猪源气单胞菌分离鉴定及耐药谱检测

为调查气单胞菌在我国猪粪便中流行情况及耐药谱,2017年3~7月从河南省4个地区,共采集370份猪粪样品,通过缓冲液蛋白胨水增菌培养后,使用添加有氨苄青霉素的气单胞菌基础培养基选择培养,分离气单胞菌。可疑菌株通过形态特征、生化试验和16SrDNA序列比对进一步鉴定。微量稀释法测定分离菌株对17种抗菌药物耐药谱。结果显示,共分离到11株气单胞菌,分离率为2.97%,其中豚鼠气单胞菌5株(占45.45%),杀鲑气单胞菌2株(占18.18%),中间气单胞菌、嗜水气单胞菌、水生气单胞菌和贝斯特润气单胞菌各1株(各占9.09%);阿莫西林/克拉维酸菌耐药率为100%,磺胺甲恶唑、氟苯尼考耐药率81.82%,阿米卡星、美罗培南敏感率均为100%,除了其中1株气单胞菌,其他菌株对头孢噻呋、头孢曲松、庆大霉素、强力霉素、磷霉素、恩诺沙星均敏感,各菌株均呈多重耐药性。表明我国健康猪粪便中携带气单胞菌,如果造成水源或者食物污染,可能有引起人类或者动物感染的风险,应引起重视。     

狐狸源致病性维氏气单胞菌的分离鉴定及耐药性分析

本研究通过生物学特性、16S rRNA基因和4种等看家基因的序列测定与分析,对分离自北京动物园死亡狐狸病变组织的1株细菌进行鉴定,并对其进行小鼠致病力试验及药物敏感性试验。结果显示:该细菌为革兰氏阴性杆菌,培养特性、理化反应与维氏气单胞菌温和生物型基本相同;根据16S rRNA基因和dnaJ、rpoD、gyrB、cpn60等看家基因的系统进化及其同源性分析,确定所分离的细菌与维氏气单胞菌属于同一系统发育分支,各基因同源性最高分别为97.6%～99.9%。分离菌株对CD-1小鼠有较强的致病作用,其半数致死量为2.8×105cfu/只;对氧氟沙星、头孢他啶等14种抗菌药物敏感,对青霉素G、克林霉素等9种抗菌药物耐药。     

鸡肠道大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析

为分析鸡肠道大肠杆菌对常用抗菌药物的耐药性,试验采集了34个鸡直肠拭子样本,分离并鉴定大肠杆菌,采用微量稀释法测定分离菌对卡那霉素、氯霉素、氨苄西林、环丙沙星、头孢曲松钠、庆大霉素、磺胺嘧啶和强力霉素8种药物的敏感性。结果显示,分离并鉴定出34株鸡肠道大肠杆菌,其中4株经鉴定为产H₂S大肠杆菌。34株菌对卡那霉素、氯霉素、氨苄西林、环丙沙星、头孢曲松钠、庆大霉素、磺胺嘧啶和强力霉素的MIC₅₀分别为>256、256、>256、16、<0.125、256、>512和16 μg/mL,耐药率依次为100.0%、100.0%、100.0%、70.6%、11.8%、94.1%、100.0%和82.3%。34株菌均为多重耐药菌株,最少可对5种药物耐药,最多可对8种药物耐药,其中耐8种药物菌株百分率为2.9%;耐7种药物菌株百分率为58.8%;耐6种药物菌株百分率为32.4%;耐5种药物菌株百分率为5.9%。试验结果表明,34株鸡肠道大肠杆菌对8种常用抗菌药物的耐药谱广、耐药率高,兽医临床应根据试验结果调整用药方案。     

胶东地区肉鸡大肠杆菌耐药性研究

试验通过CLSI推荐的K-B药敏纸片法,对胶东地区分离的肉鸡大肠杆菌进行耐药性研究。结果显示:169株肉鸡大肠杆菌分离株对17种抗菌药物均有不同程度的耐药性,对四环素、多西环素、阿莫西林耐药的菌株数量较多,耐药率分别为94.08%、94.08%、92.90%;对多黏菌素B耐药菌株数量最少,耐药率仅为0.59%;耐药率低于30%的有4种,依次为磷霉素、大观霉素、丁胺卡那霉素、多黏菌素B;其余10种药物耐药率在36.09%~79.89%。169株大肠杆菌中仅有一株大肠杆菌表现单一耐药性,其余168株分离菌均对抗菌药物表现出多重耐药,耐药范围在3~15种,其中对9~13种抗菌药物具有多重耐药性的分离菌共106株,占全部分离菌的62.72%。     

