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AREG对绵羊小腔卵泡卵母细胞体外成熟的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
旨在研究双调蛋白(AREG)对绵羊小腔卵泡卵母细胞体外成熟(IVM)的影响。本研究从屠宰场绵羊卵巢上采集小腔和中腔卵泡的卵母细胞进行试验,利用自发荧光检测卵母细胞的NAD (P) H和FAD++水平,利用JC-1检测卵母细胞的线粒体膜电位;两种来源的卵母细胞经体外成熟后,比较其卵丘扩展指数(CEI)、第一极体排出率(MII%);比较AREG、AREG+GDF9、AREG+BMP15、AREG+GDF9+BMP15、GDF9+BMP15对小腔卵泡卵母细胞体外成熟后的CEI、MII%及卵母细胞线粒体膜电位的影响;检测了AREG+GDF9+BMP15对小腔卵泡卵母细胞体外成熟后的NAD (P) H和FAD++水平及其受精后发育能力的影响。结果表明,成熟前,小腔卵泡卵母细胞的线粒体膜电位和FAD++水平均显著低于中腔卵泡卵母细胞(P<0.05);体外成熟培养后,小腔卵泡卵母细胞的CEI和MII%均显著低于中腔卵泡卵母细胞(P<0.05)。与对照组相比,AREG+GDF9+BMP15显著提高了小腔卵泡卵母细胞体外成熟后的CEI、MII%和线粒体膜电位(P<0.05),且与中腔卵泡卵母细胞组差异不显著(P>0.05);另外,AREG+GDF9+BMP15显著提高了小腔卵泡卵母细胞体外成熟后的NAD (P) H和FAD++水平(P<0.05),且与中腔卵泡卵母细胞组差异不显著(P>0.05)。与对照组相比,在成熟液中添加AREG+GDF9+BMP15可以明显提高小腔卵泡卵母细胞体外受精后的卵裂率和囊胚率(分别为(43.79±3.69)%、(28.54±4.31)%和(78.99±1.12)%、(47.46±2.50)%,P<0.05),而且与中腔卵泡卵母细胞组无显著差异(P>0.05)。综上表明,绵羊小腔卵泡卵母细胞的代谢水平及IVM质量较低, AREG在GDF9和BMP15的协同作用下可以显著提高小腔卵泡卵母细胞的代谢水平及IVM质量,并进一步提高小腔卵泡卵母细胞体外受精后的发育能力。 相似文献
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哺乳动物卵巢中绝大多数卵母细胞以无腔形式存在,有腔卵泡所占比例很少。通过建立腔前卵泡的培养体系,获取大量的具有成熟和受精能力的卵母细胞,将极大地促进体外受精、核移植等胚胎工程技术的发展,并有利于研究卵泡和卵母细胞的发育规律。 相似文献
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《畜牧兽医学报》2020,(6)
旨在研究双调蛋白(AREG)对绵羊小腔卵泡卵母细胞体外成熟(IVM)的影响。本研究从屠宰场绵羊卵巢上采集小腔和中腔卵泡的卵母细胞进行试验,利用自发荧光检测卵母细胞的NAD(P)H和FAD~(++)水平,利用JC-1检测卵母细胞的线粒体膜电位;两种来源的卵母细胞经体外成熟后,比较其卵丘扩展指数(CEI)、第一极体排出率(MII%);比较AREG、AREG+GDF9、AREG+BMP15、AREG+GDF9+BMP15、GDF9+BMP15对小腔卵泡卵母细胞体外成熟后的CEI、MII%及卵母细胞线粒体膜电位的影响;检测了AREG+GDF9+BMP15对小腔卵泡卵母细胞体外成熟后的NAD(P)H和FAD~(++)水平及其受精后发育能力的影响。结果表明,成熟前,小腔卵泡卵母细胞的线粒体膜电位和FAD~(++)水平均显著低于中腔卵泡卵母细胞(P0.05);体外成熟培养后,小腔卵泡卵母细胞的CEI和MII%均显著低于中腔卵泡卵母细胞(P0.05)。