重庆部分羊场沙门氏菌的分离鉴定、耐药表型分析及耐药基因检测

本研究旨在初步了解重庆市羊源沙门氏菌的耐药性及耐药基因流行情况。在5个山羊养殖场采集185份山羊粪便样品,经选择性增菌和PCR鉴定分离沙门氏菌,确定了其血清型,测定了分离菌对28种抗菌药物的敏感性,并检测了喹诺酮耐药决定区(QRDR)的耐药突变位点和质粒介导的喹诺酮耐药(PMQR)、超广谱β-内酰胺酶(ESBL)基因。共分离到羊源沙门氏菌11株,其中10株为德尔卑沙门氏菌。分离的菌株对氨苄西林、头孢唑啉、头孢氨苄、头孢噻肟、四环素和培氟沙星耐药严重;9株菌表现为多重耐药,对3～7类药物耐药。所有菌株均存在QRDR耐药突变且携带bla_(TEM)基因;7株菌携带1～5种PMQR基因。本研究分离的羊源沙门氏菌对常用抗菌药物整体耐药较为严重,且广泛存在耐药突变和携带耐药基因。     

麻旺鸭源大肠杆菌耐药表型分析及β-内酰胺酶、PMQR基因检测

本研究旨在了解麻旺鸭源大肠杆菌对β-内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类、酰氨醇类、氟喹诺酮类和磺胺类药物的耐药情况以及β-内酰胺酶基因和质粒介导的喹诺酮耐药(plasmid-mediated quinolone resistance, PMQR)基因流行情况。从重庆市酉阳县4个麻旺鸭养殖场采集146份泄殖腔拭子样品,经选择性增菌和PCR扩增大肠杆菌特异性phoA基因分离鉴定大肠杆菌。采用纸片扩散法测定分离菌对25种抗菌药物的耐药性并检测分离菌株中的β-内酰胺酶基因和PMQR基因。结果显示：共分离到大肠杆菌146株。这些菌株对氨苄西林、头孢唑啉耐药严重,耐药率超过50%;对庆大霉素、阿米卡星、氧氟沙星完全敏感。分别有111株(76.0%)和83株(56.8%)菌携带至少1种β-内酰胺酶基因和PMQR基因,其中bla_TEM(74.0%,108/146)和qnrS(54.8%,80/146)基因最为流行。63株菌同时携带β-内酰胺酶基因和PMQR基因。麻旺鸭源大肠杆菌对常用抗菌药物存在耐药,且广泛携带β-内酰胺酶基因和PMQR基因。     

食品动物源沙门氏菌质粒介导喹诺酮类耐药基因的检测与分析

为了解食品动物源沙门氏菌质粒介导喹诺酮类耐药性(Plasmid-mediated quinolone resistance,PMQR),采用微量肉汤稀释法和PCR方法,检测了316株食品动物源沙门氏菌对20种抗菌药物的敏感性,以及菌株中PMQR基因的携带率.结果显示:316株沙门氏菌对20种抗菌药物呈不同程度的耐药性,95.57％菌株为多重耐药菌;316株菌中未检出qnrA、qnrC、qnrD、qnrS和qepA基因,7.91％菌株检出qnrB基因,15.19％菌株检出aac(6 ′ )-Ib-cr基因,7.91％菌株检出oqxA基因,8.86％菌株检出oqxB基因,这是首次在沙门氏菌中发现oqxAB基因;98.11％PMQR阳性菌同时携带2种及以上的耐药基因,呈8～17耐的多重耐药性,其中以qnrB和aac(6′)-Ibcr基因型为主;53株PMQR阳性菌分属于5种不同的基因型,耐药表型或耐药基因型不同的菌株却有相同的PFGE谱型.本次检测的316株食品动物源沙门氏菌耐药较为严重;菌株主要携带qnrB、aac(6 ′ )-Ib-cr及oqxAB基因;不同来源菌株存在同一耐药克隆株的流行.     

