氨基酸和半胱胺对绵羊胚胎体外发育的影响

将从绵羊卵巢采集的卵母细胞成熟培养22~24h;成熟卵母细胞去除颗粒细胞,选择排出第一极体的卵母细胞,用5μmol/L A23187(5min)联合2mmol/L 6-DMAP(4h)进行孤雌激活;激活后的卵母细胞在培养液中进行培养。研究氨基酸和半胱胺对绵羊胚胎早期体外发育的影响。结果显示:(1)氨基酸能促进胚胎体外发育,0~24h培养添加抑制卵母细胞的卵裂,24h后培养添加比全过程培养添加更能促进胚胎体外发育;(2)24~72h培养添加必需氨基酸(EAA),能促进胚胎体外发育;(3)半胱胺添加量0~100μmol/L,随浓度增高各项发育指标呈增高趋势,添加100~200μmol/L,随浓度增高各项发育指标呈下降趋势。     

Ghrelin对水牛体外受精和孤雌激活胚胎体外发育的影响

本研究的目的是探讨Ghrelin对水牛体外受精和孤雌激活胚胎体外发育的影响.体外成熟的水牛卵母细胞经体外受精或离子霉素孤雌激活后.分别在舍0,0.5,5,50和500 μg/L Ghrelin的培养液中进行体外培养,观察各组胚胎的卵裂率和囊胚率.结果显示,在培养液中添加不同浓度的Ghrelin对体外受精和孤雌激活胚胎的卵裂率均无显著影响(P>0.05),但添加500 μg/L的Ghrelin显著提高体外受精胚胎的囊胚发育率(33.5% vs 13.7%,P<0.05),50 μg/L或500 μg/L的Ghrelin均显著提高孤雌激活胚胎的囊胚发育率(32.4%和34.6% vs 14.5%,P<0.05).结果表明,培养液中添加Ghrelin对胚胎的早期卵裂没有影响,但可促进水牛体外受精和孤雌激活胚胎囊胚的形成.     

微量元素锌对牛卵母细胞体外成熟及其体外受精胚胎发育的影响

本研究旨在探讨锌对牛卵母细胞体外成熟及体外受精胚胎发育的影响。首先使用锌螯合剂TPEN去除锌,并检测缺锌对牛卵母细胞体外成熟的影响;然后在体外成熟液中分别添加0(对照组)、0.4、0.8、1.2、1.6μg/mL硫酸锌,探索不同浓度硫酸锌对体外成熟及后续胚胎发育的影响。结果表明:锌元素在体外成熟液中的含量低于牛卵泡液和颈静脉血清(P<0.05);去除体外成熟液中的锌后牛卵母细胞的体外成熟效率下降(P<0.05),且具有时间依赖性,补充适宜浓度硫酸锌后成熟效率恢复;向体外成熟液中添加硫酸锌并未对卵母细胞体外成熟效率产生显著影响,但添加0.8μg/mL硫酸锌成熟后的卵母细胞中活性氧含量显著降低,后续体外受精胚胎的囊胚发育效率显著提高;RT-qPCR分析结果显示,与对照组相比,添加0.8μg/mL硫酸锌成熟后的卵母细胞中抗氧化基因SOD1、CAT、TXN1、PRD1和卵丘扩展基因PTX3、TSG6的表达水平均提高(P<0.05)。研究表明,添加0.8μg/mL硫酸锌可以通过提高卵母细胞内抗氧化酶基因的表达水平,降低卵母细胞内活性氧含量,促进卵丘扩展,从而提高卵母细胞成熟质量和体外受精胚胎的发育效率。     

血管内皮生长因子对绵羊卵母细胞体外成熟及体外受精卵卵裂率的影响

试验研究了在绵羊体外成熟和体外受精培养系统中分别添加5ng/mL血管内皮生长因子(VEGF)对绵羊卵母细胞体外成熟和体外受精卵的早期发育的影响。结果表明:①与对照组相比,添加5ng/mLVEGF能够显著(P<0.01)提高绵羊卵母细胞的体外成熟率。②在体外受精液中添加5ng/mLVEGF能够显著(P<0.05)提高成熟卵母细胞的卵裂率。研究表明,VEGF对绵羊卵母细胞的体外成熟和受精具有调节作用。     

