单侧肾切除联合链脲佐菌素诱导糖尿病肾病大鼠建模方法改进与评价

优化单侧肾切除联合链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病肾病(DKD)大鼠建模方法,研究该模型大鼠的肾脏病变特点,为药物药效学评价和临床基础研究提供稳定平台。选取健康雄性大鼠12只,随机分为单侧肾切组(UNX组)和糖尿病肾病组(DKD组)。采用背侧横行切口配合皮内缝合的方法切除右肾,术后大鼠腹腔一次性注射STZ 40mg/kg诱导糖尿病,UNX组大鼠给予相同剂量柠檬酸缓冲液。动态检测两组大鼠体重、血糖、24h尿蛋白变化,并于第12周末观察大鼠肾脏病变。采用该手术方式,大鼠术后成活率可达100%。与UNX组相比,DKD组大鼠体重增长缓慢或负增长(P<0.01),24h尿蛋白明显增多(P<0.01),血糖维持在28mmol/L^32mmol/L。肾脏病变符合早期DKD表现。背侧横行切口配合皮内缝合右肾摘除术,联合腹腔注射STZ诱导的DKD大鼠造模方法成模率高。该模型与人类糖尿病肾病早期临床症状、病理变化相似,适用于DKD的机制研究及药物研发。     

Ⅱ型糖尿病大鼠模型的建立及其活体代谢的改变

利用高脂饲料诱导联合地塞米松注射建立Ⅱ型糖尿病大鼠模型,采用实验动物全面监测系统对大鼠的活动和代谢状态进行24h全程监测,并检测血液中甘油三脂、胆固醇、胰岛素和血糖等参数的变化。结果与对照组相比,模型组甘油三酯、胆固醇、胰岛素抵抗指数以及0、0.5、2h血糖值和血糖曲线下面积极显著升高(P0.01);模型组呼吸交换率明显变低,能量消耗升高,活动量极显著下降(P0.01)。结论:高脂饲料联合地塞米松能够引起大鼠脂代谢和糖代谢紊乱,成功诱导出Ⅱ型糖尿病模型。Ⅱ型糖尿病大鼠具备消瘦、呼吸交换率低、热量消耗增加和活动量减少等临床症状,且揭示糖尿病动物较偏向脂肪代谢、生活需氧量增加、生活状态萎靡和生物节律错乱。     

蓝刺头及蓝刺头复方水提物对实验性Ⅱ型糖尿病大鼠血糖及血脂的影响

为研究蓝刺头及蓝刺头复方水提物对Ⅱ型糖尿病(T2DM)大鼠血糖、血脂的影响。本试验以SD大鼠饲喂高脂高糖饲料加小剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射的方法建立T2DM大鼠模型。将大鼠随机分为正常对照组,模型组,蓝刺头水提物高、中、低浓度组,蓝刺头复方水提物高、中、低浓度组,对各组大鼠分别连续56d灌服生理盐水及相应浓度蓝刺头及蓝刺头复方水提物,并检测大鼠相关血糖血脂生化指标。结果显示,蓝刺头及蓝刺头复方水提物高、中剂量组对Ⅱ型糖尿病大鼠空腹血糖均呈明显升高趋势(P<0.05);蓝刺头及蓝刺头复方低剂量组对Ⅱ型糖尿病大鼠空腹血糖均无明显的改善;蓝刺头及蓝刺头复方水提物高、中、低剂量组均可明显降低TC、TG和LDL-C的含量(P<0.05),HDL-C无明显差异(P>0.05)。结果表明,蓝刺头及蓝刺头复方水提物对实验性Ⅱ型糖尿病大鼠具有降糖、降脂的作用。     

2型糖尿病合并肾性高血压模型的建立及评价

制备一种发病过程类似于人类2型糖尿病合并肾性高血压疾病的大鼠模型。大鼠高脂高糖膳食4周后,予快速腹腔注射链脲佐菌素(STZ)溶液28mg/kg,制作成2型糖尿病模型。2周后,连续3d均测得空腹血糖(FBG)≥7.8mmoL/L或随机血糖(RBG)≥16.7mmol/L,为2型糖尿病成模标准。待血糖稳定后,再用改良的"两肾一夹法"结扎肾动脉,造成一侧肾动脉狭窄,形成肾性高血压。2周后,连续3d均测得大鼠收缩压(SBP)≥140mmHg,同时FBG≥7.8mmol/L或RBG≥16.7mmol/L,确定为2型糖尿病合并肾性高血压模型制作成功。4周后,模型大鼠血糖、血压稳定。与空白对照组相比,复合模型组大鼠出现体重减轻、空腹血糖升高、糖化血红蛋白值升高(P0.01),血压升高(P0.01);与糖尿病组和假手术组相比,复合模型组大鼠血肌酐,尿素氮变化不明显(P0.05),但血压明显升高(P0.01);同时,彩超结果显示,复合模型组大鼠左侧肾脏、肾动脉直径均变小,血流速增快。大鼠高脂高糖膳食后,用低剂量链脲佐菌素(STZ)溶液腹腔注射,再用改良的"二肾一夹"法制备的2型糖尿病合并肾性高血压大鼠模型,在一定程度上较好地模拟出该疾病的发病特点,可为2型糖尿病合并肾性高血压后的临床及试验研究提供一个稳定、实用、有效的新模型。     

