云南地方鸡沙门氏菌血清学调查

为了解云南地方鸡种鸡群沙门氏菌的感染情况,对采自盐津乌鸡、南涧乌鸡、武定鸡、尼西鸡、青花鸡、绿春黄连鸡、文山土鸡、宁蒗高原鸡和云龙矮脚鸡9个云南地方鸡种鸡场(户)的5 804份血清样品,采用沙门氏菌微量凝集试验进行抗体检测,开展2019年云南地方鸡沙门氏菌血清流行病学调查。结果显示:云南地方鸡种鸡场沙门氏菌场群阳性率为96.43%,个体平均阳性率为23.07%;云南省不同区域沙门氏菌个体阳性率为5.80%～40.32%;不同品种地方鸡的沙门氏菌个体阳性率为0.89%～53.57%。结果表明:云南地方鸡种鸡场鸡群中沙门氏菌的感染情况较为严重,不同区域、不同品种流行情况并不一致,需因地制宜,制定各场相应的防控净化措施。     

动物源性沙门菌的血清型、生物被膜形成能力和耐药性分析

本研究旨在探讨动物源性沙门菌的血清型分布、生物被膜形成能力及其耐药性.从不同动物病料中分离细菌,以PCR方法鉴定沙门菌,结合玻片凝集法和16S rRNA序列测定确定沙门菌的血清型和分布,结晶紫染色定量法检测分离株的生物被膜形成能力,药敏试验检测分离菌对常用药物的敏感性.结果共分离鉴定出58株沙门菌,包括鸡白痢沙门菌、鼠伤寒沙门菌、肠炎沙门菌、丙型副伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌、都柏林沙门菌和阿哥那沙门菌等7种血清型,其中鸡群以鸡白痢沙门菌感染为主,肠炎沙门菌次之;水禽以鼠伤寒沙门菌感染为主.生物被膜测定结果显示51.72％的沙门菌分离株可形成生物被膜,其中83.33％的鼠伤寒沙门菌可形成生物被膜.20种抗生素(氨基糖苷类、磺胺类、喹诺酮类、林可酰胺类、氯霉素类、青霉素类、四环素类和头孢菌素类)敏感性试验表明所有菌株对林可霉素耐药,51.72％对4种及其以上抗生素耐药,并出现了1株对所有受试抗生素均耐药的鼠伤寒沙门菌.结果表明鸡白痢沙门菌、鼠伤寒沙门菌和肠炎沙门菌是为目前在家禽中分离的优势血清型;同时具有生物被膜形成能力和多重耐药性的沙门菌将对家禽疾病控制和公共卫生带来更大的威胁.     

河南省鸡源沙门菌新近流行株的分离鉴定及其耐药性分析

旨在了解河南省鸡沙门菌临床分离株血清型分布及药物敏感情况。从河南省各地区养鸡场共采集了沙门菌可疑病料617份,按常规方法进行分离,经生化、PCR及血清型鉴定,共分离出98株鸡源沙门菌,其中血清型定型82株,主要为肠炎沙门菌(62.24%)、鸡白痢沙门菌(18.37%)。进一步Kindy-Bauer(KB)法检测分离菌株对22种药物敏感性表明,所有分离菌株对多粘菌素B、阿米卡星、庆大霉素、萘啶酸较为敏感,对阿齐霉素和氨苄西林耐药率在60.00%～70.00%之间,对红霉素和青霉素表现为极高的耐药性,耐药率高达100.00%。三重以上耐药菌株高达96.94%,七耐以上的菌株为56.12%,耐药最多的菌株可耐18种抗生素。由此可见,河南省禽类沙门菌的感染流行主要以肠炎沙门菌和鸡白痢沙门菌为主,多重耐药十分严重,严重影响了禽类沙门菌病的诊治与预防。     

