引致枇杷叶斑病的链格孢菌的鉴定及其化学防治药剂筛选

结合形态学与分子生物学分析，对采自重庆地区疑似由链格孢菌引起的枇杷叶斑病样品进行病原菌分离鉴定。结果表明，所得病原菌的rDNA-ITS序列与 GenBank中登陆的四株链格孢菌Alternaria alternate（登录号分别为：FJ228163、KT192329、KM100451、KP278185）的相似性均为99%，结合病原菌的菌落、分生孢子形态特征及致病性测定结果，将其鉴定为链格孢菌Alternaria alternate，GenBank登录号为KY397985，并命名为24-CQYB。室内毒力测定结果显示，咪鲜胺、嘧菌酯、甲基硫菌灵、多菌灵及苯醚甲环唑等5种杀菌剂对24-CQYB菌株生长均有抑制作用，其中苯醚甲环唑的抑制效果最好，EC50为3.84 mg/L。     

甘肃省燕麦主产区叶斑病调查及病原鉴定

为了明确甘肃省燕麦主产区叶斑病的发生情况及其病原种类,为防治提供理论依据。对定西市通渭县、张掖市山丹县和民乐县、武威市天祝县和甘南州合作市大面积种植的燕麦田间叶斑病发病情况进行了调查,对采集的病叶进行了病原菌的培养、分离、致病性测定及鉴定。结果表明,不同区域燕麦叶斑病的发生情况存在明显差异,其中定西市通渭县最严重,平均病叶率为96.15%,平均病情指数为70.26;武威市天祝县的叶斑病病叶率和病情指数分别为95.07%和69.16;张掖市民乐县叶斑病较轻,平均病叶率为8.78%,病情指数为2.45。分离纯化获得的真菌经致病性测定后发现发病症状与田间病害症状一致,经再次分离可得到相同的病菌。进一步通过形态学观察和rDNA-ITS序列分析表明引起甘肃省燕麦主产区叶斑病的病原菌有10种,分别为燕麦内脐蠕孢(Drechslera avenae)、燕麦核腔菌(Pyrenophora avenae)、德氏霉菌(Pyrenophora chaetomioides)、细交链格孢(Alternaria alternata)、芸薹链格孢(Alternaria brassicae)、苹果链格孢(Alternaria mali)、麦根腐平脐蠕孢(Bipolaris sorokiniana)、芽枝状枝孢菌(Cladosporium cladosporioides)、多主枝孢(Cladosporium herbarum)和黑附球菌(Epicoccum nigrum),优势菌为燕麦内脐蠕孢和细交链孢,在各调查样地均能分离出。明确了燕麦叶斑病在甘肃省主要种植区的发生情况及其病原种类,除燕麦内脐蠕孢和燕麦核腔菌外,其他均为国内燕麦叶斑病新的病原菌。     

甘肃省燕麦主产区叶斑病调查及病原鉴定

为了明确甘肃省燕麦主产区叶斑病的发生情况及其病原种类,为防治提供理论依据。对定西市通渭县、张掖市山丹县和民乐县、武威市天祝县和甘南州合作市大面积种植的燕麦田间叶斑病发病情况进行了调查,对采集的病叶进行了病原菌的培养、分离、致病性测定及鉴定。结果表明,不同区域燕麦叶斑病的发生情况存在明显差异,其中定西市通渭县最严重,平均病叶率为96.15%,平均病情指数为70.26;武威市天祝县的叶斑病病叶率和病情指数分别为95.07%和69.16;张掖市民乐县叶斑病较轻,平均病叶率为8.78%,病情指数为2.45。分离纯化获得的真菌经致病性测定后发现发病症状与田间病害症状一致,经再次分离可得到相同的病菌。进一步通过形态学观察和rDNA-ITS序列分析表明引起甘肃省燕麦主产区叶斑病的病原菌有10种,分别为燕麦内脐蠕孢(Drechslera avenae)、燕麦核腔菌(Pyrenophora avenae)、德氏霉菌(Pyrenophora chaetomioides)、细交链格孢(Alternaria alternata)、芸薹链格孢(Alternaria brassicae)、苹果链格孢(Alternaria mali)、麦根腐平脐蠕孢(Bipolaris sorokiniana)、芽枝状枝孢菌(Cladosporium cladosporioides)、多主枝孢(Cladosporium herbarum)和黑附球菌(Epicoccum nigrum),优势菌为燕麦内脐蠕孢和细交链孢,在各调查样地均能分离出。明确了燕麦叶斑病在甘肃省主要种植区的发生情况及其病原种类,除燕麦内脐蠕孢和燕麦核腔菌外,其他均为国内燕麦叶斑病新的病原菌。     

