禽副粘病毒Ⅰ型鹅源分离株YG97和鸡源分离株Y98在体外培养细胞中的形态发生

用禽副粘病毒Ⅰ型鹅源分离株YG97和鸡源分离株Y98的鸡胚尿囊液毒感染原代CEF，制作超薄切片，运用透射电镜观察，结果显示，2株病毒引起CEF细胞器肿胀等轻微的超微结构改变，但不引起细胞的皱缩和裂解。结果表明鹅源YG97分离株和鸡源Y98分离株与NDV强毒株F48E8在致细胞病变特性上的差异。透射电镜观察结果还表明：鹅源分离株YG97鸡源分离株Y98在培养细胞上的形态发生与鸡新城疫病毒F48E8强毒株相似，是由细胞核复制的“纤丝样”结构出核孔在细胞浆内发育而成的。     

禽副粘病毒型鹅源分离株YG_(97)和鸡源分离株Y_(98)在体外培养细胞中的形态发生

用禽副粘病毒型鹅源分离株YG97和鸡源分离株Y98的鸡胚尿囊液毒感染原代CEF,制作超薄切片,运用透射电镜观察,结果显示,2株病毒引起CEF细胞器肿胀等轻微的超微结构改变,但不引起细胞的皱缩和裂解。结果表明鹅源YG97分离株和鸡源Y98分离株与NDV强毒株F48E8在致细胞病变特性上的差异。透射电镜观察结果还表明鹅源分离株YG97、鸡源分离株Y98在培养细胞上的形态发生与鸡新城疫病毒F48E8强毒株相似,是由细胞核复制的“纤丝样”结构出核孔在细胞浆内发育而成的。     

禽副粘病毒I型结构蛋白分析

鹅副粘病毒ＹＣ９７分离株,鸡源Ｖ９８分离株以及新城疫病毒（ＮＤＶ）Ｆ４８Ｅ８、ＬａＳＯｔａ和Ｃ３０毒株,鸽副粘病毒ＹＺＰＮＦ２分离株经鸡胚增殖纯化后,进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳,结果显示ＹＧ９７和Ｙ９８２个毒株在５６ｋＤ处比另外４个毒株多出一个条带。用单抗２０１０株进行Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ转印,结果该单抗只对ＹＧ９７和Ｙ９８２个毒株的５６ｋＤ条带反应,证明这２株病毒的结构蛋白与经典的新城疫病毒有     

鹅副粘病毒YG97分离株HN蛋白基因的克隆与序列分析

鹅副粘病毒分离株YG97经10日龄鸡胚增殖后纯化，提取病毒的基因组RNA，采用RT－PCR一次性扩增出与预期设计的1.9kb大小相符合的特异性条带。将扩增产物提纯后克隆入pGEM^R-T载体，经转化、筛选及酶切鉴定后，初步获得了含鹅副粘病毒HN基因的阳性克隆，进一步进行了序列测定。序列分析表明所扩增的病毒的HN基因片段的长度为198bp，共编码571个氨基酸。同源性分析表明，YG97与LaSota毒株核苷酸同源性为79％，氨基酸的同源性为87％。与台湾1995年分离株Taiwan/95核苷酸和氨基酸的同源性分别为93％、96％，说明YG97与Taiwan/95亲缘关系较近，具有较高的相似性。与国内外部分发表的其它NDV毒株的核苷酸同源性在80％－84％之间，氨基酸的同源性在87％－91％之间。同源性分析表明YG97相对于经典的NDV在HN基因上发生了较大的变异。     

鸡副粘病毒病病毒特性和基因型的研究及防制

用ＳＰＦ鸡胚分别从不同患病鸡群分离到４株病毒,经病毒形态、结构、理化和生物学特性、血清学等研究,本病毒为禽副粘病毒Ⅰ型,根据国际上规定三项判定新城疫毒力的标准,４株病毒均具有与新城疫病毒速发型相似的毒力,属于强毒力的毒株;人工感染７１周龄ＳＰＦ鸡均１００％发病致死;应用一株鹅副粘病毒制备的单克隆抗体获具有对禽副粘病毒Ⅰ型共同的单抗和公对鹅副粘病毒毒株和鸡副粘病毒毒株呈阳性反应,而对新城疫Ｆ１６Ｅ８     