禽沙门菌分离鉴定方法的建立与优化

本研究旨在建立和优化禽沙门菌分离鉴定的方法。选择山东省某地方品种鸡疑似发生沙门菌病的未出壳死胚样品24份,通过4组不同的培养基组合比较沙门菌的分离情况,选择沙门菌通用引物两对和鸡白痢特异性引物一对进行分离株的PCR检测,比较其特异性,然后进行血清分型和MLST分型,确定沙门菌类型并研究其相关性。结果表明,该批样品中TTB比SC增菌效果好,XLD和XLT4选择培养基对沙门菌分离效果相同,最终通过PCR方法鉴定出沙门菌阳性率为58.3%;发现两对通用引物特异性一致,表明可任选一对引物进行PCR鉴定;用鸡白痢沙门菌特异性引物完成的PCR鉴定结果显示,14株沙门菌中有7株为鸡白痢沙门菌;血清型鉴定结果表明,14株沙门菌中有7株鸡白痢沙门菌、7株肠炎沙门菌,共两种血清型;MLST分子分型结果表明,14株沙门菌分为3个ST型,分别是7株ST11、3株ST92和4株ST2151,其中ST11为肠炎沙门菌,ST92和ST2151为鸡白痢沙门菌;本研究表明,疑似沙门菌感染样品经BPW和TTB增菌、XLD或XLT4选择培养基分离培养,最后通过PCR方法可准确完成沙门菌的分离鉴定;同时,应用该方法可完成对鸡白痢沙门菌的鉴定,并与血清分型和MLST分子分型结果一致。     

三黄种鸡场孵化死胚中沙门菌的分离鉴定与耐药性分析

为了解死亡鸡胚中沙门菌的感染状况,从河南省4家三黄种鸡场自带孵化场采集死胚样品,进行沙门菌分离、血清型鉴定,并用纸片法和PCR方法对菌株耐药表型及相关耐药基因进行检测。结果:从356份死胚样品共分离到173株沙门菌,包括5种血清型:鸡白痢沙门菌(162株)、布利丹沙门菌(5株)、塞罗沙门菌(4株)、肠炎沙门菌(1株)、菲尔摩雷沙门菌(1株)。不同来源死胚中沙门菌的分离率和耐药情况差异显著;173株沙门菌对磺胺异噁唑(82.1%)、氨苄西林(74.0%)、四环素(49.1%)、土霉素(48.6%)耐药情况较严重,且43.4%(75/173)的菌株表现为多重耐药;对其他抗生素耐药情况较轻,耐药率在11%以下;对头孢他啶、美罗培南、亚胺培南、多黏菌素E、氯霉素、恩诺沙星、环丙沙星敏感。PCR共扩增到13种耐药基因,且耐药基因的检出情况与耐药表型的符合率在72%以上,其中ESBLs类、氨基糖苷类、头孢菌素类的符合率为100%。结论:三黄鸡鸡胚感染的沙门菌血清型复杂、多重耐药严重,且耐药基因普遍存在于耐药菌株中。     

不同鸡种对肠炎沙门菌抗性的比较

为评价安卡、清远麻、仙居和白耳4个品种鸡对肠炎沙门菌的敏感性,将肠炎沙门菌经颈部皮下注射途径对各试验组鸡接种,测定半数致死量(LD50)。结果显示:4个品种鸡的LD50分别是白耳鸡为1.26×108cfu,仙居鸡为3.69×107cfu,安卡鸡为1.10×108cfu,清远麻鸡为5.01×107cfu。提示:中国地方鸡种对肠炎沙门菌的抗性存在着遗传多样性。     

15株禽源沙门菌的分离鉴定与耐药性试验

本试验旨在对沙门菌临床分离株进行鉴定及其耐药性进行研究。通过收集2012年2月-7月间具有典型沙门菌病病变特征的病例,无菌采集病死禽的肝脏、心、卵巢等脏器接种血清营养琼脂培养基,以麦康凯琼脂培养基纯化分离菌,并检测其生化特点,16S rDNA基因测序法快速鉴定分离菌株,然后进一步鉴定血清型;同时用15种抗菌药物进行药敏试验。结果显示,有15株细菌在麦康凯琼脂培养基上为无色、透明的菌落,能利用葡萄糖、甘露醇,不发酵乳糖、蔗糖,符合沙门菌的生化特性。同时,15株沙门菌的16S rDNA序列分析结果显示,分离株的同源性达到97%以上。15株沙门菌的血清学试验结果显示,有7株鼠伤寒沙门菌、5株伤寒沙门菌、2株肠炎沙门菌、1株鸡白痢沙门菌。药敏试验结果显示,分离细菌对链霉素、萘啶酸、强力霉素和美洛西林耐药率高。     

