不同培养基对玫烟色棒束孢菌株的复壮研究

虫生真菌的毒力退化是一种普遍现象,表现为产孢能力下降或丧失、毒力下降及次级代谢产物合成能力下降等。基于玫烟色棒束孢Isaria fumosorosea PF904菌株继代培养后产孢量和毒力严重退化,本试验采用添加4种不同营养物质的培养基对其进行复壮。结果表明:培养基中添加甲壳素粉后菌株毒力恢复最好,复壮第10代时对小菜蛾幼虫的致死中时(LT₅₀)由初始菌株的5.86 d下降至3.32 d,接菌第7天校正死亡率高于82%,且恢复比例较稳定;蚕蛹培养基复壮后菌株产孢量恢复最好,复壮第10代时,产孢量由初始菌株的4.28×10⁶个/cm²提升至1.73×10⁷个/cm²,提升3倍之多,但毒力恢复较差;而蝉蜕培养基复壮后产孢量和毒力恢复均不稳定;添加3种营养物质的综合培养基,第10代LT₅₀和产孢量分别恢复为3.53 d和1.58×10⁷个/cm²,对两者具有较好的恢复效果。     

淡紫拟青霉NH-PL-03菌株在不同培养基上的生长特性

观察淡紫拟青霉菌在不同培养基上的生长状况,研究淡紫拟青霉菌在不同培养基上的生长特性及对茎线虫的毒力。结果表明:不同培养基对淡紫拟青霉NH-PL-03菌株的生长特性有明显影响。在孟加拉红、PDA和察氏培养基上,菌丝量增长最为显著,培养8d,菌丝量分别达到0.800、.73 g/50 mL和0.70g/50 mL;培养过程产孢量处于动态增长趋势,而且不同培养基产孢量大不相同;在察氏和燕麦培养基上产孢量最大,培养8d,产孢量分别达到36.90×10⁶/mL和35.51×10⁶/mL;培养液滤液的毒力随淡紫拟青霉培养时间延长而升高,在察氏培养基培养毒力较高,对茎线虫的最高校正死亡率达到43.44%。     

绿僵菌对“Q型”烟粉虱2龄若虫的致病性及与毒力关联的培养性状研究

烟粉虱Bemisia tabaci(Gennadius)是我国农业上重要害虫,已对当今市场上多种杀虫剂产生严重抗性。本文研究了8株来自不同寄主的绿僵菌Metarhizium spp.菌株对Q隐种烟粉虱2龄若虫的致病性和与毒力关联的培养性状。结果表明,菌株Mf96对"Q型"烟粉虱2龄若虫具有很强的毒力,以1.0×108孢子/m L的孢子液接种到2龄若虫体表上,累积校正死亡率达89.5%,LT50为3.65 d,致死率明显高于其它菌株。以1.0×108、1.0×107、1.0×106和1.0×105孢子/m L悬浮液处理时,烟粉虱2龄若虫累计死亡率随浓度和接种后时间增加而增加,LC50为1.20×107孢子/m L。供试的8株绿僵菌菌株的胞外蛋白酶也被测定,菌株Mf96的胞外蛋白酶活性最高,达3.64 U/m L。菌株Mf96在SDAY培养基上,具有生长速度快、萌发率高和产孢量大等优点。菌株Mf96在烟粉虱的生物防治中具有较大的应用潜力。     

球孢白僵菌Bb84对Q型烟粉虱的时间-剂量-死亡率模型分析

为获得对Q型烟粉虱Bemisia tabaci（Gennadius）具有高毒力的杀虫真菌菌株并将其应用于生产,采用喷雾法测定了5个球孢白僵菌Beauveria bassiana菌株对烟粉虱若虫的毒力,并运用时间-剂量-死亡率模型分析了B.bassiana 84（Bb84）菌株对烟粉虱若虫的时间效应和剂量效应。结果表明:在5个供试菌株中,Bb84菌株对烟粉虱3龄若虫的致死速度快、致死率最高,逐日死亡率随着Bb84菌株孢子浓度的增加而上升,且其对2、4龄烟粉虱若虫也有较高的毒力。用时间-剂量-死亡率模型分析其剂量效应与时间效应,结果表明:随着Bb84菌株接种时间的延长,相应的致死中浓度（LC50）值随之降低,剂量效应逐渐增强;当Bb84菌株处理浓度为1.0×107、1.0×108和1.0×109孢子/mL时,其对烟粉虱3龄若虫的致死中时间（LT50）值分别为5.44、4.61和4.05 d,即LT50值随菌株孢子浓度的增加而减小,时间效应增强。因此,在实际生产中,当球孢白僵菌Bb84菌株的浓度高于1.0×108孢子/mL时,对烟粉虱3龄若虫的防治效果较好。     

