番茄茎叶提取物对8种植物病原菌的生物活性初步研究

采用6种溶剂对番茄茎叶进行平行提取,以葡萄白腐病菌、葡萄黑痘病菌、苹果腐烂病菌、苹果轮纹病菌、苹果斑点落叶病菌、棉花枯萎病菌、瓜类枯萎病菌和番茄早疫病菌为供试菌,对番茄不同提取液进行抑菌活性测定。结果表明,各溶剂提取液对特定病菌都有极好的抑制作用,对葡萄白腐病菌和苹果腐烂病菌的抑制率均为100%,对其它病菌也都有很好的活性。番茄茎叶的水提取液对供试8种病原菌的综合抑制效果最好,对葡萄白腐病菌、葡萄黑痘病菌和苹果腐烂病菌的抑制作用高达100%,对瓜类枯萎病菌抑菌效果最差也为67.74%。,因此,水应作为番茄茎叶农用抑菌活性物质提取的首选溶剂,石油醚可作为有机溶剂提取番茄茎叶农用抑菌活性物质的溶剂。     

瑞香狼毒根提取物对植物病原真菌的抑菌效果研究

用乙醇温浸法提取瑞香狼毒根的活性物质,对11种常见植物病害的病原菌,采用生长速率法进行抑菌活性测定。结果表明,乙醇提取液中存在抑菌活性物质,对油菜菌核病菌、辣椒疫病菌、番茄早疫病菌、草莓灰霉病菌的抑制效果较好,对其他几种病菌也表现出一定的抑制作用。     

杨树烂皮病生防链霉菌的筛选及鉴定

为明确能有效抑制杨树烂皮病菌的拮抗放线菌F58的生防效果及分类地位,采用平板对峙法、杯碟法和人工接种法分别测定了其活菌及发酵液的抑菌活性;并通过形态学、生理生化特征、16S rRNA及全细胞脂肪酸分析等方法研究了其分类地位。结果表明,拮抗放线菌F58对杨树烂皮病菌、杨树溃疡病菌、苹果斑点落叶病菌等13种供试植物病原菌均有抑制作用,抑菌谱广,其中对杨树烂皮病菌和杨树溃疡病菌抑制作用最强,抑菌带达30.2 mm以上,菌株F58发酵液对这2种病菌也有很强的抑制作用,抑菌圈直径分别为56.4 mm和42.7 mm;发酵液的无菌滤液对杨树烂皮病的保护效果和治疗效果分别达88.7%和73.4%。根据菌株形态、生理生化特性、16S rRNA序列比对及全细胞脂肪酸分析,鉴定拮抗放线菌F58为盐屋链霉菌Streptomyces sioyaensis。     

茜草等25种中药材对5种植物病原真菌的抑制活性

以苹果腐烂病菌、苹果轮纹病菌、棉花枯萎病菌、柑橘炭疽病菌与白菜黑斑病菌为供试菌,采用生长速率法测定25种中药材甲醇粗提物的抑菌活性。结果表明,在浓度为5.0mg/mL时,大部分中药材的甲醇粗提物对至少一种植物病原真菌都表现出不同程度的抑制活性,其中知母、青蒿、细辛与白鲜皮对3种供试植物病原菌的抑制率大于75%,而茜草与姜黄对4种供试植物病原菌的抑制率均在80%以上,具有广泛的抑菌谱。进一步采用系统溶剂法得到的茜草不同溶剂萃取物中,水饱和正丁醇相抑菌活性明显优于石油醚及乙酸乙酯相,表明茜草抑菌活性成分主要为中等及大极性化合物。     

豚草提取物对4种植物病原真菌的抑制活性

采用生长速率法测定了豚草石油醚、乙酸乙酯、正己烷、乙醇提取物对4种植物病原真菌的抑制活性。结果表明,不同溶剂提取物的抑菌活性有差异,其中乙酸乙酯的抑制效果最好,在浸液浓度为4 mg/mL时,对小麦赤霉病菌的抑制作用为100%,对辣椒白绢病菌的抑制作用最低也达76.07%。而石油醚的抑制效果最差,均在30%左右。     

