木聚糖酶的纯化、鉴定及酶学性质研究

试验对市售的固体木聚糖酶进行Sephadex G-100葡聚糖凝胶过滤层析纯化试验,SDS-PAGE显示获得约20 kDa木聚糖酶条带,割胶回收后通过质谱鉴定木聚糖酶为来自哈茨木霉的木聚糖酶,然后对木聚糖酶的酶促反应时间、最适反应pH、最适反应温度、pH稳定性和温度稳定性进行研究。结果表明,木聚糖酶的最适反应时间为6 min、最适反应pH为5.0、最适反应温度为55℃及半失活温度为55℃。     

饲用木聚糖酶最佳活力条件分析

试验分析了饲用木聚糖酶的最佳活力条件.结果表明,其最适反应温度为55℃,最适反应pH值为5.3,在相对较低温度条件下耐热性能良好,在55℃条件下经干燥处理10min,酶活力较稳定,通常条件下贮藏1年酶活损失很小.     

黑曲霉生产木聚糖酶固态发酵及粗酶制剂性质的研究

筛选了一株产木聚糖酶活力较高的黑曲霉菌株 ,研究了其固体培养的工艺条件。该菌的最适培养条件为 :起始 pH 4 .8,2 8℃ ,孢子悬液接种量 1 0 % ,玉米秸粉∶麸皮 (6∶4 ) ,培养时间 72h。木聚糖酶活力最高达 2 6 5 0IU/g ,营养盐、pH值及发酵时间对木聚糖酶活力影响较大。该酶的最佳作用条件 :温度 5 0℃、pH 4 .6 ,在不同温度下保温 1h ,测得半失活温度 (t1 / 2 )为 5 2℃。盐析后的酶粉活力为 91 0 5IU/g ,收率 5 0 %。酶对 3种底物降解力依次为麸皮、玉米芯和玉米秸     

饲用木聚糖酶最佳活力条件分析

试验分析了饲用木聚糖酶的最佳活力条件,表明其最适反应温度为55℃,最适反应pH值为5.3,在相对较低温度条件下耐热性能良好,在55℃条件下经干燥处理10min以内酶活力较稳定,通常条件下贮藏一年时间内酶活损失很小。     

青藏高原低温纤维素降解菌的筛选与酶学特性

以青藏高原冷地早熟禾草地土壤为样品,筛选低温纤维素降解菌株。采用刚果红染色法(水解圈法)和3,5-二硝基水杨酸(DNS)法进行菌株筛选与酶学特性研究,结合形态学与分子生物学方法对其进行鉴定。筛选出一株低温纤维素降解菌株(LD19),经鉴定为钉斑链霉菌(Streptomyces clavifer),同时该菌还具有降解半纤维素的能力。该菌产纤维素酶的最适温度为40℃,最适pH值为6,在30～70℃、pH值4～10时相对酶活力较稳定,Zn~(2+)对酶有抑制作用。该菌产半纤维素酶的最适温度为50℃,最适pH值为6,在30～40℃、pH值4～9时相对酶活力较稳定,Cu~(2+)等对该酶有促进作用。该菌株在培养102 h后两种酶的相对酶活力均达到最高值。菌株LD19可以同时分泌低温纤维素酶和半纤维素酶,在饲用酶制剂的应用中具有较大潜力。     

Neurospora crassa产木聚糖酶发酵条件及酶学特性

从青藏高原土壤中筛选出一株产木聚糖酶较高的菌株Neurospora crassa SD10。通过单因素试验和正交试验对菌株进行发酵条件优化和酶学性质探究。结果表明,菌株SD10最佳发酵条件为:麸皮30 g/L、蛋白胨20 g/L、Mn2+0.5 g/L、培养温度33℃、转速230 r/min、接种量2%、初始pH值8.0、发酵时间84 h。菌株产木聚糖酶的最适反应温度为50℃,最适反应p H值为6.0,在40～50℃和pH值4.0～8.0时有较好的稳定性,能保持80%以上酶活力,Fe2+、Zn2+、K+对酶活力有促进作用,Na+、Mg2+、Ca2+、Mn2+、Cu2+对酶活力有抑制作用。Neurospora crassa SD10优化后产木聚糖酶活力达9.4 U/mL,所产木聚糖酶具有良好的pH值稳定性。     