五株病原真菌对桃小食心虫的致病力

为筛选桃小食心虫高致病性菌株,以在山西省自然感病的桃小食心虫越冬幼虫上分离获得的5株病原真菌为材料,研究各菌株感染桃小食心虫幼虫的症状、对寄主的致死率,以及与菌株毒力相关的胞外类枯草杆菌蛋白酶、几丁质酶和脂肪酶的活性变化,并评价其生物防治潜力。5个菌株在寄主上的感病症状和致死率有显著差异,感病后10天,球孢白僵菌BbTST05对寄主的致死率最高,为89.3%,其类枯草杆菌蛋白酶、几丁质酶和脂肪酶3种酶活性均最大;粉棒束孢IfTSL02对寄主的致死率及其蛋白酶、几丁质酶活性次之;尖孢镰孢菌的FoTSL01、FoTSL03和FoTSL04菌株对桃小食心虫的致死率均低于61%,3种胞外酶的活性也较低。因此,球孢白僵菌BbTST05和粉棒束孢IfTSL02可用于桃小食心虫的防治。     

拟康宁木霉Hailin产几丁质酶条件优化及其抑菌能力评价

采用透明圈法测定了拟康宁木霉(Trichoderma koningiopsis) Hailin菌株是否产几丁质酶,并通过单因素和正交试验对Hailin菌株产几丁质酶的发酵条件进行优化;用对峙培养和培养基中添加几丁质的方法检测Hailin菌株及其几丁质酶粗酶液对7种植物病原真菌的拮抗能力。结果表明,Hailin菌株在胶体几丁质的诱导下可以产生明显的透明圈,即可产生几丁质酶。Hailin菌株产几丁质酶的优化条件为葡萄糖5.0 g/L、硝酸钾10.0 g/L、Mn~(2+)0.08 mol/L、Mg~(2+)0.05 mol/L、初始pH为4、装液量为50 mL/150 mL。优化条件下,Hailin菌株产几丁质酶活性可达到0.784 U/mL,较优化前几丁质酶活性相比提高了2.57倍。Hailin菌株对7种植物病原真菌均有抑菌效果,抑菌率在44.44%～85.71%之间;Hailin菌株几丁质粗酶液对7种植物病原菌中的6种具有抑菌效果,抑菌率为5.88%～71.52%。Hailin菌株分泌的几丁质酶在Hailin菌株抑制不同病原菌过程中发挥的抑菌作用存在显著差异。     

玫烟色棒束孢FZ-01鉴定及对烟粉虱的防治潜力评估

为了明确从罹病烟粉虱Bemisia tabaci上分离的虫生真菌（菌株FZ-01）的分类归属及其生物防治的潜力，采用形态学特征观察和rDNA-ITS序列分析方法对该菌株进行鉴定，并对其生物防治潜力进行评估。结果发现：菌株FZ-01为玫烟色棒束孢Isaria fumosorosea；该菌株在马铃薯PDA培养基上生长良好；适应温度和酸碱度范围较广，可耐高温（35℃）和酸碱（pH4～10）；孢子萌发速率快（5 h）且萌发率高（>90%）；菌株致病力测定表明分生孢子浓度为1.0×10⁷ cfu/mL时，对烟粉虱（MEAM1）成虫致死中时间（LT₅₀）仅为2.75 d，接菌4 d时致死中浓度（LC₅₀）仅为2.69×10⁴ cfu/mL。综上结果表明，玫烟色棒束孢FZ-01对烟粉虱具有十分优良的生防潜力。     

