山羊瘤胃中固氮细菌的分离与初步鉴定

通过瘤胃瘘管采集山羊瘤胃液,分离瘤胃优势菌,并在不同气体环境(纯N2、纯CO2、氩气或空气)下应用无氮培养基培养,考察瘤胃优势菌对氮气的利用情况,并初步进行了微生物学鉴定。结果表明,纯N2条件下,菌株YUAN63和菌株YUAN100在无氮培养基上能生长,与空气条件下相当,但在CO2条件下未有可见菌落,在氩气条件下仅有少数小菌落。研究结果说明了瘤胃细菌中存在一类能利用氮气的细菌,但仍需进一步确定。     

一株犬种布鲁氏菌的分离鉴定及其在巨噬细胞内存活能力的研究

为分离鉴定流产犬的致病病原及其生物学特性，本研究从重庆某宠物医院无菌采集流产犬全血2份，将其涂布于布鲁氏菌选择培养基，分别在不含CO2和含7.5%CO2条件下37℃培养72 h，观察菌落形态，并经结晶紫染色，观察细菌类型。按照国家标准鉴定分离菌的生化特性。细菌分离结果显示，在不含CO2和含7.5%CO2的培养箱中2份流产犬全血样品在布鲁氏菌选择培养基上均长出边缘整齐、光滑的圆形菌落，透射光下，菌落呈浅黄色且有光泽；结晶紫染色结果显示分离菌为典型的粗糙型细菌；生化鉴定结果显示，分离株在TSA中的生长不依赖于CO2，且不产生H2S，氧化酶和脲酶试验均为强阳性。上述结果表明分离到一株犬种布鲁氏菌，命名为B. canis CQ3。对分离菌进行全基因组测序，利用MAUVE对分离株与GenBank中38株不同种的布鲁氏菌基因组进行比对，并构建分离菌全基因组的进化树。将不同种布鲁氏菌及分离株分别接种于TSB培养基中，通过测定不同时间的OD450nm值绘制各菌株的生长曲线。将各菌株及B. canis CQ3株分别以MOI 100感染小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7，在感染后的不同时间(1 h、24 h...     

规模化奶牛养殖场空气中可培养微生物的研究

为了了解唐山地区规模化奶牛养殖场空气中微生多样性及种群分布情况,试验采用自然沉降法采集唐山市郊某规模化牧场榨乳间(NT)、贮奶厅(M)和奶牛运动场(YDC)3个不同场所的空气微生物样本并进行纯培养,分离其中的细菌和真菌,运用16S rRNA基因测序鉴定纯培养物的种属,根据菌株形态和鉴定结果选取代表菌株进行种群分布与多样性研究。结果表明:榨乳间共纯培养出26株菌,运动场共纯培养出17株菌,贮奶厅共纯培养出13株菌;榨乳间的NA培养基上的菌落总数明显多于运动场,运动场的菌落总数明显多于贮奶厅,推测可能与采样时间、场所通风、卫生情况有关。其他培养基上的菌落总数在3个不同空间也有差异。56株代表菌株分别归属于18个属,榨乳间空气样本微生物种类最为丰富,分离到包含多种芽孢杆菌、葡萄球菌和曲霉菌等10个属21种微生物;贮奶厅有8个属12种微生物;运动场筛选到10个属16种微生物。芽孢杆菌属、葡萄球菌属和曲霉菌属为3个场所的优势菌属,但不同场所条件致病菌群也存在一定的差异性。说明奶牛养殖场空气微生物种类丰富,存在的条件致病菌对人和动物有潜在健康风险。     

