急性硫化物胁迫对日本沼虾免疫和抗氧化系统的影响

日本沼虾(Macrobrachium nipponense)在硫化物浓度为0.4、1.2和4.0 mg/L的水体中暴露48 h,研究硫化物胁迫对其血液免疫指标和机体抗氧化能力的影响.结果表明,硫化物对日本沼虾的24、48、72、96 h LC50分别为22.5、15.2、12.5、11.35 mg/L.血细胞密度(THC)和吞噬活力(吞噬百分比和吞噬指数)随硫化物质量浓度升高而降低,至48 h,0.4、1.2和4.0 mg/L组的THC显著降低,分别为对照组的85.71％、70.75％和57.48％.各试验组沼虾的凝血时间与对照组相比延长,1.2 mg/L和4.0 mg/L组分别从12 h和6h开始显著长于对照组(P＜0.05).沼虾肌肉中的总抗氧化能力( T-AOC)随硫化物浓度的升高而降低,至48 h,1.2 mg/L和4.0 mg/L组显著低于对照组(P＜0.05).超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活力随硫化物浓度的升高而增强,至48 h,1.2 mg/L和4.0 mg/L组的SOD活力显著高于对照组(P＜0.05),表明日本沼虾免疫系统对低浓度硫化物有一定的耐受力；当硫化物浓度过高时,沼虾的免疫能力降低,对机体抗氧化系统产生显著影响.     

虾青素对日本沼虾血细胞密度及吞噬活力的影响

从雨生红球藻粉中提取虾青素，以60mg/kg的浓度添加到日本沼虾（Macrobrachium nipponemis）的配合饵料中，在实验室条件下饲养三周，研究虾青素对日本沼虾血淋巴密度及吞噬活力（吞噬百分比和吞噬指教）的影响。结果显示添加虾青素组的日本沼虾不论是血细胞密度还是吞噬活力都显著高于对照组，表明虾膏素可显著提高日本沼虾的免疫力。     

乐果对日本沼虾血淋巴溶菌酶与酚氧化酶活力的影响

将日本沼虾暴露于0.0001、0.001、0.01、0.1、1.0 mg/L的乐果溶液中14 d,溶菌酶与酚氧化酶活力均较对照组明显降低,且随乐果浓度的增加和胁迫时间的延长而呈下降趋势.0.0001 mg/L的乐果对日本沼虾的免疫功能即有一定的抑制作用.溶菌酶与酚氧化酶活力可作为日本沼虾亚急性中毒的检测指标.     

亚硝酸盐氮对罗氏沼虾幼体的毒性试验

罗氏沼虾（Macrobrachium rosenbergii) 幼体对亚硝酸盐氮的忍耐性随接触时间的增加而明显降低,本试验结果表明,亚硝酸盐氮对罗氏沼虾第9期幼体的毒性;24h的半致死浓度为39.81mg/L,48h的半致死浓度为25.63mg/L;96h的半致死浓度为9.71mg/L,安全浓度为0.97mg/L。     

硫化物胁迫对凡纳滨对虾血细胞的毒性影响

硫化物是水产养殖过程中常见的水体污染物之一。为探讨水体硫化物胁迫对虾类血细胞的毒性影响,以不同浓度(0.5 mg/L,2.0 mg/L)的硫化物对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)进行胁迫,于胁迫后6、12、24和48 h取血淋巴,应用流式细胞术测定血细胞的总数(THC)、活性氧(ROS)含量、一氧化氮(NO)含量以及凋亡率。结果显示,经0.5 mg/L硫化物胁迫48 h后,对虾THC显著下降至11.78×10~6个/mL,为对照组的72.7%(P0.05),ROS含量为对照组的225.2%(P0.05),血细胞凋亡率显著上升至7.42%(P0.05);经2.0 mg/L硫化物胁迫6 h开始,对虾THC呈现显著的下降(P0.05),血细胞ROS含量和凋亡率显著提高(P0.05);表明硫化物胁迫刺激对虾血细胞产生大量ROS,诱导血细胞凋亡,从而导致THC下降,这一过程可能是硫化物导致虾类细胞免疫下降的重要机制;随着硫化物浓度的升高,其细胞毒性作用明显提高。血细胞NO含量在2.0 mg/L硫化物胁迫12和48 h时显著升高(P0.05),推测NO可能在硫化物胁迫防御调控中起着信号因子的作用。     