湖南省奶牛源金黄色葡萄球菌分离鉴定与耐药性分析

为了掌握湖南省内奶牛源金黄色葡萄球菌的耐药情况,指导临床合理用药,抽取牛乳样品,通过对细菌的分离培养和纯化,采用基质辅助激光电离飞行时间质谱仪和全自动生化鉴定仪进行鉴定,并对分离菌株进行18种抗菌药物耐药性检测;结合耐药表型和mecA基因检测判定MRSA菌株。结果显示,2020-2021年从湖南地区257份牛乳样品中分离出金黄色葡萄球菌39株,89.74%的临床分离菌株表现为不同程度耐药,其中对青霉素耐药最为严重,耐药率达82.05%;对红霉素、克林霉素、替米考星、庆大霉素、头孢西丁耐药率在20%-35%之间;对多西环素及万古霉素绝对敏感,耐药率为0。38.46%分离菌株表现为多重耐药,以7重耐药最多。鉴定出19株MRSA,其中包含15株OS-MRSA和4株OR-MRSA。本研究可为湖南省内奶牛企业制定合理用药措施提供依据。     

江苏苏北地区猪链球菌耐药性调查及万古霉素耐药基因检测

调查江苏地区猪链球菌临床分离株的耐药现状并检测其万古霉素的耐药基因,为抗菌药物的合理使用提供参考。采用微量肉汤稀释法测定107株猪链球菌对8种抗菌药物的耐药性;应用PCR方法检测主要万古霉素耐药基因分布。107株菌株对克林霉素、四环素及红霉素耐药率在90%以上,对恩诺沙星、青霉素和氟苯尼考的耐药率分别为34.58%(37/107),27.1%(29/107)和23.36%(25/107),对头孢噻呋和万古霉素耐药率较低,均为3.74%(4/107)。95.3%(102/107)的菌株为多药耐药菌株,以3耐为主,达到51.0%(51/102),并有4株7耐的菌株。在4株万古霉素耐药菌株中,3株菌检测到van G基因。研究表明,猪链球菌对常用的8种抗菌药物均产生了不同程度的耐药,并出现多药耐药现象,尤其出现了vanG型的万古霉素耐药猪链球菌,需引起重视。     

陕西省部分地区鸡源A型产气荚膜梭菌分离株的药敏试验

通过应用纸片法对52株分离自陕西部分地区的A型鸡源产气荚膜梭菌分离菌株进行药物敏感性检测,了解各菌株对常见抗菌药物的耐药状况。结果分离菌株对磺胺异恶唑、复方新诺明、强力霉素耐药率较高,均在70%以上;对万古霉素、氯霉素、杆菌肽的敏感率均在80%以上;大部分菌株为多重耐药。结果表明,陕西部分地区的鸡源性产气荚膜梭菌的耐药性较为严重。     

徐州地区猪源致病性大肠杆菌耐药性调查

为了掌握徐州地区猪场大肠杆菌耐药菌株的产生情况和耐药程度,在2016-2018两年间对徐州地区猪源大肠杆菌进行耐药监测。从猪场分离鉴定致病性大肠杆菌,采用纸片扩散法测定46株分离菌株对15种抗菌药物的敏感性。结果表明,猪源大肠杆菌分离株多重耐药现象严重,至少耐药10种以上,其中10耐和11耐的菌株所占比例最大,分别为28.3%和23.9%;分离菌株对阿莫西林、氟苯尼考、强力霉素耐药率最高,达到80%以上,对头孢噻呋耐药率最低,为17.4%。两年间痢菌净耐药率下降幅度最大,丁胺卡那霉素耐药率增长幅度最大。     