规模化奶牛场空气细菌数量与乳房炎发生的相关性调查

本试验采用自然沉降法对规模化奶牛场泌乳奶牛舍进行空气细菌含量检测,同时对空气中细菌和乳房炎奶牛乳汁中细菌进行分离鉴定。结果表明,不同牧场不同培养基的细菌菌落总数均不同,在NA培养基上,细菌菌落总数B场10.97×10~3 cfu/m~3C场10.17×10~3 efu/m~3A场8.78×10~3 cfu/m~3;运动场细菌菌落总数少于牛舍内。3个牧场奶牛乳房炎的发病率分别是B场32.14%C场的30.91%A场29.25%,空气中的细菌菌落总数与奶牛乳房炎的发病率呈正相关。从3个牧场牛舍空气样本中分离到221个菌株,有金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、产气肠杆菌、沙门菌、停乳链球菌、无乳链球菌和肺炎链球菌等主要病原菌。A、B牧场主要是葡萄球菌,占分离菌的75.34%和60.61%。其中金黄色葡萄球菌分别占45.21%和22.73%。C牧场牛舍空气中主要是肠杆菌,占分离菌的51.23%,其中大肠埃希菌占31.70%。3个牧场乳房炎奶牛乳汁中所检测到的主要病原菌分别是:A、B牧场主要是葡萄球菌,占分离菌的48%和57.96%,其中金黄色葡萄球菌分别占24%和23.8%;C牧场主要是肠杆菌,占分离菌的50%,其中大肠埃希菌占18.8%,沙门菌占9.09%。奶牛场空气中主要病原菌的种类和乳房炎奶牛乳汁中主要病原菌的种类基本一致。     

西藏农区黄牛主要瘤胃微生物及瘤胃液物质特征值

通过测定牛瘤胃液中N源、可溶性糖含量,统计分类纤毛虫数量和改良纤维分解细菌选择性培养基等方法,发现瘤胃内 NH+1-N、NO-3-N、全N和可溶性糖处在一个动态变化过程,含量的高低取决于瘤胃内食糜的养分、食糜和瘤胃液在瘤胃中的排空时间,同时鉴定了西藏黄牛瘤胃液中12种不同属的纤毛虫、4个主要纤维素分解细菌和厌氧真菌的数量变化特点.结果表明,NH+4-N含量变化较小,在平均值(71.279 9±15.120 5)mg/L浮动;NO-3-N在AM 10:00达到最高值;全N在AM 8:00和16:00含量最高.通过试验改良的纤维素菌培养基能较好地培养瘤胃内4种细菌,为更进一步研究瘤胃内微生物提供了一条途径.     

不同乳牛舍环境空气中细菌含量的比较研究

采用自然沉降法对南京3个规模化奶牛场和3个奶牛小区泌乳奶牛舍内细菌含量进行监测和比较。结果显示,牛舍环境空气中的细菌菌落总数,不同的牛舍不同采样点、不同的培养基其结果均不相同。运动场细菌菌落总数少于牛舍内。NA培养基菌落数最高达33.81×103 CFU/m3,MAC和S.S培养基在多个分布点无细菌生长。6个牧场空气中的细菌菌落总数为F场＞E场＞B场＞C场＞A场＞D场。牛舍的空气细菌总数与牛舍规模化程度无关,而与各牧场牛舍卫生管理有很大的相关性。从270个样本中共分离到338株细菌,A、B牧场主要是葡萄球菌,分别占分离菌的75.34%（55/73）和60.61%（40/66）;C、E、F牧场主要是肠杆菌,分别占分离菌的51.22%（42/82）、62.16%（23/37）、61.11%（33/54）;D牧场葡萄球菌占分离菌的46.15%（12/26）,肠杆菌和链球菌分别占26.92%（7/26）。结果表明,规模化奶牛场和奶牛小区空气细菌总数无明显差异。     

