镉致鸡CD4+T与CD8+T淋巴细胞动态变化

镉是一种蓄积性强而且广泛存在的有毒金属,对人和动物具有多器官、组织和细胞毒性。大量研究表明,镉具有致癌、致畸、致突变作用,可引起多器官中毒。镉作为主要环境污染物之一,对机体淋巴细胞损伤及对免疫功能有一定的影响。近年来,慢性低水平接触镉引起宿主体内淋巴细胞损伤及     

AA肉鸡血液CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞的变化规律

采用流式细胞仪检测1、3、5、7、14、21、28、35、42、49日龄AA肉鸡血液中的CD3、CD4、CD8阳性T细胞比例。研究结果表明:1～5日龄T细胞逐渐进入血液参与细胞免疫,7、21日龄注射疫苗起免疫应答作用,28日龄后基本形成稳固的细胞免疫水平。     

Magnitude and kinetics of multifunctional CD4+ and CD8β+ T cells in pigs infected with swine influenza A virus

Although swine are natural hosts for influenza A viruses, the porcine T-cell response to swine influenza A virus (FLUAVsw) infection has been poorly characterized so far. We have studied Ki-67 expression and FLUAVsw-specific production of IFN-γ, TNF-α and IL-2 in CD4⁺ and CD8β⁺ T cells isolated from piglets that had been intratracheally infected with a H1N2 FLUAVsw isolate. IFN-γ⁺TNF-α⁺IL-2⁺ multifunctional CD4⁺ T cells were present in the blood of all infected animals at one or two weeks after primary infection and their frequency increased in four out of six animals after homologous secondary infection. These cells produced higher amounts of IFN-γ, TNF-α and IL-2 than did CD4⁺ T cells that only produced a single cytokine. The vast majority of cytokine-producing CD4⁺ T cells expressed CD8α, a marker associated with activation and memory formation in porcine CD4⁺ T cells. Analysis of CD27 expression suggested that FLUAVsw-specific CD4⁺ T cells included both central memory and effector memory populations. Three out of six animals showed a strong increase of Ki-67⁺perforin⁺ CD8β⁺ T cells in blood one week post infection. Blood-derived FLUAVsw-specific CD8β⁺ T cells could be identified after an in vitro expansion phase and were multifunctional in terms of CD107a expression and co-production of IFN-γ and TNF-α. These data show that multifunctional T cells are generated in response to FLUAVsw infection of pigs, supporting the idea that T cells contribute to the efficient control of infection.

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The online version of this article (doi:10.1186/s13567-015-0182-3) contains supplementary material, which is available to authorized users.     

鸡CD+4和CD+8T淋巴细胞对流感病毒的应答

禽流感是由A型禽流感病毒引起的多种家禽和野生鸟类的一种急性、高度致死性传染病,给养禽业造成巨大损失,我国农业部和国际兽医局都将其定为A类传染病.但1997年首次发现禽流感病毒感染人类并致人死亡,使得禽流感的公共卫生意义发生了根本性变化.     

增免散对鸡CD4+T淋巴细胞CD8+T淋巴细胞亚群浓度的影响

T-淋巴细胞来源于骨髓的多能干细胞,多能干细胞中的部分淋巴细胞进入胸腺后,在胸腺素的诱导下,经过10～30 d的分化、增殖,成为成熟的T-淋巴细胞.成熟的T-淋巴细胞经血流分布至外周免疫器官,并反复经血液-组织-淋巴-血液,再循环周游全身,以发挥淋巴细胞的免疫功能和免疫调节作用[1].一般认为,T-淋巴细胞的功能主要有以下几方面:产生细胞免疫作用或迟发型变态反应;使宿主对移植物或肿瘤产生排斥作用;溶解细胞和毒细胞的作用;增强或扩大免疫反应;帮助B-淋巴细胞产生抗体;抑制由于免疫作用增强而对机体产生的损伤等.因此,T-淋巴细胞数量的多少反映了机体免疫力的高低.     

