青岛地区球虫虫株的分离及其鉴定

为获得纯种的球虫虫株,取病料镜检,经过离心,用饱和食盐水漂浮法收集鸡球虫卵囊,培养48h后得到混合的孢子化卵囊.用玻璃纸法进行单卵囊分离,并接种雏鸡,获得两株纯种球虫虫株,试验感染率为20%,经鉴定均为柔嫩艾美耳球虫属虫株.     

堆型艾美耳球虫与柔嫩艾美耳球虫卵囊最短孢子发育时间的测定

将收集到的新排出的堆型艾美耳球虫(E.acervulina)与柔嫩艾美耳球虫(E．tenella)卵囊于29℃静态系统中孢化。以30min为间隔，对卵囊孢子发育的4个阶段在显微镜下进行观察。以1h为间隔，用发育中的卵囊连续接种无球虫鸡，以确定最短孢子发育时间(MST)。对影响孢子发育的外部因素进行了初步探讨。用堆型艾美耳球虫比较不同卵囊浓度，不同悬液深度在卵囊孢化过程中第20h时子孢子形成的卵囊百分率。E.acervulina与E.tenella的MST分别为11b与18b。卵囊浓度和悬液深度与孢子发育时间呈明显反比关系。     

紫外线照射对鸡柔嫩艾美耳球虫活力的影响

用紫外线(UV)对柔嫩艾美耳球虫杨凌株卵囊分别垂直照射不同时间,观测其孢子化率并测定活力,分析紫外线照射对鸡球虫卵囊的致弱作用。结果,照射时间分别为10,20,30,40,50和60 min时,卵囊的相对孢子化率分别为94.39%,81.63%,72.96%,53.06%,21.94%和8.16%,随照射时间的延长,相对孢子化率明显下降,长时间的UV照射对卵囊的发育影响显著;UV作用10 min对卵囊活力影响不大,随着照射时间的延长,其活力逐渐下降,在照射30~40 min的情况下,相对增重率在70%左右,克粪便卵囊数(OPG)也维持在较高水平。表明采用波长2 650的UV进行垂直不连续照射球虫卵囊,时间控制在30 min左右为宜。     

亚硝基谷胱甘肽对孢子化卵囊、孢子囊活力及致病力的影响

以亚硝基谷胱甘肽(S-nitroso-glutathione,GSNO)处理柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)卵囊和孢子囊,通过检测子孢子的脱囊情况以及卵囊和孢子囊的致病力来探讨GSNO对E.tenella卵囊和孢子囊活力的影响。体外脱囊试验结果表明,GSNO处理孢子囊的脱囊率只有1.01%~1.48%,而GSNO处理的孢子化卵囊的脱囊率为45.73%~63.90%。接种试验表明,各接种组鸡均发生了明显的临床球虫病,但与攻毒对照组相比,只有GSNO处理的孢子囊组鸡的发病情况有所减轻,这说明GSNO能明显抑制孢子囊的脱囊,并能在一定程度上减轻其致病力,而对孢子化卵囊无明显抑制作用。     

不同发育期两种艾美耳球虫在鸡消化道内的分布

对柔嫩艾美耳球虫Eimeria teenlla和巨型艾美耳球虫Eimeria maxima的卵囊、孢子囊和子孢子在鸡消化道和粪便中的分布情况进行了研究。口服接种柔嫩艾美耳球虫卵囊第1小时后,盲肠内孢子囊数为3.4×10~8、以后则逐渐减少;而子孢子数增加且直到接种后第12小时仍保持一个高水平。其它肠段只有少量的孢子囊和子孢子。在接种巨型艾美耳球虫卵囊后的第2小时,主要在空肠内发现有大量的子孢子。研究发现,柔嫩艾美耳球虫和巨型艾美耳球虫的绝大多数子孢子分别寄居在盲肠和空肠内,表明每种球虫子孢子侵袭部位的特异性在侵袭发生前就确定了。     

吉林市城区鸡球虫病的流行病学调查

通过对吉林城区具有代表性的鸡场进行鸡球虫病的感染情况调查,采集鸡新鲜粪便,用饱和盐水漂浮法收集卵囊,制片镜检,观察卵囊和孢子化卵囊的形状、颜色,测量卵囊的大小,鉴定出艾美耳属球虫3种,即柔嫩艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫,其中柔嫩艾美耳球虫为优势种,其主要侵害鸡的盲肠,导致贫血、消瘦甚至死亡,发病多为15～40日龄的雏鸡,为有效预防鸡球虫病提供参考.     

