鳜黏膜淋巴组织结构的初步研究

采用组织学和电镜技术,应用HE常规染色方法、AB-PAS黏液细胞染色方法、免疫组织化学方法,对鳜(Siniperca chuats)黏膜淋巴组织的基本结构以及免疫相关细胞的形态、类型及其在黏膜淋巴组织中的分布情况进行了研究.结果表明,鳜的鳃弓、鳃小片基部、皮肤的表皮以及肠上皮中存在大量的黏液细胞,用AB-PAS染色方法将鳜黏液细胞分为6种类型;免疫组化方法可在鳃的血窦腔、皮肤的基底层以及肠黏膜层中检测到抗体分泌细胞的存在;透射电镜观察显示,黏膜淋巴组织中存在着黏液细胞、淋巴细胞、浆细胞、吞噬细胞、肥大细胞、朗罕氏细胞、嗜中性粒细胞等免疫相关细胞.结论认为,鳜黏膜淋巴组织具有完成免疫应答的细胞基础.     

泥鳅的养殖技术

一、泥鳅的习性与特点泥鳅体细长,前部圆筒形,尾部侧扁,头较尖,须5对,体披细小鳞,黏液丰富,适宜钻洞。泥鳅为底栖鱼类,喜栖息于泥沙底的浅水体,白天常钻入泥土中,夜出活动觅食。泥鳅除用鳃呼吸外,肠和皮肤也有呼吸作用,当水中缺氧时,游到水面吞空气在肠内进行气体交换。如     

真鲷幼鱼消化道组织学研究↑（*）

６月龄真鲷（Ｐａｇｒｏｓｏｍｕｓｍａｊｏｒ）幼鱼通过解剖,切片、染色和显微摄像,结果表明：整个消化道从解剖水平可以分为口、口咽腔、食道、胃、肠及直肠等６个功能区。口部有犬齿、臼齿和不规则的粒状齿;口腔内有咽（含咽齿）及鳃耙,鳃耙形成了对食物颗粒的屏障,面向食管保护鳃丝;短的食管起源于咽腔,终止于胃,两者间没有明显的解剖上的差别;Ｙ型的胃分为贲门部、幽门部和胃盲囊３部分。组织学观察可见：胃由单层柱状上皮细胞组成,在贲门区和幽门区的上皮层下面,具有相似细胞组成的胃腺;有４个幽门盲囊,幽门盲囊与肠组织结构基本一致。胰腺管和肝管从幽门盲囊的基部生出。肠道短,肠道前部起源于幽门括约肌之后,在肠瓣处变窄,使整个肠道分为肠和直肠两部分;肠与直肠相比粘膜上有较多的褶皱;肠道上皮由柱状上皮细胞和粘液分泌细胞组成,粘膜下层有致密的结缔组织和大量嗜酸性颗粒的细胞。     

盐度对大鳞副泥鳅抗氧化酶及组织结构的影响

为研究盐度对大鳞副泥鳅（Paramisgurnusdabryanus）Na+-K+-ATP酶（NKA）、抗氧化酶活性及组织结构的影响,试验设置4、8、12共3个盐度组和一个淡水组（对照）,以全长（17.60±0.69）cm,体质量（35.51±5.30）g的大鳞副泥鳅进行14 d胁迫试验。结果表明：盐度升高使鳃Na+-K+-ATP酶活力上升,第7 d 时3个试验组Na+-K+-ATP酶活性均达到峰值且盐度8和12组显著高于淡水组（P<0.05）。肝脏SOD和CAT活性均表现为先上升后下降的趋势,且分别于胁迫12 h和2 d时达到最大值;3个盐度组的GSH-PX酶活性在6 h和12 h均有所升高,且盐度12组显著高于淡水组（P<0.05）。盐度4、8和12组肝脏MDA含量分别在第1 d和7 d达到最大值且显著高于淡水组（P<0.05）。组织切片结果显示,盐度12组的鳃小片变窄,鳃小片间距变大,泌氯细胞数量增多;肝细胞空泡化严重,血窦扩张范围增大,并出现细胞轮廓模糊、细胞核偏移、细胞核溶解。上述结果表明,盐度胁迫对大鳞副泥鳅的Na+-K+-ATP酶、抗氧化酶活性具有显著的诱导作用,并对其鳃和肝组织造成损伤。     

