生防细菌BMY-1对几种植物病原真菌的抑制作用

采用平板对峙培养法和滤纸片培养法测定细菌BMY-1菌株对番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)、辣椒疫霉病菌(Phytophthora capsici)、玉米小斑病菌(Bipolaria maydis)、玉米弯孢霉叶斑病菌(Curvularia lunata)等11种植物病原真菌生长的抑制作用。结果表明,BMY-1菌株对供试病原菌生长具有很好的抑制效果。平板对峙培养法中,BMY-1菌株对番茄灰霉病菌、玉米弯孢霉叶斑病菌、玉米小斑病菌的抑制效果最好,抑菌宽度分别达到15.0 mm,14.0 mm,13.0mm。滤纸片培养法中,BMY-1菌液对番茄灰霉病菌抑制效果最好,抑菌带宽度为8.0 mm。BMY-1菌液及其无菌发酵液对病原菌孢子萌发也有很强的抑制作用。其中对辣椒疫霉病菌和玉米小斑病菌孢子萌发的抑制效果最好。BMY-1菌液处理后,孢子萌发率分别为0.97%和1.00%,而对照萌发率为分别为96!29%和93.04%。     

3株放线菌对致病疫霉抑制作用的比较研究

采用对峙培养法、菌悬液混合法和块茎切片法分别比较了3株拮抗放线菌Sy11、NB8和A5295对致病疫霉(Phytophthora infestans)的抑制作用及其对马铃薯晚疫病的预防效果。结果显示,放线菌活体菌株以NB8对致病疫霉菌丝生长的抑制作用最强(87.18%),Sy11次之(76.92%),A5295无明显抑制作用。3株拮抗株菌对致病疫霉游动孢子释放和孢子囊直接萌发的抑制作用均随菌液浓度下降而减弱。其中,Sy11的抑制作用最强,A5295最弱;其原液对游动孢子释放的抑制率分别为92.3%、79.0%和63.7%,对孢子囊直接萌发的抑制率分别为75.8%、72.4%和55.8%。在块茎切片上对马铃薯晚疫病的预防效果也以Sy11最高(75.90%),显著优于NB8和A5295。受Sy11和NB8抑制致病疫霉部分菌丝体形态发生畸变,而A5295对菌丝形态未表现出明显的致畸作用,表明Sy11防治马铃薯晚疫病潜力最大。     

一株疫病拮抗青霉P.st10菌株的抗菌活性及其对辣椒疫病的盆栽防效

筛选得到一株疫霉菌的拮抗青霉Penicillium striatisporumP.st10。该菌株强烈抑制疫霉菌及核盘菌的菌丝生长。无菌滤液抑制辣椒疫霉孢子囊的形成及孢子囊、游动孢子的萌发,且能杀死菌丝细胞。该菌株在辣椒根际有很强的定殖能力,有机肥对其定殖有增强作用,接种后40d在根际的青霉菌数量,青霉处理为0.76×104cfu/g,而青霉菌肥处理为2.55×104cfu/g。盆栽试验显示:处理7d后,土壤只接种辣椒疫霉对照发病率为93%;同时接种青霉培养滤液和辣椒疫霉处理为16%;接种青霉培养滤液、新鲜菌丝和辣椒疫霉处理为15%。     

烟草疫霉的产孢和接种方法研究

烟草疫霉是重要的病原真菌,但在人工培养条件下难以培养、产孢以及释放游动孢子.作者对烟草疫霉培养、产孢、接种方法进行了研究.芝麻培养基、黑麦培养基、燕麦培养基可用来培养烟草疫霉,烟草疫霉在三种培养基上平均每天生长量为1.10、0.78、0.86cm;芝麻培养基、黑麦培养基为烟草疫霉产孢子囊较好的培养基,产孢能力强,分别为2.52×104、2.07×104个孢子囊/cm2.而且孢子囊释放率高,分别为43.0%、32.1%.游动孢子囊悬浮液灌根接种和注射接种都能使烟草发病,但不同的接种方法和接种浓度下,病情指数不同.     

