叉免疫保护试验。试验鼠分为对照组 ,ShTat1 1VSG免疫组 ,ShTat1 2VSG免疫组。用弗氏佐剂按常规进行 3次免疫注射 ,每次抗原用量均为 50 μg/只。三免后第 1 2天 ,将各组小白鼠随机分为 2个小组 ,分别用ShTat1 1、ShTat1 2攻击 ,每只攻虫 1 50 0条。结果攻虫后的对照鼠及异源攻虫后的免疫鼠尾血最早出虫时间均为攻虫后第 3天 ;同源锥虫攻击后免疫鼠的尾血最早出虫时间为第 6天。对照组经攻虫 ,保护率均为 0 /8;免疫鼠经交叉攻虫 ,保护率均为 0 /8;VSG免疫鼠用同源锥虫攻击 ,保护率分别为 5/1 0和 3/1 0。表明各VSG激发的免疫只能抗同源锥虫的感染 ,对异源锥虫感染无保护力     

隐性弓形虫感染小鼠诱发急性弓形虫病模型的研究

为建立环磷酰胺诱导隐性弓形虫感染小鼠复发为急桂弓形虫病的模型,20只ICR小鼠腹腔注射弓形虫Prugniaud株包囊10个/只鼠,10只小鼠注射等量无菌PBS.2个月后给所有小鼠每天腹腔注射环磷酰胺100 mg/kg,连续注射14d.隔天监测小鼠体重、全血中白细胞数和弓形虫基因,同时取濒死小鼠肝、脾和肺组织,进行HE染色和免疫荧光检测.结果发现,感染小鼠注射环磷酰胺后第8天开始出现急性弓形虫病的症状；与试验前比较,小鼠体重和白细胞数明显下降；第10天时全血中再次发现弓形虫基因；第10天后濒死小鼠组织中检测到弓形虫基因,HE染色发现明显病理损伤,免疫荧光检测到弓形虫抗原.证明环磷酰胺可成功诱导隐性弓形虫感染小鼠复发为全身性的急性弓形虫病.     

广东粤北山区耕牛伊氏锥虫病诊治

<正>耕牛伊氏锥虫病是由锥虫属的伊氏锥虫感染引发的一种寄生虫性血原虫病,是乳源县耕牛的一种常见多发病,临床上其症状表现各异,且不易察觉。该病主要是由吸血昆虫——虻、蝇叮咬带虫家畜,通过机械传播所引发。这种血原虫除寄生于水牛、黄牛和奶牛外。还可寄生于其他一些家畜和一些野生动物。本病最     

伊氏锥虫在小鼠体内抗原变异规律及免疫保护试验

为了探索伊氏锥虫抗原的变异规律及其用于免疫预防的可能性，首先对伊氏锥虫安微株单虫克隆2个早期变异体ShTatl.1、ShTat1.2采用蛋白酶抑制剂TLCK处理，分离纯化这2种变异体的VSG，用ShTat1.1 VSG免疫KM小鼠，ShTat1.1锥虫攻击免疫鼠后6d分离锥虫，经间接免疫荧光试验（IFT）和班点酶标记试验（Dot-EIA)鉴定为ShTat1.2，说明同一克隆锥虫感染兔，小鼠第1次发生抗原变异后产生的变异体相同。依据这一规律，设计了免疫预防保护试验，试验小鼠分3组：一组为未免疫对照组，一组为ShTat1.1VSG单一抗原免疫组，另一组为ShTat1.1 VSG,ShTat1.2 VSG混合免疫抗原免疫组，各组均以ShTat1.1锥虫攻击，结果ShTat1.1 VSG ShTat1.2VSG免疫组小鼠全部获得保护，单用ShTat1.1 VSG免疫组小鼠和未免疫小鼠血中全部出虫、死亡，前者比后者出虫时间、存活时间延长。提示运用伊氏锥虫抗原变异这一规律设计的这种复合抗原，能激发宿主克服虫体抗原变异对免疫保护的干扰。     

