[06]红螯螯虾雄性生殖系统组织蛋白酶的初步研究

用福林酚法和复性电泳对红螯螯虾(Cherax quadricarinatus)雄性生殖系统的组织蛋白酶(Male Reproductive SystemCathepsin,MRSC)进行了定性和定量分析,以探讨其在雄性生殖系统发育、精荚形成和精子释放过程中的作用.福林酚法测定结果显示:仔虾精巢蛋白酶比活力分别在pH6和pH10时出现2个高峰,而成虾精巢只在pH10时出现1个活力较高的峰.成虾雄性生殖系统的各部分在pH10～12的条件下有较强的蛋白酶比活力,于碱性缓冲液中浸泡有助于其后输精管内含物的溶解.复性电泳分离到4个蛋白酶条带,按分子量从大到小依次为:MRSC-A、MRSC-B、MRSC-C和MRSC-D.MRSC-A和MRSC-D广泛分布于雄性生殖系统各部分,其中MRSC-A为酸性蛋白酶,而MRSC-D是碱性蛋白酶;MRSC-C为酸性蛋白酶,只分布于中输精管;MRSC-B活性受pH值影响不大,仅存在于后输精管.在红螯螯虾雄性生殖系统的不同发育阶段,其组织蛋白酶的组成和活性不同.作为精荚的重要组成成分,组织蛋白酶与精荚排出体外后的硬化有直接关系,并促进随后精荚基质的水解以及精子的释放.     

感染白斑综合症病毒中国对虾雄性生殖系统的PCR检测与电镜观察

通过人工投喂携带WSSV的毒饵，对性腺发育成熟的中国对虾（Fenneropenaeus chinensis）雄虾（♂）进行感染实验。采用nest-PCR（巢式PCR）技术，检测感染后的中国对虾雄性生殖系统受WSSV感染情况，同时选取感染严重的虾样进行电镜观察。巢式PCR检测结果表明，感染组中国对虾的精巢、输精管和精囊均被WSSV感染，其中精囊呈阳性的最多，输精管次之，精巢最少。通过电镜进一步观察发现，WSSV粒子只存在于精巢、输精管和精囊的结缔组织中，而在其他组织和生殖细胞中均未发现病毒粒子。其中，精巢中WSSV粒子存在于精巢内两个生精小管之间的结缔组织；输精管中WSSV粒子存在于管壁的结缔组织；精囊中WSSV粒子也只存在于精囊内膜的结缔组织和精荚膜的结缔组织中。PCR检测和电镜观察结果均表明，WSSV粒子能感染中国对虾的雄性生殖系统且对性腺感染存在着一定的组织特异性。     

克氏原螯虾雄性生殖系统的超微结构

采用透射电镜研究了克氏原螯虾输精管的超微结构,采用石蜡切片法研究了克氏原螯虾的精巢、输精管和精荚的显微结构,并对精巢做了周年变化研究。结果表明,精巢由许多生精小囊和收集管组成,其结构呈葡萄串状,生殖细胞在生精小囊内发育成熟后由收集管输送到输精管;输精管有左右两条,相对于左侧输精管,右侧输精管比其约长一半,直径更大,卷曲程度更高,内容物含量更多,分泌细胞内的内质网含量更丰富;输精管根据形态不同分为前、中、后、生殖突4段,前中段具有分泌精荚壁物质的功能,后段具有储存、射出精荚的功能,末端生殖突为输精管出口;精荚呈长囊形或椭球形,由精子团、精荚基质和两层精荚壁组成,精子团偏向精荚一侧分布;克氏原螯虾雄虾精巢在一周年中的5—8月和10月处于精子细胞期的生精小囊比例很高,具有两个成熟时期。     