南疆骏枣黑斑病病原菌的分离、鉴定及控制研究

对南疆骏枣黑斑病病原菌进行了分离、鉴定,并对其防治措施进行了研究。结果表明,骏枣黑斑病病原菌为链格孢菌(Alternaria alternata),光照不利于链格孢菌生长,其最适生长p H为6~8;RH为25%时,其菌落直径较小,为1.83cm,且生长缓慢;从鲜枣上分离、筛选的10个拮抗酵母菌中,J0对链格孢菌抑菌效果最佳,抑菌圈直径最大,为3.43 cm;7种中草药提取液对其链格孢菌的抑制作用,以黄连提取液抑菌效果最好。     

杨树烂皮病内生拮抗菌的筛选及鉴定

从健康杨树枝条上分离到1株能有效抑制杨树烂皮病菌的内生细菌,编号为NS3。该菌株对供试的13种植物病原菌均有抑制作用,抑菌谱广,其中对杨树烂皮病和杨树溃疡病病原菌抑制作用最强,其活菌的平均抑菌带宽度达到25.6mm以上,发酵液的抑菌圈直径达到48.6mm以上;人工接种防治试验结果表明:发酵液的无菌滤液对杨树烂皮病具有良好的生防作用,保护作用和治疗作用分别达85.4%和69.6%,与生产上用于防治该病的常用药剂防治效果差异不显著;根据其菌株形态、生理生化特征和16SrDNA序列比对,最终将该菌株鉴定为枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)。     

银杏内生真菌No.1028代谢产物的抗真菌活性及其培养生物学特性

采用无菌技术从银杏茎中分离到一株内生真菌(No.1028),经形态分类学和rDNAITS序列分析研究鉴定为黑孢属Nigrosporasp.,菌丝生长速率法测定结果表明,其代谢产物对重要作物真菌病害病原菌具有明显的抑制作用。离体条件下内生真菌发酵液对番茄早疫病菌、黄瓜枯萎病菌、菜豆炭疽病菌、葡萄炭疽病菌、水稻纹枯病菌、黄瓜立枯病菌均有较强的抑制作用,对上述不同病原菌的抑制率分别为66.7%、48.3%、64.6%、36.5%、57.1%和23.0%。经提取分离得到纯的白色晶体状活性物质。同时也研究了不同碳源、氮源、无机离子对内生真菌No.1028生物学特性和生长的影响,发现玉米粉、黄豆饼粉比较适合其生长和抑菌代谢产物的合成,Na 对抑菌代谢产物的合成有较明显的促进作用。     

不同时期嫁接感染甘薯病毒病害SPVD对甘薯产量的影响

以苹果腐烂病菌、苹果轮纹病菌、棉花枯萎病菌、柑橘炭疽病菌与白菜黑斑病菌为供试菌,采用生长速率法测定25种中药材甲醇粗提物的抑菌活性。结果表明,在浓度为5．0 mg／mL 时,大部分中药材的甲醇粗提物对至少一种植物病原真菌都表现出不同程度的抑制活性,其中知母、青蒿、细辛与白鲜皮对3种供试植物病原菌的抑制率大于75％,而茜草与姜黄对4种供试植物病原菌的抑制率均在80％以上,具有广泛的抑菌谱。进一步采用系统溶剂法得到的茜草不同溶剂萃取物中,水饱和正丁醇相抑菌活性明显优于石油醚及乙酸乙酯相,表明茜草抑菌活性成分主要为中等及大极性化合物。     

香蕉枯萎病拮抗菌的筛选及其作用机制研究

通过分离和筛选,从香蕉园或者其他果园的土壤中分离获得13株对香蕉枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.cubense)具有抑制作用的拮抗菌,并对部分拮抗菌抑制病菌菌丝生长和孢子萌发进行了试验。结果表明,拮抗菌株d4、d5、B3和p发酵液对香蕉枯萎病菌生长具有显著的抑制作用,在平板上产生的抑菌圈直径为21.75～34.75 mm,抑菌效果具有持续稳定性,对孢子萌发的抑制率为90.49%～97.18%;拮抗菌对病菌的作用表现为对菌丝的消融、菌丝细胞的泡囊化、抑制病菌分生孢子的萌发、孢子芽管的扭曲。     

