油菜病毒病种子带病毒的初步研究

 感染芜菁花叶型病毒和烟草花叶型病毒的油菜病株种子的种皮内带有病毒,种胚自未成熟到成熟始终不带病毒。
烟草花叶型病毒在种皮内的存活期限长于芜菁花叶型病毒。烟草花叶型毒株61-16号,在"胜利"油菜病株种子的种皮内可以存活26个月以上;芜菁花叶型病毒存活期最长的一个毒株不超过25个月,最短的不到4个月。     

在玉米种子中检测高粱霜指霉的技术

引言高梁霜指霉 Peronosclerospora sorghi在玉米和高粱上引起的霜霉病是热带和亚热带地区的一种重要病害。在系统感染的高粱植株的颖壳内和种皮中都发现了高粱霜指霉的卵孢子,在种子的胚乳中观察到了菌丝段。在玉米种子的种皮、胚乳和胚中都检查到了高粱霜指霉的卵孢子和菌     

小麦线条花叶病毒检测及病毒在燕麦种子内的分布研究

小麦线条花叶病毒(wheat streak mosaic virus,WSMV)是禾本科粮食作物上重要的检疫性有害生物,能引起严重花叶、矮化和坏死。本文报道从美国进境的种用燕麦种子中检出WSMV,并研究了该病毒在种子内部的分布。挑选表面带有花纹的种子,利用两对不同的引物进行RT-PCR检测,结果均从样品中扩增出特异性条带。PCR产物测序分析结果表明为WSMV多聚蛋白部分序列。通过对幼苗及种子不同部位的检测,发现WSMV主要存在于种子稃皮及种皮内,而胚及胚乳中则未检出病毒,这一结果有助于提高WSMV的检出效率。     

酶联免疫吸附法(ELISA)检测豆类种传病毒的研究

本文介绍使用微量板酶联免疫吸附法(ELISA)检测TMV(杆状)、SMV(线状)、CMV(球状)、AMV(杆菌状多粒体)四种不同形态、不同分类组群的病毒。此法非常灵敏,能够检测病毒提纯液的最低浓度为7.6～10亳微克/毫升,也能检出稀释1563～10240倍病叶粗澄清液中的病毒,灵敏度比琼脂双扩散法高1000倍以上。 ELISA可以直接检出单粒种子中的病毒,而且可以分别检出单粒种子不同部位如大豆的种皮、种胚、胚乳及胚根中的病毒存在。该法适用于检测大量标样,对植物检疫来说,这是一个很好的方法。     

玉米疯顶病传播途径探讨

利用染色技术研究种子以及在病田中病残体作为玉米疯顶病初侵染源的可能性。结果表明 ,在病田采集的病穗籽粒、病株上基本正常穗籽粒和外观正常植株所结籽粒的种皮和胚乳中均检测到菌丝体 ,并且带菌率较高。病田种植品种的原始种子同样具有极高的带菌率。在适宜条件下 ,种植在病田的健康种子能够被病残体或土壤中的疯顶病卵孢子侵染 ,产生典型症状的病株。研究初步证明 ,携带病原菌的种子是玉米疯顶病远程传播的重要原因 ,植株病残体和土壤中病原菌休眠体的存在是病害持续发生的根本原因。     

谷子胡麻叶斑病的种子带菌及其检验

谷子胡麻叶斑病种子带菌可导致严重烂种、烂芽和幼苗叶枯,传播效能较高,谷子的种皮、胚乳和种胚等部位均可带菌。多数带菌种胚已经坏死,丧失了发芽能力,因而用药剂或热力处理种子的方法不能防止烂种,需进行播前种子带菌检验,确保种子的播种质量。比较了吸水纸培养法、琼脂基培养法和土壤种植法等3种种子带菌检验方法,以吸水纸法准确可靠,经济而快速,可望做为谷子健康检验的标准方法采用。     

检测豆类种传病毒的一种简易方法

侵染豆科植物的种传病毒大多由种胚或了叶带毒,翌年随种子萌发进入幼苗体内,造成感染,在有条件的地方可用ELISA,RIA法等直接检测种胚或子叶带毒情况。但在缺乏血清,不具备必要设备的地方,不妨一试本方法。 用灭菌水浸泡5-10粒种子,24小时后切取小块子叶,加磷酸缓冲液研磨捣碎,用常规摩擦接种指示植物。剩下大部分带胚种子     