草虾人工受精技术简介

草虾的成本高,平均每尾亲虾都要100美金左右,且易脱壳。所以一旦没有交配,既使再度成熟,所产的卵亦不能受精,亲虾将成为无用。为了充分利用亲虾,采取人工受精,移植精荚、输精管的办法可提高产卵受精率,借以提高孵化率达到多次利用的目的。 一、雄性生殖器官: 由于要移植精荚、输精管,所以详细介绍一下雄性生殖器官的构造: 1.生殖巢:雄性草虾的生殖巢由精巢、输精管、射精管、贮精荚囊、生殖孔组成。精巢位于头胸甲胃域～心脏域正下方,肠将其分成左右两片,每片8叶,输精管与精巢相连,自左右第4叶精巢下方成急速弯曲,最粗部位直径达3.25毫米突出肝胰脏后方并与之成直角,输精管内充满粘着性分泌物将精子群包围,呈白浊部分为精子群,输精管末端急速呈细管     

中国对虾卵水的特性和精子的应答

研究了中国对虾卵水的采集、保存方法、紫外吸收特性和有效期等方面的内容，并应用卵水研究了交尾期虾、雌虾及产卵期雌虾精荚或纳精囊中精子对卵水的应答开始时间、必要的反应时间等响应卵水的时间特性以及精子的存活期等。结果表明，卵水经液氮保存或先经液氮后转入普通冰柜保持冻结状态７个月后诱导精子激活效力无显著差异。精子在自然温度（１０℃）普通海水中可在１０ｈ内保持对卵水的响应能力。交尾期精子最初响应卵水有５￣１     

红螯螯虾雄性生殖系统的生化组成及精子代谢

通过对红螯螯虾（Cherax quadricarinatus）雄性生殖系统各组织的生化测定和乳酸脱氢酶（LDH）、琥珀酸脱氢酶（SDH）、延胡索酸还原酶（FR）的活性测定发现，红螯螯虾精荚（含精子）中的糖类和蛋白质含量丰富，分别为18．264和12．846mg／g（FW），总脂含量相对较低，仅为1．613mg／g（FW）；精子（含初级精荚壁）亦以糖类和蛋白质含量较高，分别达到5．227和8．475mg/g（FW），总脂含量因过低而未能测出，但精子的上述物质含量均显著低于精荚。酶活性测定发现，LDH酶活性以精巢、输精管和射精管较高，其中又以前输精管最高，为1426．258U／（g protein），可能与其功能相关；精子和精荚LDH活性极显著低于输精管，含量分别为87．375和36．215U／（g protein），两者间差异显著；FR活性在精荚和精子中较高，两者分别达到19．945和15．732U／（mg protein），显著高于生殖系统其他组织器官，但均未检测到SDH酶活性，故其SDH／FR的比值趋向于0。而生化物质的组织化学以及酶组化定位的结果进一步证实了上述结果。此外，LDH同工酶酶谱结果证实，精荚仅含有一条厌氧型LDHA编码亚基占优势的同工酶谱带。所有实验结果表明，红螯螯虾精子代谢的方式以厌氧型为主，其代谢底物主要为糖类，为厌氧型糖酵解，其代谢底物由次级精荚壁提供。     

人工养殖曼氏无针乌贼生殖系统的解剖学与组织学研究

采用解剖学和组织切片技术对人工养殖曼氏无针乌贼（Sepiella maindroni）成熟个体的生殖系统进行观察。曼氏无针乌贼为雌雄异体，其雄性生殖系统包括精巢、输精管、精囊（精囊Ⅰ、精囊Ⅱ、精囊Ⅱ的桃核体和精囊Ⅲ）、副性腺和精荚囊：雌性生殖系统包括卵巢、输卵管、输卵管腺以及附属腺（缠卵腺和副缠卵腺）。光镜下，精巢属于小叶型，由精巢壁和实质部分组成，实质部分由精小叶和小叶间质构成；卵巢呈葡萄串状，由卵巢壁、不同时相的卵母细胞和卵巢基质构成。     