猪源大肠杆菌质粒和染色体介导的喹诺酮类药的耐药机制

采用微量肉汤稀释法对31株猪源大肠杆菌进行6种喹诺酮类药物的敏感性测定,聚合酶链式反应检测质粒介导的喹诺酮类耐药（PMQR）基因qnr、qepA和aac（6′）-Ib-cr,并分析PMQR基因阳性菌株染色体gyrA、gyrB、parC、parE基因的喹诺酮耐药决定突变区（QRDRs）突变。结果显示,31株猪源大肠杆菌对兽医临床常用的氟喹诺酮类药物均呈现耐药。在31株猪源肠杆菌中共检测到2株携带qnrB10和4株携带qnrS1基因的大肠杆菌,未检测到qnrA、qepA和aac（6′）-Ib-cr。在PMQR阳性菌株gyrA基因的QRDRs中,低耐药菌株的gyrA基因出现83位S→W突变,高耐药菌株的gyrA基因同时出现83位S→L和87位D→N突变。而在parC基因的QRDRs中,大部分耐药菌株出现80位S→I突变,1株耐药菌株出现45位V→L突变。gyrB和parE基因的QRDRs未检测到突变。结果表明,本地区猪源大肠杆菌对兽医临床常用的氟喹诺酮类药物耐药严重,PMQR的出现和QRDRs的点突变可同时协同贡献对喹诺酮类耐药,而PMQR的出现加速了喹诺酮类耐药基因的快速传播。     

牛源大肠杆菌质粒介导喹诺酮类耐药基因的检测分析

为研究近年来新疆地区牛源大肠杆菌中质粒介导喹诺酮类药物耐药基因的分布及其对喹诺酮类抗生素的耐药情况,本研究于2016-2018年从新疆石河子、沙湾、奎屯、玛纳斯和伊犁5个地区12个规模化奶牛场分离出116株牛源大肠杆菌,药敏试验检测其耐药性,同时利用PCR扩增PMQR耐药基因。药敏试验结果显示,62.93%的菌株对氨苄西林耐药,耐药率最高。对链霉素、四环素、卡那霉素和恩诺沙星的耐药率依次为56.90%、54.31%、43.10%和42.24%。对头孢他啶和头孢噻肟的耐药率较低,分别为7.76%和11.21%。分离菌主要携带qnrA、qnrS和aac（6'）-Ⅰb-cr 3种耐药基因;116株大肠杆菌中有31株携带PMQR的耐药基因,检出阳性率为26.72%,其中26株仅携带1种PMQR耐药基因,占所有菌株的22.41%,4株携带2种PMQR耐药基因,占所有菌株的3.45%,1株携带3种PMQR耐药基因,占所有菌株的0.86%。综上所述,新疆地区牛源大肠杆菌质粒介导喹诺酮类药物基因主要为qnrA、qnrS和aac（6'）-Ⅰb-cr 3种,且对恩诺沙星、诺氟沙星、环丙沙星、左氧氟沙星均产生不同程度的耐药性。     

内蒙古地区羊源大肠杆菌耐药性研究

为确定内蒙古地区羊源大肠杆菌的耐药表型及其耐药基因的流行情况,本研究采用微量稀释法测定了内蒙古地区108株羊源大肠杆菌对13种临床常用抗菌药物的最小抑菌浓度。结果显示,分离菌株对阿莫西林、头孢噻吩、磺胺甲唑、黏菌素的耐药率最高,均达100.0%,对阿莫西林/克拉维酸、四环素、环丙沙星的耐药率在50%~80%之间,对头孢噻肟、美洛培南、新霉素的耐药率均低于10%,较为敏感。108株羊源大肠杆菌中耐7种以上药物的菌株占94.4%,其中15.6%菌株对13种抗菌药物耐药,只有1株菌对所有抗菌药物敏感。采用PCR方法对羊源大肠杆菌分离株所携带的6种相关耐药基因进行检测,结果显示,6种耐药基因中的4种耐药基因bla_TEM、proP-2、sul-Ⅰ、ampG检出率超过50%,耐药基因aph（3'）-Ⅰ携带率达40%,只有耐药基因aac（3）-Ⅱ检出率仅为5.5%。由此可见,内蒙古地区羊源大肠杆菌对13种抗菌药物产生了不同程度的耐药性,且存在严重的多重耐药情况,羊源大肠杆菌分离株携带aph（3'）-Ⅰ、sul-Ⅰ、ampG、bla_TEM、proP-2、aac（3）-Ⅱ耐药基因。     