人海绵状脑病

人海绵状脑病(Human Spongiform Encephalopathy),又称克留兹费尔特-雅柯勃氏病(Creutzfeldt-Jakob Disease)、格斯特曼-施特劳斯-谢纳科氏综合症(Gerstmann-Strauesler-Scheinker Syndrome)和库鲁病(Kuru),在病理学方面类似于绵羊痒病和牛海绵状脑病,同样具有传染性,不过尚没有什么证据可证明人海绵状脑病可以从人传染给人,但个别的医源性病例除外,例如,接受患者提供的角膜或硬脑脊膜组织移植,以及使用死于该病的患者脑垂体所提炼的人体生长激素。     

间接荧光抗体试验诊断马骡伊氏锥虫病的研究

以人工感染伊氏锥虫的小鼠血液涂片为抗原,建立了IFA试验检测马骡伊氏锥虫抗体的方法,并对伊氏锥虫病马、同群马、健康马、非伊氏锥虫病马血清作了检测。伊氏锥虫病马和无症状同群马的抗体阳性率分别为97％(33/34)和12％(18/150);25匹健康马血清伊氏锥虫抗体均为阴性;84份非伊氏锥虫病马血清的IFA试验均为阴性,未出现交叉反应。多数病马发病一周内的血清IFA试验即为阳性。3匹病马血清抗体消长动态观察结果表明,病马于治疗后110天,血清IFA试验仍为阳性。本试验表明,IFA试验检测马骡伊氏锥虫抗体,敏感性高、特异性强,对无症状的感染马也能检出,可用于本病的早期诊断和血清流行病学调查。     

牛至精油及肉桂精油对弗氏柠檬酸杆菌感染小鼠的预防作用研究

试验旨在研究弗氏柠檬酸杆菌对小鼠的致病性及牛至精油和肉桂精油对小鼠抵抗弗氏柠檬酸杆菌感染的预防效果。致病性试验将30只小鼠随机分为5组，对照组小鼠腹腔注射0.2 mL生理盐水，1/2倍剂量组、1倍剂量组、2倍剂量组、4倍剂量组小鼠腹腔注射2.5×10⁹、5.0×10⁹、1.0×10¹⁰、2.0×10¹⁰ CFU/mL的弗氏柠檬酸杆菌菌液(100μL/g体重)，观察感染后小鼠临床症状及死亡情况。预防试验将30只小鼠随机分为对照组、模型组、牛至精油组、肉桂精油组及复合精油组(牛至精油和肉桂精油组合)。小鼠口服精油7 d后腹腔注射弗氏柠檬酸杆菌，观察小鼠脏器载菌量、空肠炎症细胞因子含量及空肠病理变化。结果显示，小鼠感染弗氏柠檬酸杆菌后出现眼球充血等临床症状后抽搐死亡。精油能够提高小鼠存活率，减少脏器载菌量和炎症细胞因子含量，缓解小鼠肠道损伤。研究表明，弗氏柠檬酸杆菌对小鼠具有较强致病性，精油能够提高小鼠的肠道屏障功能，阻止弗氏柠檬酸杆菌在小鼠肝脏及脾脏的定植，降低小鼠空肠促炎细胞因子的含量，提高小鼠的存活...     

肺炎克雷伯菌ST23流行株皮肤脓肿感染及肥大细胞动态变化观察

为了解肺炎克雷伯菌(KP) ST23型流行株经小鼠皮肤脓肿感染后的脓肿形成过程及肥大细胞动态变化。本研究将60只SPF级C57BL/6小鼠随机分为3组:PBS对照组、KP常规感染组与免疫抑制KP感染组,同时取20只My D88KO小鼠接种KP作为免疫功能缺失感染组。除对照组外所有感染组小鼠均分别皮下接种50μL ST23型KP菌株悬液(5×10~8cfu/只),对各组小鼠皮肤变化进行时相性观察;同时取各组小鼠皮肤组织进行组织病理学检查;采用免疫组化技术分析比较肥大细胞在小鼠体内释放的主要介质的分布与变化。结果显示,所有接种KP的小鼠皮肤均有典型脓肿形成,并且随着感染时间延长,皮肤脓肿体积逐渐增大;接种KP的正常C57BL/6小鼠皮肤脓肿较快自愈,而My D88KO小鼠皮肤脓肿自愈延后;组织病理学显示感染KP后常规组与免疫抑制剂处理的小鼠真皮层胶原纤维消失,大量炎性细胞浸润,脓肿区域有明显的肥大细胞及主要炎性介质的分布;同时显示My D88KO组小鼠皮肤有明显的组织病理损伤;而PBS对照组各方面均正常。本研究建立了KP小鼠皮肤脓肿感染模型,可为进一步研究KP皮肤感染的病原特性和发病机制等提供小动物模型。     