鱼类几种烂鳃病的应对措施

鳃是鱼类重要的呼吸器官,由鳃弓、鳃耙和鳃丝组成.鳃丝组织分布许多毛细血管,水中溶氧通过鳃丝表皮细胞渗透进入血液达到气体交换.鲢鳙等滤食性鱼类通过鳃耙将水体浮游生物过滤进入食道而摄食.同时鳃具有调节体内渗透压作用,可以将过量氨氮等机体代谢产物经鳃器官排泄到体外,如果鳃组织发生病变,将直接破坏呼吸功能,威胁鱼类的生存.所以,在水产养殖过程中及时预防和治疗鳃病显得尤为重要.根据笔者多年生产实践总结,将鱼类烂鳃病的分类及应对措施介绍如下,供水产同仁参考. 1 寄生性烂鳃 1.1 流行季节 流行时间为每年4-9月. 1.2 主要症状 病鱼鱼体发黑,尾柄灰白,鳃盖张开难以闭合,鳃丝发白并参差不齐,鳃片表面黏液增多,鳃片腐烂,镜检可见大量寄生虫如:中华鳋、锚头鳋、指环虫、三代虫、车轮虫、孢子虫等. 1.3 防治方法     

长江流域泥鳅与大鳞副泥鳅种质资源调查与研究

对长江流域泥鳅和大鳞副泥鳅野生群体进行了系统资源调查,结果显示,二倍体泥鳅(2n)与多倍体泥鳅(3n,4n,5n)在长江流域均有分布,其中二倍体泥鳅数目占有绝对优势,少量多倍体泥鳅集中分布于长江流域中游地区及若干湖泊。此外,显著性分析表明,泥鳅和大鳞副泥鳅的雌性个体都显著大于雄性个体,两物种间个体大小无显著性差异。二倍体泥鳅的体长与体质量明显小于三倍体泥鳅及四倍体泥鳅,而三倍体泥鳅与四倍体泥鳅间无显著性差异。野生群体中,泥鳅雌性个体所占比例从上游到下游逐渐减少,大鳞副泥鳅无明显变化。相关性分析显示,泥鳅体质量与地域经度呈负相关,大鳞副泥鳅体质量与地域经度无显著相关性。研究表明,长江流域多倍体泥鳅和大鳞副泥鳅物种资源丰富。     

浸泡免疫迟钝爱德华氏菌疫苗诱导牙鲆黏液细胞的动态变化

为探明鱼类黏膜相关淋巴组织中黏液细胞对疫苗免疫的应答特性,本研究利用组织学和组织化学技术,研究了浸泡免疫灭活迟钝爱德华氏菌前后牙鲆皮肤、鳃、前肠、中肠和后肠中黏液细胞数量和特性的时序变化。苏木精-曙红(HE)、阿尔新蓝-过碘酸雪夫氏(AB-PAS)染色结果显示,免疫前皮肤主要分布含中性黏多糖的Ⅰ型黏液细胞以及含中性黏多糖和少量酸性黏多糖的Ⅲ型黏液细胞,鳃中可观察到Ⅰ、Ⅲ型以及含酸性黏多糖和少量中性黏多糖的Ⅳ型黏液细胞,前肠中主要分布Ⅰ型黏液细胞,中肠、后肠上皮中可观察到Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型和含酸性黏多糖的Ⅱ型黏液细胞。免疫后,牙鲆黏膜免疫相关淋巴组织中黏液细胞总量随时间呈现先增多后减少趋势,后肠在第5天达到峰值,其他于第3天达到峰值;免疫后各组织中Ⅰ型黏液细胞数量减少,含酸性黏多糖成分的Ⅱ、Ⅲ及Ⅳ型黏液细胞数量显著增多,表明疫苗免疫诱导黏液细胞成分由中性黏多糖向酸性黏多糖转变。p H 2.5和p H 1.0条件下AB染色结果显示,免疫后黏膜相关淋巴组织中酸性黏液细胞数量增多,且多数为硫酸化酸性黏液细胞。本研究结果为鱼类黏液的免疫防御功能及黏液细胞在鱼类黏膜免疫中的作用提供了理论依据。     