几株拮抗细菌抑制致病疫霉孢子萌发的比较研究

前期试验中发现芽孢杆菌(Bacillus spp.)WL1和WL2等6株细菌的菌液对致病疫霉菌丝生长有较强的抑制作用,且其中WL1、WL2和M15菌株无菌体发酵液对致病疫霉的抑制作用也较强。为深入了解其抑制作用,以筛选出对马铃薯晚疫病更具生防潜力的菌株,本试验比较了这6株菌株的菌液和其中3株菌株的发酵液对致病疫霉游动孢子释放、游动孢子萌发和孢子囊直接萌发的抑制效果以及菌液在马铃薯离体叶片上病害的预防效果。结果显示,对游动孢子释放、游动孢子萌发和孢子囊直接萌发的抑制作用以WL2菌株最强,在最低菌液浓度(1×10~4 cfu/m L)下,病菌萌发率及释放率均在36%以下,显著低于对照(47%以上);菌液处理不同时间后,对游动孢子释放、游动孢子萌发和孢子囊直接萌发的综合抑制作用仍以WL2菌株最强,处理18 h后其抑制强度保持不变,其次是M15菌株,对孢子释放和游动孢子萌发的抑制作用也不随处理时间延长而明显下降;发酵液抑制不同时间后,也以WL2的抑制作用最强,抑制游动孢子释放、游动孢子萌发和孢子囊直接萌发所需时间仅为1.0~1.5 h,而WL1和M15则需处理2.0 h或2.5 h以上。预防效果也显示,经WL2菌液处理后的马铃薯离体叶片病情指数最低(14.4),相对保护率达到81.2%。     

拮抗菌YQ5对致病疫霉的抑制作用及其抑菌稳定性研究

为明确前期试验中得到的芽孢杆菌(Bacillus sp.)YQ5菌株对致病疫霉抑制作用以及抑菌活性稳定性。本试验采用对峙培养法,测定了YQ5菌株对马铃薯致病疫霉孢子萌发的抑制效果和抑菌活性稳定性,以离体组织培养法明确发酵液对晚疫病的预防效果,采用离体组织诱导法评价发酵液对马铃薯防御酶活性的影响。结果显示,菌株YQ5对致病疫霉菌丝体的抑制率大于70%,发酵液抑制作用后其孢子萌发率不超过10%,预防处理后的块茎和叶片病情指数分别仅有15.4和10.2,其发酵液可促进防御酶活性提高1倍以上。此外,拮抗菌抑菌物质对高温、极端pH环境、紫外线照射均不敏感,当环境温度高于100℃时,发酵液抑菌率高于50%;当环境pH2或pH12时,发酵液抑菌率大于60%,紫外线照射12 h,发酵液抑菌率保持在80%以上。     

致病疫霉拮抗细菌筛选及J-28菌株鉴定

为明确从马铃薯根际土壤中分离获得的细菌对致病疫霉的抑制作用,采用平板划线分离法分离马铃薯根际细菌,以对峙培养法和打孔法分别测试细菌菌株、菌液及无菌体发酵液对致病疫霉菌丝生长的抑制作用,并对其中最具优势的菌株通过培养特征、形态、生理生化特性及16S rDNA序列进行鉴定。结果显示,在分离的60株细菌中,有16株细菌对致病疫霉有明显拮抗作用,有6株抑菌率达60%以上。其中,J-5和J-26的抑菌率最高(90.24%和91.54%),其次为J-28,抑菌率87.80%;菌液以J-5和J-33的抑菌率最高(95.34%和92.93%);J-28菌液抑菌率为81.36%:无菌体发酵液以J-28和J-26的抑菌率最高(82.92%和75.60%)。综合评价以J-28菌株的抑菌作用最为稳定。经鉴定J-28菌株为一株巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)。该菌株在马铃薯晚疫病防治中有较大潜力。     