鸡源性沙门氏菌DNA旋转酶与耐氟喹诺酮类药物关系研究

取临床分离的、对5种氟喹诺酮类药物（环丙沙星、氧氟沙星、恩诺沙星、单诺沙星和沙拉沙星）均耐药的9株鸡源性沙门氏菌耐药株,提取其染色体DNA。设计引物gyrAF和gyrAR、gyrBF和gyrBR,分别扩增菌株DNA旋转酶gyrA基因和gyrB基因的氟喹诺酮类耐药决定区（QRDR）,对PCR扩增产物进行测序及序列分析。与质控菌株相比,9株临床分离耐药株中只有菌株38和60的gyrA基因发生单碱基突变,菌株38的gyrA基因第371位碱基发生C→T突变,菌株60的gyrA基因第350位碱基发生A→C突变,两处突变均位于QRDR内,其余菌株的核苷酸未发生任何突变。菌株38的碱基突变导致gyrA基因第99位氨基酸发生R→C取代,即Arg→Cys;菌株60的碱基突变导致gyrA基因第92位氨基酸发生M→L取代,即Met→Leu。9株临床分离鸡源性沙门氏菌氟喹诺酮类耐药株gyrB基因QRDR的核苷酸序列与质控菌株完全相同;只有菌株42的gyrB基因第1592位碱基发生C→A突变,但其位于gyrB基因QRDR之外,且菌株42的gyrB基因的碱基突变并没有导致相应氨基酸的改变。上述结果提示,DNA旋转酶gyrA基因和gyrB基因QRDR突变可能并非沙门氏菌耐药性产生的主要原因。     

鸡源性多重耐药沙门氏菌 类整合子与耐药基因研究

本试验旨在了解鸡源性沙门氏菌分离株多重耐药与Ⅰ类整合子及耐药基因的携带关系。采用K-B纸片法对29株鸡源性沙门氏菌分离菌株进行10种抗菌药物敏感试验;应用PCR技术对分离菌株进行Ⅰ类整合子及耐药基因检测。29株分离株中有13株对2种以上抗菌药物耐药,属于多重耐药株,氨苄西林-四环素-头孢唑啉-复合磺胺是主要多重耐药谱;13株多重耐药菌中有8株携带Ⅰ类整合子,blatem-1、tetA和tetB基因检出最高。结果表明沙门氏菌多重耐药性与整合子的携带之间关系密切,耐药表型测定结果与耐药基因检测结果基本一致。     

质粒介导的喹诺酮耐药基因在动物源金黄色葡萄球菌的流行分布

为了解广东省动物源金黄色葡萄球菌耐药现状、分析耐喹诺酮类金黄色葡萄球菌耐药分子特征,本研究从2010—2011年广东33个养殖场的不同动物来源的样本中分离鉴定出46株金黄色葡萄球菌,采用二倍琼脂稀释法测定对14种抗菌药物的敏感性;采用聚合酶链式反应(PCR)检测耐喹诺酮金黄色葡萄球菌grlA、grlB、gyrA、gyrB基因在喹诺酮耐药决定区(QRDR)的突变特征、质粒介导喹诺酮类耐药(PMQR)基因(qnr、aac6′-Ib-cr、oqxA和qepA)的流行分布特征,同时还检测了β-内酰胺酶编码基因(blaCTX-M、blaCMY和blaSHV)、质粒介导金黄色葡萄球菌耐氟苯尼考的基因(cfr和fexA)和万古霉素耐药基因(vanA、vanB和vanC)。结果表明,46株金黄色葡萄球菌对克林霉素耐药率最高为67%,对环丙沙星和氟苯尼考耐药率为52%,对青霉素、氨苄西林、庆大霉素、红霉素、四环素和复方新诺明的耐药率在40%⁵0%之间,对苯唑西林和氯霉素耐药率为28%,对妥布霉素耐药率为13%,对头孢噻肟的耐药率在10%左右,有2株耐万古霉素。20株耐环丙沙星金黄色葡萄球菌的grlA和gyrA基因的QRDR发生了碱基突变并导致编码的氨基酸发生改变,GrlA氨基酸只有1种突变模式,Ser80→Phe,而GyrA氨基酸存在3种突变模式:Ser84→Leu,Ala或Phe。PMQR基因中,oqxA检出率最高(80%),其次是aac6′-Ib-cr占13%,qnrS1检出3株、qnrD检出2株。检测到2株菌株携带超广谱β-内酰胺酶编码基因blaSHV-12;23株氟苯尼考耐药菌株全部携带fexA基因,其中3株同时携带cfr基因;2株耐万古霉素菌株未检测到相关耐药基因。广东省动物源金黄色葡萄球菌多重耐药现象较为普遍,本研究首次在动物源金黄色葡萄球菌中检测到超广谱质粒编码的喹诺酮耐药基因流行分布广泛,大多数菌株同时携带2种以上质粒编码的耐药基因,提示养殖过程或治疗过程中使用任何一种药物(尤其是动物促生长剂)都可以筛选出耐药菌株。     