肠炎沙门菌SDBL-1分离株的生物学特性及传播途径探究

为研究肠炎沙门菌(S.enteritidis)的生物学特性和传播途径,选择1株来自于AA肉鸡的肠炎沙门菌SDBL-1分离株,探究其半数致死量、生长特性、药敏试验、毒力因子;将SDBL-1分离株定量至7.09×109CFU·mL-1,感染组灌服0.5mL,同时对照组和空气传播组灌服等量的生理盐水,在灌服后不同时间测定空气传播组、感染组和对照组血液常规、淋巴细胞亚群指标,运用细菌分离的方法分析鸡在灌服后0~20d排毒规律,同时对空气传播组口腔拭子、泄殖腔拭子、羽毛囊以及剖检脏器等分离与鉴定沙门菌,测定环境(饲料、饮水、蚊蝇等)中沙门菌;应用平板凝集方法测定空气传播组抗体变化。结果显示:1)血液指标方面,空气传播组、感染组淋巴细胞比率下降,粒细胞比率、粒细胞数量以及中间细胞比率上升,同时淋巴细胞亚群CD4+、CD8+以及CD4+/CD8+比例出现下降;2)脏器指数方面,空气传播组肝指数显著增大(P0.05),胸腺指数显著减小(P0.05);3)感染情况,空气传播组发生感染,感染鸡通过粪便间歇性排毒,其口腔拭子、羽毛囊、泄殖腔拭子和部分脏器分离到沙门菌,其中沙门菌在食道的分离率最高,空气传播组在感染后第4天初次检测到沙门菌抗体,在感染后第14天血清均呈现抗体阳性;4)环境沙门菌检出情况,水线及饲料中分离到沙门菌,但羽毛和蚊蝇中没有分离到沙门菌。可见SDBL-1分离株能通过空气传播并引起鸡的感染,导致机体炎症反应,造成免疫功能紊乱和器官不同程度损伤;感染鸡通过粪便、口腔、泄殖腔间歇性排毒,环境拭子(如料槽中的饲料、水线)可分离到沙门菌,本研究探究了肠炎沙门菌的生物学特性和不同传播途径,为控制、预防沙门菌的流行和传播提供借鉴。     

新疆地区2株驴源马流产沙门菌的分离鉴定及致病性分析

[目的] 研究确定导致新疆地区2个规模化驴场出现流产的疑似病原沙门菌,并探究其致病能力和耐药性情况。[方法] 通过细菌分离培养、形态学观察、生化试验对分离菌进行了鉴定,并对分离菌的鞭毛基因FliC进行了PCR扩增及序列分析,通过致病性测定、荷菌量检测及病理组织学观察,鉴定和分析了分离菌的致病性,并通过药敏试验分析其耐药性。[结果] 通过细菌分离培养、形态学观察、生化试验,确定分离到的2株细菌均为马流产沙门菌,分别命名为G1-1和XD1-2。对这2个分离株的鞭毛基因FliC的遗传进化分析结果显示,2株分离菌FliC氨基酸序列之间的相似性为99.0%,2株分离菌FliC氨基酸序列与爱尔兰马源马流产沙门菌分离株Ireland-HE801373、Ireland-HE801378株相似性均最高,且均为99.3%;分离株G1-1与爱尔兰马源马流产沙门菌分离株Ireland-HE801373和Ireland-HE801378及国内马源马流产沙门菌分离株China-KJ486797.1和China-KJ486769.1亲缘关系较近,分离株XD1-2则与美国肠炎沙门菌分离株USA-EBQ1214032.1亲缘关系较近,相似性分析与进化树结果一致。小鼠致病性试验显示,2株分离菌对小鼠的毒性均较强且致病性存在差异,XD1-2对小鼠的致病性强于G1-1。分离菌G1-1对9种抗菌药物耐药,对11种抗菌药物敏感。分离菌XD1-2对11种抗菌药物耐药,对5种抗菌药物敏感。[结论] 本试验成功分离到2株驴源沙门菌,不同养殖场来源的驴源沙门菌的致病能力和耐药性有一定差异,对鞭毛基因FliC的进化分析也显示出差异,本研究结果为驴源沙门菌的防治提供了一定的参考依据。     

