李属坏死环斑病毒新疆分离物运动蛋白基因片段的克隆与序列分析

为进一步揭示李属坏死环斑病毒(Prunus necrotic ringspot virus,PNRSV)新疆巴旦木分离物的分子特征、遗传变异及其与宿主之间的相互关系,采用RT-PCR方法扩增并克隆了4个PNRSV新疆巴旦木分离物运动蛋白(move protein,MP)基因片段,并进行了测序及序列同源性分析。结果表明,4个新疆巴旦木PNRSV分离物MP基因片段分别为259、258、254、260 bp;其核苷酸和氨基酸序列与已报道的PNRSV分离物的同源性分别为72.7%~91.7%和75.6%~92.9%,表现出明显差异,其中与美国分离物CH9同源性最高,分别达88.8%~91.7%和82.6%~92.9%;而与同属03亚组的苹果花叶病毒(Apple mosaic virus,Ap MV)同源性较低,仅为51.2%~58.1%和52.3%~61.9%;新疆PNRSV各分离株之间MP基因核苷酸序列同源性较高。系统发育树显示,4个新疆巴旦木PNRSV分离物与Ⅰ组代表毒株PV32的核苷酸序列同源性达88.4%~91.3%,并与Ⅰ组分离物聚集成簇,表明PNRSV新疆巴旦木分离物属于引起严重症状的Ⅰ组株系,且Ⅰ组中各分离物之间表现出一定的寄主相关性,而Ⅱ组和Ⅲ组中各分离物之间未表现出明显的寄主相关性。     

基于mtCOⅠ基因的三种稻飞虱DNA条形码构建及应用

为构建白背飞虱、褐飞虱、灰飞虱3种稻飞虱DNA条形码,准确鉴定各虫态稻飞虱种类,随机选取35个供试虫体提取全基因组DNA,PCR扩增其中线粒体细胞色素氧化酶Ⅰ（mtCOⅠ）基因,分析所获得的基因组成特点,计算P距离值,构建系统发育树,并对稻飞虱若虫、卵进行种类鉴定。PCR扩增获得了长度为706 bp的稻飞虱mtCOⅠ基因片段,碱基组成特点种内、种间不同;3种稻飞虱的种间P距离值为25.53%~34.21%,种内为0~0.51%,种间值明显高于种内;系统发育树显示同种个体聚集在同一分支;同种卵、若虫的mtCOⅠ基因与已获得的成虫基因序列同源性最高值为100%,P距离值为0。研究表明,3种稻飞虱的DNA条形码可基于mtCOⅠ基因构建,且可准确鉴定各虫态。     

侵染百合的黄瓜花叶病毒亚组Ⅱ分离物cp基因克隆和序列分析

 从云南大理的东方型百合上得到黄瓜花叶病毒分离物(CMV-DL), ELISA检测初步确定为CMV亚组Ⅱ分离物, 设计并合成CMV亚组Ⅱ的特异引物, RT-PCR扩增得到1条约800 nt的特异片段, 经克隆及序列测定, 该片段长828 nt, 包含的外壳蛋白(CP)基因由657 nt组成。将该分离物的cp基因与其它14个CMV分离物进行同源性比较, 在核苷酸水平上与CMV亚组I和亚组Ⅱ的同源性分别为76.8%~78.1%和98.6%~99.2%;在氨基酸水平上与CMV亚组I和亚组Ⅱ的同源性分别为82.0%~84.3%和95.9%~100.0%。结果表明CMV-DL为CMV亚组Ⅱ成员。     

河南省地黄病毒病初步鉴定

 利用血清学、RT-PCR并结合核苷酸序列测定等方法,对河南省地黄病毒病进行了初步鉴定。结果表明,烟草花叶病毒(TMV)为侵染地黄的主要病毒;对TMV地黄分离物(TMV-RH) CP基因的序列分析结果表明,TMV-RH与TMV-U1株系CP基因的核苷酸同源性为86.5%,氨基酸同源性为94.3%;与已发表的TMV其它株系CP基因的核苷酸同源性在76.3%~88.5%之间,氨基酸同源性在79.3%~95.0%之间,同源性较低。根据不同株系CP的氨基酸序列进化树分析,推测该分离物可能为TMV的一个新株系。     

台湾乳白蚁4个地理种群遗传分化的研究

采用线粒体COⅡ基因为分子标记对中国南部4个台湾乳白蚁地理种群的遗传分化进行了初步研究。结果显示,4个地理种群共有9个多态位点和8种单倍型;种群间遗传分化统计量F_st与地理距离无显著相关。探讨了台湾乳白蚁种群分化的影响因素和相应的防治对策。     

