冷、热休克法诱导黄颡鱼三倍体的比较研究

分别采用冷、热休克抑制第二极体释放的方法诱导黄颡鱼三倍体。结果表明,在卵受精后2min,5℃处理20min,胚胎时期的三倍体率达70%左右,孵化率50%左右,幼鱼时期三倍体(含嵌合体)的检出率为25%,此条件为冷休克处理的优化参数;在卵受精后2min,40℃处理2min,胚胎时期的三倍体诱导率达58%,孵化率为39%,幼鱼时期三倍体(含嵌合体)的检出率为40%,此条件为热休克处理的优化参数。正交分析得出,冷休克条件下起始休克时间是原肠期三倍化率和孵化率的重要影响因子,温度对畸形个体的产生有重要影响;热休克条件下,参考三倍体率、畸形率、孵化期相对存活率三者而言,休克温度均是重要因素。比较观察到冷休克处理组的胚胎受损情况严重,后期的成活率较热休克处理组要低,总体诱导效果逊于热休克处理组。     

红鳍东方鲀三倍体诱导的初步研究

通过冷休克的方法诱导红鳍东方鲀的受精卵,孵化后的仔鱼,用PAS-Ⅲ型细胞流速仪测定其倍性,得到较高的三倍体诱导率。受精后8 min,0℃下处理15 min和受精后5 min,2℃下处理15min三倍体率最高,为100%;受精后8 min,4℃下处理10 min倍化率最低,为20%;其余几组的三倍体率为90%。正交试验结果表明,影响三倍体诱导率的主次顺序是处理时间、处理温度、处理起始时间。     

冷休克法和静水压法人工诱导大黄鱼三倍体

同时采用冷休克法和静水压法进行大黄鱼（Pseudosciaena crocea Richardson）倍体诱导条件研究，同时比较适合条件下两种方法诱导效果差异以及大批量诱导组不同生长阶段三倍体榆出率的差别。结果表明：（1）冷休克法和静水压法都可成功诱导出大黄鱼二倍体。冷休克法适宜诱导条件为20℃培育水温下授精后3min，在3～4℃海水中处理8～10min；静水压法适宜诱导条件为同样培育水温下授精后3min，在静水压450kg／cm^2下处理3min。三倍体诱导率受处理时刻、处理时间和处理温度（或压力）3因素的影响。（2）综合三倍体诱导率、处理后受精卵原肠期存活率和仔鱼孵化率，静水压法诱导效果要明显优于冷休克法。（3）采用冷休克法进行大黄鱼三倍体大批量诱导，早期胚胎、初孵仔鱼和4月龄幼鱼三倍体检出率分别为34．03％、29．54％和14.81％。表明随生长发育诱导组三倍体检出率有下降趋势。     

热休克诱导马苏大麻哈鱼三倍体的初步研究

为探索马苏大麻哈鱼(Oncorhynchus masou)三倍体育种技术方法,更好地解决其个体小、生长慢和性成熟后死亡率高等问题,采用热休克法进行三倍体诱导实验,设4个诱导温度(24、26、28、30℃),2个起始诱导时间(15 min、20 min)和2个持续诱导时间(15 min、20 min)共分13个实验组和1个对照组。结果显示,13个实验组均能诱导出三倍体个体,而不同温度组的诱导率差异显著,分别为13.3%、31.65%、52.28%和78.81%(P<0.0.5)。随着温度的上升,孵化率呈显著降低的趋势。结果表明,温度是影响诱导成功的关键因素,利用热休克诱导受精卵制备陆封型马苏大麻哈鱼三倍体苗种的方法是可行的,三倍体诱导的最佳条件是:水温28℃,卵子受精后15 min持续处理20 min,发眼率(72.57±0.26)%,孵化率(60.92±0.31)%,三倍体率53.1%,综合诱导效果最佳。     

双斑东方鲀三倍体育苗生产性研究

研究了双斑东方鲀三倍体的诱导方法、技术参数的筛选及生产性育苗的模式.采用温度休克方法诱导双斑东方鲀三倍体,在水温18～20℃条件下,卵受精后5 min用40℃的水温处理双斑东方鲀受精卵10 min,三倍体诱导率100%,孵化率相对诱导量达25%;育苗采用前期室内工厂化培育与后期土池培育相结合方法,培育出全为三倍体(体长3 cm以上)苗种5.8万尾,对应孵出苗量,成活率为34.6%.     