白缘(鱼央)维氏气单胞菌的分离鉴定与药敏试验

从发病白缘(鱼央)病变组织分离纯化1株G^-细菌,经过染色镜检、生理生化试验、16S rDNA序列分析和动物试验鉴定为气单胞菌属维氏气单胞菌,并编号为LA201001。采用Kirby-Bauer法检测了维氏气单胞菌分离菌株对30种常用抗菌药敏感性。结果显示,维氏气单胞菌分离株LA201001对小鼠和白缘(鱼央)具有致病性,且耐药性较强,对强力霉素、四环素、复方阿莫西林、氨苄青霉素、头孢氨苄、头孢噻吩、卡那霉素等21种受试药物耐受,仅对庆大霉素、丁胺卡那、诺氟沙星、环丙沙星和氧氟沙星5种受试药物敏感。     

不同禽源致病性大肠杆菌的多重耐药性分析

采用K-B法,对实验室分离、保存的37株不同年代、不同禽源致病性大肠杆菌,用14种药物进行了体外敏感性测定.结果显示,20世纪80年代分离株耐药性较低,耐药谱从1重耐药到6重耐药,未见5重耐药和超级耐药株,其中,3重耐药株数最多,占总分离株比例的16.2%;多数分离株对呋喃唑酮、头孢氨苄、新霉素、壮观霉素、洛美沙星和诺氟沙星等6种药物具有高度敏感性.20世纪90年代以后的分离株均出现了不同程度的多重耐药,耐药谱从8重耐药到11重耐药,其中8重耐药菌株数最少,占总株数比例的2.7%,11重耐药最高,占总株数比例的18.9%;14种抗菌药物耐药率也出现新高,其中链霉素耐药率达到了94.4%.结果表明,随着时间的推移,大肠杆菌耐药性问题日益严重,应加强重视和研究,严格控制大肠杆菌耐药性的广泛传播以及由此带来的恶性循环.     

鸡源大肠杆菌超广谱β-内酰胺酶的检测及耐药性分析

为探明泰州地区鸡源大肠杆菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)情况及耐药情况,对13株分离自泰州地区的鸡源大肠杆菌进行ESBLs检测,并采用微量肉汤稀释法测定不同药物对产ESBLs菌和非产ESBLs菌的最小抑菌浓度(MIC).结果显示,13株分离菌中有5株被确定为产ESBLs菌株,阳性率为38.5%.产ESBLs菌对β-内酰胺类抗菌药的耐药性极其严重,耐药率明显高于非产ESBLs菌,二者对氨苄西林的耐药率分别为100%和62.5%,对头孢噻呋的耐药率分别为100%和12.5%,对头孢曲松的耐药率分别为80%和20%,产ESBLs菌对其他抗菌药物的耐药率也明显高于非产ESBLs菌.氨苄西林与舒巴坦(2:1)联用与单用氨苄西林相比,对产ESBLs菌的MIC值降低至单用氨苄西林时的1/16~1/8,但对非产ESBLs菌的MIC值没有明显变化.氨苄西林与阿米卡星(1:1)联用与单用两者中的任何一种相比,对产ESBLs菌和非产ESBLs菌的MIC值均降低至单药时的1/16~1/2.结果表明,临床可选择β-内酰胺酶类抗生素与β-内酰胺酶抑制剂的混合制剂来治疗产ESBLs鸡大肠杆菌的感染,也可尝试将不同种类、不同作用机理药物联合应用来治疗鸡大肠杆菌感染,尤其是耐药性鸡大肠杆菌感染.     