二氧化碳对台湾乳白蚁的引诱作用

台湾乳白蚁Coptotermes formosanus Shiraki是华南地区农林树木、木质构件的重要钻蛀性害虫。本文测定分析了二氧化碳(CO2)对台湾乳白蚁的引诱效果。分析结果显示,二氧化碳对台湾乳白蚁具有显著的引诱活性,其中浓度1.5%的二氧化碳对台湾乳白蚁的引诱作用较强,但引诱作用随着二氧化碳浓度的升高而减小。为了便于应用,进一步利用发酵产生的二氧化碳分析,结果显示二氧化碳较常规引诱物松木具有更显著的引诱效果。本研究将为台湾乳白蚁新型引诱剂开发提供参考,有助于提高台湾乳白蚁饵剂的防治效果。     

小麦黄色花叶病毒不同分离物外壳蛋白(CP)基因序列的比较分析

 核苷酸序列分析结果表明,小麦黄色花叶病毒(W YMV)不同分离物的外壳蛋白基因存在一定的差异。邓州分离物CP基因在其31~33nt处均缺失了3个核苷酸,其余分离物与潢川分离物及日本分离物长度一致,均为882nt。不同分离物CP基因核苷酸序列同源性为97.3%~98.9%,由此推导的氨基酸序列同源性为97.6%~99.3%,外壳蛋白N末端的110个氨基酸和C末端的55个氨基酸在各个分离物间是高度保守的。潢川分离物有5个氨基酸与其它5个分离物明显不同。WYMV不同分离物外壳蛋白序列分析结果进一步确认了WYMV与WSSMV为Bymovirus属的2种不同病毒。     

四个李属坏死环斑病毒分离物的检测鉴定及CP基因序列分析

采用RT-PCR方法,从北京昌平、云南昆明、陕西西安和浙江海宁的樱桃和月季罹病叶片中检测到李属坏死环斑病毒,为分析我国李属坏死环斑病毒分子生态学特性,克隆了病毒分离物的CP基因并进行序列分析。结果显示,北京分离物的CP基因长675nt、编码224aa,而西安、昆明和海宁分离物的CP基因均为681nt、编码226aa。序列相似性分析表明,4个分离物的CP基因之间具 有很高的同源性, 各个分离物间的核苷酸同源性在94.8%~99.3%之间, 氨基酸同源性在94.2%~98.7%之间。序列比对与系统发生树的分析结果显示,北京分离物属于GroupⅡ组,昆明、西安和海宁分离物属于Group Ⅰ组。     

基于线粒体 COⅠ和 COⅡ基因的5种不同寄主植物 西花蓟马种群遗传多样性研究

西花蓟马Frankliniella occidentalis(Pergande)是一种分布广、危害大的世界性检疫害虫。本研究旨在探讨田间常见5种寄主植物上的西花蓟马种群的寄主专化性和遗传多样性。以采自甘肃、宁夏的辣椒、茄子、蜀葵、月季、美人蕉等5种寄主植物上的西花蓟马为对象,以线粒体COⅠ和COⅡ基因为靶标,应用Arlequin 3.5软件进行种群遗传多样性、遗传分化、基因流水平及分子变异分析,以MEGA 7.0和Network 5.0软件分别构建单倍型系统发育树和中接网状树。结果显示,当以mtDNACOⅠ和COⅡ基因为靶标时,分别检测到13种和12种单倍型,其中单倍型H_1和H_2为优势单倍型;辣椒和茄子上的单倍型数量只有3种(COⅠ基因)或2种(COⅡ基因),而蜀葵、月季和美人蕉上的单倍型数量比较多,为7~9种(COⅠ基因)或8~9种(COⅡ基因);辣椒和茄子上的种群单倍型种类、单倍型多样性、核苷酸多样性和核苷酸平均差异数等均较蜀葵、月季和美人蕉上的种群低。COⅠ和COⅡ基因总寄主种群Fu's Fs检验结果分别为2.36和4.06,种群大小整体保持稳定;总寄主种群固定指数FST和基因流Nm分析表明,西花蓟马各寄主植物种群之间基因交流充分,尚未发生明显的遗传分化;AMOVA分析显示遗传变异主要来自种群内部;基于COⅠ和COⅡ基因序列的单倍型聚类和网状树都明显分为两支,分别对应西花蓟马的温室品系Glasshouse strain和羽扇豆品系Lupin strain;其中温室品系在所有寄主植物种群中均有发生,而羽扇豆品系的单倍型主要来自多年生的蜀葵、月季和美人蕉等植物,在辣椒和茄子上并无羽扇豆品系发生。研究结果对西花蓟马种群扩张机制探讨、遗传动态分析以及有效防控措施的制定具有一定指导意义。     

