‘芽黄’红瑞木枝干溃疡病病原菌的鉴定及药剂防治

‘芽黄’红瑞木枝干溃疡病在上海发生严重。本研究通过病原菌分离,致病性测定和形态学特征观察,将引起此病害的病原菌鉴定为拟盘多毛孢属一种Pestalotiopsissp.。通过扩增病原菌的rDNA-ITS序列,构建系统发育树,其在系统发育树上与拟盘多毛孢属中分生孢子中间三个细胞异色的类群处于同一分支,此结果与形态学鉴定结果一致。5种杀菌剂室内药剂筛选结果表明,对Pestalotiopsis sp.的抑制中浓度(EC50)为0.639~1.787μg/mL。4种杀菌剂室外药效试验结果表明,在发病初期,25%丙环唑乳油和25%嘧菌酯悬浮剂防治效果可达80%以上,当病害发展后,供试4种杀菌剂对病害的防治效果均小于50%。     

葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)全基因组分泌蛋白的预测及功能分析

 葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)是引起多种果树和林木枝干溃疡病和果实腐烂病的重要病原菌。为明确葡萄座腔菌的致病机理,采用SignalP、WoLF PSORT、TMHMM、GPI-SOM等软件,对葡萄座腔菌全基因组14 998条蛋白序列进行了分泌蛋白预测和功能分析。结果表明B.dothidea全基因组编码蛋白中有851条序列具有典型的分泌蛋白特征,占蛋白总数的5.67%,其长度主要分布在100~700个氨基酸范围内。信号肽的分析结果表明,以19个氨基酸为信号肽的分泌蛋白数目最多,非极性氨基酸丙氨酸(A)在信号肽中的使用频率最高,而有带电侧链的天冬氨酸(D)和谷氨酸(E)使用频率最低,信号肽-3和-1位置的氨基酸相对保守,其切割位点属于典型的A-X-A型。对分泌蛋白功能预测结果表明,578个分泌蛋白获得了功能注释,其功能主要涉及碳水化合物的运输、代谢过程,蛋白翻译后修饰和氨基酸代谢、运输过程。分泌蛋白中效应蛋白(effector)预测结果表明,B. dothidea分泌蛋白中共有119个潜在的效应蛋白,其中11个可被PHI数据库注释到,其与引起其他植物病原菌致病力变化的致病效应蛋白具有较高的相似性。碳水化合物活性酶类(CAZymes)的预测结果表明,B. dothidea分泌蛋白组中共有279个CAZymes,其中GHs家族最多。这些结果的获得为今后进一步筛选B. dothidea的效应蛋白,明确B. dothidea的致病机理,以及筛选寄主新的抗性基因提供了必要的基础。     

厚皮香枯梢病病原菌鉴定

厚皮香枯梢病在上海地区发生严重。本研究对上海地区的厚皮香枯梢病进行了病原菌的分离与致病性鉴定,得到其病原菌菌株2017SHTg。根据病原菌的形态特征将其鉴定为小新壳梭孢Neofusicoccum parvum。扩增病原菌2017SHTg的rDNA-ITS序列和翻译延伸因子EF-1α基因序列,进行BLAST序列比对与小新壳梭孢相似性分别为99%和100%;基于rDNA-ITS序列构建系统发育进化树,其在系统发育树上与小新壳梭孢的类群处于同一分支,此结果与形态学鉴定结果一致。     

猕猴桃软腐病病原菌的分离鉴定及其防治药剂筛选

为明确引起猕猴桃软腐病病原菌的种类并筛选有效防治药剂,2015年10月于安徽省金寨县猕猴桃基地采集具有典型软腐病症状的40个果实病样,对分离所得病原菌进行致病性测定、形态学和分子生物学鉴定,同时测定了10种常用药剂对病原菌的抑菌效果。结果显示,结合分离物的形态学特征及rDNA-ITS、β-tubulin和EF-1α基因序列分析结果,确定10株经致病性验证的菌株均为葡萄座腔菌Botryosphaeria dothidea。药剂筛选结果显示,多菌灵对该病原菌菌丝生长抑制效果最好,抑制率高达91.97%,其次是95%三唑醇1 600倍液,抑制率为81.72%,其余药剂对菌丝生长的抑制率均低于80.00%;多粘芽胞杆菌对该病原菌孢子萌发抑制效果最好,未见该病菌孢子萌发,70%代森锰锌可湿性粉剂1 000倍液、12.5%烯唑醇可湿性粉剂3 000倍夜、10%混合脂肪酸水剂100倍液、95%三唑醇原药1 600倍液和1.8%辛菌胺醋酸盐水剂180倍液对病原菌孢子萌发的抑制率均大于81.00%。表明多菌灵和多粘芽胞杆菌是防治葡萄座腔菌菌丝生长和孢子萌发的最佳药剂。     