α-亚麻酸通过提高培养基抗氧化能力促进绵羊卵母细胞体外核成熟

本实验旨在研究体外成熟(IVM)培养基中添加不同浓度α-亚麻酸(ALA)(0、10、50、100、200μmol/L)对绵羊卵丘扩展和卵母细胞核成熟的影响,测定IVM 24 h后培养基中超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力以及脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量。结果表明:与添加0μmol/L ALA相比,培养基中添加50、100μmol/L ALA促进绵羊卵母细胞的卵丘扩展(P<0.05),且100μmol/L ALA卵丘细胞扩展率最高;添加100μmol/L ALA促进绵羊卵母细胞的核成熟(P<0.05);添加200μmol/L ALA则具有抑制卵丘扩展和细胞核成熟的趋势(P<0.05);添加100μmol/L ALA增加SOD活力(P<0.05)和GSH-Px活力(P<0.05);添加50、100μmol/L ALA显著降低MDA含量(P<0.05),又以添加100μmol/L ALA效果最好。综上,添加100μmol/L ALA可以通过抗氧化作用改善绵羊体外成熟培养基微环境,促进卵丘扩展和卵母细胞核成熟。     

E-64对绵羊卵母细胞成熟及胚胎发育能力的影响

为了研究E-64对绵羊卵母细胞体外成熟及胚胎发育能力的影响,试验在体外成熟基础液中分别添加0,1,5,10μmol/L的E-64。结果表明:与0μmol/L E-64相比,1μmol/L的E-64能显著提高绵羊卵母细胞囊胚率(P0.05),5,10μmol/L的E-64能极显著提高其囊胚率(P0.01),但各浓度E-64对绵羊卵母细胞体外成熟率、卵裂率及囊胚细胞数均无显著影响(P0.05)。     

甘草酸单铵盐对猪卵母细胞体外成熟及胚胎发育能力的影响

将收集的猪COCs置于添加不同浓度(0.0,0.3,0.6,1.2μmol/L)甘草酸单铵盐(monoammonium glycyrrhizinate, MAG)的卵母细胞体外成熟培养液中培养46 h,统计成熟率，通过免疫荧光染色检测成熟卵母细胞ROS表达水平；对成熟卵母细胞体外受精，于胚胎培养液内体外培养48,120 h,分别统计体外受精胚胎卵裂率、囊胚率，并用Hochest荧光染色检测囊胚总细胞数；结合成熟率及IVF胚胎发育囊胚率选定最佳添加浓度，在体外成熟培养液中添加最适浓度MAG,以0μmol/L MAG为对照组，体外培养46 h后，利用免疫荧光染色检测猪成熟卵母细胞的线粒体膜电位水平和细胞凋亡水平。结果显示，与对照组相比，不同浓度MAG处理组猪卵母细胞体外成熟率均有所提高，但差异均不显著(P>0.05);不同浓度MAG添加均可降低猪卵母细胞ROS水平，与对照组相比，0.3,0.6μmol/L组差异显著(P<0.05),1.2μmol/L组差异极显著(P<0.01)。0.3μmol/L添加组显著提高了猪体外受精囊胚率(P<0.05),但不同MAG添加组对...     

α-亚麻酸通过提高GSH水平、降低ROS水平促进绵羊卵母细胞抗氧化与氧化平衡能力

为研究体外成熟(IVM)培养基中α-亚麻酸(ALA)对绵羊卵母细胞胞质成熟的影响,实验使用含0(对照组)、100μmol/L ALA的IVM培养基孵育绵羊卵母细胞24 h,测定IVM 24 h后卵母细胞胞质谷胱甘肽(GSH)及活性氧(ROS)水平。结果表明:相较对照组,培养基中添加100μmol/L ALA显著提高了绵羊卵母细胞胞质GSH水平,极显著降低了绵羊卵母细胞胞质ROS水平。由此可知,添加100μmol/L ALA可以显著增强IVM后绵羊卵母细胞的抗氧化能力,显著改善IVM后绵羊卵母细胞氧化平衡状态。     