CD8~+T细胞表位鉴定技术研究进展

CD8~+T细胞表位通过MHCⅠ分子呈递到细胞表面,激活CTL细胞从而介导并调节机体抗内源性抗原的免疫应答。MHC-peptide稳定性试验通过TAP缺陷的RMAS细胞转染克隆在细胞水平鉴定CD8~+T细胞表位与MHCⅠ分子的亲和力;酶联免疫斑点技术(ELISPOT)通过检测IFN-γ的分泌水平评估抗原免疫后机体的细胞免疫应答能力,具有较高的敏感性和高效性。四聚体技术通过流式细胞仪分析抗原特异性CD8~+T细胞的表型和功能特征。论文介绍了CD8~+T细胞表位的特征和上述3种表位鉴定方法的基本原理和研究进展,为CD8~+T细胞表位的鉴定和表位疫苗的研制提供参考。     

外周血中CD4+、CD8+T、CD4+CD25+Treg在绵羊接种布鲁氏菌M5-90弱毒疫苗后的动态变化

为研究绵羊接种布鲁氏菌弱毒M5-90株后外周血中CD4+、CD8+T、CD4+CD25+Treg细胞的动态变化规律,本研究选择11只健康绵羊,每10 d免疫一次,共免疫3次,分别在免疫前、免疫后10d、20 d、30 d利用流式细胞术检测外周血中CD4+、CD8+T、CD4+CD25+Treg淋巴细胞亚群.在免疫后的第20 d,CD4+T、CD8+T细胞百分含量达到最高水平(P＜0.05)后均缓慢下降;在第10d,CD4+CD25+Treg细胞缓慢升高,至20 d、30 d均显著升高(p＜0.05);在布鲁氏菌M5-90疫苗免疫应答过程中CD4+CD25+Treg细胞参与了机体的免疫反应调控,对CD4+T、CD8+T淋巴细胞的比例进行调节,并且维持CD4+/CD8+比值稳定,起到平衡Th1/Th2细胞间反应的作用.     

不同日龄鸡肺脏中CD4~+、CD8~+ T淋巴细胞分布规律

为了解鸡肺脏不同时期的免疫状态,选择不同日龄海兰白鸡的肺脏组织,利用免疫组织化学方法研究CD4~+和CD8~+T淋巴细胞的出现、定位分布及数量变化过程。结果显示,CD8~+细胞最初于18 d胚胎中出现,而CD4~+T淋巴细胞于孵化后1日龄雏鸡中出现。4日龄时,在初级支气管与次级支气管交汇处有淋巴细胞的聚集物,即形成了明显的支气管相关性淋巴组织(BALT)。在定位分布上,各日龄CD4~+T淋巴细胞主要占据BALT的中央区域,而CD8~+T淋巴细胞主要环绕在外周。从56日龄开始,CD8~+T细胞较CD4~+T细胞分布范围更为广泛,在三级支气管气道内壁中、房间隔中、气体交换区和小叶间结缔组织中均有分布,散布在整个肺脏中。在数量变化上,随着日龄增长,CD4~+T淋巴细胞和CD8~+T淋巴细胞数量均逐渐增加,且35日龄之前CD4~+T细胞数量多于CD8~+T细胞,而此后各日龄CD8~+T细胞的数量均显著多于CD4~+细胞。以上结果表明,鸡肺脏中CD4~+和CD8~+ T淋巴细胞的分布和数量均呈日龄相关性变化,且该变化说明鸡35日龄之前肺脏以体液免疫为主,而之后则倾向于细胞免疫。     