乳白蚁属Coptotermes分子分类研究进展

乳白蚁Coptotermes是危害林木和建筑的重要社会性昆虫,常随木质包装或原木远距离传播到异地建群,其为害隐蔽、潜伏期长,一旦爆发则为害严重且难防治。因其种类多、形态趋同,同一巢群中有龄期不一的虫态,可用分类特征少,造成形态分类困难、人为分类现象普遍。本文综述了世界乳白蚁属分子分类状况,阐述了近年来分子生物技术应用于乳白蚁属分类的研究进展,以期为基于分子手段对乳白蚁属种类修订及系统发育分析提供支持。     

小麦黄花叶病毒罗田分离物细胞质内含体蛋自基因的序列分析

 利用RT-PCR,获得了小麦黄花叶病毒湖北罗田分离物细胞质内含体(CI)蛋白基因的cDNA克隆。序列分析结果表明,湖北罗田分离物CI基因由1977个核苷酸组成,编码一个由659个氨基酸组成的蛋白质。与已报道的河南潢川、四川雅安、江苏扬州及日本分离物序列比较,不同分离物之间核苷酸序列同源性在95.0%~97.5%之间,相应推导的氨基酸序列同源性在93.2%~97.1%之间。并对CI蛋白的功能进行了讨论。     

杧果小条实蝇分子鉴定

通过对截获于澳门入境旅客携带芒果中的实蝇（SH78）进行线粒体COⅠ、COⅡ和COⅢ基因序列的扩增测序,并与GenBank中相关的序列进行比对,结果表明截获实蝇样品线粒体COⅠ基因序列和柱果小条实蝇Ceratitis cosyra（AY788421）相似性为98.87%;COⅡ基因序列与柱果小条实蝇（C.cosyra） （AY805310）和C.cosyra（AY805311）相似性分别为99.27%和98.11%;COⅢ基因序列和C.cosyra （DQ462338）相似性为89.10%。基于COⅠ和COⅡ序列构建的系统发育树中,截获实蝇样品和杧果小条实蝇最为接近。根据序列分析和系统发育关系分析的结果,将截获的实蝇鉴定为杧果小条实蝇（Ceratitis cosyra）。鉴定结果与形态鉴定结果相同。     

葡萄卷叶伴随病毒2号和3号辽宁分离物部分基因组的序列分析

 将采自辽宁兴城地区在生长期间具典型卷叶病症状的金星无核(Venus Seedless)葡萄品种休眠枝条,用RT-PCR检测4种葡萄卷叶伴随病毒(Grapevine leafroll-associated viruses,GLRaVs),扩增得到了葡萄卷叶伴随病毒2号(GLRaV-2)和葡萄卷叶伴随病毒3号(GLRaV-3)两种病毒的主要外壳蛋白(major coat protein,CP)基因的完整序列(GenBank登录号分别为FJ786017和FJ786016)。这表明该葡萄植株受到了GLRaV-2和GLRaV-3辽宁分离物(GLRaV-2-LN和GLRaV-3-LN)的复合侵染。根据检测结果,克隆了GLRaV-2-LN基因组3'端CPm (minor capsid protein)、p19(19-kDa protein)和p24(24-kDa protein)基因(GenBank登录号分别为FJ786018、FJ786019和FJ786018)。序列分析表明,GLRaV-3-LN的CP基因全长942 nt,与已报道的国内外其它分离物CP基因全序列相比,核苷酸序列同源性为89.8%~91.8%,由此推导的氨基酸序列同源性为94.9%~97.4%。GLRaV-2-LN的CP、CPm、p19和p24基因全长分别为597 nt、672 nt、486 nt和618 nt。与国外报道的几个分离物的相应蛋白基因全序列相比,核苷酸序列同源性分别为88.3%~100.0%、78.7%~99.9%、75.1%~99.4%和87.5%~99.5%;由此推导的氨基酸序列同源性分别为92.9%~100.0%、89.2%~100.0%、73.9%~99.4%和89.3%~99.0%。     

乳白蚁分类研究进展及对我国植物检疫的影响

乳白蚁属(非中国种)是我国十分重要的进境植物检疫性有害生物。本文主要综述了近年来国内外乳白蚁分类研究中取得的一些新成就,介绍了全球主要区域乳白蚁的种类分布,总结了我国多年来乳白蚁的截获状况,分析了国内外乳白蚁分类研究情况对我国进境植物检疫可能产生的影响。     

宜昌清江流域郑氏古宅白蚁危害情况调查

为更好地保护宜昌清江流域传统古民居,研发古建筑白蚁防治新技术,于2019年3月对宜昌市清江流域郑氏古宅白蚁危害种类、危害程度进行了全面系统调查。结果表明,危害郑氏古宅的白蚁种类为黑胸散白蚁、黄胸散白蚁和台湾乳白蚁等3种;门框、窗户、楼板、立柱、基石等部位均遭受白蚁危害,东厢房白蚁危害最为严重,白蚁危害率达到70%,整个郑氏古宅白蚁危害面积达到55%。     