两种葡萄溃疡病菌双重PCR检测方法的建立与应用

为快速准确地鉴定出2种不同的葡萄溃疡病菌——葡萄座腔菌Botryosphaeria dothidea和小新壳梭孢Neofusicoccum parvum,根据Gen Bank中已报道的引起我国葡萄溃疡病的6个主要种的延伸因子-1序列及β-微管蛋白序列分别设计了葡萄座腔菌和小新壳梭孢的特异性引物B.d-F/B.d-R及N.p-F/N.p-R,建立了双重PCR检测方法,并对田间病样进行检测。结果表明,引物B.d-F/B.d-R和N.p-F/N.p-R可以分别在葡萄座腔菌和小新壳梭孢中扩增到324 bp和212 bp的特异性条带,检测灵敏度均为10 pg。双重PCR检测体系中Taq DNA聚合酶的最佳用量为0.05 U/μL,引物B.d-F/B.d-R和N.p-F/N.p-R的最佳终浓度均为0.2μmol/L,最适退火温度和退火时间分别为58℃和30 s。对田间葡萄病样的检测结果与室内病样常规病原菌分离结果一致。表明该双重PCR检测方法能够同时检测葡萄座腔菌和小新壳梭孢,有助于快速、灵敏地检测葡萄苗木的带菌情况。     

麻江县蓝莓枝枯病和果腐病病原鉴定及害虫调查

2015年5月,贵州省黔东南州麻江县蓝莓(Vaccnium uliginosum)种植地发生了2种重要真菌病害和1种鳞翅目幼虫导致的虫害。采用ITS保守序列测序和形态学鉴定的方法对致病的病原微生物进行了分类鉴定。结果表明,其病原菌为乌饭树拟茎点霉(Phomopsis vaccinii)和葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea),导致的真菌病害分别为为蓝莓枝枯病和果腐病;害虫为绿尾大蚕蛾(Actias selene ningpoana Felder)的幼虫。     

甘肃定西地区甘蓝枯萎病病原菌的分离与鉴定

自2009年起,甘肃定西地区出现了甘蓝植株矮化、叶片黄化、枯萎甚至死亡的现象。2015年8月,我们采集了田间病株样本,使用常规组织分离法对病原菌进行了分离和纯化,依据柯赫氏法则进行了病原菌确认,并通过形态学和分子生物学方法对病原菌进行了鉴定。结果表明病原菌的形态学特征与尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum一致,其rDNA-ITS、rDNA-IGS以及EF-1α序列与尖孢镰刀菌F.oxysporum相似性达99%,基于病原菌及尖孢镰刀菌各代表专化型EF-1α序列构建的系统发育树将该菌与尖孢镰刀菌黏团专化型F.oxysporum f.sp.conglutinans聚为一类,故引致甘肃定西地区甘蓝枯萎病的病原菌为尖孢镰刀菌黏团专化型F.oxysporum f.sp.conglutinans。     

车前草穗枯病菌分子鉴定

采用真核生物通用引物ITS1/ITS4,对来自江西省吉安县2个车前草穗枯病菌菌株进行rDNA-ITS区段的PCR扩增,对扩增产物进行测序,结果获得2个长度均为579 nt且序列完全一致的rDNA-ITS序列,该序列与GenBank中当归间座壳菌(Diaporthe angelicae)及其无性态拟茎点霉菌(Phomopsis subordinaria)对应序列的同源性高达99.0%,根据以rDNA-ITS序列同源性大小划分种类的标准,将车前草穗枯病菌鉴定为当归间座壳菌。     

葡萄溃疡病菌巢式PCR高效检测体系的建立

葡萄溃疡病（grape canker）在世界葡萄种植区普遍发生,可引起葡萄的顶梢枯死、枝干溃疡、果实腐烂等症状,严重时可导致植株整株死亡,给葡萄生产造成严重危害[1]。已知葡萄座腔菌科Botryosphaeriaceae中的17个种可引起葡萄溃疡病[1]。     

