10种中药体外抗H1N1猪流感病毒的效果研究

为了观察10种中药抗猪流感病毒的效果,本试验通过先加中药再加病毒、先加病毒再加中药以及中药和病毒混合后一起加3种加药方式,采用鸡胚培养法和红细胞凝集(HA)试验研究了桂枝等10种中药在体外抗猪流感病毒的效果。然后,将有显著效果的中药筛选出来,测定其治疗指数(TI)和半数有效量(ED₅₀)。试验结果表明,在3种加药方式中,桂枝和麻黄抗猪流感病毒的效果最为显著。     

纳米蜂胶黄酮体内外抗PPV活性试验

采用体内外试验研究纳米蜂胶黄酮抗猪细小病毒活性。体外试验,以普通蜂胶黄酮为对照,分3种加药方式(先加蜂胶,后加蜂胶,蜂胶和病毒同时加入)加至PK-15细胞中,用MTT法检测细胞活性,实时荧光PCR检测PK-15细胞中猪细小病毒(PPV)含量,观察蜂胶黄酮对PK-15细胞抗PPV及清除PPV能力的影响。结果显示,与普通蜂胶黄酮相比,纳米蜂胶黄酮可显著抑制PPV在PK-15细胞上生长,高浓度效果优于低浓度,3种加药方式中先加药物的效果最好。体内试验,豚鼠注射PPV后灌胃纳米蜂胶黄酮和普通蜂胶黄酮,检测血液中PPV含量、血清中HI含量。结果显示,高、中剂量的纳米蜂胶黄酮可以显著抑制PPV在血液中复制、减轻PPV对豚鼠体重的影响、提高血清HI效价。结论,普通蜂胶黄酮经纳米化处理后,可以显著提高其抗PPV活性。     

纳米蜂胶黄酮对猪细小病毒的体内外抗病毒作用

采用体内外试验研究纳米蜂胶黄酮抗猪细小病毒(PPV)作用。体外试验是以普通蜂胶黄酮为对照,分3种加药方式(先加蜂胶、后加蜂胶、蜂胶和病毒同时加入)加至PK-15细胞中,用MTT法检测细胞活性,实时荧光PCR检测PK-15中PPV含量,观察蜂胶黄酮对PK-15抗PPV及清除PPV能力的影响。体内试验是给豚鼠注射PPV后灌胃纳米蜂胶黄酮和普通蜂胶黄酮,检测肺脏、肾脏、肝脏、性腺及血液中PPV含量、血清中HI含量。结果显示:(1)与普通蜂胶黄酮相比,纳米蜂胶黄酮可显著抑制PPV在PK-15上生长,高浓度效果优于低浓度,3种加药方式中先加药物的效果最好;(2)高中剂量的纳米蜂胶黄酮可以显著抑制PPV在血液中复制、减轻PPV对豚鼠体重的影响、提高血清HI效价。结果表明:蜂胶黄酮经纳米化处理后,可以显著提高其抗PPV活性。     

7种中药多糖对F81细胞抵抗犬细小病毒感染能力的影响

本研究旨在观察7种中药多糖:川明参多糖(CPS),川牛膝多糖(RCPS),杜仲多糖(EOPS),川白芷多糖(ADPS),川麦冬多糖(OJPS),川黄柏多糖(PCPS),川佛手多糖(CMPS)体外对犬细小病毒(CPV)感染细胞能力的影响。分别将7种中药多糖通过先加多糖再接种病毒、病毒和多糖感作后加入和先接种病毒再加多糖3种加药方式加入到培养24h的F81细胞中,在病毒接种后72h通过MTT法测定F81细胞的活性以评价各中药多糖对F81细胞抵抗犬细小病毒感染的影响。结果表明,在第1种加药方式下,CPS、RCPS、EOPS、ADPS抗CPV作用较强;在第2种加药方式下0JPS、PCPS、CMPS的抗病毒作用最为显著;在第3种加药方式下RCPS、ADPS、PCPS抗病毒作用最为显著。结果提示,7种多糖均能不同程度地抑制病毒感染F81细胞,部分中药多糖的抗病毒作用与加药方式有关且呈一定的量效关系。     

