链格孢菌抗植物病原真菌活性筛选

活性筛选是开发利用微生物资源的第一步,在生物农药、抗菌素及天然药物开发颇为急切的今天,对微生物抑菌活性的研究具有重要的理论和现实意义。本研究以水稻稻瘟病菌（Magnaporthe grisea）、小麦雪腐病菌（Typhula incarnate）等10种重要植物病原真菌为研究对象,采用滤纸片法对云南西双版纳地区分离得到的20株链格孢菌（Alternariaspp．）进行抗菌活性筛选,获得对10种植物病原菌有广谱抗性的链格孢菌4株,编号分别为SWFC0364,10102,0845,5828,其中菌株0364的抑菌活性最强,对小麦雪腐、梨黑星、三七丝核的抑菌圈直径均达到2cm以上,该研究结果为活性物质的分离奠定了基础。     

一株放线菌次生代谢产物抗菌活性的初步研究

从秦岭山区土样中筛选得到一株放线菌,编号为NO.24,对其产生的次生代谢产物的抑菌活性进行了测定。生测结果表明,离体条件下发酵液浓度2 000 mg／L时对烟草赤星病菌、马铃薯干腐病菌、玉米大斑病菌、番茄灰霉病菌、番茄早疫病菌、番茄晚疫病菌、小麦赤霉病菌、小麦根腐病菌菌丝生长或孢子萌发均有较强的抑制作用。对玉米大斑病菌和番茄灰霉病菌菌丝生长抑制中浓度为240.1 mg／L和350.5 nag／L;对玉米大斑病菌和马铃薯干腐病菌孢子萌发的抑制中浓度分别为155.0 mg／L和124.1 mg／L。盆栽试验在浓度为6 000 mg／L时对小麦白粉病的保护和治疗作用分别为76.13％和70.78%,对黄瓜霜霉病的保护和治疗作用分别为63.93％和59.66％。对NO.24菌株代谢产物进行了粗分离,其抑菌活性成分主要为水溶性物质。     

拮抗细菌BRF-1对几种植物病原真菌的抗生效果

从大豆根际土壤分离到一株具有拮抗作用的细菌BRF—l,经扫描电镜观察和耐高温试验,初步鉴定为芽孢杆菌。对峙培养试验表明,该菌对大豆根腐病菌、南瓜疫霉病菌、大豆立枯病菌、烟草赤星病菌、小麦赤霉病菌、水稻立枯病菌和小麦根腐病菌等7种病原其菌具有较强的抗菌活性。BRF-1的培养滤液可抑制病原菌菌丝生长和孢子萌发,具有一定的耐酸、碱及高温特性。盆栽接种结果表明,该菌可促进大豆、小麦幼苗生长;在豆长连、重一年和正茬土壤上,对大豆根腐病的防治效果分别达53．9％、34．4％和15．8％。     

土壤稀有放线菌的选择性分离及其抗菌活性研究

在优化土壤稀有放线菌选择性分离方法的基础上,对从安徽、浙江、山东、陕西等地采集的31份土样中的稀有放线菌进行了选择性分离。结果表明:以改进的HV培养基为分离培养基,将土壤样品稀释100倍,添加2×10-5 g/mL重铬酸钾＋2×10-5 g/mL萘啶酮酸＋1×10-5 g/mL卡那霉素作为抑制剂分离效果最好。以常见植物病原真菌和细菌为指示菌,从分离的417株放线菌中筛选出H32、H75、H223、H227、H238等5株可代谢抗菌活性物质的菌株。离体条件下,5株放线菌菌株发酵液对小麦根腐病菌Bipolaris sorokiniana、玉米大斑病菌Exserohilum turcicum、烟草赤星病菌Alternaria alternate的菌丝生长和孢子萌发均有强烈的抑制作用,其中H223和H238菌株发酵液对病原真菌菌丝生长的抑制中浓度(EC50)值均小于10 mL/L;H32菌株发酵液对小麦根腐病菌、玉米大斑病菌、烟草赤星病菌孢子萌发的EC50值分别为25.5、28.9和29.9 mL/L。5株放线菌发酵液对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌抑制作用显著,其中H223菌株发酵液抑制作用最强,抑菌圈达30 mm以上。盆栽实验结果表明,5株放线菌发酵液对小麦白粉病的保护效果为73.45％~82.35％,治疗效果为67.74％~70.80％。     