云南怒江番茄种植新区番茄病毒检测及病毒种传特性

病毒病对番茄生产造成严重危害, 近年来在番茄种植新区发生严重, 疑似为种子带毒传播。本研究通过对云南省怒江州番茄种植新区的番茄病毒病样品采用RNA-seq高通量测序, RT-PCR验证的方法检测病毒种类;对番茄病果种子进行超薄切片制样透射电子显微镜观察, 将病果种子播种后对种苗进行RT-PCR带毒检测。结果表明, RNA-seq高通量测序及RT-PCR检测到的病毒有番茄环纹斑点病毒(tomato zonate spot orthotospovirus, TZSV)、番茄黄斑驳相关病毒(tomato yellow mottle-associated virus, TYMaV)、辣椒脉斑驳病毒(chili veinal mottle virus, ChiVMV)、南方番茄病毒(southern tomato virus, STV)。透射电镜观察到种胚细胞及胚乳细胞中分布典型的正番茄斑萎病毒属Orthotospovirus病毒粒体。病果种子播种28 d后的种苗具有病毒病症状, 通过RT-PCR检出TZSV、ChiVMV、STV, 检出率分别为60%、100%、80%。上述研究结果为TZSV通过种子传播提供了有利的证据, 并为源头防控番茄病毒病提供了依据。     

南京地区豇豆蚜传花叶病毒的鉴定

 1982年5月,从南京郊区豇豆花叶病植株上分离到1株病毒分离物C-1,接种试验的结果证明,它可以侵染12种豆科和藜科植物。它在豇豆上引起系统花叶、叶片卷曲、明脉和畸形等症状。它在苋色藜、昆诺藜和蚕豆上表现为局部病斑。体外抗性测定,失毒温度55~60℃,稀释限点10^-3~10^-4,体外存活期1~2天。病毒极易摩擦接种传病。桃蚜、棉蚜和豆蚜都能传染这种病毒。人工接种的豇豆病株,在花器的各个部分、幼嫩的豆荚组织和末成熟的种子内都带有病毒。病株上采收的种子传毒率可达8.1%。病毒存在于种子的胚和子叶内,种皮内没有测到病毒。病毒粒体线条状,长700~750纤米。病株叶片表皮细胞内有纺锤状的内含体。免疫电镜和SDS~双扩散法测定,病毒分离物C-1与豇豆蚜传花叶病毒(CAMV)的抗血清呈阳性反应。根据以上这些性状,病毒分离物C-1可鉴定为属于马铃薯Y病毒组中的豇豆蚜传花叶病毒。用微量沉淀法测定,病毒粗提纯液制备的抗血清的效价为1:512。SDS-双扩散法测定,南京地区严重发生的豇豆花叶病中,85~86%是由豇豆蚜传花叶病毒引起的。从福建、山东、辽宁等省采集的样本中,也证实这种病毒在豇豆上普遍发生。     

枸头橙种子中柑桔衰退-茎陷点病毒的鉴定

 采用双抗体夹心-酶联免疫吸附测定试验(DAS-ELISA)对枸头橙种子中柑桔衰退-茎陷点病毒的带毒情况进行了鉴定。结果表明,从严重感染茎陷点病的枸头橙罹病树采集的种子可检测到柑桔衰退病毒(CTV)。种子带毒量以内种皮为较高,剥皮种子次之,外种皮呈阴性。种子在4℃冰箱内贮藏1~2年后仍带毒,但带毒量有所下降。对带毒种子繁殖的实生苗及嫁接在实生苗上的墨西哥来檬的检测结果,有部分呈阳性,种植在防虫隔离网室内的100余株2年生枸头橙实生苗,用无毒珠心系的墨西哥来檬芽嫁接进行生物鉴定,经2年观察未发现症状     

我国12省市玉米矮花叶病病原鉴定及病毒致病性测定

 利用甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus,SCMV)单克隆抗体细胞株2B5腹水和SCMV、玉米矮花叶病毒(Maize dwarf mosaic virus,MDMV)、高粱花叶病毒(Sorghum mosaic virus,SrMV)和约翰逊草花叶病毒(Johnsongrass mosaic virus,JGMV)的特异性引物对我国浙江、江苏、上海、山东、河南、河北、北京、山西、陕西、甘肃、四川、云南12省市15个地点的176株玉米矮花叶病病样分别进行了间接ELISA和免疫捕获反转录PCR (IC-RT-PCR)检测,结果表明这些病样均含有SCMV,而无MDMV、SrMV或JGMV存在,表明上述12省市的玉米矮花叶病病原为SCMV。进一步对甘肃(GS)、四川(SC)、云南(YN)3个SCMV分离物的近全长CP基因进行了序列测定,并测定了浙江分离物(ZJ)和甘肃分离物(GS)在13个玉米品种上的致病性。     