牛源大肠杆菌质粒介导喹诺酮类耐药基因的检测分析

为研究近年来新疆地区牛源大肠杆菌中质粒介导喹诺酮类药物耐药基因的分布及其对喹诺酮类抗生素的耐药情况,本研究于2016-2018年从新疆石河子、沙湾、奎屯、玛纳斯和伊犁5个地区12个规模化奶牛场分离出116株牛源大肠杆菌,药敏试验检测其耐药性,同时利用PCR扩增PMQR耐药基因。药敏试验结果显示,62.93%的菌株对氨苄西林耐药,耐药率最高。对链霉素、四环素、卡那霉素和恩诺沙星的耐药率依次为56.90%、54.31%、43.10%和42.24%。对头孢他啶和头孢噻肟的耐药率较低,分别为7.76%和11.21%。分离菌主要携带qnrA、qnrS和aac(6′)-Ⅰb-cr 3种耐药基因;116株大肠杆菌中有31株携带PMQR的耐药基因,检出阳性率为26.72%,其中26株仅携带1种PMQR耐药基因,占所有菌株的22.41%,4株携带2种PMQR耐药基因,占所有菌株的3.45%,1株携带3种PMQR耐药基因,占所有菌株的0.86%。综上所述,新疆地区牛源大肠杆菌质粒介导喹诺酮类药物基因主要为qnrA、qnrS和aac(6′)-Ⅰb-cr 3种,且对恩诺沙星、诺氟沙星、环丙沙星、左氧氟沙星均产生不同程度的耐药性。     

Isolation and molecular characterization of quinolone resistant Salmonella spp. from poultry farms

The antimicrobial susceptibility of 94 Salmonella strains isolated from different poultry farms in Chile (broiler and laggin hens) were analyzed by the dilution plates method. Thirty-nine of them were resistant to flumequine, nalidixic acid and oxolinic acid with MIC values higher than 64 μg/ml. These quinolone resistant strains were analyzed in order to determine the presence of mutations in the QRDR region of gyrA gene by AS-PCR-RFLP analysis. 51.3% of the strains showed mutations at codon Ser 83 and 41.0% showed mutations at codon Asp 87. No mutations were observed on codon Gly 81. These mutations were confirmed by sequenciation of one representative strain from different RFLP pattern. Likewise, no double mutations were observed. Over 90% of the quinolone resistant strains presented mutations at the QRDR region of the gyrA gene. Three phenotypically resistant strains did not show any mutations on the QRDR region of gyrA gene. However, other molecular resistant mechanism could be involve. This is the first study that demonstrate the emergency of quinolone and fluoroquinolone resistance in Chilean Salmonella strains isolated from poultry thus indicating the requirement of monitoring programmes in veterinary medicine.     