新疆加工型辣椒一种新的细菌性叶斑病病原的鉴定

2014—2015年在新疆沙湾县加工型辣椒Capsicum annuumL.上发现一种细菌性叶斑病。为明确其病原种类,采用组织分离法分离病原菌,依据柯赫氏法则进行致病性测定,并对菌株进行16S rDNA和持家基因rpoD及gry B的扩增、序列测定和系统发育分析,对其进行鉴定。结果表明,获得的8个细菌菌株间致病力无明显差异。致病细菌与已报道的黄褐假单胞菌Pseudomonas fulva菌株的16S rDNA、rpoD基因、gry B基因的同源性分别达到了99.1%~99.9%、99.4%~99.5%和97.6%~100.0%。结合革兰氏染色反应、菌体形态、培养性状、生理生化反应、寄主范围等特征,将病原菌鉴定为黄褐假单胞菌。该病原菌通过人工接种还能侵染番茄、茄子、马铃薯、黄瓜、西瓜、甜瓜、四季豆、豆角、豇豆、白菜、萝卜、胡萝卜及芹菜等多种植物。     

南部松齿小蠹和长林小蠹幼虫分子鉴定

小蠹幼虫在口岸中经常被截获。应用DNA条形码技术,对厦门口岸分别从美国进口的南方黄松和从澳大利亚进口的辐射松截获的小蠹幼虫进行分子鉴定,选用引物CJ-J-2183/TL2-N-3014对线粒体COⅠ部分序列,引物S3660/A335对核糖体28S部分序列进行PCR扩增和测序,并与Gen Bank中对应的序列进行比对。结果表明,从美国南方黄松截获小蠹幼虫样品COⅠ部分序列和28S部分序列与NCBI数据库中南部松齿小蠹同源性达99%,从澳大利亚辐射松截获小蠹幼虫样品COⅠ部分序列和28S部分序列与NCBI数据库中长林小蠹同源性分别达100%和99%;基于COⅠ和28S部分序列构建的系统发育树,两种小蠹幼虫样品分别与南部松齿小蠹和长林小蠹最为接近,根据序列分析和系统发育关系分析,将截获的小蠹幼虫鉴定为南部松齿小蠹和长林小蠹。     

球孢白僵菌体壁蛋白水解酶基因BbCDEP的克隆与分析

从玉米螟虫生真菌球孢白僵菌中分离到体壁蛋白水解酶基因片段BbCDEP,长度为1760bp,包含有3个内含子区段,分别位于331～405,586～646,1157～1223bp的位置,该基因编码了一个由377个氨基酸组成的蛋白,与蛋白数据库中同源蛋白AAL5578.1和AAK70804.1的最高同源性分别为98.9%和98.7%,为研究该基因在致病过程中的分子机理提供理论依据。     

两种板栗重要蛀果象甲鉴别研究

栗雪片象Niphades castanea Chao和栗实象Curculio davidi Fairmaire幼虫形态相似,均蛀食板栗果实,是严重影响板栗产量或质量的重要害虫。为快速准确地鉴别这两种害虫,采用野外调查法和室内饲养法,对两种蛀果象甲的形态学和生态学特性进行了观察描述;同时对基于线粒体COⅠ基因片段的DNA条形码序列进行了提取扩增与分析。结果表明:栗雪片象和栗实象在成虫形态、为害特性和生活习性上差异明显;DNA条形码序列(COⅠ基因5′端684bp)可作为两种板栗蛀果象甲鉴定的分子标记,两者具有明显的碱基差异,遗传距离达18.9%~19.6%,在系统发育关系上,栗雪片象与Molytinae亚科的Niphadomimus sp.聚为一支,栗实象与Curculio属3个种聚为一支。研究结果可为两种板栗蛀果象甲幼虫的鉴别提供可靠依据,为象甲科昆虫的进一步研究提供形态、生态和分子证据。     

线粒体DNA序列在等翅目昆虫分子系统学上的应用

综述了国内外学者利用各种线粒体DNA序列来研究等翅目昆虫系统发育的研究概况.总结发现,CO Ⅰ、CO Ⅱ、12S rDNA、16S rDNA、Cyt b和ND1等线粒体区段被用于等翅目系统发育的研究,其中以COⅡ和16S rDNA的应用最广泛.而且多数是不同分子标记间的联合分析,解决了一些形态分类不能解决的问题.进一步的研究应与传统形态学研究结果相结合,可望全面分析等翅目昆虫的系统发育关系.