拮抗菌W-7抑制马铃薯致病疫霉机理初步研究

为探究短小芽孢杆菌W-7对致病疫霉的抑制机理,进一步了解其在防治马铃薯晚疫病中的利用潜力,采用刚果红平板法检测W-7菌株是否产生纤维素酶,以对峙培养法测试含有纤维素酶的无菌体琼脂块对致病疫霉菌丝生长的抑制效果。结果显示,W-7菌株单独培养不产生纤维素酶,但在与致病疫霉对峙培养时产生纤维素酶。适宜产生纤维素酶的培养基为黑麦培养基,对峙培养时间为10 d。含有纤维素酶的无菌体琼脂块对致病疫霉菌丝生长的抑制率可达71.52%,导致菌丝体的畸变率达38.43%;含有纤维素酶的无菌体琼脂块分别经酸性和碱性缓冲液处理后,对菌丝生长的抑制作用和致畸作用均明显下降,对菌丝生长的抑制率分别为29.78%和30.11%,对菌丝的致畸率分别为12.61%和14.21%。表明W-7菌株受致病疫霉诱导后产生了纤维素酶,并通过该酶抑制了病菌菌丝生长,同时引起菌丝体畸变。     

棉铃疫病生防细菌筛选、鉴定及制剂防治效果

为有效防治由苎麻疫霉Phytophthora boehmeriae引起的棉铃疫病,采用平板对峙培养法、离体试验和田间小区试验对棉花、玉米、番茄、黄瓜等作物根围细菌进行筛选,结合形态学观察、16S rDNA序列分析及Biolog微生物自动鉴定系统对筛选出的生防细菌进行分类鉴定,并通过离体试验对优秀生防菌2种制剂的防治效果进行评价。拮抗细菌初筛试验结果表明,在供试的1 250株作物根围细菌中,399株细菌菌株有良好的抑菌能力,其中40株拮抗细菌菌株抑菌率在80.00%以上,菌株HMB22922抑菌能力突出,对棉铃疫病菌的抑菌率为85.71%,抑菌带宽10.0 mm。室内筛选试验结果表明,菌株HMB22922、HMB23917和HMB21405的病情指数显著低于空白对照,与化学药剂对照间差异不显著,人工接种苎麻疫霉5 d和7 d后,3株菌株对棉铃疫病的防治效果分别为73.92%、69.58%、56.54%和81.34%、66.67%、64.60%。田间筛选试验结果表明,菌株HMB22922培养液对棉铃疫病的田间防治效果为47.12%～58.64%,优于其它2株供试菌株,与化学药剂的防治效果相当且防治效果稳定。生防菌株HMB22922经形态学观察、序列分析和和微生物鉴定系统被鉴定为萎缩芽胞杆菌Bacillus atrophaeus。人工接种苎麻疫霉5、7和12 d时,以菌株HMB22922为有效成分的2.5′109 CFU/mL萎缩芽胞杆菌悬浮剂的防治效果分别为86.33%、78.66%和64.44%,均优于其相同菌量培养液的防治效果。     

深绿木霉T2菌株对百合疫霉拮抗作用及机制

本文采用对峙培养、抗生物质测定、对扣培养、圆盘滤膜法、酶活性测定等方法,研究了深绿木霉对百合疫霉病菌的拮抗作用及机制。结果表明,深绿木霉T2菌株具有较强的营养竞争与重寄生作用;并发现其有抗生物质和溶菌酶类产生,对峙培养60 h时,深绿木霉生长速率是百合疫霉的3.68倍,能够与其竞争营养,抑制了百合疫霉的生长与扩展,深绿木霉寄生在百合疫霉菌丝上生长,导致百合疫霉菌丝降解;其代谢产物能够抑制百合疫霉的生长,48 h时难挥发性和易挥发性代谢产物对百合疫霉的抑菌率分别为85.07%和79.10%;深绿木霉T2菌株的发酵液有较高的β 1,3 葡聚糖酶活性,并在第5天达到峰值,为18.54U;深绿木霉发酵液对百合疫霉菌丝有降解作用。     