2019年湖南省部分地区鸡、鸭、猪源大肠杆菌耐药性调查

旨在调查2019年湖南省部分地区不同来源的大肠杆菌对抗生素的耐药水平,为养殖合理用药提供参考。从4个市畜禽养殖场采集猪、鸡和鸭粪便285份,使用麦康凯琼脂培养基和伊红美蓝培养基对大肠杆菌筛选,利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱进行鉴定,采用微量肉汤稀释法检测16种抗生素对大肠杆菌的最小抑菌浓度(MIC)。共分离出203株大肠杆菌(鸡源146株、鸭源20株和猪源37株),对四环素和氨苄西林耐药率最高,分别达到89.2%和84.7%;对头孢他啶、奥格门丁、黏菌素耐药率较低,分别为2.5%、2.0%和0.5%;所有菌株均对美罗培南敏感。抗3种及以上抗生素的菌株数目占比为87.7%,而仅5.42%的菌株对所有检测的抗生素敏感。另外,来源于减抗示范养殖场的大肠杆菌对大部分抗生素的耐药率,与来源于非减抗养殖场大肠杆菌相比未见显著差异。上述结果表明,湖南省动物源大肠杆菌的耐药水平仍处在较高水平,重视兽药使用管理并持续开展对大肠杆菌的耐药性监测十分必要。     

鱼源维氏气单胞菌的耐药性研究

为检测7株鱼源维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)的耐药基因和耐药表型的分布情况,试验采用PCR法检测分离株中氨基糖苷类耐药基因(aac(3)-Ⅱa、aac(6')-Ⅰb、ant(3")-Ⅰa和aph(3')-Ⅱa),磺胺类耐药基因(Sul1、Sul2和Sul3)和四环素类耐药基因(tetA、tetC和tetM),运用Kirby-Bauer纸片扩散法检测7株鱼源维氏气单胞菌分离株对22种常用抗生素的敏感性。结果表明,可检出耐药基因aac(3)-Ⅱa(71.4%)、aac(6')-Ⅰb(85.7%)、Sul2(85.7%)和tetA(28.5%);未检出ant(3")-Ⅰa、aph(3')-Ⅱa、Sul1、Sul3、tetC和tetM基因。7株维氏气单胞菌对磷霉素(100%)、多黏霉素B(100%)、痢特灵(85.7%)、奥复星(71.4%)较敏感;对氨苄西林(100%)、乙酰螺旋霉素(100%)、复方新诺明(85.7%)、磺胺异恶唑(85.7%)、四环素(85.7%)等耐药。这说明耐药基因和耐药表型之间存在一定的相关性。     

鸭源沙门菌的分离鉴定、耐药性及致病性分析

【目的】为防控鸭源沙门菌感染,本试验针对四川德阳地区鸭源沙门菌的感染情况开展研究。【方法】从该地区3个种鸭场和1个鸭孵化场共采集不同类型样本222份,按国标GB 4789.4－2016方法对沙门菌进行分离鉴定,进一步通过K-B法检测分离菌对14种抗菌药物的敏感性,并对鉴定出的稀有血清型沙门菌进行致病性研究。【结果】疑似沙门菌分离株在BS琼脂上呈黑色、灰色或棕褐色、有金属光泽菌落,在XLD琼脂上呈无色透明、或中心黑色或几乎全黑的菌落。将疑似沙门菌株接种三糖铁琼脂斜面进行生化鉴定,疑似沙门菌分离株均能使三糖铁斜面变为红色,底部变为黄色带黑色,符合沙门菌生化特性。通过PCR对沙门菌特异性基因invA进行扩增,经琼脂糖凝胶电泳后可在500 bp左右观察到目的条带,确认共分离到17株沙门菌,总分离率为7.7%（17/222）,包括鼠伤寒沙门菌、哈托沙门菌和波恩沙门菌3种血清型,其比例分别为47.1%（8/17）、29.4%（5/17）和23.5%（4/17）,优势血清型为鼠伤寒沙门菌。分离菌对β-内酰胺类和氨基糖苷类抗菌药耐药率最高,对氨苄西林和链霉素的耐药率分别为82.4%（14/17）和88.2%（15/17）,对喹诺酮类抗菌药最敏感,其中对萘啶酸100%（17/17）敏感。分离菌存在严重的多重耐药现象,其中耐10种以上（包括10种）抗菌药的6株,占比35.2%,且10种抗菌药分别来自至少6类不同种类抗菌药;耐8种抗菌药物的2株,占比11.8%;耐5~7种抗菌药的6株,占比35.3%;耐2~3种抗菌药物的共3株,占比17.6%。通过寇氏改良法测得稀有血清型菌株H4、B2的LD₅₀分别为3.98×10⁶和1.58×10⁶ CFU,致病性试验结果表明,哈托和波恩沙门菌均能引起小鼠急性死亡,脏器充血、出血,细胞变性等。【结论】本研究成功分离到17株鸭源沙门菌,从鸭中分离到哈托沙门菌在国内外属首次。分离菌具有严重的耐药性和多重耐药现象,2株稀有血清型沙门菌对小鼠的致病力均较强,且致病作用相似。本研究结果可为鸭场沙门菌病的防治提供参考。     