静水压休克法诱导三倍体鲶鱼（silurus asotus L）的研究

采用静水压休克法诱导三倍体鲶鱼。通过对受精时间、静水压力及持续施压处理时间三方面进行筛选试验的结果表明，鲶鱼卵受精4－5min，用600－649kg/cm^2的静水压力处理3min，可以获得100％的三倍体鲶鱼，而且胚胎存活率也较高，孵化率达对照组的90％以上，是静水压休克法诱导三倍体鲶鱼的最佳条件。三倍体鲶鱼的倍性用细胞遗传学方法验证。     

诱导虹鳟鱼四倍体的初步研究

利用静水压法和热休克法对虹鳟鱼(Oncorhynchus mykiss)受精卵进行处理,诱导四倍体.对发育至原肠后期的胚胎进行染色体制备并计数,结果显示热休克处理组的四倍体诱导率为5.5%,静水压处理组的诱导率为22.8%,静水压的诱导效果明显优于热休克.最佳的开始处理时间为受精后340min,静水压力为650 kg/cm2,处理持续时间为5min.     

人工诱导泥鳅雌核发育试验

用经UV灭活的野鲤精子激活泥鳅卵,以冷休克与热休克二种方式诱导激活卵的染色体加倍。冷休克组进行休克起始时间、持续时间二参数组合试验,休克起始时间分别为3min、4min、5min,持续时间为20min、25min,休克处理温度0℃-3℃。热休克组休克起始时间为3min35s,持续时间为2min,休克处理温度为39℃-41℃。结果:冷休克组各组合均得到雌核发育二倍体泥鳅苗,以休克起始时间为3min、持续时间为25min组合雌核发育二倍体的诱导率最高,达28.8%-34.1%。热休克组雌核发育二倍体诱导率52.1%-56.3%,与冷休克各组合间均存在极显著差异(P0.01),诱导效果显著好于冷休克组。泥鳅苗经12d培育,冷休克组成活率28.6%,全长0.7-1.6cm;热休克组成活率43%,全长0.5-1.4cm;对照组成活率70.5%,规格与冷休克组相当。     

三种香港牡蛎三倍体幼虫诱导方法的效果比较

以卵裂率、D形幼虫发生率、三倍体率等为指标,比较了高盐、低温及咖啡因诱导香港牡蛎(Crassostrea hongkongensis)三倍体幼虫的效果,同时也分析了诱导因子强度(或浓度)、持续时间、受精卵密度及受精后开始处理时间对诱导效果的影响。结果表明,高盐诱导三倍体的最适条件组合是在卵子密度1.0×107个/L的情况下受精后15 min,用盐度40的海水持续处理10 min,此时卵裂率为(39.60±2.14)%, D形幼虫发生率为(31.46±1.06)%,三倍体率可以达到(59.53±5.90)%;低温诱导三倍体的最适条件组合是密度为2.0×10~7个/L的卵子在受精后15 min,用10℃海水持续处理10 min,此时卵裂率为(21.00±4.90)%, D形幼虫发生率为(12.68±1.21)%,三倍体率为(51.09±2.67)%;咖啡因诱导三倍体的最适条件组合是卵子密度为1.0×10~8个/L,用咖啡因终浓度2.0g/L的海水在受精后15min,持续处理20 min,卵裂率为(85.46±4.78)%, D形幼虫发生率为(71.79±3.92)%,三倍体率可以达到(56.36±2.07)%。最适诱导条件下,咖啡因的诱导效率指数0.405高于高盐处理0.187、低温处理0.065。高盐及低温处理方法诱导出的幼虫三倍体率随生长降低极快且存活率低于咖啡因诱导方法,说明3种方法中咖啡因可能更适合用于香港牡蛎三倍体幼虫的诱导。本研究为香港牡蛎三倍体育种提供了基础数据和实践经验。     

CB诱导熊本牡蛎三倍体及其存活率与倍化率的变化关系

为诱导熊本牡蛎三倍体，研究了细胞松弛素B (CB)浓度、诱导起始时间、诱导持续时间等因素对卵裂率、D幼率、三倍体率的影响，并分析了幼虫、稚贝及成贝的存活率和三倍体率的变化特征。结果显示，CB浓度为0.5~0.6 mg/L，诱导起始时间为40%受精卵释放第一极体，诱导持续时间为20 min时可获得87%的三倍体率。卵裂率、D幼率、三倍体率的最大影响因素分别为CB浓度、诱导持续时间、诱导起始时间与诱导持续时间。三倍体率与卵裂率无显著负相关性，而与D幼率呈显著正相关。因此，减小CB浓度或诱导持续时间，可同时获得较高的三倍体率与幼虫产量。3~15日龄三倍体组与对照组的存活率分别由71.27%与96.09%降低至34.14%与58.80%，成贝期450日龄(9月)三倍体组与对照组的存活率分别为53.62%与44.67%。3~9日龄三倍体率从87%降低至77%，而90~450日龄三倍体率平均值为59.21%±4.99%，表明幼贝与成贝期三倍体率变化较小，三倍体率的维持与存活率无显著相关性。