从吐鲁番古葡萄树上检测到4种类病毒(AGVd、GYSVd-1、GYSVd-2、HSVd)

从约有150年树龄的新疆吐鲁番葡萄(品种无核白)叶子中抽提小分子RNA,经过RT-PCR、生物学检测及克隆测序分析,证明其中含有4种类病毒:AGVd、GYSVd-1、GYSVd-2和HSVd。通过二维电泳,正反向电泳及Northern印迹杂交,RT-PCR等分子生物学方法对接种的指示植物Suyo黄瓜中的子代类病毒进行了检测,结果仅仅检测到HSVd一种类病毒。对Suyo黄瓜中的HSVd子代类病毒进行克隆及序列分析,结果表明葡萄中亲代类病毒与黄瓜中的子代类病毒序列之间存在明显差异。     

锦紫苏类病毒研究进展

锦紫苏又名彩叶草,是一种草本观赏植物,可以被马铃薯纺锤块茎类病毒科锦紫苏类病毒属的类病毒侵染。目前为止,共发现了6种锦紫苏类病毒,分别为锦紫苏类病毒-1~锦紫苏类病毒-6(CbVd-1~CbVd-6),它们具有共同的中央保守区(CCR),存在广泛的分子间重组,其嵌合体的发现为研究类病毒RNA重组提供了较为理想的试验材料。本文系统综述了锦紫苏类病毒的分类地位及分子特征、检测方法、与寄主互作等方面的研究进展,并对锦紫苏类病毒研究中的热点和难点问题进行了讨论和展望。     

葡萄上普遍存在类似于类病毒的RNAs

已知小的(247～371个核苷酸)单链环状和线状传染性RNAs或类病毒(Viroid)是草本和木本植物上许多病害的病原。类病毒的RNA稳定地聚集在寄主细胞核中并具有非介体传播的特性,这一特点预示农业上重要的历来以无性材料繁殖的植物可能是类病毒的侵染源。近年来西班牙、日本和美国通过对葡萄品种进行聚丙烯酞胺凝胶电泳检测,发现葡萄上有类病毒或暂时称为类似于类病毒的RNAs。一.低分子量RNA的提取     

一类新的植病感染原——卫星RNA的研究

随着科学技术事业的不断发展和对于植物生理、病理情况日益深入的研究,植病、植保工作的广泛发展,新的植物感染性病原不断被发现。在二十世纪初,植物病毒方面的研究在世界上还堪称一个全新的领域。七十年代,人们才开始对类病毒有所认识。近年来,人们又发现了一类新的植物感染原——卫星RNA。称其作卫星RNA是由于此类植物感染原的感染性须依赖于某种特定的植物     

类病毒的诊断和研究方法

一、类病毒及其性质类病毒是一类人们近期才有所认识的亚病毒病原。目前已知的类病毒仅含有一条分子量从10万到14万的短链 RNA。将此低分子量的 RNA 引入一些敏感寄生中,此 RNA可在植体中增殖并在一些敏感寄生中产生疾病。类病毒是迄今所知最小的具有感染性的     

啤酒花矮化类病毒属属级寡核苷酸芯片筛查方法的建立

啤酒花矮化类病毒属是重要的植物类病毒属,目前尚无有效的筛查方法。通过对该属类病毒的核苷酸序列进行分析筛选,设计了8条用于该属类病毒筛查的属级特异性探针并制备了寡核苷酸芯片。应用啤酒花矮化类病毒标准样品对该芯片进行验证,结果表明所建立的属级芯片可以特异性检测啤酒花矮化类病毒,可检测到2ng/μL的总RNA。该芯片可用于啤酒花矮化类病毒属类病毒的筛查,为该属类病毒的检疫与防控提供技术支撑。     

啤酒花潜隐类病毒RNA提取方法及检测技术的研究

本研究采用纳米磁珠提取法(Magnetic Nanoparticles,MNP)、改良的Li Cl沉淀法、CTAB法、TRIzol法和RNeasy Plant M ini Kit 5种方法提取感染啤酒花潜隐类病毒(Hop latent viroid,HLVd)的啤酒花叶片总RNA,结果显示Li Cl沉淀法、CTAB法和M NP法提取的RNA的质量较好,而M NP法具有提取时间短、操作简便,环境友好和批量提取的优势,适用于啤酒花潜隐类病毒RNA的快速提取。体外转录制备HLVd RNA标准品,利用实时荧光定量RT-PCR绘制标准曲线,并对其特异性、灵敏度进行评估。应用纳米磁珠提取啤酒花总RNA,结合实时荧光RT-PCR技术,建立了HLVd的快速、高效的M NP-RT-q PCR定量检测方法。     