香蕉枯萎病拮抗菌筛选及其抑菌活性

为获得对香蕉枯萎病菌具有稳定拮抗作用的微生物菌株,分别从海南省临高县南宝镇新营农场、皇桐村及美台镇美梅村采集感病土壤和健康土壤进行微生物分离,并以香蕉枯萎病菌4号小种(Fusarium oxysporum f.sp.cubense Race 4)等9种病原菌为靶标菌株,采用平板对峙法和含药介质法对拮抗菌的抑菌活性进行评价,同时根据形态特征、培养特征及生理生化特征和16S rDNA序列分析对其进行鉴定。结果表明:6个土壤样品中共分离得到具有拮抗作用的细菌93株和放线菌133株,其中T3-G-59菌株对9种病原菌具有广谱抗性,菌丝生长抑制率为43.58%~86.43%,孢子萌发抑制率为42.22%~81.11%,其中对香蕉枯萎病菌4号小种的菌丝生长和孢子萌发抑制率分别为86.43%和81.00%,经鉴定该菌株为多产色链霉菌Streptomyces polychromogenes,表明该多产色链霉菌T3-G-59菌株具有应用于香蕉枯萎病生物防治的潜力。     

不同壁材高效氯氰菊酯微囊悬浮剂在土壤中迁移与光解的差异性

分别制备了以脲醛树脂、密胺树脂、聚氨酯和聚脲为壁材的10%高效氯氰菊酯微囊悬浮剂,采用土壤薄层层析法、紫外光解法和室内自然光照对比法,通过高效液相色谱测定了各微囊悬浮剂在土壤中的迁移以及在紫外光和自然光照下的光解作用。结果表明:在粒径相近的情况下,以水为展开剂时,分别以聚脲、聚氨酯、密胺树脂和脲醛树脂为壁材的微囊悬浮剂的迁移性依次减小;同一壁材的微囊悬浮剂,迁移性随粒径增加而增大;在紫外光照射下,光解速率由大到小依次为高效氯氰菊酯原药,10%高效氯氰菊酯乳油,以及以聚脲、聚氨酯、密胺树脂和脲醛树脂为壁材的微囊悬浮剂,其半衰期分别是2.3、9.4、20.7、39.0、45.8 和51.9 h;在自然光照条件下,上述各药剂的半衰期分别是5.8、5.9、6.9、6.7、12.9和17.3 d。将高效氯氰菊酯制备成微囊悬浮剂后其在自然条件下的光解明显低于原药和乳油,可延长其持效期。     

玉米内生菌L10的分离、鉴定及拮抗活性

为获得对玉米茎腐病主要病原菌禾谷镰孢Fusarium graminearum有明显拮抗作用的玉米内生菌,采用平板对峙法从成熟健康玉米茎秆中筛选禾谷镰孢拮抗菌株,并分析其抗菌谱;通过形态特征、生理生化特性及16S rDNA序列分析进行菌种鉴定;利用盆栽生防试验检测其对玉米茎腐病的防治效果。结果表明,共分离获得了164株玉米内生细菌菌株,其中L10菌株对禾谷镰孢具有较好的抑制效果,抑菌圈半径达1.68 cm;该菌对玉米大斑病菌Setosphaeria turcica、层出镰孢F. proliferatum、禾谷镰孢F. graminearum、拟轮枝镰孢F. verticilliodes、玉米弯孢叶斑病菌Curvularia lunata、玉米小斑病菌Bipolaris maydis、立枯丝核菌Rhizoctonia solani、茄链格孢Alternaria solani共8种植物病原菌均有拮抗作用,尤其对禾谷镰孢抑制效果最佳;结合形态特征、生理生化性质及16S rDNA序列分析,将L10菌株鉴定为多粘类芽胞杆菌Paenibacillus polymyxa。L10菌株脂肽类物质对禾谷镰孢菌具有较好的抑制活性,且盆栽生防试验结果显示该菌株对玉米茎腐病具有一定的防治效果。表明菌株L10对玉米镰孢茎腐病的防治具有一定潜力。     

Synthesis and bioactivity of novel sulfone derivatives containing 2,4-dichlorophenyl substituted 1,3,4-oxadiazole/thiadiazole moiety as chitinase inhibitors

The paper reported the synthesis and antifungal properties and mechanism of action of a series of 2-substituted methylthio-5-(2,4-dichlorophenyl)-1,3,4-oxadiazole/thiadiazole and their corresponding sulfones. The preliminary biological test showed these compounds exhibit moderate to good antifungal activity. Particularly, the compounds 7g and 7c inhibited mycelia growth by approximately 50% (EC₅₀) at 2.6–59.2 μg/mL and 17.2–54.4 μg/mL respectively against nine kinds of fungi. The extent of inhibition induced by 7c on Rhizoctonia solani and underlying mechanism of action were studied in vitro. Docking simulation was performed to position selected compounds into the active site of family 18 chitinases. Variation in d-GlcNAc content and chitinase activity indicated that 7c can act as chitinase inhibitor for controlling fungal pathogens in plants.     