新型杀菌剂丁吡吗啉的生物活性及作用方式初探

丁吡吗啉是一种结构新颖的杀菌剂,化学名(E)-3-(2-氯吡啶-4-基)-3-(4-叔丁基苯基)-丙烯酰吗啉。室内生物测定结果表明,在离体条件下,丁吡吗啉对致病疫霉Phytophthora infestans、辣椒疫霉Phytophthora capsici、立枯丝核菌Rhizoctonia solani、古巴假霜霉Pseudoperonospora cubensis等重要植物病原菌均有很好的抑制活性,其对致病疫霉、辣椒疫霉、立枯丝核菌菌丝生长的抑制中浓度(EC50)分别为1.38±0.06、0.72±0.05和4.44±0.03 μg/mL,对古巴假霜霉菌孢子囊萌发的抑制中浓度为5.33±0.05 μg/mL;但其对尖镰孢萎蔫专化型菌Fusarium oxysporum f.sp.vasinfectum、轮纹大茎点菌Macrophthoma kawatsukai、玉蜀黍赤霉Gibeberlla zeae的菌丝生长无抑制效果。用400 μg/mL的丁吡吗啉药液喷雾处理番茄幼苗,分别在施药后1、3和8 d接种致病疫霉的游动孢子,其对番茄晚疫病的防效分别为94.2%、90.8%和78.1%,说明丁吡吗啉在防治番茄晚疫病中具有较好的保护作用和一定的持效期。     

四种化合物诱导马铃薯抗晚疫病的效果及其相关防御基因表达分析

为探究水杨酸、壳聚糖、麦角甾醇和纤维二糖4种化合物诱导马铃薯抗晚疫病的效果及其作用机理，采用整株喷雾法、挑战接种法、菌丝生长速率法分析4种化合物对马铃薯晚疫病的预防作用及对其病原菌致病疫霉Phytophthora infestans的离体抑制效果，利用实时荧光定量PCR技术测定4种化合物诱导后马铃薯病程相关蛋白和防御酶基因的调控表达情况。结果显示，水杨酸、壳聚糖、纤维二糖和麦角甾醇分别处理马铃薯植株24 h后接种致病疫霉，在多个浓度下对晚疫病均有不同程度的诱导抗性，其中在1 000 μmol/L浓度（壳聚糖浓度为1 000 mg/L）时诱导抗性最好，较对照显著提高，诱抗效果分别为54.73%、61.99%、59.73%和48.59%。壳聚糖对马铃薯晚疫病的诱抗效果高于其它3种化合物，且只有壳聚糖能显著抑制致病疫霉的菌丝生长和孢子囊形成，说明壳聚糖除了能诱导作物产生抗病性外，还具有直接抑菌作用。4种化合物诱导后马铃薯病程相关蛋白基因PR1、过氧化物酶基因POD和多酚氧化酶基因PPO的表达量在施用早期均显著升高。表明这些化合物能诱导马铃薯对晚疫病产生抗性，可能与马铃薯体内过氧化物酶、多酚氧化酶的活性和抗病信号传导途径关键基因PR1的表达有关。     

水杨肟酸对致病疫霉生长及其对嘧菌酯敏感性的影响

采用菌丝生长速率法测定了离体条件下水杨肟酸对致病疫霉菌丝生长的影响,同时测定了添加水杨肟酸对致病疫霉在不同生长阶段对嘧菌酯敏感性的影响。结果表明:水杨肟酸在低浓度时对致病疫霉菌丝生长有一定的促进作用,但随其浓度升高,对病原菌的抑制作用逐渐增强,10μg/m L时,水杨肟酸对致病疫霉菌丝生长的抑制率小于10%,50μg/m L时,其平均抑制率大于70%。与单用嘧菌酯的处理相比,嘧菌酯中添加10μg/m L的水杨肟酸时,致病疫霉对嘧菌酯的敏感性不受水杨肟酸的影响,其抑制菌丝生长的平均EC50值分别为0.08和0.10μg/m L,抑制孢子囊萌发的平均EC50值分别为0.65和0.67μg/m L;同时,添加10μg/m L的水杨肟酸对孢子囊产量、游动孢子释放以及休止孢萌发均无显著影响;但嘧菌酯中添加50μg/m L的水杨肟酸时,除对致病疫霉菌丝生长无显著影响外,对其他各生长阶段均有显著影响。因此,在离体条件下测定致病疫霉对嘧菌酯的敏感性时,可不必添加水杨肟酸。     