拮抗放线菌TA21对烟草根黑腐病菌的抑制及其控病作用

菌株TA21是一株从重庆烟区土壤中筛选出的对烟草根黑腐病菌Thielaviopsis basicola有较强拮抗作用的放线菌,为了明确其抑菌效果和控病作用及其在烟草根黑腐病生防中的应用潜力,本文进行了菌株TA21抑菌活性检测和温室控病测试;并通过形态学、生理生化和分子分类的方法确定其分类地位。室内测定试验表明,菌株TA21对烟草根黑腐病菌的抑菌带宽达12.5mm;温室控病试验发现其对烟草根黑腐病防治效果达85.3%。无菌滤液试验表明,在试验浓度范围内无菌滤液均能有效抑制烟草根黑腐病菌菌丝生长、减少孢子萌发。根据菌株形态特征、培养性状、生理生化特性、细胞组分及16S rDNA序列分析,确定菌株TA21为链霉菌属吸水链霉菌Streptomyces hygroscopicus。     

作物根际和叶围中产几丁质酶微生物的分布及其抑制真菌作用

从几十种作物的根际和叶围分离获得３５０株微生物，其中细菌和放线菌分别为２００株和１５０株，对所有这些分离物进行了抑制真菌试验和几丁质酶活性测定。在抑菌试验中，以棉花枯萎病菌、棉花黄萎病菌、黄瓜枯萎病菌，及西瓜枯萎病菌作为供试病原菌，有９６个分离物对其中的一种或一种以上的病原菌有抑制作用，其中１８个分离物对这４种病原菌都具有强烈的抑制作用，在几丁质酶活性方面１０％的细菌和４０％的放线菌都能不同程度地     

作物根际和叶围中产几丁质酶微生物的分布及其抑制真菌作用

从几十种作物的根际和叶围分离获得３５０株微生物，其中细菌和放线菌分别为２００株和１５０株。对所有这些分离物进行了抑制真菌试验和几丁质酶活性测定。在抑菌试验中，以棉花枯萎病菌、棉花黄萎病菌、黄瓜枯萎病菌，及西瓜枯萎病菌作为供试病原菌，有９６个分离物对其中的一种或一种以上的病原菌有抑制作用，其中１８个分离物对这４种病原菌都具有强烈的抑制作用。在几丁质酶活性方面，１０％的细菌和４０％的放线菌都能不同程度地产生几丁质酶。有些菌株几丁质酶活性强，抑菌作用也明显，有些菌株几丁质酶活性弱，抑菌作用弱或无作用，少数菌株几丁质酶活性强，但却无抑菌作用。用几丁质酶液处理病原菌孢子，其萌发率和芽管长度比对照显著降低     

艾丁湖极端环境中嗜盐菌的研究

９９７年～１９９８年秋春季对新疆吐鲁番艾丁湖进行了微生物区系调查,先后在不同地点采集了不同类型的土样及水样多个,对其中有生态意义的２０多个水样进行了不同类型嗜盐菌的分离和计数。３７℃培养下,每克湿土壤中极端嗜盐菌量为１．４×１０２～１．０×１０６,中度嗜盐菌量为０～１．７×１０５,中度嗜盐菌在４６℃培养下,菌量达０～５．７×１０５,高温条件下菌量比中温多。所分离３０多株的纯菌株的菌落及个体形态具嗜盐菌特征,并产多种颜色色素。     

青岛泊子盐场放线菌多样性及其功能酶的筛选

采用平板涂布法利用3种培养基从青岛即墨市田横镇泊子盐场盐池底泥样中共分离纯化出15株放线菌,对分离菌株进行16S rRNA基因测序分析。发现这15株放线菌分属于链霉菌属(Streptomyces)、拟诺卡氏菌属(Nocardiopsis)和1个新属,其中Streptomyces属为优势菌属;菌株CXB832与Nocardiopsis arabia DSM 45083T和Haloactinospora albus DSM 45015T最接近,同源性分别为95.4%和94.9%,根据其表型和分子特征可以初步判定该菌株为放线菌新属。培养基及培养温度对盐池环境中放线菌的分离效果均有影响,利用淀粉酪素培养基在37℃分离的放线菌种类和数量较多。在15株放线菌中,分别有12株、3株、2株和1株放线菌产淀粉酶、酯酶、蛋白酶和纤维素酶。     