拟目乌贼生殖系统的组织学研究

为了丰富拟目乌贼人工繁育理论,采用组织学方法,对其雌雄生殖系统的结构进行了研究。结果显示,雄性生殖系统可分为精巢、输精管、黏液腺、放射导管腺、中被膜腺、外被膜腺、硬腺、终腺和精荚囊9部分,其中输精管可分为前段、中段(壶腹)和后段3部分。精子发生不同步,成熟精子自精巢产生后,通过输精管,在黏液腺和放射导管腺中形成精团,在中被膜腺和外被膜腺中按规律进行重新排列,硬腺的主要作用是吸水使精荚变硬,最后在终腺中成熟,储存于精荚囊中,在生殖季节分批排出。雌性生殖系统可分为卵巢、输卵管、输卵管腺、1对缠卵腺和1对副缠卵腺5部分,可推测卵子发生不同步,分批成熟,在输卵管腺、缠卵腺和副缠卵腺共同作用下形成三级卵膜结构。拟目乌贼雌雄生殖系统的结构与其受精和产卵方式是相适应的。     

对虾人工移植精荚技术应用试验

对虾养殖是海水养殖的一大产业,人工培育苗种是该产业的主要环节。长期以来人工育苗所需亲虾主要采捕于自然海区,由于对虾具有独特的生殖系统和生殖行为,雄虾在雌虾产卵前就已将精荚输入雌虾交接器内,在其产卵时释放出精子。因此,为了提高亲虾使用率和解决亲虾运输受伤或脱壳引起的受精困难问题,台湾的林明男、丁云源等及国内有关单位开展对虾精荚移植技术研究,并将移植技术运用于对虾杂交育种方面。本文就对虾人工移植精荚技术在对虾育苗生产中应用进行试验,使有限亲虾资源得到充分利用和保护,从而降低育苗成本、提高孵化率,达到增产目的。现就试验结果报告于下。     

[4]东海三疣梭子蟹精子发生及精荚形成

为探究东海三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus Miers,1876)雄性群体的性腺发育规律,通过定期采样,运用形态学、组织学方法对东海三疣梭子蟹精子发生及精荚形成过程进行了研究,并结合精小叶生殖节段法对处于不同发育阶段的精巢进行了定性分析.结果表明,三疣梭子蟹精巢属于叶型,由精小叶和精小管组成的叶状管交织而成.精子发生过程与其他高等短尾派蟹类相似,精子成熟后即进入精小管中.输精管可能起源于精小管.三疣梭子蟹精巢和输精管的发育存在一定的年际变化.4-5月份,精巢小叶内精原细胞占优势,输精管内精荚零星分布;6-7月份,精母细胞与精细胞比例增加;8月份精母细胞为主.到了9月份,整个精巢完全被精细胞等发育程度较高的精小叶所占据,输精管内充满精液和精荚,为即将到来的交配季节做好准备.三疣梭子蟹交配活动主要集中在10月份.12月份精巢精小叶中出现游离精子.此后,精巢逐渐退化(1-3月),但输精管中一直储存着精液和精荚.三疣梭子蟹精荚形成过程始于前输精细管,精荚膜两层,分别由来自前输精细管分泌的第一种不定物质和其中、后端分泌的第二种不定物质.精荚内的基质可能直接源于精巢的精小叶部分.输精管中的强嗜酸性颗粒与第二种不定物质有融合作用,使输精管中贮存的精荚膜嗜酸性.     

脊尾白虾的性腺发育及组织结构观察

为系统研究脊尾白虾的性腺发育及组织学特征,采用常规的石蜡切片及H.E染色方法对脊尾白虾的性腺发育及其组织结构进行观察。结果表明,脊尾白虾的雌性生殖系统由卵巢、输卵管及排卵孔组成。卵子发生经历了卵原细胞、卵黄合成前期卵母细胞、内源性卵黄合成期卵母细胞、外源性卵黄合成期卵母细胞,最后发育为成熟的卵母细胞。卵巢发育可分为增殖期、小生长期、大生长期、成熟期及产后恢复期。脊尾白虾雄性生殖系统由精巢、输精管及排精孔组成。精巢由生精小管构成,不同生精小管内精子发育可不同步。精子发生经历了精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精细胞,最后发育为精子。输精管可分为前、中、后输精管及末端壶腹,精荚在输精管中形成。     

Reproductive Quality Evaluation of Male Penueus stylirostris from a Grow-Out Pond

