蛹虫草多糖对四氯化碳诱导大鼠原代肝细胞损伤的保护作用研究

蛹虫草是一种药用真菌。从人工培养的蛹虫草中提取蛹虫草多糖(CMPS),采用Ⅳ型胶原酶灌流法分离大鼠肝细胞进行原代培养,研究蛹虫草多糖对CCl4诱导大鼠原代肝细胞损伤的保护作用。结果表明:蛹虫草的子实体和基质都含有丰富的多糖,其中基质中的多糖含量最高,约为子实体的2～4倍;CMPS可明显降低由CCl4诱导的损伤肝细胞培养上清液中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)的活性水平和丙二醛(MDA)的含量水平,显著提高由CCl4诱导的损伤肝细胞培养上清液中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和诱导损伤肝细胞的存活率。试验结果提示CMPS对大鼠原代培养肝细胞损伤有直接保护作用,该作用可能与其抗氧化作用有关。     

人工培养蛹虫草与冬虫夏草的主要活性成分比较

蛹虫草为珍稀中药材,基于为培养出含有类似天然冬虫夏草主要活性物质的蛹虫草提供基础依据的目的,对人工培养蛹虫草及菌丝体、子实体和冬虫夏草及菌丝体中的氨基酸、多糖、虫草素等活性物质含量与组成进行了测定,结果表明:人工培养蛹虫草与冬虫夏草在氨基酸种类上完全一致,但人工培养蛹虫草中赖氨酸、酪氨酸含量显著升高,组氨酸则显著降低;二者组成的多糖基本一致,但冬虫夏草特有一个分子质量约100 kD的组分,该组分占多糖总量的1.38%,人工培养的蛹虫草的虫草素含量显著高于冬虫夏草。以上成分的细微变化是否是造成二者药理活性差异的原因还有待研究。     

真菌多糖激发子的筛选及对蛹虫草多糖激发条件的优化

选取7种药用真菌多糖作为激发子,以蛹虫草多糖含量为评价指标,筛选出对蛹虫草多糖产生有显著诱导作用的多糖激发子CM-JS,该激发子可使蛹虫草干菌丝中的多糖含量提高54.16%。进一步以蛹虫草多糖含量为响应值,用响应曲面分析法研究多糖激发子CM-JS的浓度、添加时间和激发时间等因素对多糖激发效果的影响,得出各因素的影响作用依次为多糖激发子浓度>添加时间>激发时间,CM-JS多糖激发子激发蛹虫草多糖产生的最优条件为:CM-JS的添加质量浓度70.328μg/mL,加入时间为菌种发酵第2天,激发时间3 d。在此优化条件下,加入CM-JS多糖激发子生产蛹虫草干菌丝中的多糖质量比可达342.5 mg/g。     

家蚕蛹虫草多糖的提取及纯化工艺研究

蚕蛹虫草[Cordceps militaris(L.)Link]又称北冬虫夏草,是一种潜在的中药和具有滋补作用保健营养品.其有效活性成分虫草多糖(CMPS)被认为是非特异性免疫调节剂,可激活肌体的免疫活性细胞,虫草多糖的纯化为其功能、性质的研究提供材料,为虫草多糖的规模提取提供依据及产品的深度开发(例虫草多糖注射针剂)开辟了新路.     

蛹草有效成分及其药理作用

蛹草又名蛹虫草、北虫草，具有补精益髓、润肺补肾和止血化痰的功效。蛹草是一种药食两用的虫草真菌，药食两用部位主要为子实体。蛹草资源丰富，具有与冬虫夏草相似的有效成分和药理作用，已逐渐成为冬虫夏草的替代品，其研究与开发也取得了进展。研究发现蛹草提取物具有抗菌、抗炎、免疫调节、抗肿瘤等生物活性，蛹草含有虫草素、虫草酸、虫草多糖、超氧化物歧化酶、类胡萝卜素、凝集素、纤维蛋白溶解酶等多种有效成分，其中研究最多的是虫草素和虫草多糖。蛹草还含有丰富的营养成分，包括蛋白质、氨基酸、维生素、微量元素等。目前，蛹草已广泛地应用于功能性食品和功能性保健品，但蛹草各种有效成分的代谢途径及其作用机制尚未明确，需要进一步研究。     