Investigation on Antibiotics Resistance of Escherichia coli Isolated fromDifferent Sources in the Middle East Region of Inner Mongolia

The study was aimed to research the antibiotics resistance of Escherichia coli (E.coli) isolated from different sources of Chifeng and Tongliao areas in Inner Mongolia.Using K-B method, we analysed the resistance situation of 46 strains E.coli isolated from goose, bovine and porcine to thirteen kinds of antibiotic drugs. The resistance rates of E.coli isolated from goose and porcine had the highest resistance to doxycycline hydrochloride drug, which were 95.2% and 93.3%,respectively. The resistant rate of E.coli isolated from bovine had the highest resistance to sarafloxacinhydrochloride,enrofloxacin and hydrochloric acid doxycycline, which was 80.0%. Multi-resistance results showed that the prevalence of E.coli in diseased animals with 6 resistance mainly(23.9%);Bovine source with 7 resistance (40%). The resistance type in general was enrofloxacin/florfenicol/doxycycline/amoxicillin/neomycin sulfate. E.coli from different sources of diseased animals to antibiotics had a serious resistance. So,it is not only necessary for farmers to learn to use antibiotics rationally, but also to develop new drugs that are resistant to drug resistance or new drug allergic to antibiotics.     

内蒙古中东部地区不同来源大肠杆菌耐药性调查

本研究旨在调查内蒙古赤峰、通辽地区不同来源的大肠杆菌对抗生素类药物的耐药情况。采用K-B法分析来源于鹅、牛和猪等患病动物分离出的46株大肠杆菌对13种常用的抗生素类药物的耐药性;鹅源和猪源大肠杆菌对盐酸多西环素的耐药率最高,分别达95.2%和93.3%;牛源大肠杆菌对盐酸沙拉沙星、恩诺沙星和盐酸多西环素的耐药率最高,达80.0%。多重耐药性结果表明,患病动物的大肠杆菌以6耐（23.9%）为主;牛源大肠杆菌则以7耐（40%）最多。总体耐药谱型以恩诺沙星/氟苯尼考/盐酸多西环素/阿莫西林/硫酸新霉素为主（24.4%）。不同来源的大肠杆菌对抗生素类药物均产生了严重的耐药性,因此不但要求养殖人员学会合理使用抗生素类药物,同时研究开发逆转耐药性的新药物或对抗生素类药物有增敏效用的新药物十分必要。     

2013－2019年贵州省副猪嗜血杆菌分离株耐药性及其演变

试验旨在揭示贵州省副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis，Hps）的耐药性及其变化趋势，指导Glasser's病临床防控用药，减缓Hps耐药菌株出现。通过K-B纸片琼脂法，检测2013－2019年分离自贵州省9个地区517株Hps对15种常用抗菌药的耐药性，分析不同分离时期和分离地区的菌株的耐药性差异。结果显示，针对15种抗生素分别有14.36%~70.58%的分离菌株表现耐药，其中耐头孢噻呋菌株的比例最低，耐复方新诺明菌株的比例最高；与2013年相比，2019年分离的Hps菌株对13种抗生素的耐药率分别升高了4.52%~324.68%，其中耐头孢噻呋菌株比例上升速度最快，达324.68%，耐链霉素菌株比例上升最慢，仅4.52%，耐土霉素和四环素菌株的比例分别下降2.21%和8.63%，出现负增长。相对于凯里、毕节和兴义地区，安顺、遵义、贵阳地区流行的菌株对头孢噻呋、替米考星、多西环素等在全省范围内耐药菌株比例较低的药物耐药率相对较高，而对复方新诺明、阿莫西林、链霉素等在全省范围内耐药菌株比例较高的药物耐药率相对较低。这一结果说明，贵州省Hps菌株对15种常用药物的耐药性较为严重，且总体呈现上升趋势，不同地区分离株对部分抗菌药的耐药率呈现明显的地区差异性。     