可可毛色二孢菌侵染后的烟草酵母双杂交cDNA文库构建

正葡萄是世界上最重要的经济果树之一,据联合国粮食及农业组织统计,截止到2013年,中国葡萄栽培面积已达715.5万hm2,葡萄总产量超2 300万kg。长期以来,葡萄病害是影响葡萄产业健康发展的重要因素。近年来研究发现由葡萄座腔菌科真菌(Botryosphaeriaceae)引起的葡萄溃疡病(Botryosphaeria dieback)是葡萄上的主要枝干病     

桉树溃疡病病原菌的鉴定

 随着桉树人工纯林的面积扩大,桉树病害也日趋加重,严重影响和制约桉树产业的发展。2008年至今,在云南省石林县和红河州桉树种植区发生一种病害,主要为害嫩枝、枝条和主干,发病初期,感病枝条和主干上产生红褐色圆或椭圆形坏死斑,以后逐渐扩大成椭圆或不规则溃疡斑,病变扩展到木质部后,常造成枝条生长畸形,易引起刮风断裂。主干树皮下明显呈黑褐色坏死,并造成感染面周围树皮开裂,溃疡处一般可看到流胶,严重时造成整株干枯死亡。调查发现,该病发病率通常在 10％～25％,重者可达 40％ 以上,引起桉树溃疡和枯萎死亡。本文通过病原菌分离、致病性测定及传统、分子鉴定明确了该病的病原,以期为病害防治提供理论依据。     

无花果树苗中截获的无花果孢囊线虫形态和分子鉴定

上海口岸从旅客携带进境的树苗中分离到1种孢囊线虫属的2龄幼虫,通过形态特征和分子特征分析,鉴定为无花果孢囊线虫(Heterodera fici Kirjanova,1954)。该2龄幼虫的主要形态特征为:体长409.9~454.4μm;唇环3个;口针发达,长22.6~24.0μm,基部球圆形略向前倾斜;侧线4条;尾长圆锥形,末端细圆,尾部透明区长24.7~30.5μm,约占尾长的1/2。序列分析显示其ITS区序列与GenBank中无花果孢囊线虫的序列相似性为99.48%~99.90%,序列差异为1~5 bp。系统发育分析显示该线虫与无花果孢囊线虫处于一个聚类组内。这是我国口岸首次报道截获无花果孢囊线虫。     

防治杨树溃疡病内生菌的分离筛选及鉴定

为筛选到对杨树溃疡病有良好生防效果的拮抗菌,采用平板对峙法初筛、发酵液“三明治”法和改良琼脂扩散法复筛,以及离体组织试验对杨树不同部位组织的内生菌进行了分离筛选,并对目的菌株进行了防治效果测定;采用形态学观察和ITS序列及其系统发育树分析对其进行初步鉴定。结果表明从115株杨树内生菌中筛选出有拮抗效果的菌株24株,并复筛出拮抗效果良好的菌株5株,最终从杨树内生菌中筛选出1株杨树溃疡病拮抗真菌,编号为YGF9,其对杨树离体组织溃疡病防治效果可达76.47%,初步鉴定该菌株为黄绿木霉Trichoderma aureoviride。表明菌株YGF9可有效抑制杨树溃疡病病原菌的生长,是防治杨树溃疡病的潜在生防菌株。     

草坪害虫中喙丽金龟幼虫的空间分布与理论抽样数

本文采用扩散指标法和Iwao、Taylor回归法测定了上海辰山植物园内‘矮生百慕大’Cynodon dactylon×C.transvaalensis‘Tifdwarf’和日本结缕草Zoysia japonica上的中喙丽金龟Adoretus sinicus越冬幼虫的空间分布型。结果表明,中喙丽金龟幼虫在两种草坪草根部土壤中不同区域的密度相差较大(5~139头/m~2);幼虫在两种草坪草土壤中空间分布型均为聚集型的负二项分布,分布的基本成分为个体群。根据空间分布型的参数,确定了理论抽样数和Kuno序贯抽样方法。     

柑桔黄斑落叶病病原菌鉴定

正柑桔(Citrus reticulata Blanco)是著名的热带、亚热带水果。位于我国南疆的广西,属于亚热带季风气候,是种植柑桔最适宜区或适宜区,柑桔也是广西一大优势水果产业,是广西出口东盟的主要农产品。柑桔黄斑落叶病是近年来在我国广西地区发生的一种新病害。该病害主要危害秋梢和春梢叶片,形成不规则黄斑,严重的可造成整个叶片脱     