楚雄腮扁叶蜂虫生真菌粉红粘帚霉的鉴定及其生物学特性

为明确楚雄腮扁叶蜂Cephalcia chuxiongica病原真菌的种类,以组织分离法对自然罹病死亡的楚雄腮扁叶蜂进行虫生真菌的分离培养,根据形态学特征和rDNA ITS序列分析对所得虫生真菌进行鉴定,并对其中的高毒力菌株进行生物学特性测定。结果表明:共分离得到4属25株菌株,其中以粉红粘帚霉Clonostachys rosea出现频率最高,共分离到15株,均与GenBank中粉红粘帚霉相关菌株亲缘关系最近,ITS序列同源性达100%,属优势种。按照柯赫法则证实4个属的虫生真菌对楚雄腮扁叶蜂均有致病力,其中粉红粘帚霉致病力最强,其高毒力菌株SWFUYHL 02-01对楚雄腮扁叶蜂幼虫致死中时为10 h;蛋白胨马铃薯葡萄糖琼脂培养基最适宜该菌株生长和产孢,其次是马铃薯葡萄糖琼脂培养基;该菌的最适生长温度为25℃,光照对其菌丝生长无显著影响;在以不同种类糖为碳源的培养基上该菌株均能生长,以蔗糖为碳源的培养基上产孢量最高,显著高于以其它糖为碳源时;适宜其生长的氮源是酵母浸出粉,适宜产孢的氮源是硝酸铵和尿素,以硫酸铵和酵母浸出粉为氮源时不产孢;适宜菌丝生长和产孢的无机盐分别是MnSO_4和MgSO_4,添加CaCl_2的培养基上未见产孢;光照对粉红粘帚霉孢子萌发无显著影响。粉红粘帚霉菌株在采样点的出现频率与其生物学特性完全吻合。     

一株高毒力刀孢蜡蚧菌最适培养条件的优化及其对桃蚜的毒力测定

刀孢蜡蚧菌Lecanicillium psalliotae是一种重要的昆虫病原真菌,在害虫生物防治中应用广泛。为明确刀孢蜡蚧菌生长和产孢的最适培养条件,本文对一株刀孢蜡蚧菌HFLP006菌株的培养条件进行优化,比较了不同培养基种类、初始接菌量、培养温度、供试碳源和氮源对该菌株产孢量的影响。结果表明,在SDAY液体培养基中,以8%接菌量培养8 d能够获得最大产孢量2.83×10⁹个孢子/mL。菌株HFLP006最适产孢温度为26℃。以甘露醇和葡萄糖为碳源能够获得最大产孢量,分别为1.28×10⁹和1.25×10⁹个孢子/mL,二者之间差异不显著。以酵母浸粉为氮源获得的产孢量（9.48×10⁸个孢子/mL）最大,且显著高于其他氮源处理组。使用1×10⁷个孢子/mL的菌悬液对桃蚜进行毒力测定,处理后第7 d试虫平均校正死亡率达80.73%。本研究所获得的结果对菌株HFLP006的大规模工业生产和生物防治应用均具有重要意义。     

7种杀虫剂对北京地区烟粉虱成虫毒力的比较研究

本试验比较测定了7种杀虫剂对北京地区烟粉虱成虫的毒力,以期为北京地区高毒农药淘汰提供参考。结果表明:氟虫腈对烟粉虱成虫的毒力最强,其LC50值为2.98(g/mL;新烟碱类杀虫剂啶虫脒、吡虫啉对烟粉虱成虫的生物活性较好,LC50值分别为8.04(g/mL、7.49(g/mL,噻虫嗪对烟粉虱成虫毒力相对较差,LC50值仅为95.03(g/mL;烟粉虱成虫对马拉硫磷、异丙威和噻嗪酮3种杀虫剂不敏感。在北京地区,采用噻虫嗪、马拉硫磷、异丙威和噻嗪酮等杀虫剂,不能有效防治烟粉虱的成虫;氟虫腈、吡虫啉和啶虫脒可以用来防治烟粉虱成虫。     

球孢白僵菌生物学特性与其对小菜蛾致病力相关性分析

为明确球孢白僵菌的各项生物学指标与其对小菜蛾致病力间的相关性,对一株球孢白僵菌菌株GXU-Bb进行单孢分离,测定了菌株GXU-Bb及其分离子菌株GXU-Bb16、GXU-Bb10、GXU-Bb13和GXU-Bb05这5个菌株的生长速率、产孢量、孢子萌发率、胞外蛋白酶水平和几丁质酶水平等多项生物学指标。结果表明,各菌株间生长速率和孢子萌发率无显著差异;产孢量变化范围1.54×10^7-2.98×10^7个/ml;胞外蛋白酶水平变化范围1.04-1.19;几丁质酶水平变化范围1.05-1.14;各菌株间对小菜蛾二龄幼虫的致病力差异较大,校正死亡率变化范围为39.81%-83.79%。将各生物学指标与菌株对小菜蛾二龄幼虫的校正死亡率进行回归分析得出,球孢白僵菌对小菜蛾的致病力与菌株生长速率、孢子萌发率无显著相关关系;与产孢量、胞外蛋白酶水平呈极显著正相关关系;与几丁质酶水平呈显著正相关关系。     