两株新分离的APMV-I毒株感染SPF鸡的超微病理变化

将APMV-I鹅源分离株YG97鸡源分离株Y98和NDV强毒株F48E8感染SPF鸡，运用透射电镜观察该2株病毒分离株对机体细胞的影响，结果显示3株禽副黏病毒均引起机体肝、胰、脾、肾、心、胃、十二指肠和直肠等实质器官组织细胞的超微病变，如黏膜上皮细胞多处受损，表面微绒毛脱落；实质细胞核固缩、凝聚、凹陷、核多形性，线粒体嵴断裂、空泡样变、膜溶解，粗面内质网扩张、囊泡变，细胞浆的囊泡内及细胞浆内存在有囊膜的成熟病毒粒子等，但YG97和Y98对不同实质器官的组织细胞超微病变程度不一：胃、肝、胰、脾、肾超微病变比心脏的超微病变严重。电镜观察结果还表明：3株禽副黏病毒引起宿主细胞的超微病变有2种形式：坏死性病变和凋亡性病变。     

鹅源禽副粘病毒NA-1株HN蛋白基因的遗传变异研究

鹅副粘病毒分离株NA-1株经11日龄鸡胚增殖后纯化。提取病毒的基因组RNA，采用RT-PCR扩增出与预期设计的1．7kb大小相符合的特异条带。将扩增产物提纯后克隆入pMD18-T载体，经纯化、筛选及酶切鉴定后，初步获得了含鹅副粘病毒HN基因的阳性克隆，并对阳性克隆进行了测序。测序后拼接得出HN基因的全序列长度为1740bp，该基因的ORF总长为1716bp，编码571个氨基酸。与GenBank下载的15株参考毒株比较HN基因编码区全核苷酸序列，发现所测NA-1株与国内标准强毒株F48E9核苷酸的同源性为84．5％，氨基酸的同源性为89．5％；与传统的疫苗株La Sota核苷酸的同源性为82．2％，氨基酸的同源性为88．5％；与鹅源禽副粘病毒SF02株核苷酸的同源性为97．1％，氨基酸的同源性为97．4％；与鹅源禽副粘病毒YG97株核苷酸的同源性为97．3％，氨基酸的同源性97．4％。说明NA-1株和SF02株、YG97株亲缘关系较近，它们三者可能有着共同的来源。根据基因树分析，NA-1株应属于基因VII型新城疫病毒。由此更进一步证实新城疫可以感染水禽，且对鹅具有高度的致死性。     

鹅副粘病毒冻融前后EID50比较

病毒在分离培养过程中,常需要冻融使病毒从组织中充分释放,但反复冻融可能使许多病毒很快灭活。为此,本人利用鹅副粘病毒分离株进行了冻融前后效价对比,以探索其变化规律,现报告如下:1材料和方法1.1种毒鹅副粘病毒YG97株,由扬州大学畜牧兽医学院王永坤教授惠赠。1.2SPF鸡胚本中心SPF鸡场提供。1.3鸡胚半数感染量的测定YG97种毒1押1000稀释,尿囊腔接种10日龄SPF鸡胚,每胚0.1ml,37℃继续孵化,分别收集正常死亡鸡胚的尿囊液、尿囊膜和胚体作为试验材料。每种试验材料均分成2组,第一组冻融一次,第二组不冻融,然后按常规方法,每种材料10倍…     

H9N2亚型禽流感病毒抗原性变异的研究

对1998—2002年间在河南省豫北地区分离到的5株H9N2亚型禽流感病毒的抗原性变异进行了研究。经HI试验、鸡胚中和试验、细胞中和试验及攻毒保护试验证明，5株H9N2亚型间已经发生了抗原性漂移。98A5和99S毒株间的保护力接近100％，HI试验、鸡胚中和试验、细胞中和试验的相关性均在0．74以上。表明2毒株间的抗原性相近；用00Y毒株攻击其他4株免疫的鸡，其保护率仅为60％～80％；而02Y株对除00Y株外的4株的免疫保护率分别为60％、75％、80％、100％，与分离年代呈负相关性，HI、鸡胚中和试验、细胞中和试验也取得类似结果，说明2000年后的毒株间已发生抗原性变异。     