双峰骆奶对2型糖尿病大鼠肝细胞凋亡的影响

本试验旨在研究双峰驼奶对2型糖尿病大鼠肝细胞凋亡的保护作用。60只月龄接近的雄性成年大鼠随机分5组,阴性对照(C)组采用基础饲粮,其他4组均通过链脲佐菌素结合高糖高脂饮食诱导建立2型糖尿病大鼠模型,各组分别为糖尿病模型对照(DMC)组、低剂量骆奶(LCM)组(2 mL/d)、高剂量骆奶(HCM)组(5 mL/d)和盐酸二甲双胍(MTH)组(200 mg/kg)。试验期4周。结果表明:与C组和DMC组相比,MTH组和HCM组大鼠血糖浓度显著下降(P<0.01);DMC组肝细胞水肿,部分肝细胞核皱缩、碎裂、溶解,而LCM组、HCM组和MTH组肝细胞形态正常,胞核结构清晰;与DMC组相比,HCM组和MTH组大鼠肝细胞B细胞淋巴瘤因子2(BCL-2)蛋白合成增强,BCL-2相关蛋白X(BAX)合成减弱;BCL-2 mRNA相对表达量在MTH组中最高,BAX mRNA相对表达量在LCM组和MTH组中最高;DMC组、MTH组、LCM组和HCM组均可检测出BCL-2和BAX蛋白。综合以上,双峰骆奶能抑制BAX蛋白的合成而促进BCL-2蛋白合成,揭示双峰骆奶能抑制细胞凋亡,促进细胞增殖。双峰骆奶具有明显的降低2型糖尿病大鼠的血糖及肝细胞损伤的作用,可起到辅助治疗的作用。     

Ⅱ型糖尿病大鼠动物模型的构建与验证

将171只体质量200~250g 7周龄雄性SD大鼠随机分为正常对照组(Ⅰ组,25只)和Ⅱ型糖尿病模型组(Ⅱ组,146只),采用高脂高糖饲料喂养结合STZ腹腔注射的方法建立Ⅱ型糖尿病大鼠动物模型,定期对大鼠体质量、空腹血糖、糖耐量、血清胰岛素及胰腺组织等指标进行检测。结果显示:第42天,与正常对照组相比,模型组大鼠体质量显著升高(P0.05),血糖无明显差异(P0.05),糖耐量曲线下面积增大(P0.05),胰腺外分泌腺内大量脂肪异位沉积;第56天,与正常对照组相比,模型组体质量显著降低(P0.05),血糖、血清胰岛素、胰岛素抵抗指数显著升高(P0.05),糖耐量曲线下面积显著增大(P0.05),胰岛素敏感指数显著降低(P0.05),胰岛减小、减少,胰岛形状不规整,部分胰岛细胞内脂质沉积;模型组成模率70%、死亡率5%、淘汰率25%。结果表明:对SD大鼠采用高脂高糖配方饲料结合低剂量链脲佐菌素腹腔注射可成功制备Ⅱ型糖尿病大鼠动物模型,并具有Ⅱ型糖尿病基本特征胰岛素抵抗及胰岛β细胞轻度损伤同时出现的临床特点,是研究Ⅱ型糖尿病及其新药开发的理想动物模型。     

