砂培体系中甜菜多粘菌的生物学特性和传带甜菜坏死黄脉病毒的定位研究

 甜菜多粘菌(Polymyxa betae)是甜菜坏死黄脉病毒(BNYVV)的真菌介体,属持久性传毒关系。BNYVV引起甜菜丛根病,是世界范围分布的主要甜菜病害,在我国各甜菜产区也广泛流行并严重危害。     

3种药剂防治甜菜丛根病的初步研究

用微生物制剂与２种抗病毒剂相结合，防治甜菜丛根病。微生物制剂可减轻传毒介体多粘菌的侵染，抗病毒剂可抑制病毒侵染及增殖。在连续种植甜菜的重病地，防治效果达４４．０％～６４．６％，产量增加７．３６％～９．５８％，含糖量增加１．３９％～１．９５％。在因甜菜丛根病严重发生而绝产的田块，防治效果可达２５．４％～４７．９％     

甜菜丛根病症状类型的研究

对甜菜丛根病4种类型的标样进行了病毒提纯,利用电子显微镜检查提纯的病毒形态,用光学显微镜检查病根中有无多粘菌(Polymyxa beta)和线虫,结合用鉴别寄主进行生物测定。结果认为坏死黄脉型,黄化型和黄色焦枯型由甜菜坏死黄脉病毒引起,病毒粒体杆状,直径18nm,有80,110,260和400nm 4种长度;黑色焦枯型病根中提纯出一种直径30nm的球状病毒,初步鉴定为番茄黑环病毒的一个株系。     

在我国发生的甜菜坏死黄脉病毒病

 1978年以来,在内蒙包头、呼和浩特等地发现了一种甜菜新病害。地上部表现叶片黄化、枯斑坏死、沿脉黄化坏死等症状;地下部表现次生侧根异常增生。根据鉴别寄主的症状,病株根部多粘菌(Polymyxa betae)的寄生和病毒形态及粒子长度分布特征确定内蒙所发现的这种新病害即国外报道的由Polymyxa betae传带的甜菜坏死黄脉病毒所致的甜菜丛根病。     

甜菜坏死黄脉病毒(BNYVV)单克隆抗体研制

 目前,甜菜丛根病(Rhizomania)已成为世界范围内危害甜菜生产的问题。     

甜菜夜蛾不同品系对甜菜夜蛾核多角体病毒的敏感性

利用寄主昆虫增殖病毒时，影响病毒产量的因素很多，其中寄主昆虫的敏感性是重要因素之一。尽管国内外在不同寄主对同种病毒敏感性方面进行了较多研究，但在相同寄主不同品系对同种病毒敏感性上的研究，尚未见报道。鉴于此，本文开展了甜菜夜蛾不同品系对甜菜夜蛾核多角体病毒（Spodoptera exigua Nucleopolyhedmvirus，SeNPV）敏感性的研究，以期筛选到高敏感性寄主昆虫，从而实现在甜菜夜蛾幼虫末龄高效增殖甜菜夜蛾核多角体病毒，达到有效提高甜菜夜蛾病毒杀虫剂生产效率的目的。现报道如下。     

混合病毒在不同宿主中交替繁殖对病毒毒力的影响

研究了混合病毒在不同宿主中交替繁殖对病毒毒力的影响,选用对甜菜夜蛾Spodoptera exigua (Hüber)较专化的苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒(AcNPV)和对斜纹夜蛾Spodoptera litura (Fabricius) 较专化的斜纹夜蛾核多角体病毒(SlNPV),按多角体数量1∶ 1混合后分别连续感染或交替感染甜菜夜蛾和斜纹夜蛾,比较各代病毒对两种夜蛾的活性。测定结果表明:SlNPV中国株和AcNPV混合,起始感染甜菜夜蛾,再在斜纹夜蛾和甜菜夜蛾中交替繁殖后,F4代斜纹夜蛾病毒(由斜纹夜蛾中收集的病毒)对3龄甜菜夜蛾幼虫的致死率极显著高于F2代斜纹夜蛾病毒,F3代甜菜夜蛾病毒(由甜菜夜蛾中收集的病毒)对斜纹夜蛾的致死率也显著高于F1代甜菜夜蛾病毒;混合病毒起始感染斜纹夜蛾,再经甜菜夜蛾和斜纹夜蛾交替繁殖后,斜纹夜蛾病毒对甜菜夜蛾的毒力以及甜菜夜蛾病毒对斜纹夜蛾的毒力也都显著提高。交替传代后的病毒比同代次连续传代后的病毒对非宿主的毒力显著提高,并且它们对原宿主的毒力未有减弱。AcNPV和SlNPV日本株混合病毒在甜菜夜蛾和斜纹夜蛾中交替繁殖后也表现出对非宿主毒力的提高。表明混合病毒在两种不同原宿主中交替繁殖比其在同种宿主中连续繁殖后对非繁殖原宿主的毒力显著提高。     