郑州地区冷季型草坪草根腐病病原鉴定

通过对郑州地区冷季型草坪草根腐病病原物分离鉴定发现,主要病原物有镰刀菌(Fusarium spp.)、链格孢菌(Alternaria spp.)、丝核菌(Rhizoctonia spp.)、德氏霉菌(Drechslera spp.)、弯孢菌(Curvularia spp.)和腐霉菌(Pythium spp.)6大类。其中,茄腐镰刀菌(Fusarium solani)和立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)(AG-4)的分离频率最高,致病力比较强,为优势病原。     

4省（市）葡萄果实病害调查及病原初步鉴定

本研究在贵州、广东、安徽和上海共16个县（市）的66个调查点位进行葡萄主要病害的调查。并对安徽、贵州和广东共9个县（市）的葡萄病样进行采集，对病原菌进行分离纯化后，分别用ITS序列对其进行分子鉴定。结果表明：广东、贵州、安徽、上海均有不同程度的葡萄霜霉病、炭疽病的发生。其中，贵州省主要葡萄病害为炭疽病、霜霉病和灰霉病，葡萄霜霉病危害严重，发病率为60.79%，炭疽病仅危害水晶葡萄，发病率为47.64%；广东省主要葡萄病害为溃疡病、炭疽病、白粉病和白腐病，其中溃疡病发生普遍，发病率为48.28%；安徽省葡萄病害有葡萄酸腐病、炭疽病、灰霉病、白腐病、黑曲霉病，其中酸腐病发生较为严重，发病率为53%，巢湖市“夏黑”品种中发病率高达97.0%；上海市调查发现葡萄酸腐病、炭疽病和黑曲霉病。此外，自广东、贵州与安徽省共分离得到114株真菌，分别鉴定属炭疽菌属(Colletotrichum spp.)、葡萄座腔菌属(Botryosphaeria spp.)、间座壳属 (Diaporthe spp.)和链格孢属 (Alternaria spp.)等共计15个属。通过调查，可为各省葡萄病害综合防控提供理论参考。     

贡柑黑腐病发生规律研究

贡柑黑腐病是近年来严重为害贡柑的病害，其病原菌系柑桔链格孢菌（Alternaria citri）。为了探明其发生规律，笔者于2011-2012年采用盆栽苗人工接种和田间调查相结合的方法进行研究。试验结果表明：在人工接种条件下，该病原菌可以从没有伤口的叶片表面浸入，更易从伤口入浸，桔类和橙类的杂交柑-贡柑、茂谷柑最感病，其次是桔类中的椪柑、南丰蜜桔，在有伤口和连续下雨的条件下，马水桔、砂糖桔、温州蜜柑的嫩芽也偶被感染，橙类、柚类、柠檬、金桔抗病。在田间，贡柑、茂谷柑最感病，其次是南丰蜜桔、椪柑，马水桔、砂糖桔、温州蜜柑未见发病。刚抽发的嫩梢和幼果易感病，组织越嫩，越易感病，老叶、成熟果实感病少，幼树和刚结果树以及嫩梢多的树发病重。该病原菌孢子萌发需要高湿，下雨、高温、高湿有利于该病的发生和流行；夏梢发病最重，其次是春梢和幼果，秋梢发病轻。在人工接种条件下，只要下雨和温度达到15-30℃，1-3d即可显症。沿着叶脉快速扩展是该病的最大特点，也是该病难防治的最大原因。     