球孢白僵菌BB-T02生物学特性及对两种检疫性粉蚧的侵染活性

南洋臀纹粉蚧和石蒜绵粉蚧是近年我国新记录的两种检疫性有害生物,目前分别在福建省的番荔枝果园和多肉植物种植基地发生为害严重。为明确球孢白僵菌BB-T02对这2种检疫性粉蚧的生防潜力,本研究在该菌株生物学特性的基础上,测定该菌株对两种检疫性粉蚧的致病力和胞外酶活性。结果表明,球孢白僵菌BB-T02培养最适的温度为28℃、光周期8L:16D、碳源为麦芽糖、氮源为蛋白胨,在此条件下培养10 d菌落直径和产孢量分别可达5.60 cm和4.22×10⁸孢子/cm²。菌株BB-T02侵染南洋臀纹粉蚧和石蒜绵粉蚧10 d后的LC₅₀分别为5.00×10⁵孢子/mL和2.17×10⁵孢子/mL,1.00×10⁸孢子/mL处理的累计致死率分别为85.39%和88.76%、LT₅₀分别为5.78 d和5.19 d。菌株BB-T02蛋白酶活性的变化幅度较大,在第5 d达峰值22.68 U/mL;几丁质酶和脂肪酶活性的变化幅度相对平稳,均在第6 d分别达到峰值13.19 U/mL和9.77 U/mL。综上,球孢白僵菌BB-T02生长速度快、产孢量高,对南洋臀纹粉蚧和石蒜绵粉蚧的侵染活性强,可用于这两种检疫性粉蚧的生物防治。     

连续施药及室内药剂驯化对番茄灰葡萄孢对咯菌腈敏感性的影响

为了解连续施药对番茄灰葡萄孢对咯菌腈敏感性的影响,在温室条件下,从灰霉病发生初期开始,按推荐剂量(有效成分67.5 g/hm2)定期向番茄苗喷施咯菌腈,通过菌丝生长速率法检测灰葡萄孢对咯菌腈的敏感性。结果表明,在番茄1个生长季节中连续施药7次后,病菌对咯菌腈仍表现敏感,其EC50值在0.004 7～0.046 2 μg/mL之间。在含咯菌腈的PDA培养基上对30个灰葡萄孢敏感菌株进行药剂驯化7代后,共产生2个抗药性突变体(Rg-12和Rdz-28),其中Rg-12对咯菌腈的EC50值是其亲本菌株g-12的46倍,Rdz-28的EC50值大于500 μg/mL,2个抗性突变体在菌丝生长速率、产孢量和产菌核能力方面均显著低于其亲本菌株。推测灰葡萄孢可能不易对咯菌腈产生抗性,咯菌腈可作为防治番茄灰霉病的理想候选药剂。     

二点委夜蛾幼虫高毒力球孢白僵菌菌株筛选与生物学特性初步研究

本研究对分离自二点委夜蛾Athetis lepigone（Moschler）越冬幼虫僵虫上分离的43株球孢白僵菌菌株进行生物测定,筛选到致病力较强的4株菌株,并对这4株菌株的菌落形态、菌株生长速度、产孢量和萌发率等生物学性状进行了测定。同时以二点委夜蛾2龄幼虫为供试虫源,测定了这4株白僵菌菌株对二点委夜蛾的致病力,从中筛选出具有生长速度快、萌发率高、产孢量大等培养性状优及毒力较强的球孢白僵菌Ed-41菌株。该菌株在浓度为1×107孢子.mL-1悬浮液喷雾接种处理后,在26℃条件下,第8 d供试幼虫的死亡率达85%,显示出对靶标害虫的具有较好的毒力,在二点委夜蛾害虫生物防治中将有潜在的的应用价值。     

球孢白僵菌对葱地种蝇成虫的毒力及繁殖力的影响

本文采用浸虫法测定了4株球孢白僵菌对1日龄葱地种蝇（本文称葱蝇）成虫的毒力,筛选出高致病力的菌株,描述了感染症状,测定了其亚致死剂量LC₂₀和LC₅₀对存活1日龄葱蝇成虫生物学参数和繁殖力的影响,并比较了5.8×10³和5.7×10⁵孢子/mL对1日龄和10日龄葱蝇成虫死亡率和单雌产卵量的差异。结果表明菌株Bb01对葱蝇成虫的致病力最强,其LC₅₀为1.76×10⁶孢子/mL,其次为菌株Bb03和Bb02,其LC₅₀分别为4.05×10⁶和1.86×10⁷孢子/mL。与对照相比,菌株Bb01亚致死剂量处理1日龄成虫后,明显延迟了葱蝇成虫的产卵前期,降低了单雌产卵量,LC₂₀浓度处理时单雌产卵量比对照下降了51.9%,LC₅₀处理下降92.2%,明显缩短了雌成虫寿命,但卵孵化率没有明显影响。虽然菌株Bb01对1日龄成虫造成的死亡率较高,但在5.7×10⁵孢子/mL下,10日龄成虫单雌产卵量比对照下降了82.5%,对种群控制效果仍较强。     