陇东地区油污土壤紫花苜蓿(Medicago sativa)和金鸡菊(Coreopsis lanceolata) ——植物修复效应比较

对陇东黄土高原地区油污土壤紫花苜蓿（Medicago sativa）和金鸡菊（Coreopsis lanceolata）植物修复效应进行分析比较。经5个月场地修复试验,相关植物生理、土壤理化及微生物指标分析结果表明：（1）金鸡菊和紫花苜蓿根区土壤总石油烃（Total Petroleum Hydrocarbons, TPH）去除率最高可达75.33%和69.88%;(2)7%和9%油污土壤对金鸡菊生理特性的抑制作用相对较小,且其根区土壤p H、脲酶和碱性磷酸酶活性显著高于紫花苜蓿（P<0.05）;(3)金鸡菊根区土壤中食烷菌属（Alcanivorax）、嗜盐单胞菌（Halomonas）和类诺卡氏菌属（Nocardioides）等相对丰度显著高于紫花苜蓿（P<0.05）;(4)油污浓度增加抑制了紫花苜蓿植物生理进而限制其根区TPH去除率,而土壤理化和微生物的共同作用使得金鸡菊根区土壤TPH去除率高于紫花苜蓿。     

油茶根腐病拮抗内生细菌的筛选及鉴定

为探讨防治油茶根腐病的高效拮抗菌的拮抗机制,采用研磨法从健康油茶根、茎、叶、果等组织中分离内生菌,通过平板对峙试验和抑菌谱检测试验筛选对油茶根腐病菌具有高效拮抗作用的内生菌,并进行形态观察、生理生化指标测定和16S rRNA序列分析.结果显示:从油茶中分离获得内生细菌75株,对油茶根腐病菌有拮抗作用的菌株18株,其中抑菌圈半径在5 mm以上的6株.这6株细菌的发酵液对油茶根腐病菌等6种供试病原真菌均有拮抗作用,其中菌株R6的抑菌效果最好,对各病原菌的抑菌圈半径均在10 mm以上.根据对R6的形态观察和生理生化指标测定,以及16S rRNA序列分析结果,初步鉴定其为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis.     

青海渔水河嗜盐耐盐放线菌的初步研究

对青海渔水河河水、底泥及河旁沙土进行盐分离子及pH值的测定,并通过不同培养基、盐种类和添加量的设计对渔水河中嗜盐耐盐放线菌资源进行了初步研究.结果表明:渔水河样品均偏碱性;河水的水溶性总盐及盐分离子含量均远远低于沙土,其中泥土的水溶性总盐含量最高,为158.67 g/kg;盐分阴离子中Cl-含量最高,阳离子中K+和Na+含量最高,所以推断样品盐分离子主要以NaCl和KCl的形式存在;分离共获得89株放线菌,其中底泥中分离到的放线菌最多,且改良淀粉酪素培养基的分离效果最好;通过嗜盐耐盐放线菌的筛选,得到8株嗜盐放线菌,其中极端嗜NaCl菌3株,极端嗜KCl菌7株,还有1株嗜K型放线菌.     