Ghrelin在绵羊卵母细胞体外成熟过程中对BCL-2、BAX的mRNA表达的影响

为了探讨Ghrelin在绵羊卵母细胞体外成熟过程中与BCL-2、BAX的相关性及Ghrelin在绵羊卵母细胞成熟过程中可能的作用机理,试验在绵羊卵母细胞成熟液中添加500 ng/mL Ghrelin,采用实时荧光定量PCR分别在0,8,16,24小时时检测卵母细胞BCL-2、BAX的表达量。结果表明:试验组添加Ghrelin后8,16小时时卵母细胞BCL-2 mRNA相对表达量显著升高(P<0.05),但成熟后16,24小时时较8小时时有下降趋势;下降到24小时时,其表达量与0小时时没有显著变化(P>0.05);8,16小时时试验组与对照组比较差异显著(P<0.05),0,24小时时差异不显著(P>0.05)。试验组添加Ghrelin后8,16,24小时卵母细胞BAX mRNA相对表达量较0小时时下降,且差异显著(P<0.05),但成熟后16,24小时时与8小时时比较有上升趋势;在8,16小时时试验组较对照组BAX mRNA相对表达量均有所下降,且差异有显著性(P<0.05),而在0,24小时时差异不显著(P>0.05)。说明Ghrelin在绵羊卵母细胞成熟过程中与BCL-2和BAX的表达存在相关性,推测Ghrelin在卵母细胞成熟过程中存在积极调控作用。     

美洛托宁对猪卵母细胞体外成熟的影响及受体介导机制探究

为了探究美洛托宁对猪卵母细胞体外成熟的影响及其受体介导机制,试验采集健康母猪卵巢中的卵母细胞,采用免疫荧光检测猪卵母细胞MT受体表达情况;在体外成熟培养液中分别加入不同浓度的美洛托宁(0,1×10~(-5),1×10~(-6),1×10~(-7) mol/L),筛选对猪卵母细胞成熟和胚胎发育的最适浓度;根据最佳美洛托宁添加浓度,成熟液中分别添加1×10~(-6) mol/L的美洛托宁、MT受体激动剂、 MT受体颉颃剂和1×10~(-6) mol/L MT受体颉颃剂+1×10~(-6) mol/L美洛托宁,检测美洛托宁及其受体激动剂和颉颃剂对猪卵母细胞成熟和胚胎发育的影响;收集添加1×10~(-6) mol/L的美洛托宁24 h处理组、空白对照组、MT受体颉颃剂处理组、美洛托宁和MT受体颉颃剂组母猪卵母细胞复合物,利用试剂盒检测卵母细胞cAMP和cGMP含量。结果表明:当美洛托宁浓度为1×10~(-6)mol/L时,猪卵母细胞的分裂率和囊胚率均达到最高,分别为76.26%和31.48%,与空白对照组相比差异显著(P0.05);在成熟液中添加1×10~(-6)mol/L美洛托宁和1×10~(-6)mol/L MT受体激动剂,两组细胞极体排出率均较高,与空白对照组相比差异显著(P0.05),1×10~(-6)mol/L MT受体激动剂和1×10~(-6)mol/L美洛托宁的分裂率分别为75.16%和75.33%,囊胚率分别为30.04%和30.36%,与空白对照组相比差异显著(P0.05);在成熟液中添加1×10~(-6)mol/L的美洛托宁可以显著降低cAMP的含量和显著升高cGMP的含量(P0.05)。说明美洛托宁通过与细胞膜G蛋白偶联受体结合,从而抑制了cAMP合成,提高cGMP含量,进而促进猪卵母细胞成熟及早期胚胎发育。     

EGF和IGF-1对山羊卵母细胞体外成熟的影响

研究了在培养液中添加不同浓度的EGF、IGF-1以及EGF联合IGF-1对山羊有腔卵母细胞体外成熟的影响。结果表明: (1)10, 20, 30μg/LEGF对山羊卵母细胞体外成熟无显著影响(P>0.05)。(2) 10μg/L的IGF-1对山羊卵母细胞体外成熟无显著影响(P>0.05); 20, 30μg/L的IGF-1能显著提高山羊卵母细胞体外成熟率 (P<0.05)。(3)添加 10μg/LEGF+20μg/LIGF-1组卵母细胞体外成熟率显著高于添加 20μg/L的IGF-1组(P<0.05),极显著高于添加 10μg/LEGF组和对照组(P<0.01)。可见,EGF和IGF-1对山羊卵母细胞体外成熟有协同作用。     