氨态氮和亚硝态氮对日本沼虾酚氧化酶活力及血蓝蛋白含量的影响

在水温(24±1)℃下分别测定了日本沼虾暴露在0、2.2、4.2、8.7、17.8、36.6 mg/L氨氮和0、2.0、3.2、5.0、7.9、13.3 mg/L亚硝酸盐后血淋巴中酚氧化酶活力和血蓝蛋白含量的变化。试验结果表明,随着氨氮和亚硝酸盐浓度的升高,酚氧化酶活力先升后降,在氨氮质量浓度为8.7 mg/L、亚硝酸盐质量浓度为5.0 mg/L时,酚氧化酶活力最高。在氨氮质量浓度为2.2 mg/L、亚硝酸盐质量浓度为2.0 mg/L时,血蓝蛋白含量显著高于对照组。日本沼虾血淋巴中酚氧化酶活力和血蓝蛋白含量没有相关性。     

过氧乙酸对中华绒螯蟹及池塘生物的毒性研究

水温(20±1)℃下,采用静态生物毒性试验的方法,研究了过氧乙酸对中华绒螯蟹Ⅲ期仔蟹、幼蟹、日本沼虾及伊乐藻、金鱼藻和苦草的毒性。试验结果表明,过氧乙酸对中华绒螯蟹Ⅲ期仔蟹的24、48、72h和96h的半致死质量浓度分别为39.36、34.36、30.55mg/L和28.05mg/L,安全质量浓度为7.86mg/L;对中华绒螯蟹幼蟹的24、48、72h和96h的半致死质量浓度分别为43.55、40.70、36.53mg/L和31.60mg/L,安全质量浓度为10.67mg/L,过氧乙酸对日本沼虾的24、48、72h和96h的半致死质量浓度分别为17.14、14.98、12.02mg/L和9.50mg/L,安全质量浓度为3.43mg/L。根据安全质量浓度可知,对过氧乙酸的耐受性顺序为中华绒螯蟹幼蟹Ⅲ期仔蟹日本沼虾。过氧乙酸对伊乐藻、金鱼藻和苦草的96h半有效质量浓度分别为20.13、39.78mg/L和33.67mg/L,因此,在蟹塘使用过氧乙酸消毒时,用量需控制在3.43mg/L以下,防止过氧乙酸的药害。     

低氧和复氧对日本沼虾抗氧化酶活力及组织结构的影响

为研究低氧胁迫及恢复后日本沼虾(Macrobrachiumnipponense)抗氧化酶活力和组织结构的变化,将体重(2.0±0.2) g的日本沼虾暴露于(2.0±0.2) mg/L低氧环境中24 h,设定溶解氧(6.0±0.2) mg/L为对照组,每组设置3个重复,于低氧胁迫0 h、6 h、12 h、24 h及复氧1 h、6 h、12 h、24 h分别采集实验组及对照组鳃、肝胰腺及肌肉组织,测定这些组织的抗氧化酶活力,并进行组织切片观察。实验结果表明,低氧胁迫期间肌肉组织中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活力先升高后下降, 3种酶活力在低氧胁迫12 h时显著高于对照组(P0.05),复氧阶段肌肉组织中SOD、CAT酶活力呈波动性变化,GPX酶活力在复氧24h时显著低于对照组(P0.05)。鳃组织中SOD、CAT和GPX酶活力在低氧胁迫12 h时显著高于对照组(P0.05), GPX酶活力在复氧24 h时显著高于对照组(P0.05)。在低氧胁迫期间肝胰腺SOD、CAT和GPX酶活力在低氧6 h均达到最大值并显著高于对照组(P0.05),复氧阶段3种酶活力均呈现波动性变化,肝胰腺中丙二醛(MDA)含量在低氧及复氧阶段均显著高于对照组(P0.05)。低氧胁迫及恢复并未对肌肉组织结构产生明显的影响。鳃组织在低氧胁迫期间鳃小片上皮细胞与支柱细胞排列发生紊乱,次级层片发生肥大的现象且有红细胞流入,泌氯细胞形态发生变化且细胞数目有所增加,但复氧后均得到一定程度的恢复。肝胰腺组织在低氧胁迫期间B细胞数量逐渐降低,胞内运转泡体积减小,复氧阶段B细胞数量及体积恢复明显。结果表明急性低氧胁迫能够导致日本沼虾肝胰腺和鳃组织结构损伤并引起抗氧化酶活力发生显著变化,且24 h恢复期不足以让日本沼虾在低氧胁迫中完全恢复。     