小麦茎基腐病生防菌株YB-161的分离鉴定及防效测定

为筛选防治小麦茎基腐病的高效生防菌株,采用稀释涂布法从小麦茎基腐病病土中分离细菌,以假禾谷镰孢Fusarium pseudograminearum为靶标菌,通过平板对峙培养法和室内盆栽试验筛选优良菌株并测定其田间防治效果,分析优良菌株发酵滤液对假禾谷镰孢的抑菌能力,并结合形态特征、Biolog微生物自动鉴定系统和gyrA序列分析对其进行种类鉴定,以及测定该菌株的抑菌谱。结果表明,10份供试土样中共分离到98株细菌,对假禾谷镰孢的菌丝生长抑制率超过40.00%的菌株有14株,其中菌株YB-161对假禾谷镰孢的菌丝生长抑制率最高,达63.50%。室内盆栽试验结果显示,菌株YB-161处理小麦的病情指数最低,为31.40,对小麦茎基腐病的防治效果最好,为68.15%,其对小麦也表现出较好的促生作用。田间调查结果显示,菌株YB-161菌液拌种处理对小麦茎基腐病的田间防治效果高于52.35%,并对小麦具有一定的增产作用。菌株YB-161的发酵滤液5倍稀释液和10倍稀释液对假禾谷镰孢的菌落抑制率分别达66.67%和44.33%,该菌株被鉴定为解淀粉芽胞杆菌Bacillus amyloliquefaciens。此外,菌株YB-161对辣椒炭疽病菌Colletotrichum capisci、烟草疫霉病菌Phytophthora parasitica等5种植物病原真菌均有较好的拮抗作用。表明生防菌株YB-161对绿色防控小麦茎基腐病具有良好的开发利用潜能。     

不同光照条件对脱镁叶绿酸钠光敏抑菌活性的影响

脱镁叶绿酸钠是叶绿素代谢中间产物脱镁叶绿酸a的水溶性钠盐，具有良好的光敏抑菌活性。为探索光照条件对其抑菌活性的影响，采用菌丝生长速率法，研究在不同光照度、光波长及光照时间条件下，脱镁叶绿酸钠对忽视拟盘多毛孢Pestalotiopsis neglecta的抑制作用。结果表明:20 mg/mL的脱镁叶绿酸钠在照度为2 000 lx的白光照射下对菌丝生长的抑制率为83.7%，在黑暗条件下抑制率为77.0%，表明光照对脱镁叶绿酸钠抑菌活性有显著影响 (P < 0.05)；此外，白光的效果好于单色光；光照度及光照时间对抑菌活性也有显著影响，其中当照度为16 000 lx且光照时间为24 h时抑菌作用最强。     

野生酸枣内生细菌筛选、鉴定及其抑菌活性测定

为广泛开发植物内生菌资源,采用组织分离法从野生酸枣的根、茎、叶和果实中进行生防菌的分离和筛选,通过平板对峙法和发酵液法测定了所得菌株对8种植物病原菌的活性,并利用生物学和分子学方法对所得菌株进行了鉴定。结果显示,从野生酸枣的根、茎、叶和果实中共分离得到76株内生细菌;通过对所有菌株进行初筛和复筛,最终得到8株拮抗作用较强的菌株,菌株SZG-23、SZG-1、SZY-13和SZS-3对梨黑斑病菌Alternaria kikuchiana和黄瓜枯萎病菌Fusarium oxysporum f.sp.cucumerinum的抑制作用较强,抑制率均分别高于82.5%和71.1%,其中菌株SZG-23的抑制率最高,达90.3%和72.4%。菌株SZG-23发酵液对8种植物病原菌生长均有一定的抑制作用,其中对梨黑斑病菌和番茄灰霉病菌Bortytis cinerea的抑制作用最好,抑制率分别达92.2%和90.5%。菌株SZG-23的抗利福平突变菌株能在酸枣幼苗中定殖和移动。结合形态观察、生理生化特征及16S r DNA同源性分析将菌株SZG-23鉴定为解淀粉芽胞杆菌Bacillus amyloliquefaciens,16S r DNA序列在Gen Bank中登录号为KF483660。     