诱变选育木聚糖酶高产菌株及其发酵条件的研究

以黑曲霉(Aspergillus niger)XE6为出发菌株,经微波(MW)和硫酸二乙酯(DES)诱变处理,选育出一株遗传性状稳定的高产木聚糖酶菌株mAn1。利用单因素轮换法和正交试验法对菌株mAn1固态发酵产酶工艺进行了研究。结果表明:最适产酶条件为麸皮与玉米芯的添加比例6:4,硝酸铵2g,培养基起始pH值为4.5,固液比为1:1.8,500ml三角瓶中装培养基50g,30℃培养72h,在此条件下所产木聚糖酶的酶活为81151U/g,比出发菌株的酶活提高了34.88%。     

高产淀粉酶枯草芽胞杆菌的诱变选育和酶学性质研究

为了提高产淀粉酶枯草芽胞杆菌Bacillus subtilis N21的酶活,试验采用紫外线对该菌株进行诱变,并对该淀粉酶的部分酶学性质进行了研究。结果表明,淀粉酶酶活由出发株的32.96 U/mL增加到86.24 U/mL,比原菌株酶活提高了161.65%。该酶的最适反应温度为35℃,最适pH值为7.0,在30~40℃,pH值为5.0~8.0条件下较稳定。Ca2+和Mn2+对酶有激活作用,Cu2+、Zn2+对酶有抑制作用,而Mg2+、Fe2+对其影响较小。说明筛选出1株产酶活性较强的突变菌株。     

木聚糖酶的热稳定性以及最运pH值、温度的研究

木聚糖酶是一类内切糖苷酶酶系,同自然界中五碳糖的循环相联系,在能量循环中占有重要地位.试验通过采用DNS(3,5-二硝基水杨酸)法,在540nm处用紫外分光仪测OD值,对某生物木聚糖酶进行研究,得出该木聚糖酶的最适pH值为4.2;分别在30～85 ℃测定木聚糖酶酶活,得该木聚糖酶的最适反应温度为50℃.同时发现,该酶的热稳定性较好、耐酸碱性好,木聚糖酶对pH值不敏感.     

液体酶的稳定性及生物学效价的体外评定

芩研究测定4种液体酶(编号为L1、L2、L3、L4)中木聚糖酶的最适pH值范围、在猪胃液中的稳定性、3种温度(20、35、50℃)下的贮存稳定性,同时对这4种液体酶对麸皮与脱水玉米酒糟及可溶物(DDGS)的纤维体外降解能力进行了评估.结果表明L1、L2、L3、L4中木聚糖酶的原始酶活分别为4349、5042、18749、9314U/mL;在pH值为3.5时,L2的相对活性最高,其他酶在pH为5.5时相对活性最高.在猪胃液中保存8 h后,各酶中木聚糖酶的剩余活性依次为27.95%、46.39%、71.26%、61.26%.在20℃下贮存10周后,L1、L2、L3、L4中木聚糖酶的剩余酶活分别是47.32%、63.84%、83.12%、73.79%;在35℃下贮存10周后,其剩余酶活分别是6.95%、43.34%、29.87%、20.06%;在50℃贮存8周后,各液体酶的木聚糖酶都基本失活.4种液体酶对麸皮中的NDF的降解率均较佳,L2、L4时DDGS中NDF、麸皮和DDGS中半纤维素的降解率相对更高.     