日本沼虾瞬时耗氧速率与体长及溶氧水平的关系

为了研究不同体长及水体溶氧水平对日本沼虾瞬时耗氧速率的影响,以体长分别为1.65、2.49、3.71、4.56、5.61、6.18 cm的日本沼虾为试验对象,在水温26 ℃的条件下,采用密闭呼吸室法,测定其耗氧量随时间的变化状况。结果表明:日本沼虾的瞬时耗氧速率[Vt,mg/(g·h)]随时间(t,h)的增加而下降,随着体长的增长,Vt的下降速度也逐渐降低,且呈良好的幂函数关系;在适宜的溶氧量范围内,Vt随水体溶氧量(DO,mg/L)的降低而降低,且分别呈良好的线性关系,日本沼虾的呼吸类型属于顺应型;Vt随着虾体长(L,cm)的增长而降低,呈良好的线性关系。     

咪唑类物质KK-42对日本沼虾免疫功能的影响

为评估咪唑类物质KK-42对日本沼虾免疫相关基因表达及抗菌机能的影响,将处于蜕皮间期的日本沼虾分别用1.95×10~(-4) mol/L的KK-42溶液或不含KK-42的溶液浸泡1min,测定处理后3、6、12、24h和48h细胞质锰超氧化物歧化酶、线粒体锰超氧化物歧化酶和血蓝蛋白基因的表达以及相应酶活力的变化;KK-42处理12h后,腹部注射嗜水气单胞菌,测定感染后日本沼虾的死亡率。结果显示,KK-42处理后3、6、12h,细胞质锰超氧化物歧化酶、线粒体锰超氧化物歧化酶和血蓝蛋白基因表达明显提高,超氧化物歧化酶活力和血蓝蛋白含量也于6~48h持续升高,在24h达到最高值。KK-42预处理可以降低感染嗜水气单胞菌后日本沼虾的死亡率。试验结果表明,KK-42可诱导日本沼虾免疫相关基因的表达,并能提高日本沼虾的抗菌能力。     

左旋咪唑对中华绒螯蟹非特异性免疫功能及抗病力的影响

为测定在饲料中添加左旋咪唑(LMS)对中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)的免疫调节作用,以0(对照)、100、200和300 mg·kg~(-1)干饲料的剂量将LMS添加于基础饲料中制成颗粒饲料,投喂中华绒螯蟹7 d,然后投喂不含LMS的对照组饲料。在投喂含LMS的饲料之前(0周)和投喂后2、4、6、8周,采样测定中华绒螯蟹的血细胞总量(THC)、不同血细胞数量(DHC)、吞噬活性、呼吸爆发(超氧阴离子的释放)、酚氧化酶(PO)活性和溶菌酶(LSZ)活性;并在投喂含LMS的饲料后的第4周,按1.2×10~7cfu·kg~(-1)体重的剂量,体腔注射接种中华绒螯蟹致病性嗜水气单胞菌(Aeromonas hyrophila)CL99920菌株,记录接种10d后中华绒螯蟹的累积死亡率。结果显示,各LMS处理组的血细胞总量(THC)、透明细胞(HC)数量、吞噬百分率、呼吸爆发、PO活性和LSZ活性均显著地高于对照组(P<0.05);颗粒细胞(GC)数量、血细胞吞噬指数与对照组无显著差异(P>0.05);LMS处理组的蟹对嗜水气单胞菌的抵抗力明显增强。研究表明,饲喂适量的LMS可增强中华绒螯蟹的免疫力和抗病力;在本试验条件下,200 mg·kg~(-1)干饲料的剂量为最适添加剂量。     

应用流式细胞术检测虾类血细胞总数方法的建立

通过对流式细胞术(FCM)检测虾类血细胞总数(THC)的条件和方法进行优化,为虾类血细胞学研究提供快捷、准确的测定方法。2012年7-9月,应用SYBR Green I作为荧光染料标记完整血细胞,设置3个不同染料浓度(1×、10×和100×),测定不同孵育时间下染色细胞比例的变化。结果显示,染料终浓度为10×时染色效果最佳,其最佳孵育时间为60 min;应用建立的FCM方法和显微计数方法测定10尾凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)的THC,平均值分别为(16.68±1.57)×106个/m L和(15.09±1.76)×106个/m L,2种方法测定结果的相关性极显著(R2=0.8064,P<0.01)。凡纳滨对虾经不同浓度(0.5 mg/L和5.0 mg/L)的Cd2+胁迫,利用建立的FCM方法测定Cd2+胁迫下对虾THC的变化。结果显示,0.5 mg/L和5.0 mg/L Cd2+胁迫下,对虾THC随着胁迫时间的延长不断下降,胁迫48 h时分别下降至对照组的78.7%和64.7%,可见Cd2+胁迫对虾类血细胞产生毒性,抑制了血细胞活性,表明该方法适用于虾类的血细胞学研究。     