广东省零售市场鸡肉中肯塔基沙门菌的流行情况及耐药性分析

本研究旨在了解广东省零售市场鸡肉中肯塔基沙门菌的流行情况、耐药水平与耐药基因携带情况。对2016年从广东省五个地级市采集的鸡肉样品进行沙门菌分离鉴定、血清型鉴定、药敏试验、耐药基因的检测和分子分型。结果显示，245份鸡肉样品中沙门菌阳性率为62.04%（152/245），共鉴定出19种血清型，其中主要血清型有阿贡纳（Salmonella Agona，29/152，19.08%）、科瓦利斯（S.Corvallis，25/152，16.45%）以及肯塔基（S.Kentucky，20/152，13.16%）。肯塔基沙门菌药敏试验结果显示对磺胺异噁唑（100%）、萘啶酸（90%）、四环素（75%）、氨苄西林（65%）、头孢他啶（55%）、环丙沙星（55%）的耐药率较高，有85%（17/20）的菌株对3种及3种以上的抗菌药物耐药。对喹诺酮耐药基因的检测结果显示，95%（19/20）的菌株具有gyrA突变（Ser83Phe、Asp87Asn、Asp87Gly），其中有57.89%（11/19）的菌株发生gyrA双突变（Ser83Phe与Asp87Asr、Ser83Phe与Asp87Gly），5.26%（1/19）发生gyrA三突变（Ser83Phe、Asp87Asn、Asp87Gly）；100%（20/20）的菌株具有parC突变（Tyr62Ser、Ser85Ile）。45%（9/20）分离株携带质粒介导的喹诺酮抗性（PMQR）基因（aac（6'）-Ib-cr、qnrB、qnrS、oqxAB），最常见的是aac（6'）-Ib-cr耐药基因。β-内酰胺类耐药基因bla_TEM-1、bla_OXA-1和bla_CTX-M-55的检出率分别为25%、10%和5%。PFGE图谱的聚类分析结果显示，肯塔基沙门菌之间具有不同的亲缘关系与遗传多样性，部分菌株具有高度同源性。肯塔基沙门菌在广东省零售市场鸡肉中是主要的流行血清型之一。其对传统药物磺胺异噁唑、萘啶酸、四环素和氨苄西林耐药较严重，对环丙沙星以及头孢他啶耐药尤其严重，具有多种多重耐药表型。肯塔基沙门菌其喹诺酮耐药决定区突变率高。分子分型揭示了菌株间跨地区传播的可能，为肯塔基沙门菌溯源提供一定的依据。     

内蒙古地区奶牛源致病性沙门氏菌耐药性分析及ESBLs基因检测

为研究内蒙古地区奶牛源致病性沙门氏菌的耐药特性及ESBLs基因流行特征,试验采用微量肉汤稀释法测定了22种兽医临床常用抗菌药物对临床分离沙门氏菌的最低抑菌浓度(MICs),并对其多重耐药特性进行了分析;采用PCR法对具有β-内酰胺类药物耐药表型的菌株进行了8种动物源沙门氏菌常见ESBLs基因的检测。结果显示,内蒙古地区奶牛源致病性沙门氏菌对甲氧苄啶(97.4%)及磺胺甲基噁唑(94.7%)的耐药率最高,对多数β-内酰胺类、氨基糖甙类、氯霉素类及四环素类药物的耐药性也较为严重(耐药率为40%~80%),所有菌株对氟喹诺酮类药物均敏感;菌株的多重耐药率为94.7%,有29株菌(76.3%)同时对6类抗菌药物具有耐药性;35株对β-内酰胺类药物耐药的菌株中,有30株(85.7%)为ESBLs基因阳性,共检出6种ESBLs基因,其中CTX-M型基因检出率最高(40.0%),未检出SHV和PSE型基因;共发现15种ESBLs基因型,9种ESBLs基因型组合,有16株菌(45.7%)同时携带两种或两种以上ESBLs基因。结果表明,内蒙古地区奶牛源致病性沙门氏菌对兽医临床常用抗菌药物的耐药性较为严重,且ESBLs基因的流行模式较为复杂,提示兽医临床抗菌药物不合理使用可能是造成该地区奶牛源沙门氏菌耐药性产生的原因。     

Analysis of Antimicrobial Resistance and Detection of ESBLs Genes of Pathogenic Salmonella Isolates from Dairy Cows in Inner Mongolia

