藏绵羊肌红蛋白（Mb）基因克隆及肌肉Mb含量的测定

为探索藏绵羊适应青藏高原缺氧环境的分子机制,克隆了藏绵羊的肌红蛋白(Mb)基因,纯化了心肌Mb,同时比较了心肌和骨骼肌的Mb含量.用RT-PCR克隆了心肌Mb的cDNA,长度为640 bp,编码153个氨基酸.试验采用盐析、CM-Sephadex离子交换层析、Sephadex G-50凝胶层析等方法分离纯化了藏绵羊Mb,SDS-PAGE分析其分子量约为17kD.组织含量测定表明,藏绵羊心肌中Mb含量极显著高于骨骼肌.     

牦牛肌红蛋白的基因克隆测序、分离纯化、含量及其与乳酸脱氢酶和苹果酸脱氢酶活力的关系

为探索牦牛适应高原缺氧环境的分子机制,测定了麦洼牦牛心肌和骨骼肌中肌红蛋白（Mb）含量及乳酸脱氢酶（LDH）、苹果酸脱氢酶（MDH）活力,并对牦牛Mb进行了分离纯化和基因克隆测序。牦牛心肌和骨骼肌中Mb含量显著高于水牛和黄牛（P〈0.01）;牦牛、黄牛和水牛心肌MDH/LDH活力比均显著高于骨骼肌;牦牛心肌MDH/LDH活力比显著高于水牛和黄牛,但在不同牛种骨骼肌之间无显著差异。各组织Mb含量与MDH/LDH活力比呈显著正相关。试验用RT-PCR方法从牦牛心肌中克隆了Mb基因,与普通牛相比,核苷酸序列同源性为99.5%,氨基酸序列完全相同;用盐析、CM-Sephadex阳离子交换层析、Sephadex G-50凝胶层析等方法分离纯化了牦牛Mb,SDS-PAGE显示其分子量约为17 ku。     

玛多循化牦牛RBC,PCV,Hb及Mb的测定

对海拔 4 30 0m左右的 1 7头成年玛多牦牛和海拔 35 0 0m左右的 7头成年循化牦牛的RBC、PCV、Hb、心肌和骨骼肌Mb进行了测定 ,结果分别为 :8 60× 1 0 1 2 个 /L和 9 31× 1 0 1 2 个 /L ;0 4 7L/L±0 0 4 9L/L和 0 4 9L/L± 0 0 5 2L/L ;1 64 8g/L± 2 60g/L和 1 86 1g/L± 1 1 2 8g/L ,4 1 8 66nmol/g±5 9 99nmol/g和 30 0 0 1nmol/g± 66 68nmol/g ;338 34nmol/g± 83 91nmol/g和 2 68 36nmol/g±5 5 70nmol/g。玛多牦牛心肌Mb高于骨骼肌的Mb(P <0 0 5 ) ,较高海拔的玛多牦牛的心肌和骨骼肌的Mb含量均高于较低海拔的循化牦牛 (P <0 0 1和P <0 0 5 )。     

不同发育期牦牛红细胞数、血红蛋白及肌红蛋白的测定及意义

用常规方法对同一海拔高度不同发育期牦牛几项指标进行测定。结果:随着牦牛年龄的增长血液中Hb含量、HCT值逐渐增加,而RBC明显降低,差异显著(P<0.05),即随年龄的增长Hb、HCT与RBC的变化呈负相关;心肌和骨骼肌Mb含量随着年龄的增长均呈逐渐递增的趋势,心肌中Mb含量均显著高于骨骼肌,差异显著(P<0.05)。结论:牦牛在生长发育过程中逐渐增加血液中Hb、HCT和骨骼肌、心肌中Mb含量增强机体有氧代谢机制。     

不同海拔地区牦牛心肌、骨骼肌线粒体氧自由基代谢的研究

对青海省玛多和刚察两县牦牛心肌、骨骼肌组织中肌红蛋白(Mb),心肌、骨骼肌中线粒体总抗氧化能力(T-AOC),超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX),乳酸脱氢酶(LDH)活性及丙二醛(MDA)含量进行了测定。结果:玛多牦牛心肌、骨骼肌中Mb含量均高于刚察牦牛,但差异不显著(P0.05);玛多牦牛心肌、骨骼肌线粒体中T-AOC,SOD,GSH-PX酶活性均显著高于刚察牦牛(P0.05),而LDH活性显著低于刚察牦牛(P0.05),玛多牦牛骨骼肌和心肌线粒体MDA含量低于刚察牦牛(P0.05)。结论:在高原低氧环境下,牦牛心肌、骨骼肌线粒体抗氧化能力随海拔高度的升高而增强,表明牦牛对高原低氧环境具有显著的适应性。     