dsRNA-RT-PCR技术在甜菜坏死黄脉病毒属不同分离物鉴定中的应用

 甜菜坏死黄脉病毒(BNYVV)和甜菜土传花叶病毒(BSBMV)都属于甜菜坏死黄脉病毒属(Benyvirus)。     

基于高通量测序检测甜菜生尾孢中真菌病毒多样性

为明确甜菜生尾孢Cercospora beticola中真菌病毒的多样性,2020年自新疆维吾尔族自治区、内蒙古自治区、黑龙江省和北京市采集感染褐斑病甜菜病叶,鉴定获得78株甜菜生尾孢菌株,运用高通量的宏转录组测序技术检测甜菜生尾孢所携带的真菌病毒种类;将分离到的甜菜生尾孢按照菌落生长表型分为4组,进行宏转录组测序,将得到的序列经过拼接、聚类和基因功能注释,筛选出真菌病毒相关同源序列。序列分析结果显示,4组样品共比对到6个真菌病毒科,包括双分体病毒科Partitiviridae、双核糖核酸病毒科Birnaviridae、低毒病毒科Hypoviridae、裸露RNA病毒科Narnaviridae、泛欧尔密病毒科Botourmiaviridae和转座病毒科Metaviridae,以及未分科的负义单链RNA病毒。研究结果丰富了甜菜生尾孢真菌病毒资源库。     

甜菜夜蛾核型多角体病毒研究进展

甜菜夜蛾(Spodoptera exigua Hübner)属夜蛾科(Noctuidae),是一种世界性分布的多食性害虫。近年来在我国由次要害虫上升为主要害虫,经常暴发成灾,给农业生产带来严重损失。甜菜夜蛾核型多角体病毒(Spodoptera exigua nucleopolyhedrovirus,Se NPV)能有效控制甜菜夜蛾种群数量,是有效防治甜菜夜蛾的生物制剂,具有重要的经济、生态和环保价值,应用前景广阔。本文从毒力、流行病学、分子生物学、增效剂及对甜菜夜蛾寄生蜂的影响等方面综述了甜菜夜蛾核型多角体病毒的研究进展。     

甜菜潜隐病毒的研究

 从市场出售的甜菜(Beta vulgaris)种子中首次得到了直径约30毫微米的等轴病毒粒子的分离物。接种试验证明,它不能由摩擦接种传病,也不能由桃蚜(Myzus persicae)传播,但可由种子传毒,种子带毒率高达87.5%。受侵染的甜菜植株不表现症状,体内含毒量很低,病株汁液须经部分提纯并浓缩后才能在电镜下观察到病毒粒子和用琼脂双扩散法检测到病毒。在病株叶片的超薄切片中,未发现病毒粒子和细胞学的变异。在氯化铯溶液中,病毒粒子的浮力密度为1.37克/毫升左右。该分离物能与甜菜潜隐病毒抗血清产生沉淀反应,但与黄瓜花叶病毒无血清学关系。根据上述基本性状,该分离物归属于甜菜潜隐病毒(Beet Cryptic Virus)。     