鸡新城疫地方强毒SC01株HN基因片段的克隆与分析

用设计的1对特异性引物，对一株从成都地区分离的鸡源性NDV强毒SC01株的HN基因的526bp片段进行克隆与分析。分析结果表明，SC01株HN基因与相比较的12株鸡源性毒株的HN基因的核苷酸同源性为81．4％-94．6％，核苷酸所推导的氨基酸同源性为88．0％～94．8％。对SC01株和CH185、F02、GD／1／98／goose、YG97、JS／3／98／goose、JS／5／01／goose、JS／2／98／goose等毒株的HN基因进行聚类分析，证明它们属同一亚群，SC01株属于NDV基因Ⅶ型毒株，证明了基因Ⅶ型NDV毒株在四川地区存在。     

鹅副粘病毒NA-1分离株HN蛋白基因的克隆与序列分析

鹅副粘病毒分离株NA-1经11日龄鸡胚增殖后纯化.提取病毒的基因组RNA,采用RT-PCR扩增出与预期设计的1.7kb大小相符合的特异条带.将扩增产物提纯后克隆入pMD 18-T载体,经纯化、筛选及酶切鉴定后,初步获得了含鹅副粘病毒HN基因的阳性克隆,并对阳性克隆进行测序.测序后拼接得出HN基因的全序列长度为1 740bp,该基因的ORF总长为1 716 bp,编码571个氨基酸.与GenBank下载的15株参考毒株比较HN基因编码区全核苷酸序列,发现所测NA-1毒株与参考毒株YG97核苷酸序列同源性为97.3%,与F48E9同源性为84.5%,与La Sota为82.2%.同源性分析表明NA-1相对于NDV在HN基因上发生了较大的变异.     

3个不同基因型新城疫病毒间的抗原同源性比较

分别以鸡新城疫病毒（NDV）基因Ⅱ型弱毒疫苗株LaSota、基因Ⅶ型鸡源野毒株Y98F9和基因Ⅵ型鸽源野毒株PB9601为灭活疫苗，制备相应的抗血清。将3株病毒分别与相应的抗血清做交叉血凝抑制试验（HI）和在细胞培养上做交叉病毒中和试验（VI）．以此比较3个基因型病毒间的抗原同源性关系。在交叉HI中，LaSota株与基因Ⅶ型的Y98F9株间的同源性为90．0％，而基因Ⅵ型的鸽源PB9601株与Y98F9株间的抗原同源性仅为74．2％，与LaSota株间的抗原同源性更低至65．2％。在交叉VI中，也表现出非常类似的同源性关系，LaSota株与Y98F9株间的同源性为90．1％，而鸽源PB9601株与Y98F9株间的同源性也仅为75％，与LaSota的同源性进一步低至65．8％。     

鹅副粘病毒不同来源分离株血凝特性及ELD50的比较

鹅副粘病量 种新发现的由副粘病毒引起的能引起不同年龄鹅发病和不同程度致死的疾病，为了研究其病毒特性，我们用分离鉴定的11株鹅副粘病毒，分别在SPF鸡胚传代至2-11代后用鸡、鸭、鹅、鸽、鹌鹑的红细胞作血凝试验，测出各毒株的凝集价，证明所分离的11株病毒均不同程度地凝集上述5种禽类的红血球，同时分别测定10株病毒的ELD50，结果表明各毒株的ELD50在8-12之间。     