饥饿胁迫对虾夷扇贝几种免疫因子的影响

在(17±1)℃条件下,研究了壳长(8.83±0.52)cm的虾夷扇贝在不同饥饿时间(5、10、15、20、30 d)处理后,血液中血细胞总数、血细胞吞噬水平、酸性磷酸酶、过氧化物歧化酶的变化。结果表明,扇贝的血细胞总数随着饥饿时间的延长逐渐降低,饥饿20 d以上的扇贝血细胞数明显降低,与投喂组差异极显著(P<0.01),扇贝血细胞吞噬率和酸性磷酸酶活性呈现出先小幅上升后下降的趋势,饥饿253、0 d与投喂组差异显著(P<0.05),饥饿253、0 d的扇贝过氧化物歧化酶的活性有所升高,饥饿30d,与投喂组差异显著(P<0.05)。试验表明,饥饿超过20 d,扇贝的免疫系统受到较为严重的破坏。     

饲料铜含量对亚硝酸盐胁迫下斑节对虾血细胞的影响

研究了饲料铜离子含量对亚硝酸盐胁迫下斑节对虾（Penaeus monodon）血细胞参数的影响。向斑节对虾投喂不同铜离子添加量（0,10,25,40,55和110 mg/kg）的饲料8周后,进行24 h 的20 mg/L亚硝酸氮胁迫,取样测定对虾的血细胞总数（THC）、血细胞活性氧（ROS）含量和血细胞凋亡率。结果显示,经亚硝酸盐胁迫后,25-55 mg/kg饲料组对虾能保持较高的THC,以及较低血细胞ROS含量和凋亡率;110 mg/kg饲料组对虾的THC最低,血细胞ROS含量和凋亡率均最高。这些结果表明饲料中添加25-55 mg/kg的铜离子能有效降低亚硝酸盐胁迫对血细胞造成的氧化损害,但过量添加（110 mg/kg）反而对血细胞造成更为严重的损害。     

氨氮胁迫对中国明对虾血淋巴氨氮、尿素氮含量和抗氧化能力的影响

将600尾体重为(5.0±1.2)g的健康中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)随机分为5组,每组6个重复,每个重复20尾虾,分别暴露于不同氨氮质量浓度(0 mg/L、2 mg/L、4 mg/L、6 mg/L和8 mg/L)海水中,于胁迫后6 h、24 h、48 h、72 h和96 h测定血淋巴氨氮、尿素氮含量、总抗氧化能力(T-AOC)、抗超氧阴离子活力和血淋巴细胞过氧化氢酶(CAT)基因、过氧化物还原酶(Prx)基因和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)基因的相对表达量,以0 mg/L氨氮组作为对照。结果显示,随着氨氮胁迫时间的延长,中国明对虾血淋巴氨氮含量逐渐积累,以8 mg/L组对虾血淋巴氨氮含量最高,是对照组的5.85倍。氨氮胁迫6 h,胁迫组中国明对虾血淋巴尿素氮含量显著高于对照组(P0.05),其中6 mg/L组对虾血淋巴尿素氮含量最高,是对照组的2.22倍。氨氮胁迫下中国明对虾血淋巴T-AOC、Prx mRNA相对表达量随着取样时间推移先升高后降低,而血淋巴抗超氧阴离子活力、CAT和caspase mRNA相对表达量随时间增加呈现先上升后下降再上升的变化过程。氨氮胁迫下中国明对虾血淋巴抗氧化能力被显著诱导,这可能破坏机体的氧化-抗氧化系统的平衡,从而导致caspase mRNA相对表达量的上调。     