不同发育期牦牛红细胞数、血红蛋白及肌红蛋白的测定及意义

用常规方法对同一海拔高度不同发育期牦牛几项指标进行测定。结果：随着牦牛年龄的增长血液中Hb含量、HCT值逐渐增加，而RBC明显降低，差异显著（P〈0．05），即随年龄的增长Hb、HCT与RBC的变化呈负相关；心肌和骨骼肌Mb含量随着年龄的增长均呈逐渐递增的趋势，心肌中Mb含量均显著高于骨骼肌，差异显著（P〈0．05）。结论：牦牛在生长发育过程中逐渐增加血液中Hb、HCT和骨骼肌、心肌中Mb含量增强机体有氧代谢机制。     

不同发育期黄牛有氧和无氧代谢相关指标的测定

用常规方法对平原地区不同发育期黄牛红细胞压积(Hct)、血红蛋白(Hb)、肌红蛋白(Mb)、乳酸脱氢酶(LDH)指标进行测定。结果:随着黄牛年龄的增长,血液中Hb及心肌和骨骼肌中Mb含量逐渐增加,但差异不显著(P>0.05),心肌Mb含量显著高于骨骼肌,差异显著(P<0.05);血液中Hct随年龄的增长逐渐降低,差异不显著(P>0.05);血清、骨骼肌、心肌组织及线粒体LDH活性在黄牛年龄组间差异均不显著(P>0.05);血清中LDH活性高于组织和线粒体,差异显著(P<0.05)。试验表明黄牛在生长发育过程中逐渐增加血液中Hb和心肌、骨骼肌中Mb含量来增强机体的有氧代谢机制,而无氧代谢机制保持在相对稳定的水平。     

不同海拔地区牦牛血红蛋白、肌红蛋白含量的测定

用常规方法分别对青海省玛多、刚察地区牦牛,甘肃地区黄牛心肌、骨骼肌中Mb和血液中Hb含量进行测定,结果:心肌及骨骼肌中Mb依次为:玛多牦牛(1275.96±220.96) nmol/g,(828.33±194.25)nmol/g;刚察牦牛(1195.58±156.63)nmol/g,(759.09±184.46) nmol/g;甘肃黄牛(1073.81±147.19)nmol/g,(545.82±98.54)nmol/g;Hb,玛多牦牛(163.4±16.2)g/l;甘肃黄牛(117.8±16.9)g/l;Hct,玛多牦牛(47.20±2.85)%,甘肃黄牛(35.69±4.19)%。结果表明在高原低氧环境中心肌、骨骼肌中Mb和血液中Hb含量与牦牛适应低氧环境密切相关。     

不同海拔地区牦牛血红蛋白、肌红蛋白含量的测定

用常规方法分别对青海省玛多、刚察地区牦牛,甘肃地区黄牛心肌、骨骼肌中Mb和血液中Hb含量进行测定,结果:心肌及骨骼肌中Mb依次为:玛多牦牛(1275.96±220.96)nmol/g,(828.33±194.25)nmol/g;刚察牦牛(1195.58±156.63)nmol/g,(759.09±184.46)nmol/g;甘肃黄牛(1073.81±147.19)nmol/g,(545.82±98.54)nmol/g;Hb,玛多牦牛(163.4±16.2)g/l;甘肃黄牛(117.8±16.9)g/l;Hct,玛多牦牛(47.20±2.85)%,甘肃黄牛(35.69±4.19)%.结果表明在高原低氧环境中心肌、骨骼肌中Mb和血液中Hb含量与牦牛适应低氧环境密切相关.     

牛肌红蛋白的纯化及其抗血清检测

纯化了牛的肌红蛋白(Mb)并制备了特异性抗血清。Mb是由牛的骨骼肌通过硫酸铵分级分离,经两次结晶而纯化,从而获得相当纯的牛正铁肌红蛋白结晶。用纯化的Mb所制备的抗牛Mb血清可用于检测患营养性肌病的小牛血清和尿液中的Mb。     

藏系绵羊MSX2和HOXA4基因的克隆与序列分析

对藏系绵羊的同源异型基因家族的两个成员（MSX2和HOXA4基因）进行克隆测序,为其功能分析奠定基础。从藏系绵羊皮肤中提取总RNA,采用常规的基因克隆方法,获得了MSX2和HOXA4基因编码区序列,长度分别为804 bp和552 bp。序列比对显示,MSX2基因与预测的绵羊序列存在多个碱基差异;藏系绵羊HOXA4基因与预测的山羊序列间只有1个碱基差异,但与绵羊的预测序列差异大。     

