三倍体雌性虹鳟性腺发育阶段细胞色素相关基因的表达

Cyp19a1b、Cyp11a1、Cyp11b2、Cyp17a1、Hsd3b1等细胞色素相关基因能够调节硬骨鱼类性类固醇的合成,对性腺发育和性别决定产生影响。本研究以全雌三倍体虹鳟(Oncorhynchus mykiss)为研究对象,正常雌性二倍体虹鳟为对照,选取31~68 dpf(days post fertilization)时间段的虹鳟仔鱼脑组织,采用q RT-PCR和酶联免疫的方法研究以上几种基因的表达状况和脑芳香化酶的活性变化,以期探明导致三倍体雌性虹鳟性腺发育异常的关键原因。q RTPCR结果显示,二倍体中Cyp19a1b在30~50 dpf时表达量上调并且维持在较稳定水平,但50~56 dpf时表达量逐渐下调,之后56~68 dpf表达量持续上调;三倍体中Cyp19a1b表达量在30~35 dpf开始上调,35~47 dpf逐渐下调,47~55 dpf开始第二次上调,之后维持在较稳定水平直至68 dpf,但三倍体Cyp19a1b的表达量显著(P0.05)低于同期二倍体的。二倍体Cyp11a1表达量在34 dpf出现峰值,三倍体Cyp11a1在38 dpf时出现峰值。二倍体Hsd3b1表达量在33~42 dpf时维持在较高水平,在38 dpf时出现高峰;三倍体Hsd3b1表达量在47~59 dpf时较高,在49 dpf出现高峰。二倍体中Cyp11b2在37 dpf出现峰值,之后开始下调;三倍体在40 dpf出现峰值,之后逐渐下调,但三倍体Cyp11b2表达量显著低于同期二倍体。二倍体Cyp17a1的表达量在35~46 dpf时逐渐上升,在45 dpf时达到高峰之后直至69 dpf逐渐下降,并且维持在较为平稳的水平上;但是在相同的实验条件下未检测到同一时期三倍体Cyp17a1的表达量。酶联免疫结果显示,在40 dpf时二者的脑芳香化酶活性到达高峰,但在40~60 dpf时期,二倍体虹鳟脑芳香化酶活性显著(P0.05)高于三倍体虹鳟,尤其在45~50 dpf时,该酶活性分别较三倍体的高1.15倍和1.12倍。以上结果表明三倍体虹鳟早期性腺发育迟缓的原因之一是Cyp19a1b、Cyp11a1、Cyp11b2、Cyp17a1、Hsd3b1等基因的表达晚于二倍体,且表达量低于二倍体,造成雌二醇不能正常合成,最终导致性腺发育迟缓。     

中华鳖Gper基因克隆、表达及其在精巢中的功能

G蛋白偶联雌激素受体（Gper）是一种膜雌激素受体，介导雌激素的非基因组途径。为研究G蛋白偶联雌激素受体基因（ cDNA全长序列，利用qRT-PCR分析其在不同组织及胚胎不同发育阶段的性腺中的表达模式，并通过来曲唑（letrozole）和Gper抑制剂G-15处理雄鳖初步分析Gper在精巢中的作用。结果显示，中华鳖 cDNA序列全长2023 bp，包含705 bp 5''非编码区、241 bp 3''非编码区和1077 bp开放阅读框，编码358个氨基酸，其氨基酸序列上有7个跨膜结构域和Asp-Arg-Tyr（DRY）三联体结构，基因编码蛋白分子量为41.084 kD，等电点为6.844。表达量变化呈相同趋势：16期表达量最高，随着性腺分化过程表达量显著降低。Letrozole处理组中2表达量明显升高；G-15处理组精巢中，精子发生与促细胞凋亡相关基因表达量显著升高。结果表明，可能参与中华鳖性腺分化早期过程，并调控雄性生殖细胞增殖。     