CD4~+CD25~+调节性T细胞与鸡REV持续性感染的相关性研究

为探讨CD4~+CD25~+调节性T细胞(Treg)在禽网状内皮组织增生症病毒(REV)垂直感染引起鸡持续性病毒血症中的作用,在鸡胚发育第7天经卵黄囊接种REV建立先天性感染动物模型,通过流式细胞术分析不同日龄REV感染鸡外周血和免疫器官中CD4~+CD25~+Treg细胞的比例及其动态变化,进一步运用绝对荧光定量技术对病毒载量进行连续监测。结果显示:与对照组相比,在7、15、30、45日龄时,感染组鸡胸腺、法氏囊、外周血以及脾脏中CD4~+CD25~+Treg细胞的比例均显著升高;血液和脾脏中的病毒载量随着日龄增长而逐渐升高,胸腺和法氏囊中的病毒载量随着日龄增长而逐渐降低;外周血和免疫器官中REV的m RNA表达水平与CD4~+CD25~+Treg细胞出现的频率呈正相关。研究提示:REV感染鸡体内高频出现的CD4~+CD25~+Treg细胞与REV的持续性感染存在显著的相关性。     

刺五加多糖对雏鸡脾脏中CD4+ 和CD8+T淋巴细胞定位分布的影响

为了研究刺五加多糖（ASPS）对雏鸡脾脏中CD4+和CD8+ T淋巴细胞定位分布的影响,从组织学角度评价ASPS对脾脏的免疫调节作用,试验将1日龄海兰褐公雏饲养至7日龄时选取150只,随机分为3组：空白对照组、ASPS低剂量组（ASPSL）和高剂量组（ASPSH）,每组50只,所有组每天注射1次,连续注射3天。免疫后的第7、14、21和28天分别取其脾脏制作冰冻切片,采用免疫组织化学方法检测CD4+和CD8+ T淋巴细胞的定位分布。结果显示,与空白对照组比较,免疫注射后21天和28天时ASPSL组和ASPSH组CD4+ T淋巴细胞的数量均显著增加（P<0.05）,而且ASPS能够促进红髓中CD4+ T淋巴细胞向动脉周围淋巴鞘迁移,从而使单个动脉周围淋巴鞘面积较对照组明显增加,而ASPS对脾脏中CD8+ T淋巴细胞的数量和分布无明显影响。由此可知,ASPS能够通过影响脾脏中CD4+ T淋巴细胞的定位分布发挥免疫调节作用,这对于进一步揭示ASPS的免疫调节机制具有重要意义。     

金黄色葡萄球菌FnbpA的CD4~+ T细胞表位鉴定

金黄色葡萄球菌(S.aureus)表达的菌体表面纤连蛋白结合蛋白A(FnbpA)在感染早期与宿主细胞粘附过程中起关键作用,将其免疫小鼠后能够诱导机体产生强烈的Th1和Th17反应。但FnbpA诱导Th1和Th17反应的CD4~+ T细胞表位尚不清楚。本研究根据FnbpA二级结构及其与MHCⅡ分子的结合能力对CD4~+ T细胞表位进行预测与分析,选择并合成7个候选CD4~+ T细胞表位肽。将每个表位肽分别对FnbpA免疫的C57BL/6小鼠CD4~+ T细胞进行体外刺激,通过检测CD4~+ T细胞增殖及其分泌的细胞因子水平对免疫优势表位进行初步鉴定。再以初步鉴定的优势表位肽段免疫小鼠,并检测其诱导的特异性细胞免疫应答水平。结果表明,表位肽F5(FnbpA488-505)能够显著诱导CD4~+ T细胞增殖并分泌高水平IFN-γ和IL-17A,而且F5在不同S.aureus菌株中高度保守。表明FnbpA_(488-505)是诱导CD4~+ T细胞分化为Th1/Th17的T细胞表位。本研究为S.aureus的FnbpA表位肽疫苗的进一步设计提供了实验依据。     

清凉冲剂对鸡免疫器官中CD4+CD8+T细胞数量影响的动态观察

清凉冲剂是以石膏为主要成分的抗热应激中药方剂,其作用机理是通过增强散热和提高机体免疫水平这两个方面来达到抗热应激的目的。石膏又名白虎,是中医清热泻火治气分实热证的要药[1],在20世纪80年代前主要是通过研究石膏有无退热作用,来对其作用机制进行探讨。在近年的研究中发     