The aim of the present study was to investigate the characteristics of antimicrobial resistance and prevalence of ESBLs genes of Salmonella isolates from dairy cows in Inner Mongolia.Micro-dilution broth method recommended by CLSI was used to determine the MICs of 22 antimicrobial agents commonly employed in veterinary clinic against the 38 Salmonella isolates.PCR analysis was carried out to detect the presence of 8 ESBLs genes mostly observed in animal origin Salmonella in the isolates with resistance to at least one β-lactam antibiotics, and the features of multi-resistance of the isolates were also analyzed.The results showed that most Salmonella isolates were resistant to trimethoprim(97.4%), sulfamethoxazole(94.7%), and to most of the β-lactam, aminoglycosides, chloramphenicol and tetracycline antibiotics with the resistance rate ranging from 40% to 80%, however, all of the isolates were sensitive to fluoroquinolone drugs.76.3%(n＝29) of the isolates were simultaneously resistant to 6 categories antibiotics and the multi-resistance rate was 94.7%. 85.7%(n＝30) of the β-lactam antibiotics resistant isolates were ESBLs genes positive.Of the six genotype of ESBLs genes found in this study, CTX-M (40.0%) was the mostly encountered ESBLs gene, however, the SHV and PSE types gene were absent in the isolates.A total of fifteen genotypes of the ESBLs genes and nine ESBLs genes combinations were observed in this study, and 16 isolates (45.7%) simultaneously contained two or more than two ESBLs genes.It was indicated that the current situation of the resistance of the Salmonella isolates from dairy cows in Inner Mongolia to the commonly used antimicrobial agents in veterinary clinic was serious, and the prevalence pattern of the ESBLs genes in the isolates was complex, suggesting that the irrational employment of the antibiotic in the treatment of animal infectious diseases was the crucial reason causing the antimicrobial resistance of the isolates.     

羊源沙门氏菌的分离鉴定及致病性和耐药性分析

【目的】 分离张家口某地区羊源沙门氏菌并检测其血清型、毒力基因、耐药性及耐药基因，分析分离株表型和基因的相关性和差异性。【方法】 将样品用选择培养基增菌并纯化培养，挑选疑似的沙门氏菌单菌落进行革兰氏染色、镜检和生化鉴定。根据沙门氏菌属特异性基因invA的核苷酸序列进行PCR和血清型鉴定。利用SPF昆明小鼠对分离株进行致病性试验并测定其半数致死量。PCR扩增毒力岛基因hilA、avrA、sseL、ssaQ、mgtC、siiD和sopB，肠毒素基因stn，质粒毒力基因spvR。采用Kirby-Bauer纸片扩散法进行药敏试验，PCR扩增β-内酰胺酶耐药基因bla_TEM、bla_CMY和bla_OXA，氟喹诺酮耐药基因qnrS、oqxA和oqxB，磺胺类耐药基因sul1、sul2和sul3，四环素类耐药基因tetB及氨基糖苷类耐药基因aadA1。根据PCR检测结果，将扩增的毒力基因和耐药基因进行测序，并与NCBI中相应的参照基因进行BLAST比对分析。【结果】 分离得到4株羊源沙门氏菌，血清型鉴定均为鼠伤寒沙门氏菌。分离株对小鼠具有致病性，4株分离株的半数致死量为5.67×10⁷~6.45×10⁷ CFU。分离株可检出毒力岛基因hilA、avrA、sseL、ssaQ、mgtC、siiD和sopB，肠毒素基因stn及质粒毒力基因spvR，检出率均在50%以上。分离株对复方新诺明、利福平、林可霉素、青霉素、氨苄西林耐药，对庆大霉素、环丙沙星敏感。分离株可检出β-内酰胺类耐药基因bla_TEM、氟喹诺酮耐药基因qnrS、磺胺类耐药基因sul1和sul2。【结论】 本研究分离的羊源沙门氏菌的毒力表型与染色体和质粒携带的毒力基因有关。分离菌株携带β-内酰胺类、磺胺类耐药基因，与耐药表型相符，临床上可将庆大霉素和环丙沙星作为首选药。     