广西玉林市番石榴焦腐病的病原菌鉴定

In October 2019, guava (Psidium guajava) fruits were collected from Yulin, Guangxi, after kept indoors for 2-3 days, brown lesions were found on the blossom-end of the fruits with water-soaked haloes around the lesions. A lot of needle tip-sized dots produced at the centre of the lesions, which were subglobose pycnidia, and the conidia were colorless and nearly fusiform. Single spore strains were obtained by isolation and purification, and YLWB-BD01 was selected as representative strain for pathogenicity assay. After wound inoculation, similar symptoms with natural occurrence appeared. The fungus had the same morphological characteristics with YLWB-BD01 was re-isolated from the lesions. BLAST analysis of ITS, EF-1α and β-Tub sequences of YLWB-BD01 shown 100% homology with Botryosphaeria dothidea (Moug.) Ces. & De Not. Phylogenetic tree constructed by the concatenated sequences of ITS～EF-1α～β-Tub sequences shown that the strain YLWB-BD01 was clustered together with B. dothidea (CMW8000). Based on the morphological characteristics and phylogenetic analysis results, the pathogenic fungus causing guava black-rot was identified as B. dothidea. To our knowledge, this is the first report of guava black-rot caused by B. dothidea in China.     

噻唑膦在不同介质不同pH条件下热贮稳定性

噻唑膦加工后的稳定性是剂型选择的关键,为了提高其稳定性,延长其持效期,本研究通过噻唑膦在几种介质中的热贮稳定性试验,研究了酸碱度及介质对噻唑膦化学稳定性及稳定剂环氧大豆油对噻唑膦水乳剂热贮稳定性的影响,从而探索出噻唑膦在不同介质中稳定的最佳pH范围。研究结果发现,噻唑膦在同一pH下不同介质中的稳定性表现为硅藻土膨润土水乳剂,当pH为4.5时噻唑膦的稳定性最佳,而且加入0.2%的环氧大豆油做稳定剂可使噻唑膦在水乳剂中的分解率控制在10%以下。总之噻唑膦在酸性介质中较稳定,在硅藻土和膨润土中的稳定性要高于水乳剂中的稳定性。     

Erysiphe trifolii– a newly recognized powdery mildew pathogen of pea

Diversity of powdery mildew pathogens infecting pea (Pisum sativum) in the US Pacific Northwest was investigated using both molecular and morphological techniques. Phylogenetic analyses based on rDNA ITS sequences, in combination with assessment of morphological characters, defined two groups of powdery mildews infecting pea. Group I (five field samples and three glasshouse samples) had ITS sequences 99% similar to those of Erysiphe pisi in GenBank and exhibited simple, mycelioid type of chasmothecial appendages typical of E. pisi. Erysiphe pisi is normally considered as the powdery mildew pathogen of pea. Group II (four glasshouse samples and two field samples) had ITS sequences 99% similar to those of E. trifolii and produced chasmothecia with dichotomously branched appendages similar to those of E. trifolii. There are fourteen nucleotide differences in the ITS region between the two groups. The correlation of rDNA ITS sequences with teleomorphic features for each of the two groups confirms their identity. Repeated samplings and artificial inoculations indicate that both E. pisi and E. trifolii infect pea in the US Pacific Northwest. Erysiphe trifolii is not previously known as a pathogen of pea. The existence of two distinct powdery mildew species infecting pea in both glasshouse and field environments may interfere with the powdery mildew‐resistance breeding programmes, and possibly explains putative instances of breakdown of resistance in previously resistant pea breeding lines.     

白及锈病的病原鉴定及其田间防治药剂筛选

随着对白及需求的增加, 其人工种植规模不断扩大, 病害也逐年加重?白及锈病常年在种植区发生, 传播能力强, 是生产上危害严重的病害之一?本文对采集自湖北恩施来凤县的白及锈病材料进行显微观察, 发现了该病原菌的夏孢子和冬孢子, 并进行了详尽的形态描述, 同时基于夏孢子的ITS和LSU基因序列构建了系统发育树?结果表明, 该病原为Coleosporium bletiae?此外, 选择5种常见药剂对该病进行田间防效试验, 结果表明, 250 g/L吡唑醚菌酯EC和12%萎锈灵WP的防效最佳, 第2次施药后14 d, 其防效分别可达(90.01±0.64)%和(87.80±0.61)%?本研究结果为白及锈病病原学及其田间防治提供了重要的理论依据?