诃子、矮紫堇、甘青乌头提取物对牛病毒性腹泻病毒的体外抑制作用

为探讨诃子、矮紫堇、甘青乌头3种藏药的体外抗牛病毒性腹泻病毒(BVDV)作用效果,利用细胞培养技术,对BVDV进行增殖并检测TCID50;通过CPE观察和CCK8检测相结合的方法测定3种藏药和利巴韦林的最大药物安全浓度和药物半数中毒浓度(CC50);采用先加药后加病毒、先加病毒后加药、药和病毒预先作用的3种不同加药方式进行体外抗病毒抑制试验,计算不同作用方式下抗病毒有效率、药物半数有效浓度(EC50)和治疗指数(TI),进一步明确各个药物对BVDV的抑制作用。结果表明,经Reed-Muench氏法计算出病毒的TCID50为10-4.67·0.1mL~(-1);诃子、矮紫堇、甘青乌头和利巴韦林的最大安全浓度分别为1mg·mL~(-1)、1mg·mL~(-1)、8mg·mL~(-1)和2μg·mL~(-1);3种藏药及利巴韦林在药物和病毒预先作用方式下的最大有效抑制率均高于50%,其中矮紫堇浓度为1mg·mL~(-1)时,有效抑制率可达到72.86%,抑制效果极显著高于利巴韦林(P0.01);在先加药后加病毒、先加病毒后加药两种作用方式下的最大有效抑制率均小于30%,药物的吸附阻断作用和复制阻断作用并不明显。综上所述,3种藏药对BVDV均有一定的直接杀灭作用。其中,矮紫堇直接杀灭效果最佳且优于利巴韦林,有望被进一步开发成抗病毒药物。     

绞股蓝皂苷及其磷酸化修饰物体外抗DHAV作用的比较

采用三聚磷酸钠和三偏磷酸钠法制备磷酸化绞股蓝皂苷(pGP),然后运用体外细胞培养法比较研究绞股蓝皂苷(GP)和pGP抗DHAV感染鸭胚肝细胞(DEH)的作用。通过MTT法测定了GP和pGP在DEH上的安全质量浓度,并采用先加药物后接种病毒、先接种病毒后加药物和药物与病毒同时感作3种加药方式观察了GP和pGP对DHAV(duck hepatitis A virus)感染DEH的影响。为了进一步验证药物的抗病毒效果,采用实时荧光定量PCR方法比较分析了最有效药物浓度的GP和pGP对DHAV在DEH上的吸附、复制和释放的影响。结果显示:GP和pGP在一定质量浓度下均能促进DEH的生长;GP和pGP都具有较好的体外抗DHAV的作用,且在先加药后加毒和先加毒后加药作用方式下,pGP的抗DHAV的作用效果优于GP;在先加药后加病毒作用方式时,GP和pGP均能有效抑制DHAV的吸附;在先加病毒后加药作用方式时,GP和pGP对病毒吸附鸭胚肝细胞没有明显的作用,但能有效抑制DHAV的复制和释放,且pGP的抑制效果优于GP。结果表明:磷酸化修饰显著提高了GP的抗DHAV作用,pGP有希望被开发成一种新型抗DHAV药物。     

8种中药成分体外抗犬细小病毒的研究

本研究旨在观察8种中药成分黄芪多糖（APS）,白术多糖（RAPS）,黄芩多糖（BSPS）,金银花多糖（FLPS）,栀子苷（CS）,苦参生物碱（SFA）,黄芪皂苷（AS）和金银花黄酮（FLF）体外对犬细小病毒（CPV）感染细胞能力的影响。分别将8种中药成分通过先加中药再接病毒、病毒和中药感作后加入和先接种病毒再加中药3种加药方式加入到培养24h的F81细胞中,于病毒接种后72h用MTT法测定F81细胞活性以评价各中药成分对F81细胞抵抗犬细小病毒感染的影响。结果,在第1种加药方式下,APS、RAPS、BSPS、FLPS抗CPV作用较强;在第2种加药方式下CS的抗病毒作用最为显著;在第3种加药方式下CS、SFA抗病毒作用最为显著。结果表明,8种中药成分均能不同程度地促进F81细胞抵抗病毒感染,部分中药成分的抗病毒作用与加药方式有关且呈一定的量效关系。     

抗病毒中药总黄酮成分复方的体外筛选

为筛选出体外抗病毒效果较好的中药总黄酮成分复方,本试验将经初步筛选出的抗病毒效果较好的淫羊藿总黄酮、黄芩总黄酮、野菊花总黄酮、三七总黄酮4个单味成分进行组方,得到9个中药总黄酮成分复方,分别从安全浓度起倍比稀释5个浓度后,以先加药物后加病毒、先加病毒后加药物、病毒和药物同时加入3种加药方式加入到CEF单层细胞中,通过MTT法观察了9个总黄酮成分复方对NDV感染CEF单层细胞的影响.结果表明,各黄酮成分复方在3种加药方式中均表现一定的抗病毒活性,以D570值和最高病毒抑制率综合评价,淫黄、淫野黄、淫三野黄3个复方的抗病毒效果最好.     