蛹虫草多糖提取工艺研究

为优化蛹虫草多糖的提取工艺,以蛹虫草多糖得率和相对标准偏差为指标,测试超声波水提法、超声波醇提法、水热回流法和醇热回流法蛹虫草多糖提取效果,确定最佳提取方法;再用正交试验方法检测水热回流法中4个因素(温度、次数、时间、料液比)对虫草多糖提取效率的影响,确定虫草多糖提取条件。结果表明:水热回流法虫草多糖得率6.2%,相对标准偏差RSD(%)1.39,是提取虫草多糖的最佳方法;提取温度100℃、提取时间90min,提取次数3次,料液比1∶20,为蛹虫草多糖提取的最佳工艺条件。     

利用磁化水培养富硒蛹虫草条件优化的研究

为了优化磁化水培养富硒蛹虫草的条件,试验采用正交试验优化磁化水培养富硒蛹虫草的条件。结果表明:最佳培养条件为富硒浓度7 mg/kg、磁场强度0.1 T、磁程15次,在此条件下得到的蛹虫草子实体生物学效率为82.36%,多糖含量为34.41 mg/g,虫草酸含量为60.32 mg/g,虫草素含量为3.15 mg/g,总硒含量为8.97 mg/kg。说明利用磁化水培养富硒蛹虫草能有效提高蛹虫草的生物学效率和活性成分的含量,具有良好的应用前景。     

不同发育程度柞蚕蛹培育蚕蛹虫草的产量与营养保健品质

将经过0、30、60、90、120和150℃有效积温(以下称积温)处理的柞蚕蛹用于培育蚕蛹虫草,通过调查和检测柞蚕蛹虫草的生长状况及氨基酸组成与主要活性成分含量、超氧化物歧化(SOD)酶活力,考察不同发育程度柞蚕蛹对培育蚕蛹虫草的生长性状与营养保健品质的影响。结果表明,柞蚕蛹感受积温不超过90℃时,蛹虫草菌对柞蚕蛹的感染速度较快,僵蛹率在92%以上,生产蚕蛹虫草总鲜质量及子实体的数量、长度等产量指标显著高于感受积温120℃、150℃的柞蚕蛹生产的蚕蛹虫草(P0.05);柞蚕蛹感受积温在0~120℃之间,随着积温增加,生产蚕蛹虫草的氨基酸总量也有增加趋势,当感受积温150℃时生产蚕蛹虫草的氨基酸总量又降低,比最高组(氨基酸总量的质量分数为35.05%)减少了28.73%;柞蚕蛹感受积温60℃时生产蚕蛹虫草的虫草素含量最高,质量比达到1.15 mg/g;随着柞蚕蛹感受积温的增加,生产蚕蛹虫草中的虫草多糖含量与SOD酶活力逐渐降低,柞蚕蛹感受积温150℃时生产蚕蛹虫草中的虫草酸含量最高(质量分数达13.23%)。试验结果提示,利用柞蚕滞育蛹或轻度发育蛹可以高效生产出品质优良的蚕蛹虫草。     

一化性柞蚕蛹虫草有效成分分析

测定了利用一化性柞蚕蛹培育的蛹虫草的部分营养成分及生理活性物质含量,并与野生冬虫夏草和野生蛹虫草进行了对比,结果表明：一化性柞蚕蛹虫草中氨基酸的含量高于野生冬虫夏草和野生蛹虫草,其主要的有效活性物质含量较高,重金属含量在国家规定的安全范围以内,并且不合铅元素,完全可以替代野生冬虫夏草或野生蛹虫草,可利用一化性柞蚕的蛹人工工厂化培育蛹虫草,以缓解市场的供需矛盾.     