桑树青枯病与根际土壤肥力及微生物群落结构特征的研究

本文比较分析了桑树青枯病发病和健康植株根际土壤肥力以及微生物（细菌和真菌）群落结构特征差异，旨在挖掘和利用丰富微生物资源的有益功能，为构建桑树青枯病生物防治技术体系奠定基础。结果表明，桑树青枯病发病植株根际土壤中指示土壤肥力与健康状况的生物学性状指标β-葡糖苷酶和磷酸酶的活性显著降低，微生物生物量碳、磷显著下降；细菌门分类水平上，发病植株根际土壤中酸杆菌门、放线菌门和疣微菌门等优势细菌相对丰度降低，变形菌门、绿弯菌门、粘球菌门、厚壁菌门、拟杆菌门等优势细菌相对丰度增加；细菌属分类水平上，发病植株根际土壤富集了硝化螺菌属和放线菌属等特有细菌属，缺失了诸如链霉菌属等具有分泌抗生素功能的优势细菌属。真菌门分类水平上，发病植株根际土壤中子囊菌门和担子菌门真菌相对丰度增加，unclassified_k_Fungi和霉菌门真菌相对丰度降低；真菌属分类水平上，发病植株根际土壤富集了地霉菌属、腐质霉属和丝孢菌属等腐生真菌，缺失了被孢霉属、枝顶孢属和曲霉属等具有产抑菌化合物功能的优势真菌。研究表明，桑树青枯病与根际土壤β-葡糖苷酶、磷酸酶活性，微生物生物量碳、磷以及微生物群落结构都具有一定的相关性。链霉菌属细菌以及被孢霉属、枝顶孢属和曲霉属真菌有望作为生物防控青枯病的有效备选菌属。     

两株嗜铁细菌对几种病原菌的抑制作用及对小麦种子萌发的影响

采用滤纸片法测定嗜铁菌C-12、C-13对4种病原菌的抑制作用。结果表明,嗜铁菌C-12、C-13菌悬液对小麦赤霉病菌、水稻纹枯病菌、蒜薹炭疽病菌和小麦根腐病菌生长均具有不同程度的抑制作用,达到最大抑制率的时间长短各不相同。其中C-12对水稻纹枯病菌最大抑制率为36.7%,C-13对小麦赤霉病菌最大抑制率为34.6%。嗜铁菌C-12、C-13对小麦种子发芽率和胚芽长度无明显的影响,而对胚根生长有显著促进作用,两株菌株间差异显著。     

陕西地区花椒主要病害的生防菌筛选与鉴定

为开发针对陕西地区花椒主要病害的生防菌资源,对陕西省宝鸡市凤县花椒根际土壤微生物进行分离培养,并测定了其对花椒的4种靶标病原菌,即干腐病菌（Fusarium zanthoxyli）、黑胫病菌（Phytophthora citrophthora）、根腐病菌（F. solani）和落叶病菌（Marssonina sp.）的抑菌活性。结果显示：从花椒根际土壤中共分离到297个微生物菌株,其中105个为真菌,192个为细菌。通过初筛,获得了20个对3种及以上靶标病原菌均具有显著拮抗作用的细菌菌株,经形态学和16S rDNA 序列分析,将其中7个鉴定为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）,5个鉴定为解淀粉芽孢杆菌（B. amyloliquefaciens）,3个鉴定为伯克霍尔德氏菌属（Burkholderia）的不同种,2个鉴定为安徽黄杆菌（Flavobacterium anhuiense）,3个为其他种。经复筛和验证,发现贝莱斯芽孢杆菌P87的生防潜力最强,可以作为花椒病害生物防治的备选菌种。     

一株拮抗链霉菌SM3-7的鉴定及其对玉米茎基腐病的防效

为获得对玉米茎基腐病具有良好防效的拮抗菌株,从玉米根际土壤中分离以玉米茎基腐病拟轮枝镰孢菌Fusarium verticillioides为靶标菌的拮抗放线菌菌株。采用平板对峙法测定不同菌株的抑菌活性,用抑菌圈法筛选效果良好的拮抗菌株并进行种类鉴定、抑菌谱和防效测定。结果表明,从土壤中分离并筛选获得1株对拟轮枝镰孢菌具有明显抑制作用的菌株SM3-7。经形态学、生理生化特征和16S rDNA系统发育分析,将菌株SM3-7鉴定为核粒链霉菌Streptomyces sclerogranulatus。该菌株抑菌谱广,对玉米上的8种植物病原菌有良好的抑制作用,对拟轮枝镰孢菌抑菌圈直径可达（28.03±0.45mm）。盆栽防效结果表明,菌株SM3-7发酵液对抗病品种“良玉99”和感病品种“全玉1233”的玉米茎基腐病14d防效分别达77.28%和76.12%,21d防效达72.20%和71.89%。核粒链霉菌菌株SM3-7发酵液可有效防治玉米茎基腐病,为利用微生物防治玉米茎基腐病拟轮枝镰孢菌提供参考。     