SDBS对大鳞副泥鳅胚胎发育及幼鱼性腺发育的影响

为了解十二烷基苯磺酸钠(SDBS)对大鳞副泥鳅(Paramisgurnus dabryanus)胚胎发育及幼鱼性腺发育的影响,将受精卵随机分成7组,分别置于0、0.1、0.3、0.5、1.0、2.5、5.0 mg/L SDBS溶液中充氧孵化,统计培育周期、孵化周期、孵化率和畸形率。选取均重为3 g左右健康的大鳞副泥鳅210尾,随机分成7组,分别置于0、0.1、0.3、0.5、1.0、2.5、5.0 mg/L SDBS溶液中饲养60 d,统计大鳞副泥鳅的死亡情况,取性腺制作组织切片,观察SDBS对大鳞副泥鳅幼鱼性腺发育的影响。结果显示:SDBS浓度≤1.0 mg/L时,对大鳞副泥鳅受精卵培育周期、孵化周期、孵化率和鳅苗畸形率无显著影响,SDBS浓度≥2.5 mg/L时,培育周期与孵化周期显著延长,孵化率显著下降,鳅苗畸形率显著上升。大鳞副泥鳅的死亡率随SDBS浓度的升高明显上升,SDBS浓度≥0.1 mg/L时显著抑制精巢发育。     

生态浮床对大鳞副泥鳅仔稚鱼气泡病及池塘生态的影响研究

为研究生态浮床对大鳞副泥鳅仔稚鱼气泡病及池塘生态的影响,设置生态浮床占培育池面积20%的试验组与不设浮床的培育池进行对比试验,分别测定养殖过程中水体的温度、溶氧量、氨氮、pH、透明度等指标以及水体中浮游植物的种类和数量;统计大鳞副泥鳅仔稚鱼气泡病发病死亡情况,计算累积死亡率;测量试验结束时大鳞副泥鳅仔稚鱼的终末平均体长和体质量,计算日增重率。根据试验数据分析研究了水环境中的理化因子、浮游植物等与大鳞副泥鳅仔稚鱼气泡病的关系。结果显示,试验组池塘累积死亡率为7.3%,而对照组池塘累积死亡率达35.5%。研究表明,在大鳞副泥鳅仔稚鱼培育水体设置生态浮床,通过对水环境中微生物、藻类、浮游动物及理化因子的综合作用,能优化养殖生态系统的结构和功能,在维持大鳞副泥鳅仔稚鱼生存环境的稳定、提供适口饵料、抑制有害菌群、减少病害等方面有重要作用。     

人工培育四指马鲅鳃组织结构及其早期发育

采用组织切片和透射电镜技术对人工培育四指马鲅(Eleutheronema tetradactylum)鳃结构及其早期(1—35日龄)发育进行观察。结果显示,鳃耙列齿状,鳃丝梳状排列在鳃弓上,鳃小片排列在鳃丝两边。透射电镜下鳃小片主要由线粒体丰富细胞(Ⅰ型和Ⅱ型)、扁平上皮细胞、柱细胞、血细胞、黏液细胞和未分化细胞组成。四指马鲅鳃早期发育显示,1日龄鳃原基形成;3日龄出现鳃弓,有扁平上皮细胞和血细胞;5日龄出现鳃小片,鳃小片上有柱细胞,基部有线粒体丰富细胞;18日龄鳃小片增多,鳃结构完善;35日龄鳃结构基本和成鱼一致。根据发育特点将其分为3个阶段:第1阶段(0—3日龄)为原基期,鳃原基形成但未分化,仔鱼主要靠鳍褶、皮肤和卵黄囊上的微血管进行呼吸;第2阶段(4—17日龄)为鳃结构分化、发育期,鳃耙、鳃弓、鳃丝、鳃小片逐渐形成,具备鳃基本的结构特点;第3阶段(18—35日龄)为鳃结构完善期,鳃组织发育主要体现在数量和形状的变化。     