牦牛胎盘对小鼠组织中NO含量的影响

[目的]探讨牦牛胎盘对小鼠组织中NO含量影响,研究牦牛胎盘抗缺氧的机制。[手法]根据采集到胎盘的海拔高度将100只小鼠随机分为高海拔组、中海拔组、低海拔组和对照组,连续28天分别灌服不同海拔的牦牛胎盘和生理盐水,然后处死小白鼠快速采取肝、肺、心肌、骨骼肌、脾脏和肾脏,测定各组织内NO的含量。[结果]各海拔组肺,高、中海拔组心肌、骨骼肌中NO含量显著的高于对照组,差异极显著（p〈0．01）;高、中海拔组肝和肾脏,低海拔组心肌和骨骼肌NO的含量高于对照组,差异显著（p〈0．05）。【结论】牦牛胎盘提高小鼠肺、心肌、骨骼肌、肝和肾脏中NO的含量。     

β-胡萝卜素对小鼠肠黏膜上皮紧密连接蛋白的保护作用

本试验旨在探讨β-胡萝卜素对小鼠肠黏膜上皮紧密连接蛋白的保护作用。将40只体重在22~25 g的雄性健康昆明小鼠,随机分为4组,分别为对照组、β-胡萝卜素处理组、脂多糖(LPS)组、保护组,每组10只,对照组饲喂正常鼠粮,β-胡萝卜素组饲喂含有50 mg/kgβ-胡萝卜素的鼠粮,LPS组饲喂正常鼠粮并每天注射10 mg/kg LPS,保护组饲喂含有50 mg/kgβ-胡萝卜素的鼠粮并每天注射10 mg/kg LPS。结果表明:与对照组相比,LPS的注射能显著降低小鼠血液中IL-2、IL-4含量(P0.05),显著提高小鼠血液中NO含量(P0.05),影响小鼠结肠结构并显著降低结肠紧密连接蛋白ZO-1的蛋白表达(P0.05);而与LPS组相比,保护组的小鼠血液中IL-2、IL-4含量以及结肠紧密连接蛋白ZO-1的蛋白表达显著升高(P0.05),NO含量显著降低(P0.05)。结果显示,β-胡萝卜素可对由LPS应激造成的小鼠肠黏膜损伤具有明显的保护作用,该结果对保护肠屏障功能具有重要意义。     

NO在小鼠早期胚胎吸收过程中的作用

给妊娠 7d小鼠尾静脉注射细菌脂多糖 (L PS)诱导早期胚胎吸收。注射 L PS后 12、2 4、36 h,以 EL ISA、比色法检测血清和子宫匀浆中 Th1型细胞因子 IFN- γ、IL- 12与 NO的含量变化 ;免疫组织化学法观察 3种一氧化氮合酶(n NOS,e NOS,i NOS)和 Th2型细胞在小鼠子宫表达的变化。此外 ,还观察了 NO供体硝普钠 (SNP)诱导孕鼠流产效果及氨基胍 (AG)对抗 L PS诱导孕鼠流产的效果。结果显示 ,相对于正常妊娠组 ,L PS处理组孕鼠子宫匀浆 NO含量及 IFN- γ、IL- 12水平极显著升高 (P<0 .0 1) ,血清 NO含量也极显著升高 (P<0 .0 1) ;n NOS、i NOS在 L PS处理组小鼠子宫可见阳性标记 ,而 e NOS未见阳性标记 ;大量 Th2型阳性细胞标记仅在正常妊娠组小鼠子宫内膜基质可见 ,L PS处理组未见阳性细胞。腹腔注射 SNP致使孕鼠早期胚胎吸收 ,然而妊娠 6～ 9d腹腔注射 AG却未能降低 L PS诱导的孕鼠早期胚胎吸收。上述结果提示 ,L PS处理后 ,Th1型免疫反应增强 ;源自升高表达的 i NOS的子宫局部高浓度 NO可能作为一种效应分子介导小鼠早期胚胎吸收。     