细绿萍黑腐病病原菌鉴定及其生物学特性和防治药剂筛选

为了明确引起细绿萍黑腐病病原菌种类，研究该病原菌的生物学特性及常用杀菌剂对其菌丝生长的抑制作用。形态学结合多基因联合发育分析结果表明，引起细绿萍黑腐病的致病菌为细极链格孢(Alternaria tenuissima)。生物学特性表明，细极链格孢菌丝生长和产孢的最适温度均为25℃,全黑暗条件下利于菌丝生长和产孢。pH值在6.0～8.0时更利于其产孢，在CMA培养基上生长速度最快，而在PSA培养基上产孢量最大。碳源选择上，在丙三醇上生长速度最快，而甘露醇最有利于其产孢；氮源选择上，在硝酸钾上的生长速度最快，且酵母浸膏最有利于其产孢。室内药剂毒力测定结果表明，供试5种杀菌剂对细极链格孢菌丝生长均有一定的抑制作用，其中32.5%苯甲嘧菌酯SC的抑制活性最强，EC₅₀为0.001 2μg·mL^-1。     

贡梨果实黑斑病病原菌鉴定及室内防治药剂筛选

通过病原菌形态特征、致病性测定、rDNA-ITS序列和EF1-α基因序列分析，确定贡梨黑斑病的病原菌为链格孢菌（Alternaria alternate）。在此基础上，采用菌丝生长速率法测定8种杀菌剂对该病原菌的毒力大小，结果表明，苯醚甲环唑、异菌脲、肟菌?戊唑醇和苯甲?丙环唑的抑菌效果很好，EC50值分别为0.4904μg/mL、0.5091μg/mL、0.5718μg/mL和0.9138μg/mL。     

广西火龙果采后病害主要病原菌分离与鉴定

从广西南宁市、钦州市和防城港市采收的火龙果,经28℃存放,观察采后发病情况。取病部进行组织分离,根据形态学特性和rDNA-ITS序列分析对病原菌进行鉴定,结果表明广西火龙果采后贮藏发生的病害有火龙果软腐病(Fusarium equiseti (Corda) Sacc.,Gilbertella persicaria (Eddy) Hesselt.),火龙果黑斑病(Alternaria alternata (Fr.) Keissl. , Bipolaris cactivora (Petrak)Alcorn), 火龙果溃疡病(Neoscytalidium dimidiatum (Penz.) Crous & Slippers),其中木贼镰刀菌引起火龙果软腐病为首次发现。     

广西柠檬疫菌褐腐病病原菌鉴定

为了解广西柠檬疫菌褐腐病的病原菌确切种类，本研究通过多次采样、病菌分离纯化、人工接种等一系列研究，确定分离到了正确的病原菌。根据病原菌的形态学特征，rDNA-ITS序列和致病性，确定引起广西柠檬疫菌褐腐病的病原菌为柑橘褐腐疫霉菌(Phytophthora citrophthora)。     

金刺梨黑斑病病原菌的分离及鉴定

金刺梨黑斑病主要于开花期危害幼嫩的果梗,果梗受害后产生黑色干腐病斑,导致整个花序从果梗处脱落。对黑斑病病原菌进行了分离和鉴定,通过形态学特性、致病性测定、rDNA-ITS序列分析,初步确定该病主要由拟茎点霉属(Phomopsis Sacc.)的Phomopsis.capsici真菌引起。     