与对照组相比,AREG+GDF9+BMP15显著提高了小腔卵泡卵母细胞体外成熟后的CEI、MII%和线粒体膜电位(P0.05),且与中腔卵泡卵母细胞组差异不显著(P0.05);另外,AREG+GDF9+BMP15显著提高了小腔卵泡卵母细胞体外成熟后的NAD(P)H和FAD~(++)水平(P0.05),且与中腔卵泡卵母细胞组差异不显著(P0.05)。与对照组相比,在成熟液中添加AREG+GDF9+BMP15可以明显提高小腔卵泡卵母细胞体外受精后的卵裂率和囊胚率(分别为(43.79±3.69)%、(28.54±4.31)%和(78.99±1.12)%、(47.46±2.50)%,P0.05),而且与中腔卵泡卵母细胞组无显著差异(P0.05)。综上表明,绵羊小腔卵泡卵母细胞的代谢水平及IVM质量较低, AREG在GDF9和BMP15的协同作用下可以显著提高小腔卵泡卵母细胞的代谢水平及IVM质量,并进一步提高小腔卵泡卵母细胞体外受精后的发育能力。 相似文献
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旨在在猪卵母细胞体外成熟培养液中添加N-乙酰半胱氨酸(NAC),揭示NAC对不同直径卵泡来源卵母细胞体外成熟效果的影响,解析其对氧化还原平衡的调控作用。本研究收集猪卵巢上大腔(4~6 mm)、中腔(2~4 mm)、小腔(1~2 mm)卵泡中的卵母细胞,在以上3种卵泡来源猪卵母细胞的体外成熟培养液中,均分别添加0、1、2、4 mmol·L-1浓度的NAC处理,评价卵丘扩展指数、第一极体排出率等成熟指标,检测卵母细胞中ROS水平、谷胱甘肽(GSH)含量和抗氧化基因的表达水平。结果表明,NAC处理对大腔卵泡来源卵母细胞的卵丘扩展指数和ROS水平无显著影响(P>0.05),对大、中腔卵泡来源卵母细胞的第一极体排出率无显著作用(P>0.05);而适量浓度的NAC(2 mmol·L-1)处理可显著提高中、小腔卵泡来源卵母细胞的卵丘扩展指数(P<0.05),降低ROS水平(P<0.05),提升小腔卵泡来源卵母细胞的第一极体排出率(P<0.05)。同时,NAC处理对大、中腔卵泡来源卵母细胞中的GSH含量和抗氧化基因SOD、CAT... 相似文献
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牛卵巢内卵泡及卵母细胞生长发育的组织学研究 总被引:3,自引:0,他引:3
随机摘取牛离体卵巢18枚,常规石蜡切片,光镜下共观察卵泡5 818个,并测得卵泡、卵母细胞直径和透明带厚度(平均值)。结果:在整个卵泡发育过程中,卵泡与卵母细胞发育是完全显著正相关(P<0.01,R=0.9906),其中腔前期P<0.01,R=0.9917,有腔期P<0.01,R=0.9951。腔前卵泡时期,卵泡和其卵母细胞直径增长幅度大体相等,而从有腔卵泡始,卵泡生长速度远远大于其卵母细胞。透明带与卵母细胞发育呈不显著正相关(P>0.05,R=0.9521)。 相似文献
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许多年以来,国内动物繁殖工作者一直从事繁殖控制机理的研究,致力于发展繁殖操作技术。最近几年,繁殖新技术的研究突飞猛进,出现了体外受精、克隆、转基因和性别控制技术,来提高具有高遗传价值动物的繁殖力及其生产效益。这些新技术在体外操作都需要卵母细胞,但是由于缺乏足够的可用卵母细胞,大大地限制了这些新技术在生产上的应用。卵巢上除了少数大腔卵泡卵母细胞外,还有成千上万的小腔卵泡卵母细胞和腔前卵泡卵母细胞,这些小腔和腔前卵泡卵母细胞是提供体外操作所需的成熟卵母细胞的潜在来源。本研究目的在于开发卵巢上的小腔卵… 相似文献