卵孢白僵菌优良菌株的筛选和选育

从不同地区采集并分离到卵孢白僵菌菌株１７个，其中菌株Ｂｅａｕｖｅｒｉａｔｅｎｅｌｌａ２４一１对大黑鳃金龟幼虫的室内致病力高达７３．３％。通过单孢分离、紫外线照射分生孢子和原生质体的诱变方法，获得了比出发菌株Ｂ．ｔｅｎｅｌｌａ２４一１产孢量高２倍以上，毒力提高０．５４～１．７９倍的优良菌株４个。     

不同菌株绿僵菌和白僵菌对刚竹毒蛾幼虫致病力及林间防治试验

刚竹毒蛾(Pantana phyllostachysae Chao)是福建省毛竹林的一种主要害虫,本研究应用5种金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)菌株和1种白僵菌(Beauveria bassiana)菌株,对3龄初幼虫进行感染力测定,旨在筛选出感染该虫的高致病力菌株。结果表明:应用1.45×10 7孢子/mL孢悬液感染12 d后,3龄初幼虫的校正死亡率均达到63.16%以上;其中MaFzzL-01和Ma1291-2两个绿僵菌株对该幼虫的致病力分别为90.93%和84.21%,其LT50值分别为5.97 d和6.67 d,LC50值分别为1.727×10 4孢子/mL和2.029×10 4孢子/mL。结果说明:绿僵菌MaFzzL-01和Ma1291-2两个菌株对该幼虫的致病力强,且致死速度快。应用1.45×10 8孢子/mL孢悬液进行林间防治可以取得良好效果。     

Differential Induction of Grapevine Defenses by Two Strains of Botrytis cinerea

ABSTRACT Even though Botrytis cinerea, the causal agent of gray mold, is a highly variable fungus with strains displaying very different degrees of virulence toward one given host plant species, no study has yet shown any correlation between the lack of aggressiveness of one given strain and its ability to stimulate a defense response from its host. Strains of B. cinerea collected from different host plant species were screened for their pathogenicity on grapevine to select two strains with similar morphological characteristics but different levels of virulence. In grapevine leaves, the less aggressive strain, T4, enhanced the accumulation of many defense products including secondary metabolites and the pathogenesis-related proteins, chitinase and beta-1,3-glucanase. Interestingly, secondary metabolites were formed in cells around a small group of dead cells. When compared with T4, the more aggressive strain, T8, had larger necrotic spots, no secondary metabolite biosynthesis, and accumulations of chitinases and beta-1,3-glucanases that were more delayed, yet only slightly weaker. The culture fluids of both strains mimicked the differential effect of each isolate in stimulating chitinase activity when infiltrated into grapevine leaves.     

几丁质酶基因在球孢白僵菌中的超表达提高其对马尾松毛虫的毒力

几丁质酶在虫生真菌穿透寄主体壁的过程中起一定作用,但其与真菌毒力的关系尚不清楚。本研究通过几丁质酶基因在球孢白僵菌Beauveria bassiana中的超表达以及超表达菌株的毒力变化研究了该基因与毒力的关系。将几丁质酶基因Bbchit1通过芽生孢子转入野生型球孢白僵菌中,获得多拷贝的转化子;转化菌株在胶体几丁质诱导培养基中酶活最大值高于出发株4.2倍,表明该几丁质酶基因在转化菌株中得到超表达。毒力测定发现转化子对马尾松毛虫Dendrolimus punctatus的致死中浓度比出发株降低84.5%,在2.5×107孢子/ml浓度下的致死中量减少84.5%,致死中时缩短0.7d,因此毒力大大提高。第2~9d感病死虫数与转化子第1~8d酶活呈极显著正相关（P〈0.01）,而与出发株不相关（P〉0.05）。这些证据表明,几丁质酶与毒力的关系是复杂的,在分泌达到一定阈值后与毒力才有明显的相关关系。