鸭源沙门菌的分离鉴定、耐药性及致病性分析

【目的】为防控鸭源沙门菌感染,本试验针对四川德阳地区鸭源沙门菌的感染情况开展研究。【方法】从该地区3个种鸭场和1个鸭孵化场共采集不同类型样本222份,按国标GB 4789.4－2016方法对沙门菌进行分离鉴定,进一步通过K-B法检测分离菌对14种抗菌药物的敏感性,并对鉴定出的稀有血清型沙门菌进行致病性研究。【结果】疑似沙门菌分离株在BS琼脂上呈黑色、灰色或棕褐色、有金属光泽菌落,在XLD琼脂上呈无色透明、或中心黑色或几乎全黑的菌落。将疑似沙门菌株接种三糖铁琼脂斜面进行生化鉴定,疑似沙门菌分离株均能使三糖铁斜面变为红色,底部变为黄色带黑色,符合沙门菌生化特性。通过PCR对沙门菌特异性基因invA进行扩增,经琼脂糖凝胶电泳后可在500 bp左右观察到目的条带,确认共分离到17株沙门菌,总分离率为7.7%（17/222）,包括鼠伤寒沙门菌、哈托沙门菌和波恩沙门菌3种血清型,其比例分别为47.1%（8/17）、29.4%（5/17）和23.5%（4/17）,优势血清型为鼠伤寒沙门菌。分离菌对β-内酰胺类和氨基糖苷类抗菌药耐药率最高,对氨苄西林和链霉素的耐药率分别为82.4%（14/17）和88.2%（15/17）,对喹诺酮类抗菌药最敏感,其中对萘啶酸100%（17/17）敏感。分离菌存在严重的多重耐药现象,其中耐10种以上（包括10种）抗菌药的6株,占比35.2%,且10种抗菌药分别来自至少6类不同种类抗菌药;耐8种抗菌药物的2株,占比11.8%;耐5~7种抗菌药的6株,占比35.3%;耐2~3种抗菌药物的共3株,占比17.6%。通过寇氏改良法测得稀有血清型菌株H4、B2的LD₅₀分别为3.98×10⁶和1.58×10⁶ CFU,致病性试验结果表明,哈托和波恩沙门菌均能引起小鼠急性死亡,脏器充血、出血,细胞变性等。【结论】本研究成功分离到17株鸭源沙门菌,从鸭中分离到哈托沙门菌在国内外属首次。分离菌具有严重的耐药性和多重耐药现象,2株稀有血清型沙门菌对小鼠的致病力均较强,且致病作用相似。本研究结果可为鸭场沙门菌病的防治提供参考。     

屠宰场沙门氏菌耐药性分析和毒力基因检测

【目的】研究广东省茂名地区屠宰环节猪肉中携带的沙门氏菌的耐药性和毒力特征,为该地区食源性沙门氏菌的危害评估和防控措施制定提供依据。【方法】从广东省茂名地区屠宰场采集的猪肉、脾脏、肝脏样本中分离到19株沙门氏菌,采用K-B药敏纸片法检测其对β-内酰胺类、氟喹诺酮类、氨基糖苷类、四环素类、酰胺醇类和磺胺类抗菌药物的耐药性,用PCR方法检测β-内酰胺类耐药基因(bla_TEM、bla_OXA-1、bla_SHV)、氟喹诺酮类耐药基因(qnrA、qnrS、qnrB)、氨基糖苷类耐药基因(aadA1、aac(6')-Ⅰb、rmtB)、四环素类耐药基因(tetA、tetB、tetC)、酰胺醇类耐药基因(Cat1、floR)、磺胺类耐药基因(SulⅠ、SulⅡ、SulⅢ)和10种毒力基因(mogA、sseL、mgtC、bcfA、araB、spvR、spvA、spvB、spvC、spvD)的携带情况。【结果】19株沙门氏菌耐药严重,对四环素、多西环素、氯霉素、氟苯尼考、磺胺异噁唑的耐药率均＞50％,对四环素、多西环素和氯霉素的耐药率最高,均为89.5%(17/19),对3种及其以上抗菌药物耐药率为89.5%,最高对11种抗菌药物均有耐药性;bla_TEM、qnrA、aadA1、aac(6')-Ⅰb、Cat1、floR、SulⅠ、SulⅢ耐药基因的检出率较高(≥50.0%),bla_TEM耐药基因检出率最高为84.2％,同时携带5个及以上耐药基因的菌株占73.7%,最高携带12个耐药基因;mogA、mgtC、bcfA、araB毒力基因均有检出,且检出率均在70％以上,其中mogA基因的检出率高达100%,其余6种毒力基因均未检出。【结论】广东省茂名地区屠宰场猪肉中沙门氏菌多重耐药严重,携带多种耐药基因且具有复杂的基因组合类型,同时携带多种毒力基因。     

Prevalence of antimicrobial resistance among Salmonella on midwest and northeast USA dairy farms