白藜芦醇对绵羊卵母细胞体外成熟的影响

本实验探究体外成熟(IVM)培养基中添加不同浓度白藜芦醇(0、0.5、2.0、5.0μmol/L RES)对绵羊卵母细胞核质成熟的影响。IVM 24 h后观察卵丘细胞扩展率和卵母细胞第一极体形成情况,并检测卵母细胞细胞质内活性氧(ROS)和谷胱甘肽(GSH)含量。结果表明:与对照组相比,0.5μmol/L RES组的卵丘细胞扩展率无显著差异,卵母细胞第一极体的形成显著提高,卵母细胞胞质中ROS显著降低,GSH含量显著提高;添加量增至5.0μmol/L卵丘扩展率、第一极体形成率、胞质内GSH含量显著下降。综上所述,在绵羊卵母细胞IVM液中添加0.5μmol/L RES通过降低胞质内ROS及提高GSH含量增强卵母细胞抗氧化能力,提高卵母细胞核成熟率及胞质质量,而促进卵母细胞体外成熟。     

AY9944A-7和FSH对绵羊卵母细胞体外成熟的影响

本试验旨在研究FSH和AY9944 A-7在抑制剂阻滞的绵羊卵母细胞体外成熟过程中的诱导作用并探究二者的互作效应。分别以次黄嘌呤(Hx,4 mmol/L)、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX,0.25 mmol/L)或者二丁酰环磷酸腺苷(dhcAMP,0.3 mmol/L)抑制绵羊卵丘-卵母细胞复合体(COCs)中卵母细胞自发成熟,通过单独或同时添加FSH(10μg/mL)和AY9944 A-7(20μmol/L)诱导其恢复减数分裂。结果表明:FSH能克服一定浓度Hx,IBMX和dbcAMP对绵羊卵母细胞自发成熟的抑制作用,诱导绵羊卵母细胞生发泡破裂,排出第一极体;AY9944A-7能够克服一定浓度Hx和IBMX的抑制,诱导绵羊卵母细胞恢复减数分裂;FSH和AY9944 A-7在克服Hx对绵羊卵母细胞成熟的抑制时,存在显著的协同效应(P0.05)。     

淫羊藿苷对小鼠卵泡卵母细胞体外发育与成熟的影响

用在体和离体试验研究淫羊藿苷对小鼠卵母细胞体外发育与成熟的影响。健康雌性小鼠分组灌服0.1、0.3、0.5和0.7 mg/d淫羊藿苷或2、6、10及14 mg/d淫羊藿水提液,并设生理盐水灌服对照组,取连续灌服7d和14d小鼠卵巢卵泡卵母细胞作体外成熟培养与体外受精,统计第一极体(pb I)排出率和受精率。在小鼠卵母细胞体外成熟培养液中按高(5μg/m L)、中(0.5μg/m L)、低(0.05μg/m L)剂量添加淫羊藿苷,经24 h成熟培养后进行体外受精,观察并记录卵母细胞pb I排出、受精和卵裂情况。结果表明,分别连续灌服淫羊藿苷和淫羊藿水提液后,各组小鼠卵母细胞细胞体外成熟率均有所提高,连续灌服7 d后,淫羊藿苷0.3、0.5和0.7 mg/d组小鼠卵母细胞受精率较对照组显著提高(P0.01);连续灌服14 d淫羊藿水提液6 mg/d组卵母细胞pb I排出率和受精率均显著高于对照组(P0.05)。添加淫羊藿苷低剂量组小鼠卵母细胞体外受精率和卵裂率显著高于对照组(P0.05);pb I排出率虽高于对照组,但无显著差异。本试验表明,连续灌服淫羊藿苷7 d对小鼠卵母细胞体外发育与成熟具有明显的促进作用;体外培养液中添加低剂量淫羊藿苷对小鼠卵母细胞体外成熟和受精具有促进作用,但高剂量反而有抑制作用。     