传染性支气管炎病毒结构蛋白免疫鸡对CD4+CD8+T淋巴细胞亚群的影响

为了比较传染性支气管炎病毒3种主要结构蛋白免疫鸡后对CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群的不同影响.本试验以pVAX1载体为携带工具,制备分别含有IBV主要结构蛋白基因的质粒免疫健康雏鸡,采用流式细胞仪(FACS)对免疫鸡外周血中CD4+、CD8+T淋巴细胞数进行检测.结果显示:各试验组间,携带N蛋白基因的质粒在免疫后3周内CD4+T淋巴细胞数和CD8+T淋巴细胞数均高于其他组,且差异极显著(P＜0.01).由此可见,IBV的N蛋白可明显诱导CD8+T淋巴细胞的CTL免疫作用和CD4+T淋巴细胞的辅助性免疫作用,其细胞免疫原性高于S1蛋白和M蛋白.     

米糠多糖对免疫抑制鸡外周血CD4~+和CD8~+ T淋巴细胞亚群的调节作用

为探讨米糠多糖对免疫抑制鸡免疫功能的调节作用,采用流式细胞技术检测了环磷酰胺和传染性法氏囊病毒诱导免疫抑制鸡在服用米糠多糖(剂量为150 mg/kg)和不服用米糠多糖情况下,外周血中CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群数量的动态变化。结果显示,米糠多糖能够抑制环磷酰胺和传染性法氏囊病毒处理鸡外周血中CD4+和CD8+T淋巴细胞数量的降低;提高健康雏鸡外周血中CD4+T淋巴细胞比率,对CD8+T淋巴细胞作用不明显。     

精清诱导CD4~+CD25~+T调节细胞限制早期妊娠免疫应答的研究进展

精清作为受精过程中重要的物质组成部分,不仅在公畜生殖道内具有保护成熟精子的作用,还能够在受精卵发育早期限制子宫内的免疫应答反应,使妊娠过程正常完成。精清中含有妊娠母体的免疫抑制因子TGF-β(转录活性因子β)、PGE2(前列腺素E)等能够诱导CD4+CD25+T调节细胞的激活和增殖。CD4+CD25+T调节细胞是唯一一类能抑制细胞免疫应答的T细胞,它能够调节妊娠早期的免疫耐受,影响胚胎的正常发育、后代的代谢表型以及疾病的发生。     

高温下清凉冲剂对鸡免疫器官中CD4+、CD8+ T细胞数量的影响

采用免疫组化方法检测鸡免疫器官中CD4^＋、CD8^＋T细胞数量，探讨高温下清凉冲剂对机体细胞免疫机能的影响及其药理作用。108只农大3号35目龄公雏，随机分为3组，每纽36只鸡，即常温对照组、高温对照组和高温用药组。用药组饲喂中药煎荆（浓度为1g／ml），用药量与饲料量比为1：1000。在试验的第1、4、8、10天各组捕杀5只。分别采取胸腺、脾脏、法氏囊检测。结果高温下。用药组免疫器官中CD4^＋、CD8^＋T细胞数量均高于高温对照组。第8、10天差异极显著（P〈0．01）。表明高温下清凉冲剂可以增加鸡免疫器官中CD4^＋、CD8^＋T细胞数量，有效地提高鸡细胞免疫水平。     