拮抗链霉菌26B的筛选及其在不同含水量土壤中对白菜软腐病的防病效果

为挖掘防治白菜软腐病的生防菌,本研究采用牛津杯法从38株白菜根际放线菌中筛选到一株拮抗放线菌26B,通过形态学观察和16S rRNA基因序列分析将菌株26B初步鉴定为链霉菌。该菌除菌发酵滤液对供试的白菜软腐病菌Pectobacterium carotovorum subsp.brasiliensis BC1及3种马铃薯黑胫病菌均表现较高的抑菌活性,其中对白菜软腐病菌抑菌直径达到23.97 mm。萌发试验表明,白菜种子经26B除菌发酵滤液浸种后发芽势、发芽指数、根长及鲜重显著增加。采用浸根法测定菌株26B除菌发酵滤液对软腐病菌荧光标记菌株BC1-gfp在白菜根部定殖量的影响,浸根处理后48 h,白菜根上BC1-gfp的数量达到2.3×10⁹ CFU/g;未从26B除菌发酵滤液与BC1-gfp菌悬液混和处理（体积比10%）的白菜根上检测到病原菌。盆栽防病试验结果表明,在含水量为14%和20%的土壤中,菌株26B除菌发酵滤液对白菜软腐病的防效分别达96.0%和89.8%。上述结果表明,链霉菌26B是一株具有潜在开发应用价值的生防菌株,将链霉菌26B应用与土壤水分管理相结合可进一步提高其防病效果。     

烟草赤星病颉颃放线菌的分离与鉴定

从健康小麦植株中分离得到21株分离物,经对7种植物病原菌颉颃试验分析,获得1株对烟草赤星病菌等具有良好颉颃活性的菌株2-7。采用平板对峙法、生长速率法、盆栽试验等方法测定其抑菌及生防作用。结果显示,放线菌2-7发酵液对烟草赤星病菌抑制率为62.1%,盆栽防治率为48.73%。通过该菌的培养特征、生理生化指标、细胞壁以及16S rDNA基因序列分析(GenBank登录号:JN638883),将菌株2-7归属于放线菌中的玫瑰暗黄链霉菌(Streptomyces roseofulvus)。     

中华真地鳖抗菌物质的抑菌活性测定

以研磨法从中华真地鳖五龄若虫体内提取得到抗菌物质,分别采用比浊法和菌碟法测定了其对多种细菌和植物病原真菌的抑菌活性。结果表明,该抗菌物质对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白菜软腐菌和枯草芽孢杆菌等4种细菌生长均有一定的抑制作用,对数期延迟1~4h,菌的浓度、繁殖速度减缓。对7种植物病原真菌的抑菌试验表明,该抗菌物质对玉米茎基腐病菌、小麦根腐病菌、棉花枯萎病菌抑制效果较好,抑制率分别为50.0%、49.2%、45.2%;而对白菜黑斑病菌和玉米大斑病菌活性较差,抑制率仅为28.3%和24.5%。     

茶卡盐湖中耐盐抗真菌芽孢杆菌的分离和鉴定

本试验从茶卡盐湖水及淤泥中分离得到了51株细菌,通过16S rDNA及gyrB基因测序分析初步确定了菌株的分类地位,并测定了各菌株对苹果根腐病菌Fusarium spp.、辣椒疫霉病菌Phytophthora capsici等13株病原菌的抑菌谱及对NaCl的耐受性。共筛选获得13株对13种真菌病害均有抑菌作用的菌株,13株广谱生防菌株在NaCl浓度为10%的LB培养基上都能正常生长,其中菌株10和27在NaCl浓度为15%的LB培养基中的生长速度显著高于生防菌B916。盐湖环境为耐盐生防菌的筛选提供了丰富的资源,本研究获得的耐盐广谱生防菌对盐碱地真菌病害的防治提供了菌株资源。