产α-半乳糖苷酶菌株的筛选、鉴定及其酶学特性的研究

利用筛选培养基从不同豆制品作坊附近的土样中筛选出一株产α-半乳糖苷酶的菌株D-1,对其进行分子鉴定及所产的α-半乳糖苷酶进行酶学特性研究。研究表明,菌株D-1为Aspergillus niger,此菌株所产α-半乳糖苷酶的最适反应温度是55℃,在60℃以下热稳定性较好;最适反应pH值为5.0,在pH值3.0～5.5范围内稳定性较好,相对酶活>64.1%;Mg2+、Na+、Pb2+、K+、Mn2+、Co2+、Al3+对α-半乳糖苷酶均有不同程度的抑制作用,其中Cu2+和Fe3+的抑制作用较为明显,而Ca2+、EDTA(乙二胺四乙酸)、Zn2+对α-半乳糖苷酶有一定的促进作用。     

Bacillus subtilisT15产木聚糖酶的学特性及其在禽饲料中应用的初步研究

对Bacillus subtilisT15生产的木聚糖酶作了部分酶学性质考察,研究表明该酶是一种中性木聚糖酶,最适pH值为6.4,pH值稳定范围为5.6～8.0;最适温度为55℃,酶液在40～50℃处理4h后活力保持100%,含水量17%～20%的酶泥在85℃条件下2.5min活力保持67.4%;对燕麦木聚糖的主要降解产物为聚合度2～5的木寡糖.在考察酶学性质基础上,对该酶作了在禽饲料中的初步应用实验.饲养试验表明,在禽饲料中添加0.002%该酶能提高料肉比9.94%,饲养效果显著优于对照组(P＜0.05).     

一株产高温纤维素酶菌株的筛选、鉴定及其酶学性质研究

从云南大理市弥渡县石夹泉热泉的55℃底泥中筛选到1株高温纤维素酶的高产菌株,对其进行显微形态及生理生化特征、16SrRNA基因序列分析,将其初步鉴定为不动杆菌属(Acinetobacter sp.)的一株菌,命名为Acinetobacter sp.Cel-55。对其生长条件及酶学性质进行研究,结果表明:该菌株耐高温性较好,菌株在55℃仍能生长,菌株最适生长温度为37℃。所产纤维素酶最适酶活温度为75℃,最适反应pH为7.0。该酶具有良好的热稳定性,在75℃下,保温120min仍能保持80%的活性。Zn^2+、Mn^2+、Ca^2+、K^+、Mg^2+、Fe^2+、Cu^2+均对酶活力起一定的抑制作用,其中Mg2+的抑制效果最为明显。     

木聚糖酶的酶学性质研究

采用DNS法对木聚糖酶的一些性质进行了研究。结果表明:该酶的最适反应pH为6.0,在pH5～10之间保温不同时间后可保持较高的活性;最适反应温度50℃,液态下低于60℃热稳定性较好。在50℃、pH6.0下,以燕麦木聚糖为底物时,该木聚糖酶的米氏常数Km=6.49mg/mL,最大反应速度Vmax=21.05μg/(mL·min)。用不同底物测定酶活,以燕麦木聚糖为底物的酶活最高。酶在动物胃中活性较低,而在肠道中活性较高。     

产纤维素酶芽孢杆菌的诱变和酶学性质研究

为提高芽孢杆菌产纤维素酶的活性,以实验室保存的产纤维素酶枯草芽孢杆菌作为出发菌株,利用紫外线对其进行诱变处理,采用刚果红染色法初筛和3,5-二硝基水杨酸法进行复筛,并对其酶学性质进行初步研究.结果表明:诱变后突变株的纤维素酶活力较出发菌株提高4.476倍.该纤维素酶的最适pH为6.0,且在pH 5.0～7.0酶活力较稳定;该酶的最适酶促反应温度为60 ℃,在无底物保护且水浴30 min的条件下,酶活力在30～65 ℃保持稳定;此外,金属离子K+和Ba2+对酶活力有激活作用,相对酶活分别为108.11％和105.43％,而金属离子Ca2+和Cu2+对酶活性有抑制作用,二者的相对酶活分别为93.80％和89.08 ％.     