不同饲粮条件下湖北黑头羊瘤胃细菌多样性及群落结构分析

旨在研究不同饲粮条件下湖北黑头羊瘤胃细菌多样性及群落结构。选取15只健康的湖北黑头山羊公羊,随机分为5组,每组3只,分别饲喂花生藤(A组)、苜蓿(B组)、苜蓿+花生藤(C组)为粗饲料来源的颗粒型全混合日粮以及进口苜蓿草颗粒(D组)和新疆苜蓿草颗粒(E组),试验期共45 d,其中预试期15 d。在试验结束后第1天,经口腔抽取瘤胃液抽提基因组DNA,采用Illumina Miseq PE300平台对瘤胃细菌进行分析。结果表明:1)在97%相似性水平下,5组样品共产生851个操作分类单元(OTU),共享295个OTU,占瘤胃液细菌总OTU数目的34.67%,D组在各组中α多样性指数指标(Ace指数、Chao1指数和Shannnon指数)最高,而3组颗粒型全混合日粮中A、C组高于B组(P<0.05,P<0.01);2)瘤胃中拟杆菌门(Bacteroidetes)、厚壁菌门(Firmicutes)、无壁菌门(Tenericutes)为各组优势菌门,D组中的拟杆菌门显著高于B组(P<0.05),而厚壁菌门显著低于D组(P<0.05),而A、B、C组间拟杆菌门、厚壁菌门含量差异不显著(P>0.05);3)普雷沃氏菌属1(Prevotella_1)、1种未鉴定的属(Unidentified genus)、理研菌属RC9(Rikenellaceae_RC9_gut_group)为优势菌属,其中D组普雷沃氏菌属含量较高,A组与C组,D组与E组的遗传距离更接近。综合得出,苜蓿草颗粒品质和颗粒型全混合日粮中精料含量能影响湖北黑头羊瘤胃细菌的多样性;全苜蓿饲粮条件下湖北黑头羊瘤胃存在独特的细菌群落结构,细菌多样性最高。     

硝化细菌的分离鉴定

应用硝化细菌选择性培养基,从南京的土壤和水体中筛选到6株硝化细菌,包括3株亚硝化菌和3株硝化菌,对其生理生化特性、温度敏感性、耐盐性、抗生素抗性、及硝化能力等生物学特性进行了测定。结果表明,6株细菌均为G-,菌体杆状或球状。生长缓慢,培养120 h以后才进入对数生长期,5 d左右形成菌落。最适生长温度为25~30℃。耐受偏碱环境。不耐盐,6株菌都能耐受的盐浓度范围是0.05%~0.3%。通气量对该菌的生长没有太大影响。6株菌株对不同的抗生素具有抗性。其中,菌株J2的抗药谱最窄,只抗卡那霉素。6株菌只能在以碳酸钠或者碳酸氢钠为唯一碳源、以硫酸铵或者亚硝酸盐为唯一氮源的培养基上生长良好。菌株硝化能力不同,其中菌株J2硝化能力较强,在基础培养基中200 h,该菌转化NO2-42%左右,可以作为降解鱼塘中和饲料中亚硝酸盐的硝化菌候选株。     

桑树根际解磷细菌的分离鉴定及解磷能力测定

桑树根际解磷细菌能够改善桑树营养,促进根系生长。利用选择性培养基,从桑树根际分离获得32个具有解磷能力的细菌分离物,经rep-PCR基因指纹分析得到19株解磷细菌。经解磷能力测定,PYP2、PYP4、PYP6、FYP2菌株具有较强的解有机磷能力,FWP7、PWP4菌株具有较强的解无机磷能力,FWP1、FWP9、FWP11、PYP6和PWP1菌株的解有机磷和无机磷能力均较强。利用菌落形态特征观察及16S rDNA碱基序列测定和同源性分析,对具有较高解磷能力的菌株进行了鉴定:FWP1、FWP11、PYP2、PYP6、FYP2菌株为假单胞菌属(Pseudomonas sp.),FWP9和PWP1菌株为贪噬菌属(Variovorax sp.),FWP7、PWP4菌株为根瘤菌属(Rhizobium sp.)。     

桑树根际固氮细菌的分离鉴定及固氮酶活力测定

利用固氮细菌可降低桑园化肥使用量和提高桑叶产量与品质。采用选择性培养基,从桑树根际分离获得24个具有固氮能力的细菌分离株,以rep-PCR基因指纹分析聚类为18个聚类群。经固氮酶活性测定,PA19、PA2和PK1菌株具有较强的固氮酶活性。利用菌落形态特征观察及16S rDNA碱基序列测定和同源性分析,对3株细菌进行鉴定的结果是:PA19菌株为中慢生根瘤菌属(Mesorhizobium sp.),PA2菌株为假单胞菌属(Pseudomonas sp.),PK1菌株为土壤杆菌属(Agrobacterium sp.)。