非寄主和寄主种子分泌物对大豆疫霉活性的影响

为探寻非寄主和寄主种子分泌物中抗病信号分子,通过显微观察,采用菌丝生长速率法和离体接种法对不同种子分泌物处理后大豆疫霉Phytophthora sojae的游动孢子数、孢子囊数、游动孢子释放后残留的空囊数、成囊和未成囊的游动孢子数、萌发和未萌发的胞囊数、菌落直径、卵孢子数进行测量,并计算抑制率,明确非寄主菜豆和寄主大豆抗病品种、感病品种种子分泌物对大豆疫霉游动孢子趋化性、生长发育和侵袭力的影响。结果显示,非寄主菜豆种子分泌物不吸引大豆疫霉游动孢子,显著抑制大豆疫霉孢子囊形成、胞囊萌发和卵孢子产生,抑制率依次为97.3%、73.0%和17.5%,然后溶解胞囊,最终导致游动孢子对下胚轴侵袭力降低,抑制率为67.1%。寄主大豆种子分泌物能吸引大豆疫霉游动孢子,感病品种种子分泌物吸引力高于抗病品种。感病品种种子分泌物对大豆疫霉生长发育无显著影响,但促进大豆疫霉游动孢子侵袭力;抗病品种种子分泌物显著抑制大豆疫霉孢子囊形成、胞囊萌发和卵孢子产生,抑制率依次为86.6%、34.3%和12.8%,然后溶解胞囊,但作用强度小于非寄主菜豆种子分泌物,最终导致游动孢子对下胚轴的侵袭力降低,抑制率为24.2%。表明非寄主菜豆和寄主大豆抗病品种的种子分泌物对大豆疫霉有抑菌活性,大豆疫霉的非寄主和寄主抗病性与种子分泌物有关。     

淡紫褐链霉菌NBF715防控黄瓜猝倒病及其机制的初步研究

为明确淡紫褐链霉菌NBF715对黄瓜猝倒病的防控效果和抑菌机制,对其进行了对峙培养、抑菌活性、抑菌物质测定和盆栽防效测定。结果表明,对峙培养条件下NBF715对瓜果腐霉抑菌率为55.6%,无菌发酵液稀释10、25、50倍和100倍对瓜果腐霉抑菌率分别为84.1%、69.2%、47.8%和36.5%。光学显微镜和扫描电镜下观察,与对照相比,NBF715处理后瓜果腐霉菌丝发生扭曲、肿胀变形和消解。NBF715菌株能产生淀粉酶、纤维素酶、β-1,3-葡聚糖酶和嗜铁素。发酵液原液和稀释5倍发酵液浸种处理,对黄瓜猝倒病防效分别为97.1%和80.2%。NBF715菌株具有较好的生防应用前景。     

细辛叶枯病生防真菌的筛选、鉴定及拮抗效果评价

通过平板对峙培养和发酵液抑菌试验,从细辛健康植株根际土壤中筛选出拮抗效果较好的生防真菌F1-6菌株,经形态学和ITS序列分析鉴定,确定该菌为微紫青霉(Penicillium janthinellum)。对峙培养和发酵液抑菌试验结果表明,该菌株对叶枯病病菌的抑菌率分别为61.25%和63.64%;室内盆栽防治试验结果表明,该菌株对细辛叶枯病的预防效果为70.78%、治疗效果为61.03%。     

影响五倍子水悬浮液对马铃薯晚疫病田间防治效果的主要气象因素

 将4.0%五倍子水悬浮液喷施田间马铃薯品种Bintje的叶片,于不同处理时间后,剪下叶片带回室内人工接种致病疫霉孢子囊悬浮液,保湿培养后调查各处理的发病情况。结果表明,喷施五倍子水悬浮液后48h内未经历降雨的处理,病情指数仅为7.41,与清水对照相比,防效为92.59%;喷施后96h接种的处理,由于在田间经历了降雨,完全丧失了防效,病情指数达100。室内毒力测定结果显示,0.4%五倍子水悬浮液喷施96h后,对致病疫霉游动孢子释放的抑制率仍在80%以上,在室外避雨不避光条件下五倍子水悬浮液96h内抑菌效果无显著降低,表明日光的影响作用较小。在室内盆栽条件下,通过喷淋水滴模拟田间降雨对药液的冲刷作用。结果表明,冲刷作用可导致五倍子水悬浮液对马铃薯晚疫病的防效显著降低。进一步说明,降雨是导致五倍子水悬浮液对马铃薯晚疫病田间防治效果降低的主要气象因素。     