云南苹果白纹羽病原菌的分离与鉴定

为了明确云南苹果产区是否发生白纹羽病,本文按照柯赫氏法则,采用组织分离法和苹果枝条离体接种法,确定分离菌株的致病性,采用形态学和rDNA-ITS序列鉴定分离物的生物学归属。结果表明,分离菌株 STX1.E.3、TJX-6、Y8-8与ZTZS-6在离体条件下能侵染苹果枝条,并在枝条表面形成白色丝网状菌索和褐色的水渍状圆形病斑,它们都属于引起白纹羽病的褐座坚壳菌（Rosellinia necatrix（Hart.）Berl）。该病菌在云南省红河州泸西县、曲靖市马龙区、昆明市西山区和昭通市鲁甸县均有分布。这是云南省苹果白纹羽病的首次报道,对该病的发生规律和防治技术研究奠定了基础。     

柑橘溃疡病拮抗芽孢菌株的筛选及其控病作用

从柑橘根际土壤中获得192个细菌分离物，通过平板拮抗测试，筛选出对柑橘溃疡病菌（Xanthomonas axonopdis pv. citri）有较强拮抗作用的6个芽孢菌株，抑菌圈直径达12.0～25.0mm，其中菌株G32对柑橘溃疡病菌抑制效果最好，稳定性高；温室控病试验表明，菌株G32的控病效果最佳，提前喷施拮抗菌其预防效果达60.7%，接种溃疡病菌后喷施的治疗效果为53.2%；根据其形态特征、培养性状、生理生化特性及16S rDNA序列比对分析，将G32鉴定为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。     

茎直黄芪内生真菌分离鉴定及其多样性分析

为探明茎直黄芪(Astragalus strictus)不同组织部位内生真菌种群分布及其物种多样性,对采自西藏工布江达县的茎直黄芪样品,运用形态学和rDNA-ITS序列分析技术鉴定其种属,并计算多样性指数。结果表明:从茎直黄芪424个组织块中分离到内生真菌336株,分属7纲、9目、10科、13属,其中Alternaria tenuissima分离率最高为32.14%,是优势种属,其次是Undifilum oxytropis,分离率为19.05%;多样性指数显示,茎直黄芪不同组织部位内生真菌多样性指数不同,花中内生真菌香农-维纳指数(2.16)及辛普森指数(0.154)及均匀度指数(0.80)均最高,表明其多样性最高,叶次之,茎最低。表明茎直黄芪不同组织内生真菌的数量、种属组成及多样性存在明显差异,花是内生真菌定植的主要部位,且其多样性最高。     

葡萄炭疽病病原鉴定及防治药剂筛选

采用组织分离法对采自贵阳市花溪区葡萄基地的葡萄炭疽病病样进行分离,致病性测定,结合病原菌形态学特征、rDNA-ITS序列对菌株进行鉴定,并通过菌丝生长抑制法测定了该菌株对7种杀菌剂原药及2组混配药剂的敏感性。结果表明,结合形态学和分子生物学将该菌株鉴定为胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)；7种原药中丁香菌酯对该菌株生长抑制作用最强,EC50值为0.18 mg/L,其次为苯醚甲环唑和双苯菌胺,EC50值分别为1.18 mg/L和1.34 mg/L；混配组合中,吡唑醚菌酯与苯醚甲环唑8:1混配时,其共毒系数(CTC)为168.69,啶氧菌酯与苯醚甲环唑1:4和8:1混配时,CTC分别为197.21和192.69,协同增效效果显著。引起贵阳市花溪区葡萄基地葡萄炭疽病的致病菌为胶孢炭疽菌。     

草坪灰斑病的田间诊断与控制

为了明确河南郑州某高尔夫球场的多年生黑麦草(Lolium perenne)上发生的病害种类,通过田间调查对草坪病害症状进行描述,对病样进行保湿培养并对分离到的病原物进行形态学观察、核糖体DNA-ITS序列分析。结果表明:该病原真菌的形态学与已报道的稻梨孢菌(Pyricularia grisea)相同,核糖体DNA-ITS序列测定分析该菌与稻梨孢菌的同源性达到100%,可以确定该球场的多年生黑麦草上的病害为稻梨孢菌引起的草坪灰斑病。     