甘蔗花叶病毒田间杂草寄主鉴定

Sugarcane mosaic virus (SCMV) is the prevalent virus causing maize dwarf mosaic in China. Here we collected 90 weed samples belonging to 15 species, among which Setaria viridis, Echinochloa crusgalli and Digitaria sanguinalis showed distinct mosaic symptom. The maize in-bred line B73 and cultivar Denghai 605 plants inoculated with extracts of S. viridis, E. crusgalli and D. sanguinalis showed distinct mosaic symptom in the systemically infected leaves at 10 days post-inoculation. ELISA results showed that samples of S. viridis, E. crusgalli and D. sanguinalis were positive to antibody against SCMV CP. The duplex-PCR showed that samples of S. viridis, E. crusgalli and D. sanguinalis were infected by SCMV which was not belonging to group IV. The SCMV ORF of 3 weed and one maize samples shared nucleotide and amino acid sequences identities of 93.1%-99.7%. Gene-flow analysis showed that the SCMV isolates from three weed samples had frequent gene flow with the SCMV isolates from maize in Shandong Province. Phylogenetic analysis showed that all the four SCMV isolates were clustered into group I. These results indicate that S. viridis, E. crusgalli and D. sanguinalis are weed reservoir of SCMV. These results provide theoretical guidance for the effective control of SCMV.     

甘蔗花叶病毒田间杂草寄主鉴定

正玉米矮花叶病1963年在美国俄亥俄州首次报道[1],我国1968年在河南省首次报道。甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus,SCMV)是引起我国玉米矮花叶病的主要病原[2, 3]。根据基因组序列的系统发育分析,SCMV分为4个组,其中第I组分布最广,第IV组是新发现的一个强毒株系,近年来的发生呈上升趋势[4, 5]。SCMV属于马铃薯Y病毒属(Potyvirus),粒体为弯曲线状。其由蚜虫非持久性传播[6],能侵     

甘蔗花叶病毒第IV组分离物RT-PCR检测体系的建立及应用

 甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus,SCMV)是引起我国玉米矮化叶病的主要病毒。根据其基因组序列,SCMV可以分为4个组,其中第IV组分离物属于新出现的强毒株系。为了快速检测SCMV尤其是IV组分离物的发生情况,我们针对SCMV I-IV组及IV组分离物设计了6对引物,从中筛选出特异性最强的2对引物(I-IV-2F/I-IV-2R和IV-1F/IV-1R),进行PCR体系的优化。优化后的PCR体系为:退火温度51℃,dNTP终浓度为0.1 mM,引物终浓度为0.20 μM,TaqDNA聚合酶终浓度为0.015 U·μL^-1。利用该体系, 引物对I-IV-2F/I-IV-2R和IV-1F/IV-1R均能够从50 ng感病叶片或0.05 ng病毒RNA中检测出SCMV。通过优化两对引物浓度比例建立了能同时检测SCMV所有分离物及第四组分离物的双重PCR体系。利用该体系从山东、河南及云南均检测出SCMV第IV组分离物的发生。本研究为SCMV尤其是SCMV第IV组分离物的快速检测提供了技术支持。     

甘蔗花叶病毒2个山东分离物的全基因组序列分析

甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus,SCMV)是引起我国玉米矮花叶病的主要病毒。本文从山东泰安采集到2个表现矮花叶症状玉米样品的分离物(命名为DWK1和DWK2),通过RT-PCR扩增全基因组片段并测定了其序列(GenBank登录号分别为KU171814和KU171815)。序列分析结果表明,DWK1和DWK2基因组全长分别为9 575和9 576个核苷酸(nucleotides,nt),开放阅读框均为9 192 nt,编码3 063个氨基酸的多聚蛋白。DWK1和DWK2的全基因组核苷酸一致率为81.7%,DWK1与山西分离物SX(AY569692)的核苷酸一致率最高,为90.9%;DWK2与河北分离物BD8(JN021933)核苷酸一致率最高,达99.4%。二者在系统进化树中分别被聚类到Ⅰ组和Ⅳ组。重组分析发现,DWK1是HN(AF494510)、Guangdong(AJ310105)和BD8 3个分离物的重组体。选择压力分析表明,SCMV 11个蛋白的dN/dS值都小于1,均处于负选择,但在P1、P3和CP中存在正选择位点。本研究结果可为甘蔗花叶病毒株系的监测及防控提供理论指导。     

