3种根萤叶甲实时荧光PCR检测技术研究

根萤叶甲属(Diabrotica)被我国列为进境植物检疫性有害生物,该属中的玉米根萤叶甲(D.virgifera virgifera)、十一星根萤叶甲(D.undecimpunctata)、巴氏根萤叶甲(D.barberi)是北美的主要农业害虫。为了建立一种快速的分子鉴定方法以鉴定这3种根萤叶甲,本研究从田间采集的成虫样品中获得其部分mtDNA COI序列,与Gen Bank中的相关序列进行比对,设计筛选出3种根萤叶甲的特异性引物和TaqMan探针,并进行实时荧光PCR特异性和灵敏度检测。特异性检测结果表明,用目标种根萤叶甲DNA和其特异性探针和引物进行实时荧光PCR反应时,在30个循环反应内(Ct值30)有近S型扩增曲线出现,同时其他种均无荧光信号增长。此外,灵敏度结果显示,玉米根萤叶甲和巴氏根萤叶甲可检测的最小DNA模板浓度,即实时荧光PCR反应的灵敏度为0.1 ng/μL,十一星根萤叶甲为0.01 ng/μL。     

螺旋粉虱的分子检测方法

螺旋粉虱(Aleurodicus dispersus)是一种世界性重要入侵害虫。针对其体型微小难以进行准确、快速鉴别,以及对其卵、若虫及不完整标本更是难以鉴别的难题,本文研究了它的分子标记快速检测方法。利用螺旋粉虱的CO I基因序列设计1对特异性引物,其扩增片段为399 bp。结果表明:此引物只对螺旋粉虱CO I基因具有特异性扩增,而对其他粉虱类昆虫不具有特异性扩增条带;该引物不仅能快速准确检测成虫,而且对其他虫态(卵、若虫和拟蛹等)亦具有同样的检测能力;同时,此检测方法灵敏度高,对成虫的检测限达到1/4000头。该检测方法的建立,为有效防控螺旋粉虱在我国的进一步扩散蔓延和危害提供了技术保障。     

玉米根萤叶甲的抗逆性与防治研究进展

玉米根萤叶甲（Diabrotica virgifera virgifera Leconte）在美国是最重要的玉米害虫。它不仅对一些环戊二烯、有机磷类和氨基甲酸盐类化学杀虫剂产生了很强的抗药性,还对玉米 大豆轮作和调整播期等农业防治措施产生了适应性。此外,该虫有较广的适生性和扩展性。在过去的60年内,它从美国中西部传到了东北部沿海地区,并入侵欧洲定殖为害。新近采用的防治方法主要是种植转Bt基因抗虫玉米。表达经生物工程改良并导入的某个Bt毒素基因如Cry3Bb1、Cry34Ab1/Cry35Ab1或mCry3A的转基因抗虫玉米可毒杀取食的玉米根萤叶甲。但在转Bt基因玉米使用数年后,田间观察和温室筛选研究显示,玉米根萤叶甲具有对转基因玉米的潜在抗性。本文对该叶甲与防治有关的生物学特性、抗逆性及其机制、防治措施做了综述和讨论,旨在对该害虫的检疫防除有所帮助。     

首次发现一种双斑长跗萤叶甲寄生蜂——冈田长柄茧蜂

近年来,双斑长跗萤叶甲数量逐年上升,其分布广泛,寄主多样,危害严重,成为玉米、大豆等作物上的重要害虫。笔者于2022年7―9月在吉林公主岭田间采集双斑长跗萤叶甲成虫时,在其体内发现了一种寄生蜂。通过形态学及分子生物学鉴定为冈田长柄茧蜂Streblocera (Eutanycerus) okadai Watanabe（茧蜂科Braconidae长柄茧蜂属Streblocera亮角茧蜂亚属Eutanycerus）,基于CO I基因的分子进化树结果显示与长柄茧蜂属寄生蜂聚为一类。截至目前,国内外未有双斑长跗萤叶甲寄生性天敌报道。本研究填补了双斑长跗萤叶甲寄生蜂生防资源的空白,也为该害虫的生物防治提供了新策略。     

佛山口岸截获十一星根萤叶甲

2008年10月28日,佛山澜石口岸从泰国进境的一批龙眼集装箱中截获1头死的叶甲成虫、实验室初步鉴定其为十一星根萤叶甲(Diabrotica undecimpunctata),后经广东局技术中心复核,确认为我国禁止进境的根萤叶甲属害虫十一星根萤叶甲(英文名Spotted Cucumber Beetle).     

