多形核白细胞与巨噬细胞的超微结构及抗感染作用(续)

(接2007年第1期P43)如Ⅰ型颗粒中的髓过氧化物酶是中性粒细胞所特有,即使在有强吞噬作用的巨噬细胞中也极少或完全没有这种酶。在细胞化学中,一般将髓过氧化物酶作为中性粒细胞的标志。中性粒细胞受细菌产物、抗原抗物复合物、难溶的晶状物或脂溶性物质的作用时,细胞的颗粒内容     

斑马鱼Mut-001基因的克隆及胚胎早期发育过程中的表达

为了研究斑马鱼Mut-001基因的克隆及其在个体早期发育过程中的时空表达图谱,试验提取斑马鱼胚胎的总RNA制备地高辛标记的Mut-001 RNA反义探针,采用整体胚胎原位杂交(WISH)的方法研究Mut-001基因在斑马鱼早期发育过程中的表达。结果表明:试验成功克隆斑马鱼Mut-001基因并合成Mut-001基因探针,获得Mut-001基因在斑马鱼早期发育过程中的表达情况,Mut-001基因在1 000细胞期(受精后3小时,即3 hpf)、50%外包期(受精后5.3小时,即5.3 hpf)前普遍性表达;受精后14小时(14 hpf)开始在头部、肌节边界及躯干肌肉有特异性表达;受精后24小时(24 hpf)时这些部位表达更明显并在听囊、脊索出现特异性表达;受精后36小时(36 hpf)开始除了在头部和躯干肌肉持续特异性表达外,在胸鳍原基和心脏也开始特异性表达;受精后48小时(48 hpf)时上述部位持续特异性高表达。说明Mut-001基因在早期参与了中枢神经系统与肌肉的发生,在脑部、脊索、肌肉的发育中可能起到了重要作用。     

DHP及其核受体诱导斑马鱼IFI44表达及细胞定位研究

为了明确17α,20β双羟孕酮(DHP)及其核受体调控干扰素诱导蛋白44(IFI44)mRNA在雄性斑马鱼组织中的表达机制及细胞定位,试验采用荧光定量PCR法测定IFI44 mRNA组织分布及相对表达量,采用活体和离体E_2与DHP暴露方法明确雌二醇(E_2)单独暴露及与DHP联合暴露对斑马鱼IFI 44 mRNA相对表达量,采用原位杂交方法明确IFI 44在精巢面积中的定位。结果表明:IFI44 mRNA呈组织差异性分布,脑、心脏、肌肉和肝脏中表达量较少,脾脏和精巢中表达量丰富,差异显著(P0.05);活体10 nmol/L E_2暴露野生型雄性斑马鱼21 d,取精巢组织离体100 nmol/L DHP暴露24 h,E_2+DHP处理组精巢组织IFI44 mRNA表达量显著高于单独E_2处理组(P0.05);活体10 nmol/L E_2暴露野生型和孕酮核受体敲除型雄性斑马鱼各21 d,取精巢组织离体100 nmol/L DHP暴露24 h,孕酮核受体敲除型雄性斑马鱼E_2+DHP处理组IFI44 mRNA的表达量显著低于野生型雄性斑马鱼E_2+DHP处理组(P0.05),但显著高于两种类型雄性鱼单独E_2处理组(P0.05);IFI44原位杂交试验显示基因主要表达于精巢组织支持细胞中。说明DHP及其核受体诱导表达的IFI44极大可能参与了斑马鱼精子发育过程。     

禽白血病病毒J亚群(ALV-J)基因表达与抗原定位的研究

本研究通过原位杂交(ISH)和免疫组织化学(IHC)技术检测了组织中ALV-J病毒RNA的表达及定位。原位杂交结果显示：在攻毒后3周时．所检测到的组织大部分已感染病毒；病毒对肝脏、心脏、肾脏的实质细胞、骨髓髓系细胞和卵巢基质中的间质细胞、脾脏红髓内的单核-巨噬细胞有较高的嗜性．在核膜及胞浆内显示出蓝紫色颗粒状的特异性信号，而在法氏囊、胸腺、脑和坐骨神经中检测不到病毒RNA及病毒基因的表达。免疫组化结果与原位杂交相似，在核膜及胞浆内可见蓝紫色阳性信号．瘤组织的信号较强，显示了较强的抗原性。由骨髓和其他组织的结果可推测ALV-J诱导肿瘤可能和病毒基因的插入位点有直接关系，而和病毒在组织内的数量没有直接关系。     

应用原位杂交技术研究CLK1在早期鸡胚胎发育中的表达

试验旨在探讨蛋白激酶CLK1在早期鸡胚胎发育过程中的表达情况。应用分子克隆技术构建CLK1/p MD18-T重组质粒,制备地高辛标记的CLK1 RNA原位杂交探针,利用Real-time PCR和原位杂交技术检测CLK1 mRNA在早期鸡胚胎发育中的表达及分布。Real-time PCR结果显示,CLK1 mRNA在早期鸡胚各时期中均有不同程度的表达;原位杂交结果显示,CLK1的mRNA在鸡胚的不同时期不同部位均有不同程度的表达,且在头部和尾部表达明显。本研究阐明了CLK1在早期鸡胚胎发育过程中的表达及分布,为进一步研究CLK1在鸡胚中的功能及作用机制奠定基础。     