左旋咪唑对罗氏沼虾免疫功能及抗病力的影响

以0(对照)、50、100和150 mg/kg饲料的剂量将左旋咪唑(LMS)添加于基础饲料中制成颗粒饲料投喂罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)14 d,采样测定了罗氏沼虾血细胞吞噬活性、血清酚氧化酶(PO)、溶菌酶(LSZ)及超氧化物岐化酶(SOD)活性,并以6×105cells/mL浓度的致病性嗜水气单胞菌(Aerom onas hydrophila)对罗氏沼虾进行肌肉注射(20μL/尾),记录接种7 d后罗氏沼虾的累积死亡率。结果表明,3个LMS处理组的罗氏沼虾血细胞吞噬百分比和吞噬指数、血清PO、LSZ及SOD活性均显著地高于对照组(P<0.05);LMS处理组的罗氏沼虾对嗜水气单胞菌的抵抗力明显增强。因此,饲喂适量的LMS能促进罗氏沼虾的免疫力和抗病力;在本试验条件下,100 mg/kg饲料的剂量为最适添加剂量。     

Effects of different dosages of astaxanthin on giant freshwater prawn Macrobrachium rosenbergii (De Man) challenged with Lactococcus garvieae

The effects of astaxanthin (AX) injected at 0.67 and 1.34 nmol g^?1 BW^?1 on the survival, antioxidant capacity, total haemocyte count (THC) and hepatopancreas astaxanthin content of giant freshwater prawn, Macrobrachium rosenbergii, challenged with Lactococcus garvieae were evaluated. AX‐injected M. rosenbergii at 1.34 nmol g^?1 BW^?1 had significantly (P≤0.05) higher survival rates. However, AX showed no significant effects on the capacity of certain antioxidant indicators (superoxide dismutase, glutathione peroxidase and glutathione reductase). This implies that L. garvieae infection suppressed the activity of the haemolymph antioxidant system of infected M. rosenbergii. This result suggests that the two different dosages used in this study could not exert significant effects on the tested antioxidant capacity of L. garvieae‐infected M. rosenbergii. On the other hand, AX‐injected M. rosenbergii at either dose showed a significant increase in the THC and hepatopancreas AX content when compared with the challenged control group. Overall, the results of this study indicate that the injected AX led to an improvement in M. rosenbergii's resistance against L. garvieae infection.     

5种药物对三角帆蚌幼蚌的急性毒性作用

为了在鱼蚌混养生产中科学使用杀虫药物提供参考数据,采用静态急性毒性法对三角帆蚌（Hyriopsis cumingii）幼蚌进行毒理学试验。5种常见药物对三角帆蚌幼蚌48hLC50、96hLC50、安全浓度（SC）,草甘膦为27.46、25.62、2.56mg/L;吡喹酮为0.4491、0.1516、0.0152mg/L;甲苯咪唑为48.47、23.12、2.31mg/L;苯扎溴铵为8.749、2.977、0.298mg/L;阿维菌素为0.0137、0.00444、0.00044mg/L。从急性毒性特征分析,5种药物对三角帆蚌幼蚌的毒性高低依次为：阿维菌素〉吡喹酮〉苯扎溴铵〉甲苯咪唑〉草甘膦。     

氨氮胁迫对奥尼罗非鱼非特异性免疫的影响

将奥尼罗非鱼（Oreochromis niloticus× O. areus）幼鱼暴露于不同质量浓度（0、2.5 mg·L -1、5 mg·L -1、10 mg ·L -1和20 mg·L -1）的氨氮溶液中,于第0、第12、第24、第48和第72小时测定其非特异性免疫相关指标。结果表明,试验幼鱼经氨氮胁迫后各试验组血清溶菌酶活力随着胁迫时间的延长下降显著（P ﹤0.05）。氨氮胁迫明显影响鱼肝脏总抗氧化能力（T-AOC）及相关抗氧化酶活力。与对照组相比,随胁迫时间增加各试验组肝脏 T-AOC 及总超氧化物歧化酶（T-SOD）活力均先下降后上升（P ﹤0.05）。过氧化氢酶（CAT）及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力变化还与胁迫溶液浓度相关。低浓度组（2.5 mg·L -1和5 mg·L -1）,CAT 活力在胁迫24 h 后显著下降（P ﹤0.05）;高浓度组（10 mg·L -1和20 mg·L -1）,CAT 活力却出现先升高后降低的变化。除最高浓度组,各试验组 GSH-Px 活力表现为诱导效应（P ﹤0.05）。试验条件下氨氮胁迫对罗非鱼非特异性免疫产生明显影响,且随浓度增加及时间延长影响程度加大。