天鹅源丙型副伤寒沙门菌对小鼠的致病性

为了解天鹅源丙型副伤寒沙门菌的公共卫生学意义,并建立天鹅源丙型副伤寒沙门菌感染小鼠的实验动物模型。采用腹腔注射和人工灌服途径感染小鼠,了解感染鼠的LD50,观察灌服鼠于灌服后不同时段的临床症状、病理变化、血清生化指标、粪便排菌情况。结果表明,腹腔注射感染鼠的LD50为4.55×107 CFU/mL,人工灌服途径感染鼠的LD50为1.8×109 CFU/mL;用菌液浓度2×106 CFU/mL灌服感染鼠6h开始发病,6~96h精神沉郁、嗜睡、食欲减退,有腹泻、死亡;病、死鼠(12h)呈现肠黏膜坏死脱落、肠壁变薄,肠腔有多量黄色黏液状的内容物,肺脏有出血性病变,24h肝脏表面见有点状坏死;感染后36h的尿酸、72h的谷丙转氨酶、谷草转氨酶显著升高直至120h,尿素氮在72~96h明显升高,碱性磷酸酶活性在48~96h显著降低,血糖、蛋白在72~120h明显下降;2种途径感染8h后小鼠的粪便皆可检出感染菌,且粪便排菌的持续时间与感染剂量呈正相关,0.5mL/只(2×1010 CFU/mL)感染鼠直至感染后23d粪便仍有排菌,表明天鹅源丙型副伤寒沙门菌对试验小鼠有致病性,感染后经粪便长期排菌。     

克隆伊氏锥虫对安锥赛抗药性的培育

为了深入观察伊氏锥虫对安锥赛抗药性的形成,将伊氏锥虫浙江水牛株克隆,克隆繁殖后的虫体一部分作为原种对照组,即C01组;一部分虫体连续经环磷酰胺免疫抑制的小鼠,再用安锥赛亚治疗剂量治疗该小鼠,使其伊氏锥虫对安锥赛产生7个不同程度的抗药性组,即C1～C7组;另一部分虫体也连续经环磷酰胺免疫抑制的小鼠,作为伴随C7的同步繁殖组,即不用药物的C02组.结果C01、C02、C1～C7组所用安锥赛剂量依次为0、0、6、16、40、80、196、406、638mg/kg,它们经小鼠传代数依次为0、28、1、3、6、9、15、22、28代.用体外生长繁殖抑制法测得它们的ICs0值依次为0.015 50、0.016 87、0.082 60、0.102 37、1.409 29、1.922 90、9.923 30、23.563 00、43.84000.结果表明,安锥赛亚治疗剂量与伊氏锥虫抗药性的IC50值呈曲线关系,从C1到C4的IC50值上升较缓慢,从C4后的ICs0值上升较快,并且几乎呈直线上升;伊氏锥虫所经小鼠的代数与它们的IC50值的关系呈抛物线型,从C1到C4的ICs0值上升很慢,C4以后的IC50值上升很快.用体内试验测试C01～C4组的CD100值,每个组感染35只小鼠,每只小鼠接种1.0×104条锥虫,其中30只小鼠分为安锥赛的3个剂量治疗小组,另5只小鼠为不治疗对照组.结果C01组和C1组的CD100值分别为7.0、13.0 mg/kg,这表明C1组只经1代免疫抑制小鼠,注射安锥赛剂量3×2 mg/kg,就使该组伊氏锥虫对安锥赛的抗药性提高了6 mg/kg,并且它们的IC50值C1是C01的6.6倍.C2、C3和C4组由于抗药性程度过高均不能治愈,因此尚未测到它们的CD100值.这些结果表明,伊氏锥虫经免疫抑制小鼠对安锥赛产生抗药性的速度是非常快的.     