蜂胶体外对猪细小病毒感染细胞能力的影响

为研究蜂胶体外抗猪细小病毒（porcine parvovirus,PPV）活性,用细胞维持液将蜂胶稀释成10个浓度,加至长成单层的PK-15细胞培养体系中,用MTT法测定蜂胶对PK-15细胞的安全浓度;将蜂胶从最大安全浓度倍比稀释5个梯度,分3种加药方式（先加蜂胶后加PPV、先加PPV后加蜂胶、蜂胶和PPV同时加入）加至PK-15细胞培养体系中,用MTT法观察蜂胶对PPV感染PK-15细胞的影响;采用实时荧光定量PCR方法检测PK-15细胞培养体系中PPV含量,观察蜂胶对PK-15细胞清除PPV能力的影响。结果显示,在31.2~250 μg/mL安全浓度范围内蜂胶组D_{570 nm}值和PPV含量分别显著高于和低于病毒对照组（P<0.05）,表明蜂胶可增强PK-15细胞抗PPV感染及清除PPV的能力。蜂胶的这种作用效果与其浓度和加药方式有关,蜂胶浓度越高则效果越好;3种加药方式中,以先加蜂胶后加PPV方式抵抗PPV感染活性最好。     

12种藏药对新城疫病毒感染鸡胚成纤维细胞能力的影响

为筛选抗新城疫病毒藏药复方的组分药,将安全质量浓度范围内的藏菖蒲、红景天、灵芝菌柄、灵芝菌盖、决明子、天冬、龙胆、降香、乳香、仁青芒觉、二十五味松石丸、二十五味珍珠丸的煎液和鸡新城疫病毒(NDV)分别以3种方式(先加藏药后接种病毒、先接种病毒后加藏药、藏药和病毒感作后同时加)加入到鸡胚成纤维细胞(CEF)的培养体系中.用MTT法测定各藏药对NDV感染CEF能力的影响.结果表明:多数藏药均能显著抑制NDV感染细胞,且与加药方式和药物质量浓度有一定关系.藏菖蒲、灵芝菌盖和降香在3种加药方式中均呈现显著效果,可作为抗NDV藏药复方的组分药.     

天然复方药物在CEF上的安全浓度筛选及其抗IBDV感染的试验研究

采用体外组织培养方法 ,测试了由黄芪为主药组成的天然复方药物方 1、方 2、方 3在鸡胚成纤维细胞 (CEF)上的安全浓度 ,及其在以下三种不同加药方式中抗 IBDV感染 CEF单层的能力 ,即 :先加药物后加病毒、先加病毒后加药物、药物病毒同时加入。结果 :单味黄芪组成的方 2在 CEF单层上的安全浓度为 2 5 mg/ ml,对 CEF基本没有毒性 ;方 1、方 3二者的安全浓度一致 ,为781.2 5μg/ ml,约为方 2的 1/ 30 ,表明方 1、方 3对 CEF的毒性明显较方 2大。在三种不同的加药方式下 ,复方药物所表现出来的抗 IBDV感染 CEF单层的能力并不相同 :在先加药物后加病毒及药物病毒同时加入两种方式下 ,三个方剂均表现出一定的抗 IBDV感染 CEF单层的能力 ;而先加病毒后加药物时 ,无论哪个方剂均未表现出抗 IBDV感染的能力。提示它们有一定的抗 IBDV感染作用 ,但与其作用方式有关     

绿原酸的提取及其对猪细小病毒的体外作用研究

本试验利用水煮醇提方法提取金银花的主要成分绿原酸,通过观察PK 15细胞病变效应（CPE）来评价绿原酸不同加药方式（先加药后接种病毒,先接种病毒后加药）对猪细小病毒（PPV）的体外作用效果。结果表明,在安全浓度范围内,金银花提取物绿原酸对PPV具有显著的体外抑制作用和明显的体外阻断作用,对PPV的最小抑制浓度为1.56 μg/ml,对PPV的最小阻断浓度为0.391 μg/ml。     