Quantitative trait Loci mapping of resistance to sugarcane mosaic virus in maize

ABSTRACT Sugarcane mosaic virus (SCMV) is an important virus disease of maize (Zea mays) in Europe. In this study, we mapped and characterized quantitative trait loci (QTL) affecting resistance to SCMV in a maize population consisting of 219 F(3) or immortalized F(2) families from the cross of two European maize inbreds, D32 (resistant) x D145 (susceptible). Resistance was evaluated in replicated field trials across two environments under artificial inoculation. The method of composite interval mapping was employed for QTL detection with a linkage map based on 87 restriction fragment length polymorphism and 7 mapped microsatellite markers. Genotypic and genotype x environment interaction variances for SCMV resistance were highly significant in the population. Heritabilities ranged from 0.77 to 0.94 for disease scores recorded on seven consecutive dates. Five QTL for SCMV resistance were identified on chromosomes 1, 3, 5, 6, and 10 in the joint analyses. Two major QTL on chromosomes 3 and 6 were detected consistently in both environments. Significant epistatic effects were found among some of these QTL. A simultaneous fit with all QTL in the joint analyses explained between 70 and 77% of the phenotypic variance observed at various stages of plant development. Resistance to SCMV was correlated with plant height and days to anthesis.     

云南美人蕉病毒病病原鉴定

In this study,the causal agents were identified from Canna indica viral diseased plants in Yunnan Province.The diseased C.indica plants mainly exhibited the symptoms like veinal chlorosis and yellowing,streak mosaic or interveinal chlorosis,while older leaves always showed veinal necrosis as well as chlorosis.Viral pathogens were detected by RT-PCR/PCR in 24 diseased C.indica samples collected from Kunming and Yuxi City in Yunnan Province.The results indicated that the main C.indica-infecting viruses were canna yellow mottle virus (CaYMV),bean yellow mosaic virus (BYMV),sugarcane mosaic virus (SCMV).CaYMV showed the highest detection rate of 87.5 %,whereas,the BYMV had the lowest rate of 16.7% in the 24 samples.Co-infections of CaYMV+SCMV,CaYMV+BYMV and CaYMV+SCMV+BYMV were also detected in the diseased samples.However,cucumber mosaic virus (CMV),tobamovirus,luteovirus,orthotospovirus,begomovirus and umbravirus were not detected in these samples.This is the first report of CaYMV and SCMV infecting C.indica in Yunnan province.     

云南省玉溪市玉米致死性坏死病毒原的分子鉴定

玉米致死性坏死病是由玉米褪绿斑驳病毒(Maize chlorotic mottle virus,MCMV)和一种或多种马铃薯Y病毒科病毒复合侵染引起的。2014年1月在对云南省玉溪市玉米病毒病害的调查中发现了一些表现严重花叶、矮化叶片甚至整个植株坏死症状的玉米。对采集样品进行RT-PCR检测,所有样品中都同时检测到了MCMV和甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus,SCMV),在一个样品中同时检测到了MCMV、SCMV和南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus)。     

福建永安市辣椒丛枝病植原体的分子检测及鉴定

永安地区发病辣椒植株表现小叶、黄化、丛枝、簇芽等症状。利用植原体16SrDNA基因的通用引物R16mF2/R16mR2和R16F2n/R16R2,对发病辣椒植株总DNA进行巢式PCR检测,获得约1.2kb的特异性DNA片段。经测序并在GenBank数据库进行比对分析,共获得4条植原体特定的16SrDNA基因序列(CHY-C4-1、CHYY1-1、CHY-Y7-1、CHY-G1-1)。将测得的4条序列与已报道的植原体序列进行同源性比对,并构建系统进化树,结果显示获得的4条植原体序列均聚类到16SrI组,其中CHY-Y1-1、CHY-Y7-1、CHY-G1-1与16SrI-B亚组植原体聚类到同一支,而CHY-C4-1与已报道的16SrI组内的6个亚组均未聚类到一支,因此建议将CHY-C4-1命名为新的亚组。利用iPhyClassifier在线分析软件对获得的4条植原体序列进行虚拟RFLP分析,结果与进化树获得的结果一致。