沙葱萤叶甲己糖激酶基因的克隆、相对表达量及RNA干扰效应

为揭示沙葱萤叶甲Galeruca daurica己糖激酶基因的功能，根据本课题组组装的沙葱萤叶甲转录组测序数据，应用cDNA末端快速扩增技术（rapid amplification of cDNA ends，RACE）克隆获得沙葱萤叶甲己糖激酶基因的cDNA全长序列，分析其编码蛋白的氨基酸序列与其它昆虫同源蛋白氨基酸序列之间的系统进化关系，采用实时荧光定量技术（real-time quantitative polymerasechain reaction，qPCR）测定不同发育阶段和不同温度下沙葱萤叶甲己糖激酶基因的相对表达量以及对RNA干扰的响应。结果表明，沙葱萤叶甲己糖激酶基因的cDNA全长为1 699 bp，开放阅读框长为1 479 bp，编码492个氨基酸；沙葱萤叶甲己糖激酶氨基酸序列与玉米根萤叶甲Diabrotica virgifera virgifera己糖激酶氨基酸序列一致性最高，为65.42%。己糖激酶基因在沙葱萤叶甲不同发育阶段均有表达，成虫滞育期间相对表达量维持在低水平，而滞育结束后相对表达量急剧上升达最高值。在0~40℃范围内，随着温度增加，己糖激酶基因在沙葱萤叶甲成虫体内相对表达量呈先升高后下降的趋势。采用RNA干扰技术沉默沙葱萤叶甲成虫己糖激酶基因2 d后，与对照相比，己糖激酶基因相对表达量下调90%以上，4 d后仍下调40%以上；该基因干扰后12 d内，沙葱萤叶甲成虫存活率下降了25%以上。表明己糖激酶基因可能在沙葱萤叶甲生长发育和滞育过程中起着重要作用。     

螺旋粉虱SCAR标记的建立与应用

螺旋粉虱Aleurodicus dispersus Russell是一种严重威胁果树、蔬菜和园林植物生产的入侵性害虫。由于该粉虱的卵和初孵若虫体型微小,与其它粉虱类害虫形态相似,且易于携带传播,难以快速准确鉴别,本研究采用特征序列扩增区域(SCAR)标记法,通过对目的片段的克隆与测序,设计螺旋粉虱特征片段扩增引物,并对该引物的种特异性和灵敏性进行检验。结果显示,利用SCAR标记法获得了螺旋粉虱特异性片段(632bp,GenBank登录号为HM240855),根据此片段的碱基序列设计1对螺旋粉虱特异性引物,其扩增片段大小为307bp;该对引物只对螺旋粉虱具有扩增能力,对近缘种、属粉虱不具有扩增效果。该引物不仅对成虫具有良好的扩增效能,对单粒卵、1~3龄若虫和拟蛹等亦具有同样的扩增能力,其最低检出阈值为1/6400头成虫。从而表明,该SCAR标记技术完全可用于螺旋粉虱的鉴定识别及其检测和监测。     

基于@RISK软件评估玉米根萤叶甲对我国玉米产业造成的潜在经济损失

为评估玉米根萤叶甲 Diabrotica virgifera virgifera对我国玉米产业的潜在经济损失，在收集整理玉米产量、种植面积、市场价格以及玉米根萤叶甲为害和防控相关数据的基础上，结合其在我国的潜在地理分布，构建不防控和防控2种场景下玉米根萤叶甲的潜在经济损失随机模型，并利用@RISK软件预测其可能给我国玉米产业带来的潜在经济损失。结果显示，在不防控和防控场景下，玉米根萤叶甲对我国玉米产业造成的潜在经济损失总量分别为187.35亿~273.65亿元（90%置信区间）和47.31亿~102.65亿元（90%置信区间）；而在投入防控措施后，可挽回的潜在经济损失介于104.87亿~205.37亿元（90%置信区间）之间。表明玉米根萤叶甲可对我国玉米产业造成严重的潜在经济损失，采取积极的防控措施严防该害虫入侵我国是十分必要的。     

双斑长跗萤叶甲为害玉米花丝对产量的影响

玉米吐丝初期, 通过人工接虫模拟不同密度的双斑长跗萤叶甲成虫为害玉米花丝, 研究其对产量损失的影响, 收获时进行各项产量性状指标测定。研究结果表明:玉米吐丝初期每果穗接入1～40头双斑长跗萤叶甲成虫, 玉米平均产量损失率在3.8%～28.5%; 接入1头成虫时产量与对照无显著差异, 接入5头以上成虫时显著减产, 平均产量损失率达12.3%～28.5%; 双斑长跗萤叶甲成虫数量与玉米产量损失率的关系符合一次函数y=0.64x＋5.17(R2=0.65, P<0.001); 双斑长跗萤叶甲成虫取食为害玉米花丝, 影响玉米授粉和结实, 随着成虫数量增加, 果穗的穗粒数和百粒重逐渐降低, 产量损失逐渐增大。研究双斑长跗萤叶甲成虫为害玉米花丝对产量的影响对确定防治指标、防治适期及综合防控具有重要的应用价值。     