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目前 ,动物腔前卵泡的体外培养正日益受到重视 ,并已取得了较大进展 ,已建立的培养体系可成功地使腔前卵泡发育到有腔阶段 ,猪、山羊等已可实现腔前卵泡卵母细胞体外成熟 ,体外受精并发育至囊胚阶段。但有关腔前卵泡体外成熟的机制仍不明了。本文通过对体内发育与体外培养之卵泡及其卵母细胞超微结构进行比较 ,从微细结构上客观评定体外培养卵泡的形态、活力、代谢状况及功能完整性 ,界定体外生长卵泡所处发育阶段 ,从而为确立和完善腔前卵泡体外培养体系并最终选择高质量的卵母细胞进行体外受精提供可靠的理论依据。1 体内发育卵泡及其卵… 相似文献
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卵泡发育的激素调节研究进展 总被引:2,自引:0,他引:2
卵泡的发育经历了早期的发育、有腔卵泡的生长、优势卵泡的选择以及卵泡成熟排卵等过程。在一个发情周期中,数以万计的原始卵泡发育到排卵阶段时排卵数仅占原始卵泡总数的0.1%-0.2%,绝大数与产仔率有着极大的正相关,要提高产仔率就要防止卵泡闭锁,增加排卵数。而激素调节伴随着卵泡发育的始终,其中垂体促性腺激素和甾体激素可促进卵母细胞的生长、卵母细胞的增殖和卵泡腔的形成,在卵泡发育的过程中起着至关重要的作用。本文主要就促性腺激素、甾体激素和抑制素在卵泡发育中调节作一综述。 相似文献
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体外培养牛腔前卵泡卵母细胞的超微结构 总被引:1,自引:1,他引:0
直径约100μm牛腔前卵泡在无血清下体外培养15d。超微结构研究显示,培养前腔前卵泡卵母细胞微绒毛短小,分布均匀。胞质内细胞器致密而均匀,线粒体多为长或圆形,嵴较少,高尔基体、脂滴稀少,未见有皮质颗粒出现。培养6d时,微绒毛略变粗长,但数量减少。胞质内细胞器,由近核分布向胞质中央区转移,线粒体形态丰富,基质电子密度极高。培养15d腔前卵泡卵母细胞微绒毛增多,变长,斜向或垂直插入已经形成的透明带中。线粒体增多,大小不等,形态各异,胞质中区有溶酶体样物质及零星的皮质颗粒出现。电镜研究表明,体外培养与体内正常发育腔前卵泡卵母细胞超微结构变化规律基本相似。 相似文献
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近20年来,胚胎移植、体外受精、核移植、转基因等胚胎工程技术在理论和生产应用上已取得了很大进展.然而,所有这些技术是建立在具有完全发育能力的卵母细胞的基础之上的.大量卵母细胞的体外成熟培养是这些技术的限速步骤之一.目前采用的有腔卵泡卵母细胞的体外成熟和超数排卵,不能提供充足的卵母细胞以支撑胚胎工程技术的进一步发展.此外,卵巢中的卵母细胞绝大多数以无腔的形式存在于卵巢皮质内,有腔卵泡所占比例不到1%,屠宰场屠宰羊只后的卵巢内含有大量的腔前卵泡.如果建立腔前卵泡的体外培养体系,获得大量的具有成熟和受精能力的卵母细胞,一方面将会最大限度地挖掘保存卵巢上遗传资源;另一方面将极大的促进胚胎工程技术的研究与应用,还有利于研究卵泡和卵母细胞的生长和发育规律. 相似文献
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为了探讨绵羊体内卵母细胞的核相及皮质颗粒的分布特征,本研究根据绵羊卵泡直径将绵羊有腔卵泡分为早期有腔卵泡(1mm≤直径≤2.5mm)与中期有腔卵泡(2.5mm<直径≤7.5mm)两组,用地衣红染色方法观察两组绵羊卵泡中卵母细胞的核相特征及所占比例,用FITC-PNA、Hoechst 33342双染方法观察两组绵羊卵泡中的不同核相时期的卵母细胞的皮质颗粒分布特征。结果表明,绵羊早期有腔卵泡中的卵母细胞大部分处于GV1期,其核膜边缘不整齐,染色体呈细丝状,紧贴于核膜下均匀分布或集中于核膜下某处分布,皮质颗粒在胞质中密集、均匀的分布。绵羊中期有腔卵泡中的卵母细胞,大部分处于GV3~GV4期,其核膜边缘清晰、着色较轻,染色体短而粗,在核质中均匀分布,核质明显脱颗粒化,皮质颗粒开始向细胞膜迁移,部分卵母细胞的皮质颗粒在细胞膜下形成一圈密集的带状区域。由此可见,绵羊早期与中期有腔卵泡中的卵母细胞大部分处于GV期的不同阶段,其胞质中皮质颗粒开始发生迁移的时间早于生发泡破裂(GVBD)期。 相似文献