Antifreeze proteins in the urine of marine fish

Several species of marine teleosts have evolved blood plasma antifreeze polypeptides which enable them to survive in ice-laden seawater. Four distinct antifreeze protein classes differing in carbohydrate content, amino acid composition, protein sequence and secondary structure are currently known. Although all of these antifreezes are relatively small (2.6–33 kd) it was generally thought that they were excluded from the urine by a variety of glomerular mechanisms. In the present study antifreeze polypeptides were found in the bladder urine of winter flounder (Pseudopleuronectes americanus), sea raven (Hemitripterus americanus), ocean pout (Macrozoarces americanus) and Atlantic cod (Gadus morhua). Since the plasma of each of these fish contains a different antifreeze class it would appear that all four classes of antifreeze can enter the urine. The major antifreeze components in the urine of winter flounder were found to be identical to the major plasma components in terms of high performance liquid chromatography retention times and amino acid composition. It is concluded that plasma antifreeze peptides need not be chemically modified before they can enter the urine.     

Characteristics of the marine environment and algal blooms in Gamak Bay

This study was conducted to gain insight into the characteristics of algal blooms in relation to the marine environment of Gamak Bay. From the first known occurrence of algal blooms in 1984 until 2006, 23 causal species have been identified, the most common ones being Prorocentrum sp., Cochlodinium polykrikoides, Chaetoceros sp., Skeletonema costatum, and Heterosigma akashiwo. A principal component analysis indicated that blooms of these species develop under different conditions in terms of water temperature, salinity, precipitation, and insolation. Field data showed Cochlodinium polykrikoides to be favored by high temperatures and to be euryhaline, whereas Skeletonema costatum appeared to be eurythermal and euryhaline. Prorocentrum sp. and Chaetoceros sp. appeared to be stenothermal and stenohaline. Finally, Heterosigma akashiwo appeared at the lowest temperature and highest salinity of the five species and was classified here as stenothermal and stenohaline.     

Influence of the antibacterial herbs, Solanum trilobatum, Andrographis paniculata and Psoralea corylifolia on the survival, growth and bacterial load of Penaeus monodon post larvae

The indiscriminate use of antibiotics and chemicals in shrimp hatcheries has led to biomagnification and that in turn could lead to rejection of a whole consignment. The application of the bioencapsulation technique as a tool for curative treatment in shrimp larvae was investigated. Herbs having antibacterial properties such as Solanum trilobatum, Andrographis paniculata and Psoralea corylifolia (methanolic extracts) were bioencapsulated in Artemia and fed to Penaeus monodon post larvae PL 1–25. The post larvae were reared in a medium inoculated with pathogenic bacteria such as Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Salmonella typhi and Vibrio sp. Post larvae reared in the non-inoculated water and fed with non-enriched Artemia exhibited 90% survival, highest specific growth rate (12.43%) and reduced bacterial load. P. monodon reared in the bacterial inoculated water and fed with the non-enriched Artemia exhibited the lowest survival (10–30%), specific growth rate (8.42–9.1%) and increased bacterial load (2.86 × 10³ to 3.76 × 10⁵ cfu/g). The methanolic extracts of the herbs helped to increase survival and specific growth rate and reduced bacterial load in the P. monodon culture system. Among the three herbal extracts, P. corylifolia enriched Artemia fed post larvae showed the tendency to higher survival (>50%), growth rate (11.5 averaged) and low bacterial load (1.12 × 10⁵ cfu/g). This revised version was published online in August 2006 with corrections to the Cover Date.     

东太平洋公海茎柔鱼种群遗传结构初步研究

根据2009年7月到10月我国大型鱿钓渔船在东太平洋(81.9°～94.9°W,8.9°N～11.3°S)秘鲁和哥斯达黎加外海作业期间采集的样本,利用线粒体DNA细胞色素b基因的724 bp部分序列,分析了采自秘鲁7个采样点和哥斯达黎加3个采样点的155个个体的序列多样性与种群遗传结构.结果显示,724 bp片段中发现了16个变异位点,155个个体出现43个单倍型.序列多样性分析结果揭示,155个个体的平均单倍型多样性指数为0.873,核苷酸多样性指数为0.003 69.群体间共享6个单倍型,秘鲁外海茎柔鱼群体享有最多特有单倍型(20个).分子方差分析揭示,82.70％的遗传变异性出现在种群内；群体间的FST分析揭示部分秘鲁群体与哥斯达黎加群体,部分秘鲁群体间存在着显著的遗传分化；而哥斯达黎加群体内部不存在显著的遗传分化.     