华东地区沙门菌流行病学及耐药性分析

沙门菌病是一种严重危害人类健康和养殖业发展的人畜共患病,为了解华东地区沙门菌的分子流行情况,本研究采用选择性培养基和PCR分离鉴定沙门菌,然后利用PCR检测沙门菌临床分离株的血清型及毒力因子,并用药敏纸片法检测其耐药性。结果显示,本研究分离鉴定出48株沙门菌,分离率为16.84%。血清学结果显示所检测的48株沙门菌中鼠伤寒沙门菌占64.58%,肠炎沙门菌占6.25%,其他血清型占29.17%。毒力基因检测发现除sopE基因分布率为25%外,其他15个毒力基因分布率可达97%以上。药敏试验结果显示沙门菌分离株对常见抗生素具有不同的抗性和敏感性,并且耐药性十分严重,对红霉素、阿奇霉素、克林霉素、新霉素、大观霉素、四环素、利福平、复方新诺明等抗生素的耐药率均超过50%以上。检测结果说明,华东地区沙门菌主要血清型为鼠伤寒沙门菌,且毒力基因分布广泛,多重耐药性菌株十分流行。     

藏鸡源食窦魏斯氏菌的抑菌特性研究

为了解藏鸡源益生菌的抑菌特性,选用10只体质健康的1月龄藏鸡作为益生菌的分离来源。以肠炎沙门菌(Salmonella enterica)为指示病原菌,通过琼脂扩散试验对分离菌株进行抑菌特性判定,共筛选到6株具有抑制肠炎沙门菌生长繁殖的菌株,抑菌圈直径均在8~28 mm之间,其中从小肠黏膜中分离到的食窦魏斯氏菌(Weissella cibaria)的抑菌圈直径高达276 mm,明显高于其他菌株和常用抗生素。将该菌株命名为WT1,并对WT1的抑菌特性和生物学活性进行深入研究。结果显示:WT1所产细菌素作用肠炎沙门菌8 h后,肠炎沙门菌大量死亡;基因序列分析显示,WT1益生基因entA;WT1具有良好的热稳定性和耐酸性。研究表明,藏鸡源食窦魏斯氏菌具有良好的抑菌特性和生物学活性,可以用于家禽肠炎沙门菌感染的治疗,在一定程度上缓解抗生素的负面影响。     

鸭源沙门菌的分离鉴定及分型研究

为了解徐州地区鸭源沙门菌的感染情况,对徐州市场和超市300份样品(鸭肉及副产品)、6个养鸭场的380份样品(鸭泄殖腔肛拭子、粪便以及饲料和用具等)以及50例临床发病鸭的脏器组织样品(肝、脾、盲肠等)进行增菌培养,通过细菌分离培养特性、生化反应和血清型鉴定,成功分离到56株鸭源沙门菌。市场及超市产品共分离到6株沙门菌,分离率为2%,优势血清型为肠炎沙门菌;鸭场共分离到26株沙门菌,分离率为6.8%,优势血清型为肠炎沙门菌;临床发病鸭分离到24株,分离率为48%,其优势血清型为印第安纳沙门菌和肠炎沙门菌。对21株沙门菌进行ERIC-PCR分子分型,分成18类基因型,遗传相似性在59%~100%,结果显示出良好的多态性,获得了较好的指纹图谱数据。     