Drug Resistance and Evolution of Haemophilus parasuis Isolates from Guizhou Province During 2013 to 2019

This study was aimed to reveal the trend of drug resistance about Haemophilus parasuis (Hps) in Guizhou province and guide clinical use of Glasser's disease then slow the emergence of drug-resistant Hps strains.K-B slip-agar diffusion method was used to test the 15 common antibiotics resistance of 517 Hps strains isolated from 9 districts in Guizhou province from 2013 to 2019.The drug resistance differences of strains isolated from different time and districts were analyzed.The results showed that 14.36% to 70.58% isolates indicated drug resistance to 15 antibiotics,the proportion of EFT resistant strains was the lowest and SXT resistant strains was the highest.Compared with 2013,the resistance rate of Hps strains isolated in 2019 to 13 antibiotics increased by 4.52% to 324.68%.Among them,the proportion of drug-resistant strains of 13 drugs increased which EFT resistant strains increased at the fastest rate to 324.68% while STR resistant strains slowest rate to only 4.52%.The rate of TET resistant strains showed negative growth which decreased by 2.21% and 8.63%,respectively.Compared with Kaili,Bijie and Xingyi of Guizhou,the strains isolated from Anshun,Zunyi and Guiyang districts showed higher drug resistance rate of EFT,MC and DO which with low resistance in Guizhou province,but lower of SXT,AML and STR which with high resistance in Guizhou province.The results indicated that the resistance of Hps strains to 15 commonly antibiotics in Guizhou province was serious with rising tendency and the resistance rate of certain strains showed obvious differences between different districts.     

丹顶鹤源大肠杆菌耐药性的检测与分析

对扎龙自然保护区丹顶鹤源大肠杆菌进行分离培养,开展大肠杆菌耐药性调查。采用纸片扩散法测定各分离菌株对17种抗微生物药的敏感性。结果表明:丹顶鹤源大肠杆菌分离株对各抗微生物药的敏感性不同。受试菌株对氨苄西林、头孢噻吩的耐药率分别为57.5%、47.5%,对氟苯尼考、氨曲南、阿莫西林/棒酸均敏感。     

动物源性大肠杆菌药物敏感性检测及耐药性分析

用2000～2003年自兽医临床分离的393株大肠杆菌,对9种常用抗生素的敏感性进行了检测.依据菌株采集时间、菌株来源对菌株耐药性的变化及耐药性产生之间的相关性进行了较全面的统计分析,并随机选出39株典型的多重耐药菌株观察了对小鼠的致病性.结果显示,393株分离菌对四环素、庆大霉素、氯霉素、氨苄青霉素、利福平、卡那霉素、呋喃妥因、链霉素和环丙沙星的耐药率分别为93.89%, 57.76%,78.63%, 77.86%,92.11%, 47.33%,46.82%, 76.84%,74.81%;按照耐药种类可将分离菌株分为8类,最多耐药9种,最少耐药2种,约80%以上的菌株耐受7种所试药物.猪源大肠杆菌对庆大霉素、氨苄青霉素、卡那霉素的耐药率高,而鸡源大肠杆菌对四环素、氯霉素、链霉素和环丙沙星的耐药率显著高于猪源大肠杆菌.2000年和2003年分离菌株的耐药率相比,氯霉素从67.33%上升到90.58%,氨苄青霉素从71.29%上升到84.81%,链霉素从73.76%上升到80.10%,环丙沙星从61.88%上升到88.48%,庆大霉素却从61.39%下降到53.92%.95%的菌株(37/39)可直接在72 h内致死感染小鼠(2.0×107CFU·鼠-1).5%不能直接致死小鼠的菌株经小鼠体内2～3次传代,可直接致死感染小鼠.试验表明,兽医临床分离菌株普遍存在多重耐药性,并随分离时间、寄主种类等耐药率出现动态变化,耐药类型间具有一定的相关性.耐药菌株对小鼠仍具有很强的致病性,少数菌株致病性出现暂时减弱,但在体内几次传代即可恢复.