Bioaugmentation in the growth and water quality of livebearing ornamental fishes

Bacillus subtilis isolated from the intestine of Cirrhinus mrigala (Hamilton) was incorporated into the rearing water of Poecilia reticulata (Peters), Poecilia sphenops (Valenciennes), Xiphophorus helleri (Heckel) and Xiphophorus maculatus (Gunther) at four different concentrations (5 × 10⁸ cells ml⁻¹, 5 × 10⁷ cells ml⁻¹, 5 × 10⁶ cells ml⁻¹ and 5 × 10⁵ cells ml⁻¹) and its effect on fish growth performance and survival, water quality parameters and bacterial population of water were assessed. The results showed that the addition of bacterial cells in the rearing water resulted in greater survival and a faster growth rate and, hence, greater length and weight increments of the livebearers. The use of a bioaugmentor in the rearing water of the livebearing fishes resulted in significantly lower (P < 0.05) concentrations of dissolved organic matter and total ammonium nitrogen. The counts of motile aeromonads and total coliforms recorded in the water of bioaugmented tanks were also lower than that in the control tank. Bioaugmentation between 10⁶ and 10⁸ cells ml⁻¹ in the rearing water is sufficient in establishing a bioaugmentor and the use of a higher concentration of bacterial cells did not always lead to significantly better results.     

二氧化锗对共培养萱藻丝状体和硅藻生长的影响

为抑制萱藻丝状体保存和扩增过程中出现的小伪菱形藻与碎片菱形藻的生长,本实验应用实验生态学方法,分别建立了丝状体与小伪菱形藻、丝状体与碎片菱形藻、丝状体与小伪菱形藻和碎片菱形藻的共培养体系,研究了1.00～4.00μg/mL二氧化锗(GeO_2)对共培养条件下丝状体生长发育及附生硅藻生长的影响。结果显示:(1)处理萱藻丝状体和硅藻共培养体系的适宜GeO_2浓度为1.00～2.50μg/mL,各实验组14 d的硅藻抑制率均高于67.33%±5.18%,且丝状体生长发育良好,2.00μg/mL为最适浓度,此浓度下丝状体日均增长率最高,在各培养体系中均大于11.00%,且诱导后孢子囊枝比例和孢子囊直径分别为57.47%±5.31%和(24.55±1.01)μm,与对照组差异不显著;(2) 3.50和4.00μg/mL GeO_2虽对硅藻抑制效果更佳,但同时也会抑制丝状体生长和后期孢子囊的形成与发育,其中4.00μg/mL GeO_2可导致丝状体死亡;(3)碎片菱形藻较小伪菱形藻对GeO_2更敏感。实验14 d,各浓度GeO_2对碎片菱形藻的抑制率为(82.10%±2.40%)～(96.35%±0.79%),均高于同浓度GeO_2对小伪菱形藻的抑制率;同时在丝状体与小伪菱形藻和碎片菱形藻的共培养体系中,碎片菱形藻占硅藻比例随GeO_2浓度升高而相应下降。     

青岛斋堂岛附近海域薛氏海龙繁殖生物学

根据2015年3-5月在青岛斋堂岛附近海域使用张网采集的1250尾薛氏海龙(Syngnathus schlegeli)样本,分析了该水域薛氏海龙的性比、副性征、性腺指数、性腺成熟度与卵径、育儿袋中胚胎等繁殖生物学特征。结果表明,青岛斋堂岛附近海域薛氏海龙春季繁殖种群雌雄比例分别为63.28%和36.24%,未成年个体占0.48%,雌雄比为1.75:1,明显偏离1:1的性别比例;繁殖群体中雄性个体的性腺指数始终保持在较低水平,为0.01%~4.85%,雌性个体相对较高,为0.05%~128.99%,二者差异极显著(P0.01);组织学观察发现,性腺在3—5月份迅速发育成熟,雄性排精后精巢腔中仍剩余较多精细胞,表明雄性个体为多次排精;雌性Ⅲ~Ⅳ期卵巢中均分布有不同时相的卵子,且卵径分布呈现两个峰值,表明雌性个体为分批产卵;根据雌性个体V期卵巢中成熟卵子的卵粒数与雄性个体育儿袋中的平均怀卵数基本相同,育儿袋中胚胎的发育阶段也基本一致,推测其交配模式可能为一雄一雌制,抑或是雄性在同一天内与多个雌性交配的一雄多雌制。斋堂岛附近海域薛氏海龙的交配模式还有待室内行为观察并结合微卫星标记等手段进一步确认。     