植物类病毒脱除技术进展

类病毒是已知最小的植物病原物,可侵染蔬菜、果树以及花卉等多种农作物,并对农业生产造成严重影响。目前,对感染类病毒的植株进行脱毒处理是一种有效的防控措施,本文针对果树、蔬菜和花卉上几种常见的类病毒,综述了茎尖培养、热处理结合茎尖培养、低温处理、超低温处理、化学处理及不含叶原基的顶端分生组织再生等植物类病毒的脱除技术,分析了不同方法的应用效果及所适合脱除的类病毒种类,同时展望了类病毒病害在未来植物病害防控中的重要地位,并提出综合考虑各种因素、制定合理方案、选用适宜方法的类病毒脱除建议。     

啤酒花矮化类病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用

为建立一种快速、灵敏、特异的定量检测啤酒花矮化类病毒(Hop stunt viroid,HSVd)的实时荧光定量RT-PCR (RT-qPCR)方法,设计了2对引物及特异探针,体外转录制备了RNA标准品,绘制标准曲线,并对该方法的特异性、灵敏度和重复性进行评估.建立的定量标准曲线Ct值与模板拷贝数对数之间呈良好的线性关系,相关系数R2为0.9988,扩增效率为95％;该方法的特异性好,与啤酒花潜隐类病毒(HLVd)、葡萄黄斑类病毒1(GYSVd-1)、葡萄黄斑类病毒2(GYSVd-2)和桃潜隐花叶类病毒(PLMVd)均无交叉反应;灵敏度为1.0×102拷贝/μL,比普通RT-PCR高10倍;试验内及试验间重复性试验的变异系数均小于3％.研究表明该方法适用于实际样品中HSVd的快速定量检测.     

苹果锈果病(ASSD)类病毒的侵染性

 用机械接种的方法研究了苹果锈果病类病毒(ASSV)的侵染性.在嫁接时将接种原滴于砧木和接穗的切面上,用针刺切面,然后观察症状表现,所有接穗都取自同一株健康“国光”.用半提纯的ASSD—RNA—1和ASSD—RNA—2接种的,成活的3株中有2株发病;用提纯的ASSD—RNA—1和ASSD—RNA—2接种的,成活的3株中有1株发病;用病组织的澄清汁液接种的,成活的4株中有1株发病;用缓冲液模拟接种的健康对照成活的5株均未发病.发病苗木的症状为叶片卷曲,随后叶片从叶柄处断裂.从发病的,不发病的及健康对照的苗木茎部提取核酸,用双向及两次聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,表现症状的4株均测出了ASSD—RNA—1,未发病的及用缓冲液模拟接种的健康对照均未检测出类病毒核酸带.结果表明ASSD—RNA—1可通过机械传播,为苹果锈果病的类病毒病原提供了又一次证据,也表明ASSD—RNA—1代表了能独立复制的苹果锈病类病毒.     

菊花矮化类病毒两种检测方法的建立与比较

菊花矮化类病毒可通过接种寄主植物和电泳方法进行检测。正反向电泳法可从相当于 2 8mg鲜重的菊花样品中检测到菊花矮化类病毒RNA ,并可同时检测10-20个样品材料。生物检测则需要较大的空间、严格的温度条件和较长时间 ,不适合于大规模检测     

利用酵母的Pac I基因获得抗类病毒转基因植物

文章简要介绍了类病毒复制和反义RNA、核酶、Pac I在类病毒上的作用重点 ,阐述了Pac I基因介导的广谱抗性的应用前景和存在问题     

苹果锈果类病毒辽宁分离物的克隆与序列分析

 类病毒是迄今为止发现的最小病原物,是一类单链共价闭合环状的裸露RNA分子,由246~401个核苷酸组成,具有自我复制能力,是感染某些高等植物的低分子致病性因子。目前已确定的果树类病毒有18种,分属于马铃薯纺锤块茎类病毒科(Pospiviroidae)和鳄梨日斑类病毒科(Avsunviroidae)。     

山西省枣树上啤酒花矮化类病毒的检测及序列分析

［目的］ 从枣树样品中分离鉴定啤酒花矮化类病毒（HSVd）。［方法］ 从山西省农业科学院果树研究所国家枣种质资源圃采集70份枣树叶片样品,提取小分子RNA后通过Northern杂交、RT PCR进行检测,并对阳性样品中的类病毒进行克隆测序,利用生物学软件对所得序列进行分析。 ［结果］ 70份枣树样品中有1份样品感染HSVd,克隆测序后,共获得13条HSVd序列,它们与GenBank上首次报道的HSVd序列相似性为92.6%~92.8% 。［结论］ 本研究首次在国内报道了枣树上分离得到的HSVd序列,HSVd枣树分离物与已报道的HSVd分离物差异较大。     