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山羊腔前卵泡卵母细胞体外发育与体外成熟的研究 总被引:9,自引:0,他引:9
通过比较3种培养基、5个培养系统和4种培养方法对卵母细胞生长率的影响,结果发现,就卵母细胞生长率而言。以MEM HEPES培养液+5%FCS+40μg/mlFSH 20ng/ml IGF-1 2mmol/L cAMP 2mmol/L次黄嘌呤培养系统为佳。在腔前卵泡体外培养过程中,12个卵泡经腔期发育,约占同等培养条件下卵泡九的2%(12/603)。培养卵泡经腔期发育并未改善其卵母细胞的成熟率(0/12)。腔前卵泡卵母细胞经过不同时间的体外培养,发现经12和14d培养结不的卵母细胞中,有81%(47/58)生发泡明显迁移至质膜下;培养14d的卵母细胞中,约16.4%(9/55)产生pbI但不排出,因而在胞质中见到极体;;培养16d得到1枚排出pbI的孤雌激活卵;同时发现培养16-18d卵母细胞退化率明显增高(P<0.01)。推测山羊腔前卵泡卵母细胞体外培养的适宜时间为16d。 相似文献
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通过对牛次级卵泡和三级卵泡前期生长发育的组织学研究 ,探讨了次级卵泡和三级卵泡前期的生长发育规律。结果表明 :在卵泡生长发育过程中 ,卵泡颗粒细胞层数达 5~ 6层时 ,开始出现不连续卵泡腔 ;其层数在 8层以上则以连续腔为主 (占 94 .74 % ) ,连续腔出现最多的层数为 8~ 16层 (占 84 .2 1% )。次级卵泡在颗粒细胞层数达到 3~ 4层时 ,已形成完整的透明带 ,颗粒细胞层数达到 5层时 ,透明带增厚。随着颗粒细胞层数的增多 ,卵泡直径和卵母细胞直径均增大。次级卵泡卵母细胞直径的增长和卵泡直径增长速度基本接近 ;而进入有腔卵泡阶段 ,卵母细胞直径的增长速度相对于其卵泡直径的增长缓慢。次级卵泡颗粒细胞层数在 2~ 5层 ;颗粒细胞层数达 5层之后进入三级卵泡初期阶段 相似文献
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犬卵母细胞体外成熟的影响因素 总被引:8,自引:0,他引:8
采集发情期和间情期犬卵巢,回收大腔(直径大于1mm)卵泡和不可见卵泡的卵母细胞,在4种成熟液(TCM199+20%FCS,TCM199+20%FCS+10IU/mLFSH,TCM199+20%EDS和TCM199+20%EDS+10IU/mLFSH)中成熟后进行了受精试验。结果:(1)发情期大于2mm和1~2mm的大腔卵泡卵母细胞的体外成熟率(42.5%,32.5%)显著高于间情期卵母细胞(20.4%),但发情犬不可见卵泡卵母细胞的体外成熟率(28.9%)与间情期卵母细胞差异不显著;(2)在成熟液中添加促性腺激素,能有效地提高卵母细胞成熟率,不可见卵泡的卵母细胞对促性腺激素的依赖性(30.0%比7.8%)大于大腔卵泡的卵母细胞(42.5%比29.0%);(3)卵丘扩散与卵母细胞成熟存在相关性;(4)EDS可诱导卵丘扩散,但不能有效提高卵母细胞的成熟率;(5)发情期卵巢上的大腔卵泡和不可见卵泡的卵母细胞以及间情期卵巢不可见卵泡的卵母细胞体外培养后,与体外获能的精子进行体外受精,其卵裂率分别为16.0%(4/25),0%(0/40)和2.5%(1/40)。 相似文献
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