互助藏羊梭菌病病原体的分离鉴定与分析

青海省互助县某羊场藏系绵羊患病死亡,伴有腹泻、神经症状,为快速确诊发病原因,及时防控和治疗,采集病羊样品5份,通过镜检、细菌分离培养、分子生物学试验及致病性试验进行病原鉴定分析。结果证明此次病原菌为羊致病性D型魏氏梭菌,毒素基因分析显示该菌同时含有α和ε两种毒素基因,动物致病性试验结果表明该菌对昆明系小鼠具有较强的致病性,并从试验致死的小鼠中分离到与藏羊病原相一致的细菌。三种基因的遗传进化树显示,该菌具有较强的多样性。研究确定了本次藏羊致死的主要病原为D型魏氏梭菌,结果可为该羊场梭菌病的治疗和预防提供科学依据。     

藏山羊脂联素基因的克隆与表达分析

为研究脂联素（AdipoQ）基因在藏山羊中的表达模式及相关功能,本试验利用生物信息学和比较基因组学方法克隆得到藏山羊AdipoQ基因序列;半定量RT-PCR和qPCR方法检测AdipoQ基因在成年藏山羊11个不同组织中的表达模式及不同脂肪组织中AdipoQ基因的相对表达量。结果显示,藏山羊AdipoQ基因编码区与牛、猪、人等哺乳动物AdipoQ基因同源性较高;AdipoQ基因在脂肪组织中表达量最高,在肌肉组织和胃中表达量较低,而在其他各组织中未检测到表达;AdipoQ基因在肾周脂肪组织中的表达量高于肠系膜脂肪组织和皮下脂肪组织中的表达量,但差异不显著（P>0.05）。本研究得到藏山羊AdipoQ基因序列、组织表达模式及不同脂肪组织中的相对表达量,为进一步研究藏山羊AdipoQ基因的功能奠定基础。     

藏羊AMPK、ACC和GS酶活分布及饥饿应激对其酶活的影响

为分析AMPK等酶对机体代谢的影响,采用酶联免疫分析法（ELISA）,分别测定正常饲养和饥饿48 h后藏羊各组织的AMPK、ACC和GS的活性.结果表明：AMPK、ACC和GS分布于藏系绵羊各组织中,且各组织器官中3种酶活性差异显著（P＜0.05）;饥饿应激导致骨骼肌、肝脏、肾脏和小肠组织中AMPK活性升高,骨骼肌、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和小肠组织中ACC活性下降,骨骼肌、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和小肠组织中GS活性下降.因此,AMPK、ACC和GS在藏系绵羊的各组织器官中分布广泛;饥饿应激可能通过激活AMPK表达,下调ACC和GS表达而调节藏羊的应激代谢.     

Experimental bluetongue virus infection of sheep; effect of vaccination: pathologic, immunofluorescent, and ultrastructural studies

Ten sheep were inoculated with bluetongue virus (BTV) serotype 17. Six of the sheep had been vaccinated before challenge exposure, 4 sheep served as nonvaccinated challenge-exposed controls, and 2 additional sheep served as nonvaccinated, nonchallenge-exposed, contact controls. Biopsy specimens (oral labial mucosa and skin) were obtained periodically after challenge exposure. Sheep were killed 8 to 13 days after challenge exposure, and necropsy was done. Vaccination did not seem to affect the nature or severity of the lesions observed. The changes in the mucosa of the cranial portion of the digestive tract included hyperemia, edema, inflammation, petechiae, erosions, ulcers, and surface encrustations. Lesions of skeletal, cardiac, and smooth muscles included hemorrhage, edema, myofiber degeneration, and necrosis. Lesions in cardiac muscles were sometimes widespread, indicating that cardiac failure may have been the major contributor to pulmonary congestion, edema, and eventual death during acute BTV infection. Damage to esophageal musculature resulted in vomiting. Hemorrhage was observed within the base of the pulmonary artery of all challenge-exposed sheep. Using immunofluorescence, bluetongue viral antigens were detected in small blood vessels of the skin, oral labial mucosa, tongue, esophagus, rumen, reticulum, urinary bladder, and pulmonary artery and in skeletal and cardiac muscles. Viral antigens were present in tissues obtained 3 to 11 days after inoculation. Ultrastructurally, changes in small-caliber blood vessels included congestion, hemorrhage, swollen degenerated endothelial cells, and occasional fibrin-platelet thrombi. Tubular structures and virus-like particles were observed within some of these endothelial cells.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)     