北京地区褐足角胸叶甲发生严重

２００１年７月北京市顺义、延庆等区县在玉米田发现一种以前未发生过的新害虫，经中国科学院动物研究所专家鉴定为褐足角胸叶甲ＢａｓｉｌｅｐｔａｆｕｌｖｉｐｅｓＭｏｔｓｃｈｕｌｓｋｙ。１田间为害状褐足角胸叶甲以成虫啃食玉米叶片，从玉米苗期至成株期均可受害，但以玉米抽雄前受害最重。据观察，成虫怕光，喜欢集中在心叶内为害，啃食叶肉造成许多小孔，有时被啃食的小孔连接起来，使叶片横向被切断，或叶片呈破碎状。玉米苗期受害，褐足角胸叶甲在心叶内为害，使心叶卷缩在一起，呈牛尾状，生长受到严重抑制。据顺义区植保…     

双斑长跗萤叶甲发生规律观察

双斑长跗萤叶甲[Monolepta hieroglyphica(Motschulsky)]俗称双斑萤叶甲。原来寄主为豆类、苜蓿、玉米等作物,2002年在玉米制种地附近的棉田里小面积为害棉花,2004年以后成为博乐地区棉田的主要害虫。为了更好地控制其为害,2004￣2005年对该虫的为害特点和发生规律在田间进行了饲养及田间观察。1为害特点双斑长跗萤叶甲以成虫在白天为害棉花叶片,花蕾苞叶、花柱,夜间躲在棉叶下休息。一般在5月中旬棉花苗期出现,开始出现成虫取食棉花叶片表层叶肉组织,5月下旬棉花蕾期是双斑长跗萤叶甲为害最严重时期,7月中旬花期为害减轻,因气温高、棉株叶…     

十字花科蔬菜黑斑病菌的PCR鉴定

 在对十字花科蔬菜黑斑病菌(Alternaria sp.)3个种及相近种的5.8SrDNA和其侧翼ITS区进行测序的基础上,分别设计合成了鉴定白菜黑斑病菌3个种的特异性引物。PCR扩增结果表明:Abre1和Abre2引物对能特异性扩增芸苔链格孢(A.brassicae)371bp的片段,Abra1和Abra2引物对能特异性扩增甘蓝链格孢(A.brassicicola)457bp的片段,Ajap1和Ajap2引物对能特异性扩增萝卜链格孢(A.japonica)411bp的片段,而且其它近源种未扩增出目标片段,说明这3个引物对可以作为十字花科蔬菜黑斑病菌3个种快速检测鉴定的分子特征标记。     

新疆棉区双斑长跗萤叶甲生活习性及消长动态调查研究

双斑长跗萤叶甲是新疆北疆棉区近几年来为害棉花的一类新害虫.通过2004～2007年对卵、幼虫、蛹取土样分离调查,对成虫定田块系统调查,基本明确了该虫主要以卵在棉田0～15 cm土层越冬,幼虫主要取食棉田及其周围棉花、玉米、杂草等的根系,完成其生长发育.成虫为害棉花,6月底、7月上旬为发生为害高峰.双斑长附萤叶甲喜高温、干旱的习性与本区近年来棉花大面积集约化种植、节水灌溉的日益普及是该虫近年发生加重的重要原因.     

种衣剂对玉米田双斑长跗萤叶甲的防效评价

为评价种衣剂防治玉米田双斑长跗萤叶甲的可行性,通过选用内吸性强、持效期长的种衣剂,设置常规剂量对玉米种子进行包衣处理,采取田间罩网小区试验,明确种衣剂对双斑长跗萤叶甲的防效及对玉米出苗、生长的安全性。结果表明,30%噻虫嗪FS、10%氟虫腈FSC、38%噻虫胺FSC、40%噻虫嗪·溴氰虫酰胺FS、30%噻虫嗪·氟虫腈FSC、30%噻虫胺·氟虫腈FSC、20%噻虫胺·氟啶虫酰胺FSC等7种种衣剂对玉米出苗、生长均安全;38%噻虫胺FSC有效成分用量7.6 g/kg种子处理对双斑长跗萤叶甲的防治效果为70.6%～78.5%,防效最好,显著高于除30%噻虫胺·氟虫腈FSC 7.5 g/kg处理外的其他种衣剂处理(P<0.05),并且可使双斑长跗萤叶甲成虫羽化出土始现期、出土高峰期推迟5～10 d,可以使成虫高峰期避开玉米吐丝期。玉米田双斑长跗萤叶甲防控前移推荐使用38%噻虫胺FSC,有效成分剂量为7.6 g/kg种子。     

荆州市黄曲条跳甲偏重发生原因及综合防治技术

黄曲条跳甲属鞘翅目、叶甲科,是十字花科蔬菜上的主要害虫.成虫取食叶片出现密集的椭圆形小孔,被害叶片老化而带苦味.     