一氧化氮合酶在猪早期胚胎发育中表达的初步研究

本研究运用分子生物学手段探究了一氧化氮(NO)在猪早期胚胎发育过程中的表达情况及其相关的规律。应用RT-PCR方法将猪各发育阶段的早期胚胎的内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS）进行检测,然后对产物进行半定量分析。结果表明,iNOS在猪早期胚胎发育的整个过程中都有表达,其相对表达量随着胚胎发育进程呈现上升的趋势,在桑葚/囊胚阶段达到最高;eNOS仅仅是在2-细胞期和4-细胞期有表达,其相对表达量在2～4-细胞期间的差异不明显;在猪2～4-细胞胚胎发育过程中,iNOS的相对表达量高于eNOS的相对表达量。结果表明,在猪早期胚胎发育中NO的产量主要由iNOS调节。     

组织原位杂交和Taq Man实时荧光定量PCR检测enJSRV及其受体HYAL2在妊娠蒙古绵羊绒毛膜中的表达

为了探究内源性绵羊肺腺瘤病毒(enJSRV)及其受体HYAL2在妊娠蒙古绵羊胚胎发育过程中的可能作用,本试验应用组织原位杂交技术和Taq Man实时荧光定量PCR对其在不同妊娠时期(30、50、70、90、110、130d)蒙古绵羊绒毛膜的分布定位和表达规律进行了研究。原位杂交结果显示,enJSRV及其受体HYAL2 mRNAs在妊娠30、50、130d蒙古绵羊绒毛膜组织的滋养层巨型双核细胞(BNC)、多核合胞体小半鞘翅(SP)和滋养外胚层(Tr)细胞中均有阳性信号表达;荧光定量PCR结果显示,在妊娠各时期绒毛膜组织中均有enJSRV及受体HYAL2的mRNA表达,通过统计学分析enJSRV mRNA的表达量于妊娠50d时最低,70d和110d相对较高,且差异都极显著(P<0.01),到130d时又降低到起始水平;受体HYAL2的表达于130d时表达量最低,90d相对较高,且差异极显著(P<0.01)。而enJSRV与其受体HYAL2 mRNA表达量之间无线性相关性。研究结果提示,enJSRV在绵羊胚胎发育过程中可能参与调节绒毛膜滋养层细胞的生长并影响胎盘的发育。     

中性粒细胞的酶激活作用和氧化杀菌机理

前言哺乳动物的血液和组织中有专门的吞噬细胞,根据细胞的形态大小可分为大吞噬细胞和小吞噬细胞。大吞噬细胞即各种组织中的巨噬细胞和血液中的大单核细胞,小吞噬细胞即血液中的中性粒细胞。中性粒细胞具有吞噬、消化异物和氧化杀菌的功能,故能抵御某些病原微生物的感染。在某种情况下,哺乳动物血液中中性粒细胞缺损是遗传学上的原因,故目前国外已将测定家畜血液中中性粒细胞的吞噬和代谢功能,作为家畜选种育种的主要依据之一。     

家蚕vasa基因的结构及表达型研究

vasa是决定生殖系发育的重要调控蛋白因子之一,具有广泛的保守性。利用家蚕基因组和EST库的数据资源,分析了家蚕vasa基因的结构,并与已有报道的18个物种的VASA蛋白质的结构域序列进行了比对分析,同时对家蚕vasa基因在家蚕胚胎发育11个时期的表达型及幼虫期8个不同组织的表达特异性进行了验证。结果表明,家蚕vasa基因包含有13个外显子,比果蝇vasa基因的外显子数量(7个)增加了6个,在第3内含子有1个转座子插入;家蚕vasa基因在未受精卵和胚胎发育的各个时期均有表达,但只在幼虫生殖腺中有表达。将家蚕vasa基因的一条cDNA片段用地高辛标记作为探针,对家蚕幼虫的生殖腺及胚胎进行全胚原位杂交,结果进一步表明家蚕vasa基因在幼虫期只在精原细胞、精囊、卵巢管等生殖系相关的细胞和组织中表达,在发育5d胚胎的生殖腺部位也有明显表达。     

内蒙古绒山羊Hox基因家族成员在毛囊中表达的研究

Hox基因作为一类重要的转录因子,在胚胎发育组织分化过程中有重要作用。为了探索Hox基因在绒山羊毛囊发育中的作用机制,本研究采用原位杂交技术,检测Hox基因家族成员Hoxa4、Hoxa5、Hoxa6基因在绒山羊毛囊的表达模式。结果显示,Hoxa4、Hoxa5、Hoxa6基因分别在绒山羊胚胎期和兴盛期毛囊的不同部位表达,说明Hox基因在绒山羊毛囊生长发育过程中扮演着重要的角色。     

Expression patterns in mouse embryos of neuroleukin/glucose-6-phosphate isomerase and autocrine motility factor receptor

The pattern of expression by using in situ hybridization in whole mouse embryos of the neuroleukin/glucose-6-phosphate isomerase (NK/GPI) gene and its receptor (AMF-R) is reported. NK/GPI expression was first seen at embryonic day 9 whereas AMF-R was detected at embryonic day 8; both were detected up to day 12 with NK/GPI showing peaking in the limbs around day 11. The main regions of expression are limb buds, spinal cord and brain. This work contributes to understanding how both proteins act in the development of somatosensory and motoric neural structures.     