不同浓度紫杉醇预处理对绵羊卵母细胞玻璃化冷冻保存效果的影响

细胞骨架系统的稳定对于提高卵母细胞或胚胎冷冻后的存活率及其发育能力具有重要作用。紫杉醇(Taxol)作为细胞骨架稳定剂,可增强α、β-微管蛋白二聚体的紧密联系,增大微管交联,促进微管聚合和稳定。本实验以绵羊体外成熟卵母细胞为材料,旨在探讨紫杉醇预处理对玻璃化冷冻绵羊卵母细胞存活率、形态正常率及体外受精后胚胎发育率的影响。采用0、0.5、1.0、1.5μmol/L的紫杉醇预处理绵羊卵母细胞并进行玻璃化冷冻保存,未经处理的新鲜卵母细胞为对照组。结果表明:采用浓度为0.5μmol/L紫杉醇预处理绵羊卵母细胞冷冻保存效果最佳,其解冻后的存活率(82.38%)与其他3个试验组相比有显著差异性(P0.05);体外受精卵裂率(51.17%)和桑囊胚率(20.30%)也显著高于其他3个试验组(P0.05),但低于对照组(69.42%,34.77%)(P0.05)。由此可见,以0.5μmol/L浓度的紫杉醇预处理组绵羊体外成熟卵母细胞冷冻后能获得较好的效果。     

虎杖苷对牛卵母细胞体外成熟的影响

为研究虎杖苷(PD)对牛卵母细胞体外成熟的影响,本实验在体外成熟液中添加不同浓度(0、0.5、1.0、2.0μmol/L)PD,对牛卵母细胞体外培养22～24 h,统计第一极体排出率,然后对各组卵母细胞进行体外受精并统计胚胎的发育情况;最后分析PD对牛卵母细胞体外成熟作用机制。结果表明:与对照组(0μmol/L)相比,PD各处理组的第一极体排出率显著提高,体外受精后的胚胎分裂率无差异,而1.0μmol/L PD处理组囊胚率较对照组显著提高,1.0、2.0μmol/L PD处理组囊胚期细胞数较对照组显著提高;进一步分析发现,与对照组相比,1.0μmol/L PD可显著降低细胞内活性氧水平,提高抗氧化基因GPX4、SOD1表达水平,显著提高细胞内总谷胱甘肽含量。综上,成熟液中添加1.0μmol/L PD可提高细胞内抗氧化基因的表达以及提高谷胱甘肽含量,降低细胞内的活性氧含量,从而有利于牛卵母细胞的成熟以及早期胚胎发育。     

黄芩苷对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

氧化应激是阻碍胚胎体外发育的重要因素之一,减少氧化应激可能是提高胚胎体外培养效果的途径。本文探讨了不同浓度黄芩苷对小鼠卵母细胞体外成熟及早期胚胎发育的影响,为体外抗氧化性研究及抗氧化物选择提供参考。试验选择4～6周龄雌性昆明小鼠获取GV期卵母细胞,在体外成熟培养液中分别添加不同浓度(0、20、40、60μmol/L)的黄芩苷,经37℃、5%CO₂、饱和湿度培养条件体外成熟12 h,统计卵母细胞第一极体排出率,检测卵母细胞胞质内活性氧(ROS)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量以及培养液中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和总抗氧化能力(T-AOC),并采集8～10周龄雄性昆明小鼠精液,进行体外受精(IVF),分别于受精后6、24、96 h统计受精率、卵裂率和囊胚率。结果表明：体外成熟液中添加40、60μmol/L黄芩苷后,卵母细胞第一极体排出率较对照组显著提高(P<0.05),且浓度为40μmol/L极体排出率显著高于60μmol/L,但对成熟后的卵母细胞体外受精率、卵裂率、囊胚率无显著性影响(P>0.05),卵母细胞胞质RO...     