肉牛源细极链格孢菌的分离鉴定

为鉴定肉牛皮肤病病原及其致病性并筛选其敏感药物,本研究取患皮肤病肉牛病变部位皮屑、毛发和痂皮进行病原菌的分离,并对分离菌株进行了形态学鉴定、ITS序列分析、小鼠致病性试验和药敏试验。结果显示分离到1株形态特征与细极链格孢菌极其相似的菌株(PY2-1-2);经PCR扩增、测序和BLAST序列比对,结果显示分离株(PY2-1-2)的ITS基因序列与细极链格孢菌(MG975630.1)的ITS基因序列的相似性为99%,分离株PY2-1-2的ITS基因序列长度为543 bp,该片段包括ITS1、5.8S rDNA和ITS2的全部基因序列以及18S rDNA和28S rDNA的部分基因序列,提交GenBank(MH656780.1)。根据形态学结合ITS基因序列分析结果确定该分离株为细极链格孢菌。小鼠致病性试验结果显示该菌对小鼠有致病性。药敏试验结果显示:该菌对灰黄霉素、氟康唑、伊曲康唑、酮康唑的最小抑菌浓度(MIC)值分别为0.5μg/mL、4μg/mL、1μg/mL、1μg/mL。本研究为今后进一步探究细极链格孢菌引起的皮肤病诊治提供科学有效的参考。     

4种暖季型草坪草币斑病病原菌鉴定及其生物学特性

2011-2013年对海南省多个高尔夫球场及校园绿化草坪进行调查期间发现一种类似于草坪币斑病且可严重危害4种暖季型草坪草的草坪病害。根据科赫法则验证、形态学观察以及ITS序列分析的结果,确定引起海南省币斑病的病原菌为Sclerotinia homoeocarpa,这是我国首次报道S. homoeocarpa危害杂交狗牙根和地毯草。生物学特性研究表明: S. homoeoparpa生长的适宜温度为25~30℃,最适温度为28℃;适宜pH值为4~6,最适pH值为5;菌丝的致死温度为55℃水浴处理10 min;光照有利于菌丝生长。S. homoeoparpa能够利用多种碳氮源:碳源测试中,对可溶性淀粉利用率较高,对D-甘露醇和D-阿拉伯糖利用率较低;氮源测试中,病菌对硝酸铵、磷酸二氢铵的利用效果最佳,对脲利用效果最差。     

我国水稻纹枯病菌的融合类群及致病性差异

为明确我国水稻纹枯病菌的融合类群及其致病力差异,于2015年8月从黑龙江、吉林、辽宁、河南、安徽、浙江、江苏、四川、重庆、贵州、云南、湖北、湖南、广西、广东、福建16个主要水稻种植区采集与水稻纹枯病症状类似的水稻叶鞘和叶片,采用水琼脂分离法分离病菌,在每个产区分离的病菌中各选择1个菌株,采用形态学、菌丝细胞核荧光染色和rDNA-ITS序列分析对分离出的真菌进行鉴定,比较不同地区病原菌生长速度、菌核结构和细胞核数量的差异,并应用柯赫氏法则对不同地区病样中分离的纯培养物致病性进行测定。结果表明,分离自不同地区的61株真菌菌株均为Rhizoctonia solani,且属于AG1IA融合群,菌丝细而松散,菌丝多分枝有隔膜,分枝直角或近45°的锐角,后期产生的菌核大多数细胞为多核,但不同地区的病原菌菌株生长速度、菌核结构和细胞核数量具有一定的差异;在致病性试验中选取的16株菌株均侵染水稻叶片,产生水稻纹枯病典型症状,分离自不同地区的菌株致病力具有明显差异,其中分离自广东、广西、福建和重庆的菌株致病力较强。