斑马鱼E3泛素连接酶基因的生物信息学分析和mRNA表达

目的对斑马鱼E3泛素连接酶基因进行生物信息学分析,并研究其mRNA表达情况。方法利用生物信息学方法分析斑马鱼E3泛素连接酶基因的cDNA序列、蛋白质二级结构、结构域、氨基酸序列同源性,并构建进化树;利用整胚原位杂交技术研究目的基因在斑马鱼体内的mRNA表达模式。结果在NCBI基因库中找出TRIM54、TRIM55a、TRIM55b、TRIM63a、TRIM63b和TRIM101 6个斑马鱼E3泛素连接酶基因。这些基因之间有较高的同源性,二级结构以α-螺旋和无规卷曲为主,编码的蛋白质均含有3个保守结构域：环锌指、B-box锌指和卷曲螺旋。进化树分析显示,所有基因聚为4组：各物种TRIM54基因聚为一组;各物种TRIM55基因聚为一组,但靠近于斑马鱼TRIM101基因分支;TRIM63基因分为一组。整胚原位杂交结果显示,这些TRIM基因的mRNA均在受精后24 h的斑马鱼的肌节中表达,且TRIM55a、TRIM63a和TRIM101基因表达量较高。这些TRIM基因在肌肉发育和肌肉功能中可能发挥作用。结论斑马鱼的6个E3泛素连接酶基因有较高的保守性,其mRNA特异性表达于肌节部位。结果对深入研究这些基因在鱼类肌肉中的作用和指导鱼类生产具有一定的意义。     

内蒙古绒山羊Hox基因家族成员在毛囊中表达的研究

Hox基因作为一类重要的转录因子,在胚胎发育组织分化过程中有重要作用。为了探索Hox基因在绒山羊毛囊发育中的作用机制,本研究采用原位杂交技术,检测Hox基因家族成员Hoxa4、Hoxa5、Hoxa6基因在绒山羊毛囊的表达模式。结果显示,Hoxa4、Hoxa5、Hoxa6基因分别在绒山羊胚胎期和兴盛期毛囊的不同部位表达,说明Hox基因在绒山羊毛囊生长发育过程中扮演着重要的角色。     

斑马鱼Geminin的功能及研究现状

Geminin是一种25kD的核蛋白,在细胞增殖、细胞分化、胚胎发育以及肿瘤发生等多方面均发挥着重要作用。在不同发育阶段,Geminin在不同的区域表达,可作为抑制因子或是诱导因子参与胚胎发育的调节。而通过建立相关geminin的转基因斑马鱼来调控其在体内的表达上调或下调,是研究geminin功能的一种常用方法。主要对geminin相关的结构、功能及其在胚胎发育方面作用的研究进展以及相关的实验技术进行了综述。     

猪瘟基因疫苗在小鼠肌肉中的动态分布表达

本研究应用原位杂交法、免疫组化、PCR法对肌肉注射猪瘟基因疫苗pcDST、pcDSW后小鼠胫前肌中质粒存在的方式、部位及时间进行了动态观察，结果表明猪 病毒基因疫苗注射3h后质粒就到达细胞核，至20d在细胞核内仍呈阳性反应；pcDST质粒在肌肉内存在120d，pcDSW质粒在肌肉存在150d;pcDST质粒肌肉注射后第3d，pcDSW质粒肌肉注射后第5d，在胫前肌肌肉中可检测到表达产物，持续表达20d以上。表明构建的猪瘟基因疫苗经肌肉注射是较好的免疫途径。     

新生儿卵巢同源盒基因在猪卵巢中的表达研究

新生儿卵巢同源盒基因(newborn ovary homeobox gene,NOBOX)是母源基因的一种,在早期卵子发生中起重要作用。为了明确NOBOX基因在猪卵巢等组织中的表达情况,本研究首先采用实时荧光定量PCR方法检测了NOBOX基因在猪不同组织中的表达,然后构建了NOBOX基因的原位杂交探针,采用原位杂交技术检测NOBOX基因在猪卵巢中的表达定位情况。结果显示,NOBOX基因在猪卵巢中的表达最高,极显著高于肾脏、肝脏、乳腺、肌肉及肾上腺等组织(P<0.01),而在肾脏、肝脏、乳腺、肌肉和肾上腺中,NOBOX基因表达差异不显著(P>0.05)。在猪卵巢中NOBOX基因的表达定位于卵母细胞胞质中,在颗粒细胞中未检测NOBOX基因的表达。以上结果表明,NOBOX基因仅在猪的卵母细胞胞质中高表达,预示NOBOX基因很可能在卵母细胞发生和胚胎的早期发育过程中发挥调节作用。