营养限制及补偿对羔羊体重及外周血液CD4+和CD8+T淋巴细胞的影响

本试验旨在研究羔羊营养限制期(第1～60天)和营养补偿期(第61～150天)体重和外周血液中CD4+和CD8+T淋巴细胞的变化规律.选用80只体况中等、平均体重为(14.72±1.10)kg的3月龄乌珠穆沁羔羊,随机分为对照组(CG)、限制组Ⅰ(RG Ⅰ)、限制组Ⅱ(RGⅡ)和限制组Ⅲ(RG Ⅲ)4个组.营养限制期4组饲粮能氮水平分别为代谢能(ME):10.88、10.88、9.41和8.62 MJ/kg;粗蛋白质(CP):15%、10%、10%和5.7%.营养补偿期各组饲喂同一能氮水平饲粮(ME:9.75 MJ/kg;CP:12%).在试验期每周称重并在第1天、第30天、第60天、第90天和第150天饲喂前从各组羊颈静脉采血,采用流式细胞仪检测羔羊血液中的CD4+和CD8+T淋巴细胞比例.结果表明:1)营养限制结束,RG Ⅰ组、RG Ⅱ组和RG Ⅲ组平均体重均显著低于CG组(P＜0.05).补偿期RGⅢ组平均日增重显著高于CG组(P＜0.05).2)营养限制前期(第1～30天)各组CD4+和CD8+T淋巴细胞浓度均呈上升趋势.补偿期结束时CD4+T淋巴细胞浓度RG Ⅰ组最低RGⅡ组最高,CD8+T淋巴浓度RGⅡ组最低RG Ⅰ组最高,差异均不显著(P＞0.05).结果提示,乌珠穆沁羔羊受不同能氮营养水平限制后体重和免疫机能有补偿效应,而且低能高氮比高能低氮限饲后得到的补偿效果较好,表明限饲蛋白质比限饲能量对补偿生长的负影响更大.蛋白质和能量同时限饲补偿生长最差.     

青蒿组方对球虫感染雏鸡血液中CD4^+和CD8^+T淋巴细胞的影响试验

为研究青蒿组方中药对鸡免疫力的影响,试验选取14日龄三黄鸡120只,平均分为4组:感染给药组(1组),感染不给药组(2组),不感染给药组(3组),不感染不给药组(4组).感染组人工接种柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊.接种后第4、7、10 d运用流式细胞仪测定各组鸡血液中CD4^+、CD8^+T淋巴细胞值及二者的比值.结果:1组CD4^+、CD8^+T淋巴细胞值及其比例在接种后第4、7、10 d均高于2组,差异显著(P<0.05);2组CD4^+、CD8^+T淋巴细胞平均比值低于其他3个组.结论:青蒿组方中药可促进鸡血液中CD4^+、CD8^+T淋巴细胞生成,进而增强机体的免疫功能.     

益生菌联合新城疫疫苗应用雏鸡消化道局部黏膜组织CD4~+CD8~+T细胞数量变化

100只艾维因肉雏鸡随机分为益生菌组、新城疫(ND)疫苗组、益生菌联合ND疫苗组和对照组。采用组织石蜡切片及免疫组织化学法分别测定ND疫苗免疫后第0天、7天、14天、28天和第42天盲肠扁桃体、十二指肠和回肠派伊尔结CD4+、CD8+T细胞数量的变化。结果表明,益生菌联合ND免疫雏鸡、ND疫苗单独免疫雏鸡上述免疫组织的CD4+T和CD8+T细胞数量分别于免疫后第14天和第7~14天明显高于对照雏鸡和益生菌雏鸡(P0.05或P0.01),表明益生菌作为免疫增强剂,与疫苗联合应用可显著增强机体消化道局部黏膜免疫组织对ND疫苗的细胞免疫应答。     

罗伊氏乳杆菌诱导肠道上皮内CD4~+CD8α α~+双阳性T淋巴细胞产生

小肠组织包含CD4~+CD8αα~+双阳性上皮内T淋巴细胞(DP IELs),它们来源于低表达转录因子Th POK的肠道CD4~+T细胞并且具有调节功能。在无菌小鼠中缺乏DP IELs,提示它们的分化依赖于微生物。本研究发现,不同环境下的小鼠DP IELs数量不同,且与罗伊氏乳杆菌的存在有相关性。罗伊氏乳杆菌诱导无菌小鼠DP IELs的产生,而正常饲养小鼠缺乏DP IELs。罗伊氏乳杆菌没有改变DP-IEL-TCR的作用模式,但是产生内源性色氨酸激活CD4~+T细胞的芳烃受体,导致Th POK下调,进而分化成DP IELs。因此,罗伊氏乳杆菌配合色氨酸丰富的日粮,能够将肠道上皮内CD4~+T细胞重塑为免疫调节性T细胞。