利用甜菜夜蛾日本品系增殖核多角体病毒

比较了甜菜夜蛾3种品系增殖甜菜夜蛾核多角体病毒(SeNPV)的效果。结果表明,利用甜菜夜蛾日本品系幼虫增殖SeNPV产量最高,其平均单头病毒含量分别比广州品系和荷兰品系高19 6%和53 3%;病毒总含量分别高20 4%和116 7%。在此基础上,进一步研究了虫龄、感染浓度和饲养密度对用甜菜夜蛾日本品系幼虫增殖SeNPV的影响,确定了利用甜菜夜蛾日本品系增殖SeNPV时,以上3因子的最佳条件为:在27±1℃下用1×108PIB/ml的SeNPV感染5龄初幼虫,并按30头/dm2的密度饲养。     

甜菜夜蛾核型多角体病毒青岛分离株SeMNPV-QD的毒力测定

为评价一株新的甜菜夜蛾核型多角体病毒（青岛分离株SeMNPV-QD）在害虫生物防治中的应用潜力，本文以甜菜夜蛾核型多角体病毒青岛株SeMNPV-QD与美国株SeMNPV-US1为材料，分别测定了病毒对甜菜夜蛾细胞系的感染、对甜菜夜蛾幼虫的室内生物活性以及田间防治效果。研究结果表明，SeMNPV-QD与SeMNPV-US1对甜菜夜蛾细胞系Se-3的感染率分别为92.34%和93.65%，平均每个细胞的病毒多角体产量分别为23.97和24.10 PIB，差异均不显著；SeMNPV-QD与SeMNPV-US1对初孵甜菜夜蛾幼虫的LC₅₀分别为4.43×10⁴和4.35×10⁴ PIB/mL，LT₅₀分别为4.12和4.02 d；SeMNPV-QD与SeMNPV-US1对4龄甜菜夜蛾幼虫的LC₅₀分别为9.25×10⁵和4.44×10⁵ PIB/mL，LT₅₀分别为6.20和5.50 d；SeMNPV-QD和SeMNPV-US1对大葱田甜菜夜蛾幼虫具有较好的防治作用，7 d的校正防效分别达到74.99%和79.04%。研究结果将为新病毒株的深入研究开发以及甜菜夜蛾的生物防治提供理论依据。     

甜菜夜蛾卵和成虫携带核型多角体病毒对种群数量的影响

在室内分别测定了甜菜夜蛾的卵、雌蛾和雄蛾分别携带甜菜夜蛾核型多角体病毒(SeNPV)对其卵孵化率、幼虫存活率及单雌产卵量的影响。结果表明:甜菜夜蛾卵块携带SeNPV后,卵孵化率和幼虫存活率均显著下降。雌、雄蛾分别携带病毒再交尾后,对单雌产卵量、卵孵化率和幼虫的存活率也有显著影响,并且不同带毒量处理间存在显著差异,表现为带毒量越高,单雌产卵量越少、卵孵化率和幼虫存活率越低。同等带毒处理条件下,卵、雌蛾和雄蛾带毒3种处理方式对甜菜夜蛾种群数量的影响没有显著差异。说明SeNPV能通过甜菜夜蛾的卵、雌蛾和雄蛾3种虫态进行垂直传播,可以明显抑制甜菜夜蛾种群数量的增长,为昆虫性诱剂和病毒集成技术在田间的应用提供了理论依据。     

甜菜夜蛾核多角体病毒的研究与应用进展

本文综述了国内外甜菜夜蛾核多角体病毒的研究和应用进展     

不同昆虫病毒对斜纹夜蛾和甜菜夜蛾的联合增效作用

测定了多种病毒组合对斜纹夜蛾和甜菜夜蛾的联合增效作用。结果表明：八字地老虎颗粒体病毒(XcGV)、银锭夜蛾质型多角体病毒(McCPV)可明显提高斜纹夜蛾核多角体病毒(SINPV)对斜纹夜蛾的杀虫速度,其中及XcGV可使SINPV对斜纹夜蛾3龄幼虫LT50缩短了0．5—2．5d;McCPV可使其缩短0．6—2．9d,但未提高其杀虫毒力。XcGV亦可提高SINPV和XcNPV对甜菜夜蛾的杀虫速度,分别使甜菜夜蛾2龄幼虫LT50缩短1．3和1．7d。     