Several male Penucus stylirostris were selected from a 3 ha commercial earthen pond and were individually evaluated for reproductive performance. Indicators measured were compound spermatophore weight, sperm count, and sperm abnormalities.
It was found that spermatophore quality was significantly better for 30–40 g shrimp than for 20–30 g shrimp ( P < 0.05). The higher frequency of abnormalities measured in younger males and the inverse relationship between abnormalities and sperm count indicate that the vas deferens could be the tissue responsible for producing highly abnormal immature semen. It is proposed that male maturation has at least three independently controlled levels of organization: testes maturation, vas deferens maturation, and spermatophore synthesis.
The individual evaluation showed that each male followed a particular response in reproductive quality. Changes in spermatophore weight were not an indicator of sperm density within spermatophores.
Male reproductive tract degenerative syndrome (MRTDS) and male reproductive system melanization (MRSM) did not develop in any shrimp during these experiments.     

黑斑口虾蛄雄性生殖系统的组织学与超微结构

黑斑口虾蛄雄性生殖系统由精巢、输精管、交接器及副性腺组成。精巢呈管状,末段较直,向前逐渐弯曲,在第七、八胸节处盘曲成耳状。输精管管壁有一层上皮细胞,但无肌细胞;输精管为精巢顶端延伸,两者管径大小很接近。交接器位于第八胸节基部,为棒状结构,连接端较软,呈膜状,可自由弯曲;游离端较硬,外有甲壳质。1对雄性副性腺位于第4～7胸节间,呈细丝状,左右末端各与同侧的输精管共同平行注入交接器中。末段精巢腔内充满着不同发育阶段的精细胞,从末段精巢向后、中、前段精巢、输精管及交接器,精细胞逐渐趋向成熟。成熟精细胞呈卵圆形,外围厚膜,大小约8.5μm×7.0μm,无鞭毛,未发现有顶体结构。     

刀额新对虾输精管的组织学及精荚形成

刀额新对虾 (Metapenaeusensis)采自福建沿海 ,体长约 14cm。活体解剖、取样、固定 ,于OlympusBH 2显微镜下观察 ,其生殖管道分为前输精管、中输精管、后输精管和端壶腹 4部分。前输精管上皮为单层柱状上皮 ,其分泌物呈嗜碱性 ;中输精管分泌物为嗜酸性 ,前段为高柱状上皮 ,后段则为柱状上皮 ,至后段共出现 2处上皮隆起 ,隆起间为扁平上皮 ;分泌管出现于中输精管前段 ,其分泌物呈嗜酸性 ,开口于中输精管后段 ,分泌物由此处流入中输精管腔 ;后输精管腔结构与中输精管腔相似 ,但管径缩小 ;端壶腹共分 3个腔 ,其中 2个由后输精管腔延续形成 ,精荚 1个。精荚由精子团和精荚壁组成。精荚壁分 2层 ,内层为均匀的嗜碱性初级精荚壁 ,精子团位于初级精荚壁中央 ;外层为次级精荚壁 ,呈嗜酸性 ,略呈“C”形包被于初级精荚壁之外。整个精荚横切面的外形似柳叶状 ,分为光滑区和皱折区 2部分 ,光滑区由次级精荚壁包被 ,皱褶区则为裸露的初级精荚壁。精荚形成于中输精管后段 ,它是由前输精管的嗜碱性分泌物、中输精管嗜酸性分泌物以及分泌管上皮细胞分泌物经复杂的化学变化形成     