中药牛皮消多糖体外抗新城疫病毒作用的研究

为探讨牛皮消多糖(CAP)对体外抗新城疫病毒(NDV)能力的影响,本试验用水提醇沉法提取牛皮消多糖,通过苯酚硫酸法和红外光谱对牛皮消多糖进行检测,采用MTT法测定牛皮消多糖对鸡胚成纤维细胞(CEF)的安全浓度,多糖的安全浓度统一为625μg/mL,选择安全浓度范围内的(39.06～625μg/mL)5种浓度的各级多糖,用3种加药方式(先加多糖后接种病毒、先接种病毒后加多糖、多糖和病毒感作后加药)检测牛皮消多糖对NDV的阻断、抑制及直接杀灭作用。结果显示,先接病毒后加多糖组和多糖与病毒感作后加药组CAP_(50)、CAP_(30)、CAP_t、CAP_(80)和CAP_(70)均能显著抑制NDV感染CEF的能力,两组各级多糖抑制率分别为131.23%、110.12%、108.15%、100.24%、93.07%和61.76%、43.73%、44.51%、29.02%、37.45%;先加多糖后接病毒组CAP_(50)、CAP_(30)能显著抑制NDV感染CEF的作用(P0.05),阻断作用下对NDV的抑制率可达到15.82%、8.33%,其余各组在安全浓度范围内对NDV无抑制作用。各组中药牛皮消多糖均有较好的抗NDV活性,其中对NDV的抑制作用和直接杀灭作用强于对其阻断作用。CAP_(50)及CAP_(30)的抗NDV活性较强,可作为进一步研究材料并具备一定的研究价值。     

维药阿魏根多糖体外抗新城疫病毒的作用

用水提醇沉法得到阿魏根总多糖FSPt和4种分级多糖FSP_(30)、FSP_(50)、FSP_(70),FSP_(80)用苯酚-硫酸法及红外光谱对阿魏根多糖进行检测。用MTT法测定各多糖对鸡胚成纤维细胞(CEF)的安全浓度,选择安全浓度范围内5种浓度的各多糖与新城疫病毒(NDV)用3种不同的加药方式(先加多糖后接种病毒、先接种病毒后加多糖、多糖和病毒感作后加)加入到鸡胚成纤维细胞(CEF)中,用MTT法测定各多糖对NDV感染CEF能力的影响。先加多糖后接病毒组和先接病毒后加多糖组FSP_(30)、FSP_(50)、FSP_(70)和FSPt均能显著抑制NDV感染CEF;多糖与病毒感作后加组FSP_(70)和FSP_(80)有显著抑制NDV感染CEF的作用(P0.05)。结论:新疆阿魏根多糖具有较好的抗NDV作用,其中FSP_(30)和FSP_(50)对病毒的抑制率较高,FSP_(70)在3种加药方式中均表现出显著且稳定的抗NDV作用,综合考虑,FSP_(50)具有很好的研发前景。     

抗传染性支气管炎病毒中药的研究

用细胞培养法、鸡胚培养法对车前子、麦冬等40种中药进行抗传染性支气管炎病毒（IBV）的筛选试验。通过细胞病变（CPE）抑制试验，石榴皮等5种中药有抑制CPE的作用。培养细胞有20%发生CPE，认为这些中药有抗IBV的作用。应用空斑形成抑制试验对5种抗IBV中药进行复筛，结果表明5种中药均有不同程度的抑制病毒空斑形成作用，其中以石榴皮等2种中药作用较强，空斑形成抑制率可达98%以上。应用鸡胚培养法对5种中药进行抗IBV试验，结果发现5种中药均显著地减少了鸡胚体的死亡，其中以石榴皮等2种中药抑制制胚体病变的作用最强。通过不同加药时间观察到在接毒前48h给药，有2种中药具有明显抑制CPE的作用；接毒同时加药以及接毒后1h加药，这5种中药均能明显抑制CPE。     

中药复方粗提物对IBDV感染细胞能力的影响

将中药方1、方2、和方3的粗提物与鸡传染性法氏囊病毒以三种顺序（先加中药后加病毒、先加病毒后加中药、中药和病毒同时加入）加入到培养24h、已长成完整单层的鸡胚成纤维细胞（CEF）上，观察它们对病毒感染细胞能力的影响。结果表明：在细胞安全浓度范围内，方1、方2和方3的粗提物在先于病毒或与病毒同时加入时均能抑制病毒感染，且与浓度与加药方式有关；以补气、清热凉血、滋阴为主的方3优于以补气、清热凉血为主的方1和以补气为主的方2。     

白毛藤生物碱体外抗新城疫病毒作用研究

采用醇提法从白毛藤中提取了水溶性生物碱和脂溶性生物碱,并测定其对鸡胚成纤维细胞的最大无毒浓度(TD0)、半数中毒浓度(TD50)、抑制50%细胞病变的药物浓度(IC50)和治疗指数(TI),应用先加药物后接种病毒、先接种病毒后加药物、病毒和药物同时加入、病毒和药物体外作用2h后再同时加入四种方式测定了生物碱的体外抗NDV效果.试验结果表明:白毛藤水溶性生物碱的TD0、TD50、IC50和TI分别为6.25mg/ml、11.32 mg/ml、2.48 mg/ml和5.脂溶性生物碱的TD0、TD50、IC50和TI分别为6.25mg/ml、14.27 mg/ml、1.56 mg/ml和9;两种生物碱均有一定的抗NDV作用,其中水溶性生物碱以先加药物后加病毒的方式抗病毒效果较强.脂溶性生物碱以先接种病毒后加药及病毒和药物体外作用2h后再同时加入的方式抗病毒效果较强,且与其浓度成正相关.     