双峰驼奶对2型糖尿病大鼠肾组织结构及其细胞凋亡的影响

观察双峰驼奶对2型糖尿病大鼠肾组织结构及其细胞凋亡的影响,为临床预防和治疗糖尿病及其并发症提供理论参考。通过链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）结合高糖高脂饮食诱导构建2型糖尿病（type 2diabetes mellitus,T2DM）大鼠模型,糖尿病大鼠随机分为糖尿病模型组（diabetes model control,DMC）、低剂量骆驼奶组（2ml/d）（low camel milk,LCM）、高剂量骆驼奶组（5ml/d）（high camel milk,HCM）和盐酸二甲双胍组（200mg/kg）（metformin hydrochloride,MTH）,每组12只,另设正常对照组（control group,C）。建模成功后,试验组处理4周后检测大鼠空腹血糖（FPG）浓度变化;采用苏木精-伊红（HE）染色方法检查肾脏组织的病理变化;采用荧光定量Real time-PCR法检测Bax（Bcl2-associated X protein,Bax）、Bcl-2（B cell lymphoma/lewkmia-2,Bcl-2）、细胞凋亡蛋白酶3（cysteinyl aspartate specific proteinase 3,Caspase 3）和核转录因子（nuclear factor-kappa B,NF-κB）mRNA的表达丰度;采用免疫组织化学染色法和免疫印迹法观察肾脏组织凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达变化。结果显示,与DMC组相比,LCM、HCM、MTH组大鼠FPG浓度均显著下降（P〈0.01）,LCM组大鼠胰岛素敏感性指数（ISI）显著升高（P〈0.01）;HE染色显示DMC组肾小球体积增大,囊腔变小,肾小球内出血严重,而LCM、HCM、MTH组肾小球体积、囊腔间隙较正常,肾小球出血明显减少;Bax mRNA和NF-κB mRNA在DMC组中表达量最高,Bcl-2mRNA和Caspase 3mRNA分别在LCM组和HCM组有较高的表达量;与DMC组相比,LCM、HCM、MTH组大鼠肾脏细胞Bax蛋白表达减低,Bcl-2蛋白表达升高。结果表明,双峰驼奶能显著降低糖尿病大鼠肾脏损伤,抑制其细胞凋亡,对糖尿病及其并发症的治疗发挥有效作用。     

蜂胶对糖尿病大鼠蛋白质代谢的影响

将复制糖尿病模型的72只SD大鼠随机分为模型组，蜂胶水提取液1(WSP1)，蜂胶水提取液2(WSP2)蜂胶醇提取液1(EEP1)，蜂胶醇提取液2(EEP2)，阳性对照组(拜糖苹)，另取12只为正常组。除正常组和模型组外，各组分别给予不同的实验药物，给药7周后，抽血测总蛋白、白蛋白，同时计算球蛋白和白蛋白，球蛋白。结果发现，蜂胶能降低糖尿病大鼠体内蛋白质的消耗，升高糖尿病大鼠体内总蛋白、白蛋白水平，同时升高白蛋白，球蛋白的比值。表明蜂胶可以调节糖尿病大鼠体内蛋白质的代谢。     

蜂胶对糖尿病大鼠肾脏的影响

将复制糖尿病模型的72只SD大鼠随机分为模型组、蜂胶水提液低剂量组(WSP1),蜂胶水提液高剂量组(WSP2)、蜂胶醇提液低剂量组(EEP1)、蜂胶醇提液高剂量组(EEP2)和阳性对照组,另取12只为正常组.除正常组和模型组外,各组分别给予不同的试验药物.给药7周后,抽血测生化指标,同时取肾脏,计算肾脏/体重.结果发现蜂胶能降低糖尿病大鼠的尿酸、尿素、肌酐水平,并且蜂胶给药组大鼠的肾重/体重均比模型组低,表明蜂胶对糖尿病机体内的肾脏组织具有保护作用.     

SD大鼠2型糖尿病动物模型的建立及胰腺组织SUR1 mRNA的表达

[目的]链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）结合高糖高脂饮食诱导建立2型糖尿病大鼠模型,检测体重、血糖、胰岛素、胰岛素敏感指数（ISI）、胰腺组织SUR1 mRNA表达的变化。[方法]30只健康雄性SD大鼠随机分为模型组（20只）、空白组（10只）。模型组喂饲高糖高脂饲料4周后,用STZ 30mg/（kg·bw）一次性左下腹腔注射。检测注射STZ后第1周、第4周、第8周、第12周空腹体重、血糖、胰岛素、胰岛素敏感指数等指标,进行统计分析。剖杀大鼠,取胰腺,RT-PCR方法检测胰腺组织SUR1 mRNA的表达。[结果]动物成模率为75%。注射STZ后1、4、8、12周,模型组血糖值均明显升高,与空白组比较,P〈0.01;ISI均明显降低,与空白组比较,P〈0.01。模型组SUR1 mRNA表达显著低于对照组（P〈0.05）。[结论]STZ一次性左下腹腔注射结合高糖高脂饮食可成功诱导2型糖尿病大鼠模型。SUR1 mRNA的降低可能是糖尿病发病的分子机制之一。