棉铃疫病生防细菌筛选、鉴定及制剂防治效果

为有效防治由苎麻疫霉Phytophthora boehmeriae引起的棉铃疫病,采用平板对峙培养法、离体试验和田间小区试验对棉花、玉米、番茄、黄瓜等作物根围细菌进行筛选,结合形态学观察、16S rDNA序列分析及Biolog微生物自动鉴定系统对筛选出的生防细菌进行分类鉴定,并通过离体试验对优秀生防菌2种制剂的防治效果进行评价。拮抗细菌初筛试验结果表明,在供试的1 250株作物根围细菌中,399株细菌菌株有良好的抑菌能力,其中40株拮抗细菌菌株抑菌率在80.00%以上,菌株HMB22922抑菌能力突出,对棉铃疫病菌的抑菌率为85.71%,抑菌带宽10.0 mm。室内筛选试验结果表明,菌株HMB22922、HMB23917和HMB21405的病情指数显著低于空白对照,与化学药剂对照间差异不显著,人工接种苎麻疫霉5 d和7 d后,3株菌株对棉铃疫病的防治效果分别为73.92%、69.58%、56.54%和81.34%、66.67%、64.60%。田间筛选试验结果表明,菌株HMB22922培养液对棉铃疫病的田间防治效果为47.12%～58.64%,优于其它2株供试菌株,与化学药剂的防治效果相当且防治效果稳定。生防菌株HMB22922经形态学观察、序列分析和和微生物鉴定系统被鉴定为萎缩芽胞杆菌Bacillus atrophaeus。人工接种苎麻疫霉5、7和12 d时,以菌株HMB22922为有效成分的2.5′109 CFU/mL萎缩芽胞杆菌悬浮剂的防治效果分别为86.33%、78.66%和64.44%,均优于其相同菌量培养液的防治效果。     

马铃薯糖苷生物碱对枸杞镰孢菌果腐病的诱导抗性及相关防御酶活性的影响

为探索马铃薯糖苷生物碱诱导采后枸杞鲜果抗病性的效应,采用菌丝生长速率法测定了离体条件下马铃薯糖苷生物碱对枸杞鲜果采后主要致腐病原菌镰孢菌Fusarium sp.的抑菌活性;采用浸泡处理法测定了马铃薯糖苷生物碱对采后枸杞鲜果发病病情指数及对果实多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)和超氧化物歧化酶(SOD)等相关防御酶活性的影响。结果表明:不同浓度马铃薯糖苷生物碱对镰孢菌均具有一定的抑制作用,EC50为0.11 g/mL;0.05～0.25 g/mL(提取原料)的马铃薯糖苷生物碱能显著降低采后枸杞鲜果病情指数,较对照降低了10.18%～38.51%;以0.15 g/mL(提取原料)的马铃薯糖苷生物碱处理后对枸杞鲜果抗果腐病的诱导效果最好,达45.81%;马铃薯糖苷生物碱处理枸杞鲜果后,果实中4种防御酶PPO、POD、PAL、SOD的活性均较对照有不同程度提高,分别于处理后第4、5、2、2天与对照差异达到最大,较对照提高了30.76%、21.34%、31.35%和21.91%。表明马铃薯糖苷生物碱能够诱导枸杞鲜果对采后病害的抗性效应,且采后抗病性可能与枸杞相关防御酶活性的增加有关。     

生防菌株ZA1的GFP基因标记及其功能稳定性测定

为明确生防莫海威芽胞杆菌Bacillus mojavensis菌株ZA1在作物体内定殖与作物和病原物的作用机理,运用电击转化法将绿色荧光蛋白表达载体pGFP78导入菌株ZA1体内,并采用细菌培养法、继代培养法和平板抑制法检测其功能稳定性。结果表明,质粒pGFP78成功导入菌株ZA1,标记后菌株ZA1-gfp经形态学和分子生物学验证均证明菌株ZA1已成功标记,标记菌株ZA1-gfp与菌株ZA1形态一致,在荧光显微镜下呈现明亮的绿色,并且能够提取导入质粒pGFP78,扩展出质粒所携带的启动子78序列。功能稳定性鉴定结果表明,标记菌株ZA1-gfp遗传稳定性达100%;与菌株ZA1的生长速率差异不显著,且不影响菌株的运动性;菌株ZA1对马铃薯枯萎病菌、马铃薯炭疽病菌和马铃薯坏疽病菌的抑制率分别为64.50%、68.35%和66.55%,标记菌株ZA1-gfp对3种病原真菌的抑制率分别为67.46%、76.56%和66.75%,表明外源质粒的导入,不影响菌株的抑菌能力。