保幼激素类似物对重组甜菜夜蛾核多角体病毒SeXD1增殖的影响

用重组甜菜夜蛾核多角体病毒SeXD1感染甜菜夜蛾幼虫,并于同龄期点滴保幼激素类似物Methoprene(ZR-515),研究其对SeXD1增殖的影响.研究表明,用5×107 PIB/ml的SeXD1感染甜菜夜蛾五龄幼虫,并以2μg/头Methoprene点滴处理效果最佳,其感染死亡率、平均单头病毒含量、病毒总产量分别为95.3%、8.6×108 PIBs/头和2.45×1011 PIBs;比对照提高65.1%、115.0%和264.1%.研究了Methoprene对染毒及未染毒宿主消化生理的影响.结果显示,Methoprene处理不仅延长甜菜夜蛾幼虫历期,增加其取食量,还显著提高幼虫的食物转化率.     

甜菜花叶病毒病的研究Ⅰ.病毒的分离鉴定

 1986-1987年对黑龙江、内蒙古部分甜菜原料产区与采种区进行了初步调查,采种区甜菜花叶病毒病发病率达100%,与其邻近的原料产区有零星发病,远离采种区则没有发病的迹象。田间采集的病叶,用磨擦、蚜传接种方法均能在甜菜上再现症状。经昆诺藜(Chenopodium quinoa)分离,普通电镜及乳胶电镜负染均能看到典型的马铃薯Y组病毒的粒体。通过鉴别寄主、甜菜上的症状表现,分离物的物理特性及血清学试验,证明此分离物为甜菜花叶病毒。在提纯方面,摸索了不同方法,认为匀浆前液氮或冷冻处理,二次PEG沉淀后过Sepharose4B柱,分离病毒效果较好,还可省去超速离心步骤。以内蒙五号甜菜品种作为毒源的繁殖寄主,能使提纯病毒产量达0.6mg/100g叶片,耳静脉与多点皮下注射相结合免疫兔子,微量沉淀测定效价为1:1024。     

甜菜夜蛾核多角体病毒对斑痣悬茧蜂发育及存活的影响

研究了甜菜夜蛾核多角体病毒对斑痣悬茧蜂Meteorus pulchricornis发育及存活的影响。正在蜕皮的甜菜夜蛾Spodoptera exigua 2龄幼虫被斑痣悬茧蜂寄生后,当其发育到3龄与4龄时分别饲以95%致死浓度(LC_(95))或10×LC_(95)甜菜夜蛾核多角体病毒(SpeiNPV),研究表明:甜菜夜蛾核多角体病毒对斑痣悬茧蜂发育及存活产生不利的影响,影响程度取决于寄生与饲毒的间隔期以及饲毒量。被寄生的甜菜夜蛾幼虫发育到第3龄(即被寄生后第1天,1dpp)分别饲以LC_(95)或10×LC_(95) SpeiNPV的处理,没有寄生蜂老熟幼虫从寄主体内钻出;被寄生的甜菜夜蛾幼虫发育到第4龄(4 dpp)分别饲以LC_(95)或10×LC_(95) SpeiNPV的处理,分别有25.62%与16.31%寄生蜂老熟幼虫从寄主体内钻出。甜菜夜蛾是否饲毒对寄生蜂的出蜂率、化蛹率及羽化率影响显著;饲毒浓度影响寄生蜂的出蜂率、化蛹率,但不影响羽化率。甜菜夜蛾饲毒与否对寄生蜂幼虫及蛹的发育历期无显著影响,但饲毒甜菜夜蛾体内寄生蜂幼虫、蛹及成蜂显著小于未饲毒的甜菜夜蛾体内寄生蜂幼虫、蛹及成蜂。     

甜菜多粘菌传带甜菜坏死黄脉病毒的细胞定位研究

 利用砂培体系继代培养不同病区甜菜多粘菌(Polymyxa betae),经酶联检测,分离得到2个带毒率高的分离株N,HR₁₂。应用甜菜坏死黄脉病毒(BNYVV)抗血清和免疫金标记技术分析了甜菜根中P.betae不同发育阶段与病毒的关系。在初生原质体、游动孢子囊以及未成熟的游动孢子中观察到被金颗粒标记的病毒粒子,在休眠孢子外围也观察到金标记的病毒粒子,但在休眠孢子内未直接观察到病毒粒子,只是在其内壁及液泡中常见有标记上的金颗粒。