桑黄粗多糖和蛹虫草粗多糖协同增效诱导肺癌细胞A549 S期阻滞及凋亡的研究

通过细胞抑制试验研究桑黄子实体粗多糖与蛹虫草子实体粗多糖混合后的粗多糖对肺癌细胞A549的抑制作用,为利用药用真菌开发抗肿瘤药物提供试验依据。采用MTT法检测0.8 mg/m L的桑黄粗多糖和蛹虫草粗多糖对肺癌细胞A549增殖均有一定的抑制作用,作用48 h后的抑制率分别为32.95%、41.93%;将0.8 mg/m L桑黄粗多糖和0.8 mg/m L蛹虫草粗多糖按1∶1体积比混合的粗多糖则表现出协同增效抑制A549细胞增殖作用,抑制率可达54.71%。用流式细胞计数法测试分析的结果是:0.8 mg/m L蛹虫草粗多糖可影响A549细胞周期各时相的分布,而0.8 mg/m L桑黄粗多糖则对细胞周期无明显作用,但0.8 mg/m L混合粗多糖对A549细胞周期各时相分布的影响显著增强,G0/G1期细胞比率从75.39%±2.49%降低至64.43%±2.12%(P0.01),S期细胞比率从16.61%±0.87%升高至27.97%±2.82%(P0.01);混合粗多糖作用48 h后,A549细胞的晚期凋亡率从正常组的1.92%±0.55%提高至20.75%±0.24%,坏死细胞率由正常组的1.88%±0.43%提高至9.64%±0.42%,表现出明显的协同增效诱导A549细胞凋亡的作用。荧光定量PCR检测结果表明,A549细胞分别用0.8mg/m L的桑黄粗多糖和蛹虫草粗多糖及其混合粗多糖处理后,细胞内周期调控相关蛋白基因Cyclin A、CDK4的mRNA转录水平均显著下调,Cyclin D1、CDK2的mRNA转录水平显著上调,凋亡相关基因Bid、Bak、Cyt-C、Caspase3的mRNA转录水平也显著上调。研究结果提示桑黄粗多糖和蛹虫草粗多糖混合使用,具有协同增效抑制肺癌细胞A549增殖的作用,推测其通过调控细胞周期和细胞凋亡相关基因的表达,导致Cyt-C释放及启动caspase级联反应,从而诱导细胞凋亡。     

蛹虫草菌保藏方法对其生产能力的影响

蛹虫草菌的保藏方法对柞蚕蛹虫草的产量及活性物质含量影响较大,随着冷冻保藏时间的延长,蛹虫草菌注蛹后的生产能力逐渐降低;随着冷藏保藏时间的延长,蛹虫草菌注蛹后的生产能力及虫草素含量均逐渐降低。丰富培养基和PDA培养基中蛹虫草菌随继代培育次数的增加其生产能力均出现降低的现象,但PDA培养基中降低的速度较慢,故PDA培养基更适合蛹虫草菌的保藏。     

蛹虫草的人工培育、有效成分及药理作用研究进展

蛹虫草是由蛹虫草真菌(Cordyceps militaris)寄生在鳞翅目昆虫蛹或幼虫体上所形成的菌虫复合体。作为一种药用真菌,可作为冬虫夏草(Cordyceps sinensis)的代用品。就蛹虫草的生物学特性、培育技术、有效成分及其主要药理作用进行了综述,为有效地开发利用蛹虫草资源提供科学依据。     

蛹虫草退化菌株的研究进展

蛹虫草是一种具有药用兼食用的经济真菌,在国内外广泛用作天然药物和民间滋补食品。蛹虫草菌株在继代培养以及保藏过程中非常容易退化,是目前蛹虫草行业急需解决的难题。本文阐述了蛹虫草菌株退化后生物学特征的变化,以及引起退化的原因和防治措施,以期对今后蛹虫草菌株的退化机理研究有所启发,为甄别蛹虫草退化菌株提供依据。     