不同收集方法及添加半胱氨酸、肝素钠对黄牛卵母细胞体外成熟及发育的影响

试验旨在研究不同卵母细胞收集方法及添加半胱氨酸、肝素钠对黄牛卵母细胞体外成熟及体外受精的影响。以黄牛为研究对象,采用两种方法(抽卵法和割卵法)抽取卵泡中的卵母细胞,比较两种方法获取的卵母细胞成熟率,结果发现,抽卵法获得的卵母细胞成熟率显著高于割卵法(P0.05)。将获取的卵母细胞分为4组:A组(对照组,只添加基础成熟培养液)、B组(基础成熟培养液+200μmol/L半胱氨酸)、C组(基础成熟培养液+20μg/mL肝素钠)、D组(基础成熟培养液+200μmol/L半胱氨酸+20μg/mL肝素钠),结果发现,D组的卵母细胞成熟率显著高于A、B、C组(P0.05),B、C组间卵母细胞成熟率无显著差异(P0.05),但两组卵母细胞成熟率均显著高于A组(P0.05);A组卵母细胞卵裂率均显著低于B、C、D组(P0.05),B、C、D组间卵母细胞卵裂率无显著差异(P0.05);D组囊胚率显著高于其他3组(P0.05)。结果表明,抽卵法获得卵母细胞效率显著高于割卵法,肝素钠及半胱氨酸对黄牛卵母细胞体外成熟和体外受精都有促进作用,且同时添加两种物质对体外成熟的效果更佳。     

氨基酸和半胱胺对绵羊胚胎体外发育的影响

将从绵羊卵巢采集的卵母细胞成熟培养22-24h；成熟卵母细胞去除颗粒细胞，选择排出第一极体的卵母细胞，用5μmol／LA23187（5min）联合2mmol／L 6-DMAP（4h）进行孤雌激活；激活后的卵母细胞在培养液中进行培养。研究氨基酸和半胱胺对绵羊胚胎早期体外发育的影响。结果显示：（1）氨基酸能促进胚胎体外发育，0-24h培养添加抑制卵母细胞的卵裂，24h后培养添加比全过程培养添加更能促进胚胎体外发育；（2）24～72h培养添加必需氨基酸（EAA），能促进胚胎体外发育；（3）半胱胺添加量0～100μmol／L，随浓度增高各项发育指标呈增高趋势，添加100～200μmol／L，随浓度增高各项发育指标呈下降趋势。     

血清、促性腺素、EGF和水对山羊卵母细胞体外成熟的影响

为了通过比较培养筛选出能改进和提高山羊卵母细胞体外成熟效率的培养体系 ,培养的山羊卵母细胞以 TCM-199为基础培养液 ,添加 :(1) 10 %血清 (胎牛血清 (FBS)或发情山羊血清 (EGS) ) 2 0 m g/ L促黄体素 (L H) 10 mg/ L促卵泡素 (FSH) 1m g/ L 雌二醇 (E2 ) ;(2 ) 10 % EGS 促性腺素 (L H∶ FSH=5 mg/ L∶ 0 .5 m g/ L 或 2 0 mg/ L∶ 10mg/ L )或者 0 .0 75 IU / m L人绝经期促性腺素 (HMG) 1mg/ L estradiol 17β;(3) 10 % EGS 0 .0 75 mg/ L HMG 10～ 2 0 μg/ L EGF。此外 ,以 M199 10 % EGS 0 .0 75 mg/ L HMG 10～ 2 0 μg/ L EGF为培养基 ,溶解于自制超纯水或储存的商品化超纯水来培养卵母细胞。培养条件为 38℃ ,5 % CO2 。培养 2 4 h后 ,在体式显微镜下统计处于 M 期的卵母细胞比例。结果显示 :在卵母细胞成熟液中添加 10 % EGS比 10 % FBS的成熟培养效果好 ;添加 HMG能够促进卵母细胞的成熟 ,其效果比添加不同比例的 L H/ FSH好 ;成熟液中添加 10～ 2 0μg/ L EGF能促进卵母细胞的成熟 ,但成熟率没有明显提高 ;新鲜的超纯水对于卵母细胞的培养是必要的。结论 :新鲜超纯水配制的 M199 10 % EGS 0 .0 75 IU / m L HMG 10～ 2 0μg/ L EGF培养液可以获得最佳卵母细胞培养效果