毒害艾美耳球虫未孢子化卵囊壁的分离与纯化

用毒害艾美耳球虫孢子化卵囊接种50只15日龄无球虫感染的雏鸡,感染后第6~12天,每隔12 h收集1次粪便,按常规方法分离卵囊。未孢子化卵囊经次氯酸钠溶液处理后,用1.1 mol/L蔗糖溶液漂浮法纯化卵囊。采用玻璃珠涡旋法破碎卵囊壁,最后用孔径10.0μm的聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)膜过滤获得纯化的卵囊壁。研究结果为进一步研究毒害艾美耳球虫卵囊壁的结构及其蛋白组成奠定了基础。     

不同地理株柔嫩艾美耳球虫(E.tenela)杂交虫株(F2)的培育

将山东株(S)与吉林株(J)柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊通过单卵囊技术接种雏鸡,收获卵囊后提取基因组DNA,利用RAPD技术分析DNA,筛选出杂交株(F1),再用该F1代与黑龙江株(H)柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊单卵囊接种雏鸡,相同方法鉴别筛选,确定了1株为山东株、吉林株和黑龙江株三个地理株的杂交(F2)卵囊。该结果为深入研究球虫的免疫机制奠定了基拙。     

球抗预防鸡柔嫩艾美耳球虫病效果的观察

采用接种孢子化柔嫩艾美耳球虫卵囊的方法,复制鸡球虫病,观察并计算球抗对柔嫩艾美耳球虫病鸡的存活率、相对增重率、血便记分、盲肠病变记分和卵囊值的影响,并求出球抗的抗球虫指数.结果发现球抗能提高球虫病鸡的存活率和相对增重率,减少血便记分和盲肠内容物卵囊数,减轻盲肠病变.表明球抗对鸡柔嫩艾美耳球虫病有一定的预防作用.     

白头翁不同提取物及复方抗鸡柔嫩艾美耳球虫研究

以存活率、相对增重率、盲肠病变记分、卵囊值和抗球虫指数为判定指标,考察白头翁不同提取物及复方对鸡柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊致病性的影响(体外试验)和抗鸡柔嫩艾美耳球虫感染效果(体内试验)。体内、体外试验结果均表明,白头翁不同提取物及复方均能提高相对增重率,降低盲肠病变计分和卵囊值。抗球虫指数(ACI)检测表明,白头翁不同提取物及复方对球虫孢子化卵囊有微弱的抑杀效果,对鸡柔嫩艾美耳球虫感染预防效果较差,不宜作为鸡柔嫩艾美耳球虫病的预防和治疗药物。     

柔嫩艾美耳球虫对禽流感疫苗的免疫增强作用研究

为了研究柔嫩艾美耳球虫对雏鸡免疫禽流感疫苗的免疫增强作用,试验将7日龄AA肉鸡随机分为4组,每组20只,1组试验鸡皮下注射柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊,同时免疫禽流感H5亚型灭活疫苗;2组试验鸡皮下注射柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊,同时免疫磷酸盐缓冲液;3组试验鸡皮下注射磷酸盐缓冲液,同时免疫禽流感H5亚型灭活疫苗;4组试验鸡皮下注射磷酸盐缓冲液,同时免疫磷酸盐缓冲液。在免疫后第7,14,21,28天,各组随机取5只鸡采血、称重,采集胸腺、脾脏、法氏囊,计算免疫器官指数,采用血凝抑制试验检测血清中禽流感抗体效价。结果表明:各组试验鸡的平均体重差异不明显,柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊与禽流感灭活疫苗共免疫不会影响试验鸡的日增重;柔嫩艾美耳球虫与禽流感疫苗联合免疫可以促进雏鸡免疫器官的生长发育,提高雏鸡免疫器官指数和禽流感抗体效价。说明柔嫩艾美耳球虫可以调节机体对疫苗的免疫反应,促进雏鸡的体液免疫应答。     

鸡柔嫩艾美耳球虫YL株多次传代后的致病性研究

为研究多次传代后的鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)YL株的致病性,分别以不同剂量的36代次柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊感染7日龄雏鸡,通过临床症状、死亡率、血便程度、潜隐期、盲肠病变、平均增重及每克粪便卵囊数(OPG)对其致病性进行评价.结果显示,不同剂量孢子化卵囊感染雏鸡均在感染后3d～4d出现血便,球...     

柔嫩艾美耳球虫子孢子的变化

纯化的柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊，经消毒，水洗处理后放入玛瑙乳钵内研磨。研磨后的卵下混入适量消化液，在４０℃恒温水浴消化３０分钟即成为球虫子孢子粗提液。此粗提液经ＤＥ５２纤维素层析柱过滤，用甘氨酸洗脱液冲洗，收集滤液经离心沉淀即得纯化的柔嫩艾美耳球虫子孢子。     

温度对球虫消杀剂抑制鸡球虫卵囊孢子化的影响

为探讨温度对球虫消杀剂抑制鸡球虫卵囊孢子化的影响,试验以7%氨水作为对照组,设置1:50、1:100、1:150的球虫消杀剂溶液组,同时设置生理盐水对照组.各处理液分别在4℃和20℃下与柔嫩艾美耳球虫未孢子化卵囊在体外相互作用6、12和24h,然后用2.5%重铬酸钾溶液培养处理后的球虫卵囊,观察其孢子化率.结果表明:1:50、1:100、1:150球虫消杀剂在4℃分别处理6、12和24h的卵囊孢子化率均极显著(P<0.01)高于20℃下的对应处理组.球虫消杀剂在20℃下有更好的抑制球虫卵囊孢子化的作用.     