西南地区三个地方鸡种母系遗传多样性评估

为研究西南地区乌蒙乌骨鸡、云龙矮脚鸡、施甸鸡的遗传多样性及母系亲缘关系,通过PCR扩增、产物回收、测序的方法,获得3个地方鸡种81个个体的mt DNA D-loop区的部分序列,利用Clustal W、Dna SP5.10、MEGA4.0等生物信息学软件对测序结果进行分析。通过对81个个体mt DNA D-loop区731~795 bp的片段数据分析,并与原鸡属的mt DNA D-loop进行聚类,构建了单倍型及品种聚类图。结果显示,乌蒙乌骨鸡、云龙矮脚鸡、施甸鸡的单倍型多样性指数分别为0.712±0.068、0.895±0.048、0.731±0.074;乌蒙乌骨鸡、云龙矮脚鸡、施甸鸡具有较近的亲缘关系,推测3个地方鸡种起源于分布在越南北部、中国云南东南部、广西西南部、雷周半岛的徐闻、海南岛的Gallus gallus jabouillei亚种。     

肠炎沙门菌感染对鸡盲肠组织DNA甲基化的影响

为探讨肠炎沙门菌感染对鸡盲肠组织甲基化的影响,本研究选用2日龄肠炎沙门菌阴性寿光鸡和SPF白来航为试验材料,用肠炎沙门菌进行接种,接种后第1、3、14和21天采集盲肠组织样品提取DNA,进行甲基化水平检测。结果显示,肠炎沙门菌感染后第3天和第14天,寿光鸡基因组甲基化水平显著降低,感染后不同时间点,对照组和试验组甲基化水平均降低,且第21天对照组甲基化水平显著低于第1、3和14天;感染后各时间点,SPF鸡盲肠组织甲基化水平均低于对照组,但没有达到显著性水平,感染后不同时间点,对照组和试验组的甲基化水平均有所升高。本研究初步揭示了肠炎沙门菌感染抑制盲肠组织全基因组甲基化,这种抑制作用受遗传背景和感染后时间的影响,为今后基因组甲基化在沙门菌感染中的调控机制提供了理论依据。     

鸡源沙门菌的分离鉴定与耐药性分析

为了解某鸡场沙门菌临床分离株血清型分布与药物敏感性,以常规方法从病死雏鸡分离出多株细菌,经形态学观察、生化试验、PCR检测和血清型定型,最终鉴定出10株沙门菌,其中2株为肠炎沙门菌,8株为鸡白痢沙门菌。采用Kindy-Bauer(KB)法检测分离菌株对25种抗菌药物的敏感性表明,菌株均为多重耐药菌株,对阿奇霉素等12种药物的耐药率达到70%以上,而对复达欣等13种药物的敏感率均高于70%。结果表明,沙门菌早期感染仍是造成雏鸡高死亡率的重要病因之一,长期以来抗菌药物在养鸡业上的不合理使用已对沙门菌的耐药谱产生了明显影响,给沙门菌的临床防控带来了新的挑战。     

致仔猪腹泻沙门菌分离鉴定与耐药性分析

为了鉴定致仔猪腹泻沙门菌并分析耐药性。从中牟地区规模化的养殖场采集患腹泻仔猪粪便、肠内容物等样品120份,通过分离鉴定的方法鉴定出57株沙门菌。人工感染小鼠致病试验结果表明,32株为致病性沙门菌。采用K-B药敏纸片法对32株致病性沙门菌进行药敏试验并分析耐药性,结果显示,32株致病性沙门菌对头孢曲松、头孢他啶、环丙沙星等4种药物耐药性在25. 0%～37. 5%之间;对氟苯尼考、阿米卡星、强力霉素等7种药物耐药性在40. 6%～78. 1%之间;对大观霉素、新霉素、阿莫西林等5种药物耐药性在87. 5%～100%之间。结果表明,从腹泻仔猪体内分离到32株致病性沙门菌对常用的抗生素具有很强的耐药性。     