玉米黄尾球跳甲的发生特点与防治技术

<正>黄尾球跳甲(Sphaeroderma apicalisbaly)属鞘翅目、叶甲科、球跳甲属。2002年远安县发生后,华中农业大学进行了鉴定。近年来,玉米黄尾球跳甲在河口乡发生呈逐年上升趋势。2016年受害面积35hm~2,2017年受害面积达68hm~2,其中50.7 hm2损失达到60%以上,对玉米生产影响极大。1寄主范围成虫对禾本科植物均有取食现象,但是不同的种间存在着差异。目前在远安县尚未发现为害除玉米外的其它作物,在自然条件下,成虫能     

广西萤叶甲种类补遗

萤叶甲又称守瓜,是重要的农林害虫。它属于鞘翅目叶甲科萤叶甲亚科,是叶甲科中最大的一个亚科。萤叶甲全世界目前已知有6000余种,我国有记载的已达894种,其中广西壮族自治区已知114种。本文就中国科学院动物研究所昆虫标本馆及广西植物研究所昆虫标本室所收藏的及文献记载的有关广西萤叶甲种类进行整理,《广西昆虫名录》记载的52种,尚有62种未发表,现编写成名录,种类的分布或采集地,部分种类有寄主,以供参考。　　1、曲线萤叶甲Menippuscervinus(Hope,1831)。分布:崇左、宾阳、龙州。　　2、中华丽萤叶甲Clfienasinensis(Fairmaire,1888),…     

蠋敌对双斑长跗萤叶甲成虫的捕食功能研究

在室内研究了捕食性天敌蠋敌对双斑长跗萤叶甲成虫的捕食功能反应。结果表明,蠋敌对双斑长跗萤叶甲成虫的捕食功能符合HollingⅡ模型,日最大捕食量为20.4头双斑长跗萤叶甲成虫,捕食一头双斑长跗萤叶甲成虫需要2.94min,功能系数为0.5169;蠋敌成虫个体间相互干扰对捕食效应的影响可以用E=0.4046*P-0.3914模拟;蠋敌若虫对自身密度的功能反应可以用A=0.3034p-0.5357模拟。经卡方检验,其理论值与实测值无统计学差异。     

基于COI基因的榆绿毛萤叶甲DNA条形码研究

经调查发现榆绿毛萤叶甲(Pyrrhalta aenescens)在喀什市大量发生,并能在喀什越冬,给当地榆树造成了严重危害。笔者对榆绿毛萤叶甲成虫进行了形态学鉴定,并进一步利用分子生物学手段,对榆绿毛萤叶甲不同发育阶段(卵、幼虫和成虫)虫态提取DNA并进行PCR扩增及测序,获得了该虫不同发育阶段的线粒体细胞色素氧化酶亚基I(COI)的基因序列,相似性高达99%;再利用K2P模型构建NJ系统进化树,确定了遗传关系。     

基于MaxEnt模型预测气候变化下玉米根萤叶甲在中国的潜在地理分布

为评估不同气候条件下玉米根萤叶甲Diabrotica virgifera virgifera在我国的潜在地理分布情况及适生区的空间格局变化趋势,通过筛选影响该虫分布的关键环境变量并基于其在全球的分布数据,运用MaxEnt模型和ArcGIS软件预测其在历史和未来气候情景下的潜在地理分布范围和适生区空间格局变化。结果表明,所构建MaxEnt模型的受试者工作特征 （receiver operating characteristic, ROC）曲线下面积（area under curve, AUC）平均为0.960,说明模型预测结果为优秀,具有较高的可信度。关键气候变量中最冷月最低温对玉米根萤叶甲的潜在地理分布具有十分重要的影响,累积贡献率为44.5%。历史气候条件下,玉米根萤叶甲的总适生区面积占我国陆地总面积的23.78%,高适生区主要分布于我国河南、湖北、陕西、甘肃、重庆、四川和云南等省市。未来气候情景下,玉米根萤叶甲在我国的总适生区面积略有减少,整体上呈现出南部收缩、北部扩张的趋势,原中南部的中、高适生区逐步转变为低适生区或非适生区。玉米根萤叶甲在我国的适生区较为广泛,适生范围涵盖多个重要玉米产区,对玉米安全生产威胁较大,应给予足够的重视,严防该虫传入我国。