Use of Microbacterium sp. and Exiguobacterium mexicanum to improve the survival and development of Artemia under xenic conditions

The effect of Microbacterium sp. strain 8L and Exiguobacterium mexicanum strain 8N was evaluated in the diet of Artemia under xenic conditions. Viable cultures of bacteria were provided to xenic cultures of Artemia in combination with Sacharomyces cerevisiae, cornflour or Spirulina, and the effect on the survival and growth was recorded. The use of these bacterial strains improves significantly the survival of Artemia independently of the used food (P < 0.05), and variable results were observed in the growth.     

巨须裂腹鱼水霉菌的分离鉴定及其对脾脏转录组的影响

为分析感染水霉菌对巨须裂腹鱼脾脏转录组的影响，探索水霉菌感染巨须裂腹鱼的分子机制，实验随机选取生活在同一水域中的5尾健康和5尾感染水霉菌的巨须裂腹鱼，采用PDA琼脂培养基和分子生物学方法对巨须裂腹鱼水霉菌进行分离鉴定，并采用Illumina HiSeqTM 2000 高通量测序平台，对健康和感染水霉菌的巨须裂腹鱼脾脏组织进行转录组测序，并对测序数据进行拼接、注释和差异表达基因分析。结果显示，从巨须裂腹鱼皮肤上分离鉴定得到3株水霉菌；转录组数据显示，健康组和感染水霉病组分别获得46 619 504 条和43 912 876 条数据，与健康组相比，感染水霉菌组共有1 889 个基因发生差异表达，其中1 414 个基因上调，475 个基因下调，随机选取6个差异表达基因进行实时荧光定量PCR (RT-qPCR)验证，验证结果与转录组测序一致。对健康组和感染水霉菌组的差异表达基因进行GO功能富集发现，上调基因主要富集于241个功能中，下调基因主要富集于60个功能中，上述基因主要涉及分子功能类、细胞组分类和生物过程类等生理功能；KEGG通路富集分析发现，差异表达基因主要富集在免疫疾病、内分泌和代谢疾病、病毒感染性疾病、消化系统及排泄系统等。研究表明，感染水霉菌会影响巨须裂腹鱼脾脏组织多种基因的表达量，实验结果为进一步探索巨须裂腹鱼水霉菌的感染机制奠定了基础。     

大菱鲆内脏结节病病原的分离与鉴定

2017年8月,天津市滨海新区某养殖场大菱鲆(Scophthalmus maximus)发生病害,累计死亡率约为25%,患病鱼体表无明显症状。通过肉眼和病理组织切片观察发现,患病鱼肾脏、脾脏、肝脏和肠道存在大量圆形结节,肾脏、肝脏和脾脏组织病变明显,肾小管坏死,肝细胞脂肪变性,脾脏中存在大量的坏死细胞。此外,在脾脏和肾脏组织中发现大量的抗酸杆菌。利用传统病原菌分离方法,从具有典型症状的濒死大菱鲆肾脏组织分离到优势菌株myco-10,利用该菌株注射攻毒能导致健康大菱鲆66.7%的死亡率,且表现出与自然发病鱼相同的症状。采用16S rDNA、Hsp65、ropB基因序列分析,构建系统发育树并结合细菌形态特征、生理生化测试对菌株myco-10进行鉴定,结果显示,菌株myco-10的16SrDNA、Hsp65、ropB基因序列与分枝杆菌属细菌(Mycobacteriumspp.)相似度最高,且在系统发育树中与海分枝杆菌(Mycobacteriummarinum)和溃疡分枝杆菌(Mycobacteriumulcerans)聚为一簇,生理生化反应与海分枝杆菌一致。综合生理生化特征和基因序列分析结果,将菌株myco-10鉴定为海分枝杆菌。这是中国首例分枝杆菌引起大菱鲆病害的报道,可为大菱鲆内脏结节病的防治提供参考资料。