藏羊MSTN基因克隆、生物信息学及组织表达分析

【目的】 对藏羊肌肉生长抑制素（myostatin，MSTN）基因进行克隆和生物信息学分析，检测其在藏羊不同组织中的表达，为探究MSTN基因在藏羊中的生物学功能提供参考。【方法】 以藏羊背最长肌组织cDNA为模板，克隆藏羊MSTN基因完整CDS区序列并测序，用SeqMan程序对测序结果进行拼接，并用BLAST在线程序对组装后的序列进行分析鉴定。用生物信息学软件进行相似性比对、系统进化树构建及生物信息学分析，用实时荧光定量PCR检测MSTN基因在藏羊不同组织中的表达量。【结果】 藏羊MSTN基因CDS全长为1 128 bp，编码375个氨基酸。藏羊MSTN基因氨基酸序列与绵羊、牦牛、牛、猪、恒河猴、人、黑猩猩、犬、鸡及斑马的相似性依次为100.0%、93.4%、93.4%、95.2%、94.4%、94.2%、94.4%、93.1%、87.8%和87.5%；系统进化树分析结果表明，藏羊与绵羊的亲缘关系最近，与斑马和鸡的亲缘关系最远。藏羊MSTN蛋白属于亲水性分泌蛋白，且具有不稳定性，不含跨膜结构，含1个信号肽，存在31个潜在的磷酸化位点、2个N-糖基化修饰位点，主要分布在线粒体和细胞质中；MSTN蛋白二级结构以无规卷曲为主，其次是α-螺旋、延伸链和β-转角；三级结构预测结果与二级结构一致。实时荧光定量PCR结果显示，MSTN基因在藏羊不同组织中均有表达，其中在臂三头肌和半腱肌的表达量显著高于肺脏、下丘脑、心脏、肝脏、十二指肠、瘤胃和肾脏（P<0.05）。【结论】 成功克隆了藏羊MSTN基因；该基因在藏羊肌肉中的表达量高于内脏组织。该结果为进一步研究MSTN基因对藏羊肌肉生长发育的调控机制奠定了基础。     

Light and electron microscopic changes in cardiac and skeletal muscle of sheep with experimental monensin toxicosis

Monensin toxicosis was induced in lambs by either a single oral dose of 12 mg/kg or six daily doses of 8 mg/kg. Clinical signs of toxicosis consisted of depression, dyspnea, stiffness of gait, reluctance to move, and recumbency. Serum creatine phosphokinase activity was increased. Samples of skeletal and cardiac muscle were obtained over a six-day period and examined by light and electron microscopy. Light microscopic changes in cardiac and skeletal muscles consisted initially of vacuolation and intracellular edema of muscle cells followed by segmental necrosis. Interstitial fibrosis was present on days 5 and 6 postexposure. Muscle fiber necrosis was more severe in skeletal than cardiac muscles and most severe in sheep given 8 mg/kg of monensin daily. Macrophages were seen only in areas of severe necrosis. The earliest ultrastructural change was severe swelling of mitochondria. Secondary changes consisted of lipid accumulation and myofibrillar alterations. Myoblast proliferation was present as early as four days after initial exposure to monensin.     

藏羊脑动脉系统结构特征与高原适应性研究

藏羊对严酷的高原低氧环境适应性很强,是高寒牧区最适宜发展的畜种之一,开展藏羊与低海拔绵羊脑血管形态的比较研究,可为探讨藏羊的高原适应性机理奠定基础.研究以高原藏羊—欧拉型藏羊和生活在低海拔地区的滩羊脑为试验材料,采用管道铸型腐蚀技术,运用比较解剖学方法对二者脑动脉系统的结构特性开展研究.比较发现,藏羊和滩羊脑动脉系统的大体解剖结构相同,但藏羊的大脑后交通动脉、上颌动脉的管径显著比滩羊粗,其它脑动脉管径平均值也略大;藏羊脑硬膜外异网显著长于滩羊;藏羊主要脑动脉中的侧支更发达,伸展较长,细小分支更丰富.藏羊有相对发达的脑动脉系统,利于向脑组织有效供血,可能是藏羊适应高原环境的结构特征之—.     

藏绵羊肺脏中链球菌的分离鉴定及耐药性分析

本试验通过无菌采集西藏地区绵羊肺脏,然后进行细菌分离、纯化及PCR鉴定;同时,对分离的链球菌菌株进行药物敏感性研究,以期为生产实践中对该病原的防制提供参考信息。结果显示,纯化所得到的细菌呈革兰氏阳性链球状,经PCR、克隆、测序鉴定为链球菌;药敏试验结果显示分离菌株对复方新诺明、恩诺沙星、庆大霉素及四环素等大部分药物敏感。本研究为西藏地区绵羊链球菌病的有效防制提供参考。