蚕体和蛹粉代料培养基上的蛹虫草生长状况与品质检测

在实验室条件下以优选的蛹虫草菌株YCC-XD-2在家蚕蛹、蛾培养基和蛹粉代料培养基上培育蛹虫草,比较不同培养基上的蛹虫草的生长状况和虫草素含量,探究高产优质蛹虫草的培养方式。蛹虫草菌种在蚕体和蛹粉代料培养基上均生长良好,其中:蚕体培养基以蚕蛾培养基上的蛹虫草生长较好;蛹粉代料培养基以糯米+蛹粉培养基上的蛹虫草生长较好。蚕体培养基培育蛹虫草子实体中的虫草素含量显著高于蛹粉代料培养基培育的蛹虫草,其中,蚕蛾培养基培育蛹虫草子实体中的虫草素质量比高达21.97 mg/g。在相同培养条件下,蛹虫草子实体中的虫草素含量高于菌丝体和培养基质。试验结果表明,利用家蚕蛹、蛾培养基可以生产出高品质蛹虫草。     

家蚕蛹虫草的化学成份分析

分析表明 :家蚕蛹虫草含有虫草酸、虫草素、腺嘌呤、尿嘧啶、β 谷甾醇、麦角甾醇、生物碱和多种游离基酸 ,其化学成份的种类与冬虫夏草基本类似 ,但虫草素、腺嘌呤的含量是冬虫夏草的 3倍。氨基酸分析表明 :家蚕蛹虫草子实体中氨基酸含量高于蛹体部分 ,特别是Glu、Lys ,而Gly则明显低于蛹体部分。比较家蚕蛹虫草与蛹虫草菌粉的化学成份可知 :炽灼残渣、重金属、总氮量和腺嘌呤的含量家蚕蛹虫草高于蛹虫草菌粉 ;总糖、腺苷、甘露醇的含量低于蛹虫草菌粉。稳定性试验表明 :3个月内家蚕蛹虫草的功效成份无明显变化     

不同培养基培育蛹虫草中的虫草素和腺苷含量测定

虫草素和腺苷是蛹虫草的重要活性成分,通过高效液相色谱(HPLC)法测定不同培养基培育蛹虫草中的虫草素和腺苷含量,筛选能生产高品质蛹虫草的培养基。测定结果表明,用不同培养基培育的蛹虫草子实体中,其虫草素和腺苷含量存在显著差异,总体表现为粳米+家蚕蛹浸提液培养基>糯米+家蚕蛹浸提液培养基>粳米培养基>糯米培养基,其中用粳米+家蚕蛹浸提液培养基培育蛹虫草子实体中的虫草素和腺苷质量比分别高达15.37 mg/g和39.96 mg/g。此外,相同培养基培育的蛹虫草子实体、菌丝体和培养基质中的虫草素与腺苷含量存在极显著差异,总体表现为子实体>菌丝体>基质。试验结果表明,粳米培养基中添加家蚕蛹浸提液可显著提高蛹虫草中的虫草素和腺苷含量。     

采用固相分离与反相色谱法制备柞蚕蛹虫草虫草素

虫草素是蛹虫草中具有药用功能的活性成分。采用超声波技术获得柞蚕蛹虫草虫草素萃取液后,利用固相萃取柱对虫草素进行预分离,再利用反相制备型高效液相色谱监测制备虫草素。试验结果表明,采用固相萃取柱可以高效地分离柞蚕蛹虫草萃取液中的虫草素,虫草素洗脱液中的虫草素质量分数达47.05%,经反相高效液相色谱监测制备的虫草素样品纯度达到99%以上,其萃取、分离、制备工艺简单,具有实用价值。     

家蚕蛹虫草对小鼠免疫调节的影响

以小鼠为试验动物 ,对家蚕蛹虫草的免疫调节作用进行了研究。结果表明 ,家蚕蛹虫草无增加小鼠血清溶血素抗体积数作用 ,但可提高腹腔巨噬细胞的吞噬率 ,对二硝基氟苯 (DNFB)诱导的小鼠迟发型变态反应无增强作用 ,可显著提高小鼠NK细胞的活性 ,对小鼠体重及小鼠脏器 /体质量的比值无影响 ,表明家蚕蛹虫草具有免疫调节作用。