鸡病毒性关节炎病毒C-98分离株S1基因的克隆与序列分析

提取鸡病毒性关节炎病毒（AVAV）内蒙古分离株（C-98株）总RNA，参考GenBank中禽呼肠孤病毒（ARV）S1133株S1基因序列设计了2对引物，应用RT—PCR技术扩增了病毒S1基因，将S1基因cDNA克隆到pGEM—T Easy载体后测序。将测定序列拼接后与参考毒株ARV-176、ARV-138、ARV-S1133、MDRV—YJL的S1基因序列进行了比较。结果显示，AVAV C-98分离株的S1基因与强毒株ARV-176株的同源性最高，达99．9％；与MDRV—YJL的同源性为99．3％，与弱毒疫苗株ARV—S1133的同源性也达97．9％；与ARV-138株的同源性最低，为81．2％。表明，AVAVC-98株与参考毒株的差异较小，与疫苗株ARV-S1133有很高的同源性。     

禽副粘病毒Ⅰ型抗原性差异初探

本文应用单克隆抗体排谱和血清学试验，对近年来分离到的鸡源、鹅源禽Ⅰ型副粘病毒以及经典的鸡新城疫病毒和鸽源禽Ⅰ型副粘病毒之间的抗原性差异进行了比较，证明近年来流行的病毒株的抗原性较经典毒株发生了较大变化。     

禽副粘病春Ⅰ型抗原性差异初探

本文应用单克隆抗体排谱和血清学试验，对近年来分离到的鸡源、鹅源禽Ⅰ型副粘病毒以及经典的鸡新城疫病毒和鸽源禽Ⅰ型副粘病毒之间的抗原性差异进行了比较，证明近年来流行的病毒株的抗原性较经典毒株发生了较大变化。     

禽副粘病毒Ⅰ型抗原性差异初探

本文应用单克隆抗体排谱和血清学试验，对近年来分离到的鸡源、鹅源禽Ⅰ型副粘病毒以及经典的鸡新城疫病毒和鸽源禽Ⅰ型副粘病毒之间的抗原性差异进行了比较，证明近年来流行的病毒株的抗原性较经典毒株发生了较大变化。     

RT—PCR对新城疫病毒（NDV）分离株的鉴定及其临床应用

采用新城疫病毒的通用引物PA PB、强毒引物PA PC、弱毒引物PA PD对11株贵州新城疫分离毒株与4株新城疫参考毒株进行了RT-PCR扩增.结果15株新城疫毒株均被PA PB引物扩增出359 bp的条带,F48E8、ND98、Fw、H2、P3、BY、L2、P1,P2被PA PC引物扩增出254 bp的条带,而PA PD引物未扩增出DNA条带;ND89、Lasota被PA PD引物扩增出254 bp的条带.而PA PC引物未扩增出DNA条带.采用3对引物对自然发病斗鸡脑、脾、咽喉试子、泄殖腔试子进行RT-PCR检测,确诊为斗鸡新城疫强毒感染,且与传统病毒分离与毒力鉴定的结果相一致.     

传染性法氏囊病病毒的分离与鉴定

从中国广东省发生传染性法氏囊病的鸡场分离了8株传染性囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)毒株,运用RT-PCR对分离毒株进行了鉴定,测定了8个分离株的ELD50以及其对SPF鸡的致死率。结果表明:这8株分离毒对SPF鸡的致死率均等于或超过60%,属于超强毒。运用RT-PCR方法对分离毒株进行了鉴定并对各毒株VP2基因高变区进行扩增测序,分析结果表明:这8株分离株均为IBDV超强毒株,同时也说明当前在广东省引起鸡传染性法氏囊病的主要毒株类型多为超强毒IBDV。     

广东省新城疫病毒地方强毒株的分离鉴定

从广东省各地方分离10余株地方强毒株，对其中的五株地方强毒株进行了分离鉴定，将各毒株病肝研磨离心后取上清，绒毛尿囊腔接种9-11日龄的鸡胚，鸡胚接种后36-42h死亡，鸡胚全身出血，含病毒的尿囊液红血球凝集效价（HA）为1：9^9-1:2^15，并能被ND阳性血清特异性抑制，却不能被AIVH5亚型血清所抑制，用自己设计的特异性检测引物，对五个毒株进行了PCR鉴定，可扩增出特异性的目的条带，再结合临床症状和剖检病变，可初步判定为新城疫病毒，为以后进行广东省新城疫病毒分子流行病学研究打下了基础。