The objective of this study was to determine the prevalence of antimicrobial resistance among Salmonella isolated from dairy herds in New York, Minnesota, Michigan, and Wisconsin, USA. Serogroup and antimicrobial susceptibility characteristics were determined for Salmonella from cattle and environmental samples collected during August 2000–October 2001 as part of a longitudinal study where 129 herds were visited at 2-month intervals. Salmonella isolates were tested (using a broth microdilution method) for susceptibility to amoxicillin/clavulanic acid, ampicillin, ceftiofur, ceftriaxone, cephalothin, chloramphenicol, ciprofloxacin, gentamicin, kanamycin, nalidixic acid, streptomycin, sulfamethoxazole, tetracycline, and trimethoprim/sulfamethoxazole. Of the 1506 isolates tested for minimum inhibitory concentrations to these 14 antimicrobial agents, 81.2% were pan-susceptible and for most herds (81.6%) the predominant antimicrobial resistance pattern was pan-susceptible. At least 1 Salmonella isolate resistant to 5 or more antimicrobial agents was found on 23.6% of herds. This resistance phenotype was most common among serogroups B and E1 and among samples from calves and farmer-designated sick cows. Resistant samples most frequently exhibited resistance to tetracycline, streptomycin, and/or ampicillin. No samples were resistant to ceftriaxone (though 13 were in the intermediate range), and very few samples were resistant to ciprofloxacin (n = 1), nalidixic acid (n = 5), or trimethoprim/sulfamethoxazole (n = 7).     

1株信鸽源鼠伤寒沙门氏菌的分离鉴定及其耐药性和毒力分析

本试验旨在鉴定临床疑似沙门氏菌感染致死信鸽的病原菌并确定致病菌的耐药及毒力状况。通过细菌分离培养、菌落形态观察、染色镜检、生化鉴定、血清分型、16S rRNA基因测序分析和康复信鸽血清平板凝集试验进行鉴定,并通过药敏试验、耐药基因和毒力基因检测进行耐药性和毒力分析。结果显示,分离纯化的细菌在BS、XLD、HE培养基上为黑色菌落,镜检为无荚膜、无芽孢的革兰氏阴性短杆菌;分离菌株生化反应结果符合沙门氏菌生化特性;分离菌株血清型为1,4,12：i：1,2;分离菌株16S rRNA基因序列系统进化树分析显示,该分离菌株与鼠伤寒沙门氏菌聚为一支,同源性>99%,康复信鸽血清与分离菌株发生特异性凝集,结合生化反应和血清分型结果该菌株鉴定为鼠伤寒沙门氏菌;分离菌株对氟苯尼考耐药,经耐药基因检测携带floR、cmlA氯霉素类耐药基因,与耐药表型相符;分离菌株mogA等17种毒力基因检测均为阳性。本试验成功分离到1株信鸽源鼠伤寒沙门氏菌,分离菌株对氟苯尼考耐药且具有较强毒力,为下一步信鸽沙门氏菌的防治和研究提供了参考依据。     

Isolation,Identification and Drug Sensitivity Analysis of Pseudomonas aeruginosa from Minks

In order to provide therapeutical guidance for drug admistration,the bacteria from five dead minks suffering with typical symptoms provided by mink farms in Shandong province were isolated and identified,and the drug sensitivity was tested.The bacteria were isolated with TSA plates,and identified using biochemical methods and PCR assay.The drug sensitivity of the isolates to antimicrobial agents was investigated using K-B method.PCR was used to detect the resistance genes.A total of 5 Pseudomonas aeruginosa isolates were obtained from sick minks.The drug sensitivity results showed that 5 strains were sensitive to fluoroquinolone,the third and fourth generations cephalosporin drugs,but were resistant to aminoglycoside,tetracycline,chloramphenicol,penicillin,the first and second generations cephalosporin drugs.There were six resistance genes were detected,aadA1,aac(3')-Ⅱc,aac(6')-Ⅰb,tetA,tetK and cat2.All of the isolates were detected more than three kinds of resistance genes.The result showed that 5 strains were all Pseudomonas aeruginosa,and Pseudomonas aeruginosa was the main cause of mink hemorrhagic pneumonia.The resistance of 5 strains were very serious and mainly for multiple drug resistance phenomenon.The resistance genes detected in the mink were various,and could cause the resistance to the drugs.