牛副性腺N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶性质的测定

以牛副性腺部分纯化的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶为材料,以对硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(pNP-NAG)为底物,研究酶催化底物水解的反应动力学。结果表明:牛副性腺NAGase的最适pH为5.5,在pH3.0～7.6区域内活力较稳定,而在pH7.6能很快失活;最适温度为55℃。在50℃以下处理30min,酶活力保持稳定,高于50℃酶稳定性较差。酶促反应动力学符合米氏双曲线方程,测得米氏常数Km为0.48mmol/L,最大反应速度Vm为19.73umol/(L·min)。酶催化pNP-NAG水解反应的活化能为69.77kJ/mol。     

黑曲霉FnD5-2产木聚糖酶液体发酵及酶学特性

试验旨在研究黑曲霉FnD5-2产木聚糖酶液体发酵及酶学特性。选用黑曲霉FnD5-2为出发菌株,采用单因素、正交试验设计、盐析等试验方法,开展木聚糖酶发酵条件优化及酶学性质研究工作。结果表明:最适发酵条件为28℃、pH5.0、Tween80添加量1.5 mL、脱脂豆粉添加量4 g/100mL、培养基装液量50 mL。黑曲霉木聚糖酶最适温度为50℃;最适pH为5.0;在4～50℃及pH 4～6的条件下稳定性较好;Mg2+、Fe2+、K+、Ca2+对该酶有激活作用,Co2+、Cu2+、Na+、Mn2+对该酶有抑制作用,Mn2+的抑制作用最强,蔗糖对酶液的保护效果比较好。     

木聚糖酶的热稳定性以及最适pH值、温度的研究

木聚糖酶是一类内切糖苷酶酶系,同自然界中五碳糖的循环相联系,在能量循环中占有重要地位。试验通过采用DNS(3,5-二硝基水杨酸)法,在540nm处用紫外分光仪测OD值,对某生物木聚糖酶进行研究,得出该木聚糖酶的最适pH值为4.2;分别在30～85℃测定木聚糖酶酶活,得该木聚糖酶的最适反应温度为50℃。同时发现,该酶的热稳定性较好、耐酸碱性好,木聚糖酶对pH值不敏感。     

黑曲霉B-2所产木聚糖酶的酶学性质研究

该试验研究了黑曲霉B-2所产木聚糖酶的酶学性质。结果表明：该木聚糖酶的最适反应温度为50℃,最适pH值为4．8,在pH4．8～5．2范围内酶活性稳定,并且粗酶粉的热稳定性良好,100℃处理1h后酶活性仍保留73．6％;Co2＋、Fe2＋,Mn2＋、Zn2＋对该木聚糖酶有抑制作用,Cr2＋能提高此木聚糖酶的活性,低浓度的Ba2＋、EDTA二钠、Na＋对木聚糖酶的活性几乎没有影响。     

B .methylotrophicus SWU6菌株产纤维素酶发酵条件的优化?

前期从自然界土壤中分离筛选到一株纤维素酶产生菌 Bacillus methylotrophicus SWU6菌株,为提高该菌株发酵产酶能力,本研究采用3,5二硝基水杨酸显色法(DNS)对该菌株产酶所需碳源、氮源、温度、pH 值、装瓶量、接种量等发酵条件进行优化,并比较优化前后等量发酵上清液中 CMCase 酶活大小。结果表明：SWU6菌株产纤维素酶的最适碳源为淀粉,最适氮源为牛肉膏,最适培养温度为50℃,培养基最适初始 pH 值为5.0,最适装瓶量为20%,最适接种量为2%;在最优发酵产酶条件下,SWU6菌株发酵上清液中的 CMCase 酶活达到454.69 U/mL,明显高于优化前利用基础培养基发酵所产的 CMCase 酶活,且酶活提高约3倍。通过发酵条件优化后,SWU6菌株单位体积发酵液显示出了更强的纤维素酶活性。