东海三疣梭子蟹成熟群体生殖特征和条件状况

为了探求东海三疣梭子蟹成熟群体的发育生殖机制,采用生态学、资源生物学等相关研究方法,通过对三疣梭子蟹性腺、肝胰腺及条件指数等指标的研究,初步建立起雄性三疣梭子蟹成熟阶段发育分期的特征变化,反映了目前东海三疣梭子蟹成熟群体的生殖特征和条件状况。三疣梭子蟹生殖群体由1龄蟹为主,规格偏小。头胸甲宽主要分布在100~160 mm之间,体重为50~200 g。头胸甲宽与长呈线性相关,而头胸甲宽、长与体重则呈幂函数关系。成熟阶段输精管发育程度和头胸甲宽正显著相关。根据三疣梭子蟹输精管的粗糙程度、管径及管重大小,本文首次提出把处于成熟阶段的雄蟹分为5个阶段。输精管重增长为幂函数方式,输精管指数则随发育线性增长。雌蟹卵巢发育规律和头胸甲宽之间关系不甚明显,而和季节相关。研究表明,9月份三疣梭子蟹交配后卵巢迅速发育,增长明显,10~12月份生殖群体卵巢普遍处于Ⅱ~Ⅳ期。三疣梭子蟹肝胰腺重量随体重和甲壳的增长而增加,而肝体指数相反。雌蟹卵巢Ⅱ期阶段梭子蟹肝胰腺重量最高,平均重量为18.21±5.68 g,随后逐渐降低,说明肝胰腺能量发生了转移;相比于雄蟹,雌蟹储能更多。雌蟹卵巢重量随肝胰腺重量变化呈对数关系增长,而雄蟹输精管重随肝胰腺重呈线性。三疣梭子蟹生殖群体在发育变化过程中两个条件指数基本处于一个平衡阶段,雌雄间差异变化不大。     

中华绒螯蟹家系定向构建与定向育苗技术研究

利用中华绒螯蟹3个群体：“苏蟹一号”F4代选育群体、长江野生群体和沿海河口野生群体及其4大类杂交组合,通过笼式和坑式定向交配设计,实现了规模化定向构建中华绒螯蟹全同胞家系和父系半同胞家系。坑式交配采用亲蟹1雌1雄,共定向构建9个全同胞交配土坑;笼式交配采用亲蟹3雌1雄,共设置交配网笼17个。至2009年4月,经过越冬暂养,其中坑配亲蟹的抱卵率及越冬成活率达100%,笼配49只雌蟹获抱卵蟹亲蟹为45只,越冬成活30只。为尽量减少由于繁育条件不一致造成的各家系间的环境偏差,使每个家系幼体培育阶段的条件尽量保持一致,共选择抱卵蟹26只进行育苗。采用面积2×667 m^2室外土池6只,选择6只坑配抱卵蟹,按照一池一只设计,进行室外天然海水土池生态定向育苗;采用3 m×2 m×1.5 m聚乙烯网箱20只,选择20只笼配抱卵蟹按照一箱一只设计,进行室外土池网箱定向育苗。通过规模化培育,最终成功构建20个中华绒螯蟹家系,其中父系半同胞6个,共培育家系蟹苗280万只。     

虾夷扇贝雄性生殖系统的组织学研究

１９９７年取材研究了大连长海县的虾夷扇贝的雄性生殖系统的组织结构。虾夷扇贝的精巢构造与栉孔扇贝,贻贝的相似,也是由外膜及其内的无数生殖小管构成。外膜含单层柱状上皮及较厚的肌层。生殖小管间充填着结缔组织及来自外膜的薄层肌肉,结缔组织中含有血管,神经及输精细管。生殖小管由位于基膜上的生殖上皮构成,生殖上皮不断向腔内增殖出精原细胞,初级精母细胞,精细胞及业郛。     

Maturing, Spawning and Egg Collecting of the White Shrimp Penaeus vannamei Boone in a Recirculating System

A specially designed recirculating system was used to maintain P. vannamei broodstock for maturation, mating and spawning in the same tank. Two groups of different size shrimp were stocked in this system in Phase I (8 May to 5 September 1989) and Phase II (5 September to 5 December 1989). Results showed that this recirculating system was able to maintain good water quality keeping broodstock maturing, mating and spawning with high stocking density (10 shrimp/m²) and low mortality (6%). Seventy-eight percent of spawned eggs were collected by a submerged egg collector. Mating success was very poor (3.4%) in Phase I even though there was normal spawning frequency. Mating success and nauplii production were much improved in Phase II. During Phase II 104 male and female broodstock housed in a 6 m³ tank produced 1.6 ± 10⁶ nauplii (with 70% mating success) in three months. This study illustrated that broodstock size was a critical factor of successful mating and fertilization for P. vunnamei , and also, reduction of handling stress and lowered disturbance of the shrimp greatly enhanced the mating success.