嗜线虫杆菌发酵液对苎麻疫霉的抑制作用

用室内平板抑菌法测定了８株嗜线虫杆菌对苎麻疫霉的抑制效果。结果表明：嗜线虫杆菌对苎麻疫霉菌丝有较强的抑制生长作用,所有株系的发酵液稀释５倍时,对苎麻疫霉的抑菌率均达１００％;稀释１０倍时,抑菌率达９５％以上的株系占８７．５％;稀释１５倍,抑菌率在８０％以上的株系占５０％。不同的嗜线虫杆菌对苎麻疫霉的抑菌作用存在很大差异,抑菌作用最强的是Ｘ．ｐｏｉｎａｒｉ的ＮＣ５１３和ＮＣ３２株系,其ＥＣ５０分别为０．０８％和０．１３％,其次是Ｘ．ｎｅｍａｔｏｐｈｉｌｕｓ的ＢＪ和Ａ２４株系,ＥＣ５０分别为０．４０％和０．８８％,其它株系ＥＣ５０在１．９４％～６．０３％之间不等。嗜线虫杆菌发酵液对苎麻疫霉有溶菌和抑制菌丝生长的作用,经发酵液处理后的苎麻疫霉菌丝扭曲、分支增多、分支顶端膨大,甚至菌丝胞壁破裂,原生质外溢。     

玉米根系分泌物中关键抑菌物质对大豆疫霉的抑菌活性

间作是控制作物土传病害的有效手段,根系分泌物对病原菌生长的影响是间作具备控病效果的重要原因。本文研究了玉米根系对大豆疫霉游动孢子行为特征的影响,鉴定了玉米根组织中的关键抑菌活性物质,测定其对大豆疫霉菌丝生长和游动孢子行为的影响。结果表明,大豆与玉米间作能够显著降低大豆疫霉根腐病的发生,玉米根系和根系分泌物能够显著减弱根际大豆疫霉游动孢子的游动和根际大豆疫霉休止孢的萌发能力。通过HPLC对玉米根组织进行分析,发现玉米根组织中存在门布和苯并噻唑这两种抑菌物质,两者能显著抑制大豆疫霉游动孢子的游动和其休止孢的萌发能力;在浓度为500μg/mL时,其游动抑制率均达到100%;而萌发抑制率分别为100%和81%。同时,门布和苯并噻唑都能显著抑制大豆疫霉的菌丝生长。在浓度为500μg/mL时,其抑制率分别为100%和62.49%。综上所述,玉米根系组织中产生和分泌的门布和苯并噻唑对大豆疫霉具有抑菌活性,生产上可以利用玉米/大豆间作降低大豆疫病的危害。     

木霉对5种病原菌抑菌活性筛选

采用滤纸片法对云南地区分离并鉴定到的15株木霉进行2株病原细菌(大肠杆菌和金黄色葡萄球菌)和3株植物病原真菌(小麦全蚀、番茄早疫、稻疫)抗菌活性筛选。获得可抑制5种病原菌(广谱)的木霉7株。抑菌圈直径范围在0.7～2.8 cm。其中哈茨木霉8917提取物对3株植物病原真菌的抑制最强,哈茨木霉10176提取物对金黄色葡萄球菌的抑制最强,哈茨木霉10174提取物对大肠杆菌的抑制最强。同时,将15株供试木霉与3株病原真菌进行对峙培养,结果显示:对番茄早疫菌抑制率最高的是新康氏木霉8722和深绿木霉8956,对小麦全蚀菌抑制率最高的是新康氏木霉8722和康氏木霉8701,深绿木霉8686对稻疫菌的抑制率最高。哈茨木霉在滤纸片法活性筛选中相对其他木霉抑菌活性较好,但在对峙培养活性筛选中其抑菌活性最弱。