某规模化种鸡场沙门菌流行病学调查和耐药性分析

试验旨在调查国内某规模化种鸡场沙门菌流行状况,为种鸡场沙门菌净化提供基础资料。1 744份样品被采集进行沙门菌分离、血清型鉴定、耐药性分析及脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法亚分型。结果显示:168株沙门菌被分离鉴定,分离率为9.63%,其中肠炎沙门菌有157株,为优势血清型(93.45%);抗生素耐药性试验表明,多重耐药现象较为严重,耐药种类在三种以上的肠炎沙门菌株有130株(77.38%);随机选取28株肠炎沙门菌进行PFGE亚分型显示,这些菌株属于同一个聚类簇,表明它们可能来自于同一克隆株。     

不同来源沙门菌入侵基因invH的检测及序列分析

根据沙门菌invH基因序列设计1对引物,对9株沙门菌和4株常见病原菌进行PCR扩增,并将扩增出的in-vH基因进行克隆及序列分析,应用生物信息学方法预测invH蛋白的T细胞抗原表位。结果表明,9株沙门菌PCR均扩增出519bp的特异条带,4株非沙门菌均无特异带扩增;核苷酸序列分析证实,3株鼠伤寒沙门菌之间同源性为99.8%,与鸡白痢和鸡肠炎沙门菌之间的核苷酸序列同源性为98.6%,3株猪伤寒沙门菌和3株鸡源性沙门菌同源性较低,且不在同一支系统进化树上;invH蛋白有5个重复率最高的T淋巴细胞受体识别的抗原表位。     

75株蛋鸡源沙门菌的MLST分型与耐药性分析

旨在掌握2017年7月至2019年5月期间云南地区蛋鸡源沙门菌血清型、药物敏感性及毒力基因携带等基本情况。无菌采集发病鸡肝组织，共分离到沙门菌75株，对分离株进行MLST分型、药物敏感性及相关耐药基因和毒力基因检测。结果显示，MLST鉴定到ST78序列型鸡伤寒沙门菌54株(72.00%)、ST92序列型鸡白痢沙门菌21株(28.00%)；分离株对青霉素的耐药率为100%，对其它抗生素的耐药率分别为: 四环素26.67%、强力霉素26.67%、复方新诺明22.67%、阿莫西林18.67%、氨苄西林16.00%、恩诺沙星14.67%、链霉素8.00%、环丙沙星2.67%、庆大霉素1.33%，共存在7种耐药谱型，28.00%的菌株表现为多重耐药，且集中于鸡伤寒沙门菌；耐药基因tetA、sul2和blaTEM的检出率分别为26.67%、10.67%和8.00%；毒力基因mogA、mgtC、bcfA、araB、stn和spvC的检出率均高达100%，而spvB的检出率为 89.33%。结果表明，鸡伤寒沙门菌和鸡白痢沙门菌为云南地区蛋鸡源沙门菌主要流行血清型，多重耐药情况严重，耐药基因与毒力基因检出率较高。     

鸡肉源与病鸡源沙门菌血清型及耐药状况的比较

为了解市售鲜鸡肉中污染的与临床病鸡感染的沙门菌在血清型与耐药性的差异,对2012-2014年间自南宁市售鲜生鸡肉和同期送检病鸡中分离到的沙门菌进行了血清型分析以及耐药性的比较。结果显示,32株鸡肉源性沙门菌的血清型分布广泛,包括有德比、纽兰和阿贡纳沙门菌等16种血清型;39株病鸡源性沙门菌的血清型则较为单一,只有鸡白痢、鼠伤寒和鸡伤寒沙门菌3种血清型;两种来源的沙门菌均对四环素、复方新诺明、甲氧苄啶,氨苄西林及阿莫西林有较高的耐药性;另外,病鸡源性分离株中多重耐药菌株的比例(89.7%)比鸡肉源性的(56.2%)高。本研究表明,南宁市售鲜生鸡肉与病鸡中的沙门菌分离株在血清型来源上完全不同,提示市售鸡肉中污染的食源性沙门菌并非来自饲养阶段的患病鸡;病鸡源性沙门菌的耐药情况较鸡肉源性沙门菌的更为严重。