柔嫩艾美耳球虫表面抗原（EtSAG）基因的分离及鉴定

利用本实验室前期获得的柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）孢子化卵囊和未孢子化卵囊差异表达ESTs序列,选取编号为BW4-C03的孢子化卵囊,采用RACE技术,获得该基因全长序列。经BLAST分析,该序列与柔嫩艾美耳球虫表面抗原有72%以上的同源性,命名为EtSAG。利用荧光定量PCR（Real-time PCR）检测发现该基因在孢子化卵囊的转录拷贝数最高,且随着孢子化时间的延长,转录拷贝数逐渐增加。采用原核表达载体pET-28C表达该基因,得到的融合蛋白大小约为36 kDa,符合预期大小。经Western blot分析,该重组蛋白可被兔抗柔嫩艾美耳球虫的多克隆抗血清识别,表明该蛋白具有较好的反应原性。本研究结果为进一步研究该基因的生物学功能奠定了基础。     

鸡柔嫩艾美耳球虫石家庄株RT-PCR的随机扩增

<正>本试验通过使用随机引物,以石家庄地区柔嫩艾美耳球虫为模板,建立了RT-PCR方法。首先对石家庄地区柔嫩艾美耳球虫的混合卵囊进行分离纯化,提取分离纯化的孢子化卵囊的总RNA。鸡球虫病是由艾美耳属的单细胞寄生虫引起的严重危害家禽生长发育的一种疾病。鸡球虫分布广泛、危害大,严重威胁养鸡业的发展,尤其对15~30日龄的雏鸡危害严重,常常造成毁灭性的损失。其发病率高达50%~70%,死亡率20%~30%,严重时     

次氯酸钠对柔嫩艾美耳球虫卵囊孢子化的影响研究

给14日龄海兰鸡雏接种E.tenella杂交F2株（本实验室培育），7d后扑杀，刮取盲肠卵囊制成卵囊悬浊液。用不同浓度次氯酸钠（含活性氯不低于7．5％）分别处理5min、10min、15min、20min后，离心洗涤并进行卵囊计数，加2．5％的重铬酸钾，28℃环境下孢子化。于60h取样检查其孢子化率。结果表明，高浓度长时间的次氯酸钠处理时E.tenella球虫卵囊孢子化率有显著影响（P〈0．05）。     

鸡巨型艾美耳球虫单卵囊分离及雏鸡扩增试验

采用饱和食盐水漂浮法收集就诊病死球虫阳性鸡小肠中段内容物中的球虫卵囊,恒温培养至孢子化后,用2%琼脂薄板进行球虫单卵囊分离,分别感染7只5日龄雏鸡,对据形态学鉴定为巨型艾美耳球虫的分离株进行2代单卵囊分离和雏鸡感染,取其后代以每只1.0×10⁴个卵囊感染10只10日龄雏鸡进行卵囊扩增,获得大量纯种巨型艾美耳球虫卵囊。结果表明,刀片切割琼脂薄板单卵囊分离法操作简便,单卵囊感染成功率较高,准确率达100%,适用于纯种卵囊的分离与扩增。     

玉溪市一例散养土杂鸡球虫病的虫种鉴定

为了对云南省玉溪市某散养土杂鸡场一例球虫病例进行虫种鉴定，本试验通过发病情况调查、病理剖检、虫卵检查、虫卵计数、特异性引物PCR扩增、18S rRNA基因序列测序等方法进行检测分析。结果显示：病鸡盲肠粗大肿胀，肠腔内有棕黑色黏液样内容物；虫卵大小在22.922～26.621μm×17.433～19.631μm之间，每个孢子化卵囊含4个孢子囊，每个孢子囊含有2个子孢子，符合柔嫩艾美耳球虫特征；柔嫩艾美耳球虫特异性基因检测为阳性；该虫种18S rRNA基因序列与柔嫩艾美耳球虫序列的同源性最高为99.61%～99.92%，且在进化树上构成一个分支；虫卵计数卵囊数（OPG）为1.7×10⁴。试验表明该鸡场鸡群感染了柔嫩艾美耳球虫，且为中度感染；用磺胺类药物加祛湿中药治疗，疗效显著。     

毒害艾美耳球虫鸡胚培养研究

为了建立毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)的鸡胚培养体系,用毒害艾美耳球虫子孢子分别接种8～11日龄鸡胚以确定最佳接种日龄,用不同剂量子孢子接种同一日龄鸡胚以确定最佳子孢子接种剂量,并在子孢子混悬液中分别加入不同剂量的胰岛素和叶酸以观察对球虫在鸡胚中发育的影响.结果显示,毒害艾美耳球虫子孢子接种9日龄的鸡胚,其卵囊产量(平均每只胚的卵囊量)和卵囊成熟率均为最高,成熟率达到99%;当每个鸡胚接种子孢子1×104个时,其卵囊产量最高;在子孢子混悬液中分别加入胰岛素1 000 U/mL、叶酸0.05 mg/mL,均能明显增加鸡胚中的卵囊产量.本文通过对毒害艾美耳球虫的鸡胚接种日龄、子孢子接种剂量、营养物质添加等因素的研究,初步建立了毒害艾美耳球虫的鸡胚培养体系.