立枯丝核菌质粒DNA的分离及鉴定

30余种植物病原真菌体内的病毒或类病毒粒子已有报道。有的还进行了病毒对真菌致病力影响的研究。一些真菌衰退病有人报道过,但几乎没有报道植物病原真菌表现出退化型症状。Castanho和Butler认为,在立枯丝核菌常规移植过程中,从健壮分离体中获得的严重罹病分离体表现出一种衰退现象。这种衰退常与三个大小不同的双链RNA(ds RNA)之一些片断有关;在一     

不同探针大小、标记物及反应底物对马铃薯类病毒杂交检测的影响

 灵敏可靠地检测马铃薯纺锤块茎类病毒(Potato spindle tuber viroid,PSTVd)对脱毒种薯的生产具有重要意义。本研究探索了影响核酸杂交检测技术的关键因素。通过基因克隆技术构建了插有PSTVd全长单体、双体及片段的载体。分别以地高辛和同位素为标记物,利用PCR和转录标记技术制备cDNA和RNA探针。比较探针大小、标记物、标记方法、反应底物等对检测灵敏度的影响。结果显示,以地高辛为标记物,利用PCR标记制备的PSTVd双体cDNA探针,在以CDP-Star为底物,通过在柯达X-OMAT BT胶片进行化学发光反应来分析结果的检测灵敏度最高,可以检测到0.05 pg总RNA中的PSTVd,是国外报道检测灵敏度的500倍。利用核酸斑点杂交技术检测PSTVd具有灵敏度高,一次可检测样品数量多等特点,对于大规模PSTVd检测更加方便可行。     

中国锦紫苏类病毒的检测及其分子生物学特征研究

 从无明显症状表现的11株锦紫苏叶片中抽提低分子量的RNA,经Return-PAGE、RT-PCR和Dot-blot hybridization检测,结果表明11株锦紫苏全部带有锦紫苏类病毒(Coleus blumei viroid,CBVd)。将部分PCR产物克隆到pGEM-3Zf(+)载体上并进行DNA序列测定。序列分析结果,所克隆的序列(GenBank登录号分别为DQ178395、DQ178396、DQ178397、DQ178398和DQ178399)与GenBank中报道的锦紫苏类病毒1号(CBVd-1)序列同源性为85.23%~99.20%。从市场上购买的锦紫苏种子经Return-PAGE和RT-PCR检测不携带锦紫苏类病毒。这是中国发生的锦紫苏类病毒的首次报道。     

寄生蜂类病毒颗粒及其生理功能

本文对寄生蜂体内类病毒颗粒的形态结构、产生、组成、分离和纯化，及其与寄生蜂的关系、对寄主的调节机制等进行了概述。     

福建三明地区柑橘病毒类病原种类的鉴定及检测

为了明确福建省三明地区柑橘病毒类病原(病毒和类病毒)种类,利用RT-PCR技术对其进行了鉴定和检测,并对其检出率进行了分析。结果表明,从207份柑橘叶片样品中检出柑橘衰退病毒(citrus tristeza virus, CTV)、柑橘黄化脉明病毒(citrus yellow vein clearing virus, CYVCV)、柑橘叶斑驳病毒(citrus leaf blotch virus, CLBV)和蚜虫致死麻痹病毒(aphid lethal paralysis virus, ALPV)等4种病毒以及柑橘曲叶类病毒(citrus bent leaf viroid, CBLVd)、啤酒花矮化类病毒(hop stunt viroid, HSVd)、柑橘矮化类病毒(citrus dwarfing viroid, CDVd)、柑橘类病毒Ⅴ(citrus viroidⅤ, CVdⅤ)和柑橘类病毒Ⅵ(citrus viroidⅥ, CVdⅥ)等5种类病毒。其中,CTV、CYVCV、CLBV和ALPV的检出率分别是71.01%、66.67%、0.97%和6.28%,CBLVd、HSVd、C...     

ICTV第八次报告的最新植物病毒分类系统

 本文介绍了国际病毒分类委员会第八次报告中的最新植物病毒分类系统18个科、81个属,以及亚病毒感染因子的类病毒和病毒卫星。与第七次报告相比新增的3个科、9个属分别是:矮缩病毒科、芜菁黄花叶病毒科、线形病毒科、番茄伪曲顶病毒属、香蕉束顶病毒属、塞尔病毒属、内源RNA病毒属、葡萄斑点病毒属、柑橘病毒属、葡萄卷叶病毒属、温州蜜柑矮缩病毒属、樱桃锉叶病毒属。