扶正解毒散及其超微粉体外抗鸡传染性法氏囊病病毒药效比较

采用鸡胚法和细胞法2种体外抗病毒试验比较扶正解毒超微粉(FZSM)和扶正解毒散(FZ)的抗鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)效果。鸡胚法:在FZSM和FZ 2种煎煮液对鸡胚安全浓度范围内分别选取3个浓度,采用先加煎煮液后接种病毒和先接种病毒后加煎煮液2种方式,接种10日龄SPF鸡胚,测定2种煎煮液对IBDV ELD50的影响。细胞法:在FZSM和FZ 2种煎煮液对鸡胚成纤维细胞(CEF)安全浓度范围内分别选取3个浓度,采用先加煎煮液后接种病毒和先接种病毒后加煎煮液2种方式,加入到长成单层的CEF中继续培养,观察并统计各孔的细胞病变(CPE)。结果显示,FZSM和FZ 2种煎煮液均可以降低IBDV的病毒滴度和CPE抑制率,高浓度效果优于低浓度;同浓度FZSM效果优于FZ;预防作用效果优于治疗作用效果。结果表明FZSM和FZ均具有体外抗IBDV的作用,且FZSM效果优于FZ。     

抗传染性喉气管炎病毒中药的筛选试验

本文用细胞培养法、鸡胚培养法对42种中药进行抗传染性喉气管炎病毒的筛选试验。通过细胞病变（CPE）抑制试验对42种中药进行初步筛选，结果发现石榴皮等5种中药有抑制CPE的作用。培养细胞有20％的细胞发生病变，认为这些中药有抗ILTV的作用；应用空斑形成抑制试验对5种抗ILTV中药进行复筛，结果表明5种中药均有不同程度的抑制病毒空斑形成作用。其中以石榴皮等2种中药作用较强，空斑形成抑制率可达98％以上；应用鸡胚培养法对5种中药进行抗ILTV试验，结果发现5种中药均显著地减少了鸡胚绒毛尿囊膜上的痘疱，其中以石榴皮等2种中药抑制痘疱形成的强度最高；通过不同加药时间，观察CPE抑制情况。结果表明，在接毒前48h给药有2种中药具明显的抑制CPE。接毒同时加药以及接毒后1h加药，这5种中药均呈现明显的抑制CPE。     

三种中药复方抗小鼠感染H1N1和H3N2亚型猪流感病毒的效果研究

为了筛选抗H1N1和H3N2猪流感的中药复方,试验将小鼠随机分为正常对照组、模型对照组(病毒攻毒组)、利巴韦林组、麻杏石甘散组、复方一组、复方二组和复方三组,除正常对照组外,各组小鼠均滴鼻接种猪流感病毒造模后进行相应的治疗,正常对照组则用PBS处理,最后通过测量各组小鼠的体重、计算肺脏指数、观察肺脏组织和检测血液中抗氧化指标[超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)、丙二醛(MDA)]等,研究三个中药复方抗小鼠感染猪流感病毒的效果。结果表明:复方一组、复方二组和复方三组小鼠体重下降幅度小、恢复速度快。与模型对照组比,三个中药复方组能显著或极显著降低感染H1N1亚型猪流感病毒小鼠的肺脏指数(P0.05或P0.01);也能降低感染H3N2亚型猪流感病毒小鼠的肺脏指数,但只有复方三组小鼠的肺脏指数与模型对照组差异显著(P0.05)。模型对照组小鼠肺脏组织肺泡隔断裂、肺泡腔增大,麻杏石甘散组小鼠的肺脏组织出现大范围的出血症状,利巴韦林组小鼠肺脏组织无实质性病变,三个复方组小鼠肺脏组织无明显病变,肺泡间隔和肺泡壁厚度正常。与模型对照组比,三个复方组均能极显著提高血清SOD活性和GSH浓度(P0.01),降低MDA浓度。说明本试验所用的三个中药复方具有增强小鼠抗H1N1和H3N2亚型流感病毒感染的效果,且复方三的效果相对好些。