李氏杆菌感染雌性小鼠生殖器官的病理学观察

为了研究李氏杆菌对生殖器官的影响,从感染病羊分离纯化得到李氏杆菌,以雌鼠为模型,设立试验组与对照组,试验组小鼠腹腔注射李氏杆菌,对照组小鼠注射同剂量的灭菌生理盐水,对小鼠进行剖检,H. E.染色后镜检观察雌鼠生殖器官的组织病理学变化。结果显示,试验组小鼠的子宫组织间隙较大,肌层增厚,出血严重,子宫内膜上皮脱落,淋巴细胞浸润;卵巢髓质处出血,颗粒细胞凋亡,黄体细胞空泡化。本试验对进一步探讨母畜感染李氏杆菌的发病机理和临床防治提供基础资料。     

家禽常见寄生虫病的流行与防治研究

1 家禽常见的寄生虫及流行特点禽类常见寄生虫按寄生部位可分为寄生于消化道内的球虫类、吸虫类、绦虫类、蛔虫等。寄生于呼吸道的吸虫类、线虫类等，寄生于循环系统的原虫、锥虫等，寄生于皮肤及皮下组织的虱、螨等。按照寄生种类的不同可以分为原虫类寄生虫，蠕虫类寄生虫和体外寄生虫。1．1家禽原虫类寄生虫病原虫病是由单细胞的原生动物原虫引起的寄生虫病包括球虫病，住肉孢子虫病，住白细胞虫病，疟原虫病，组织滴虫病，毛滴虫病，隐孢子虫病和锥虫病等寄生性原虫。下面介绍一些常见的寄生虫种类：     

小鼠弓形虫病对卵巢功能的影响

为探索弓形虫病导致不孕的机理,选用性成熟SPF级雌性昆明小鼠60只,随机分为实验组与对照组,每组30只。实验组人工感染弓形虫,观察临床症状,并于45d和90d采血,用雌二醇放射免疫分析试剂盒测定实验组与对照组小鼠血中雌二醇的变化;在90d采血后处死小鼠,采集卵巢、脑等材料进行病理学检查。结果表明：在弓形虫感染90d后可明显引起脑和卵巢组织炎症反应与功能障碍,致小鼠血中雌二醇显著降低（（P〈0．05）,可能是导致小鼠不孕的主要原因。     

牛源犬新孢子虫孕鼠感染模型的建立

为建立牛源犬新孢子虫孕鼠感染模型,深入研究牛源犬新孢子虫对孕鼠的致病作用,本试验以雌性BALB/c小鼠为试验动物,分离Vero细胞中培养的牛源犬新孢子虫速殖子,分不同剂量组腹腔接种雌性BALB/c小鼠后,与雄性BALB/c小鼠合笼,每天观察小鼠临床症状和发病情况,观察主要脏器组织的病理变化,应用PCR方法检测孕鼠脑、肝脏、脾脏等脏器组织及胎盘中犬新孢子虫Nc5基因,并测定孕鼠胎盘湿重和胎盘系数。结果显示,感染模型小鼠的最佳攻虫剂量为105个虫体;感染犬新孢子虫孕鼠先后出现精神不振、共济失调等临床症状,并有不同程度死亡;病理学观察模型小鼠脑、肝脏、脾脏等脏器组织出现充血、出血、肿大等病理变化;在模型小鼠脑、肝脏、脾脏等脏器组织及胎盘中检测到犬新孢子虫Nc5基因;随攻虫天数的增加,模型小鼠胎盘重量和胎鼠重量均不断增加,胎盘系数逐步降低,在第12、14、16天时,模型组与对照组相比,胎盘重量和胎盘系数均差异显著(P0.05)。本试验成功建立了牛源犬新孢子虫孕鼠感染模型,为犬新孢子虫致病机制研究奠定了基础。