17β－雌二醇诱导鲻鱼雌性化的机制：芳香化酶和雌激素受体双染定位研究

用免疫细胞化学双重染色技术和鼠抗人芳香化酶抗体、兔抗人雌激素α受体与β受体亚型(ER-α和ER-β)抗体、兔抗人雌激素(E2)抗体，对鲻鱼(Mugil cephalus)脑各部位进行定位研究。结果显示，芳香化酶和E2、芳香化酶和ER-α、芳香化酶和ER-β、ER-α和E2的双染免疫活性物质分布在鲻鱼嗅脑、大脑、间脑和小脑的神经细胞的胞核或胞质及其突起或神经纤维上。值得指出的是，鲻鱼下丘脑视前区芳香化酶免疫活性细胞上共存有雌激素α受体与β受体亚型，提示E2诱发鲻鱼雌性化的作用机制是，E2先与芳香化酶样神经细胞上的雌激素受体结合，而后激发与性分化相关的芳香化酶基因的表达。     

黄连素对高脂诱导的斑马鱼肝脏细胞脂质代谢的影响

为研究黄连素对高脂诱导的斑马鱼肝脏细胞脂质代谢组学的影响,以斑马鱼细胞为实验材料,通过棕榈酸钠(0.25mM,24h)诱导肝脏细胞脂质沉积模型,经黄连素(25μM,6h)处理后收集细胞。采用高效液相色谱-质谱联用技术进行脂质代谢组学分析,对不同处理的斑马鱼肝脏细胞的脂质代谢物进行筛选鉴定并对脂代谢相关因子的基因表达进行检测。结果显示,与对照组相比,高脂组共筛选出1761个差异离子,其中鉴定出147种差异代谢物,123个升高、24个降低;高脂+黄连素组共筛选出2728个差异离子,其中鉴定出346种差异代谢物,139个升高、207个降低。与高脂组相比,高脂+黄连素组共筛选出1605个差异离子,其中鉴定出259种差异代谢物,45个升高、204个降低。进一步对不饱和脂肪酸代谢通路研究发现,差异代谢产物二高-γ-亚麻酸(DGLA)和二高-α-亚麻酸(ETA)含量在高脂组中显著上升(P < 0.05),且添加了黄连素后含量显著下降(P < 0.05);与对照组组相比,高脂+黄连素组的DGLA和ETA含量并无显著差异。通过检测DGLA和ETA分解相关酶的基因(ATGL、HSL)表达量发现,与对照组相比,高脂组两者均显著(P<0.05)降低,添加了黄连素后均显著(P<0.05)升高;检测合成相关酶基因(ACC、Elovl6、Elovl7a、SCDb、FAS、FADS2)的表达量,结果显示,与对照组相比,高脂组组细胞内ACC、Elovl6和SCDb的表达量显著(P<0.05)升高,FADS2表达量显著(P<0.05)降低,而添加了黄连素后细胞内FADS2的表达量显著(P<0.05)升高,FAS、Elovl6、SCDb表达量显著(P<0.05)降低。综上所述,高脂诱导通过抑制脂质分解相关基因表达,促进脂质合成相关基因的表达进而引起脂肪在细胞中的过度沉积,添加适量黄连素可以显著改善这一现象。     

壬基酚对雌鲫受体表达和雌二醇水平的影响

研究了环境激素壬基酚（4-NP）在雌鲫体内的对雌激素受体的表达和雌二醇水平的影响。雌鲫腹腔注射1、50、100 mg·kg-1的4-NP或1 mg·kg-1的E2，分别在24 h和48 h提取肝脏RNA用RT-PCR查看α型雌激素受体（ER-α）和CYP1A的表达情况和提取血清用荧光免疫法测定E2浓度。结果表明：1 mg·kg-1 E2 处理组的ER表达在24 h和48 h有显著性增加（P<0.01）。1 mg·kg-1 4-NP处理组在24 h ER表达与对照组比较有极显著性增加（P<0.01），在48 h有显著性增加（P<0.05），E2浓度在24 h与对照组比较有显著性下降（P<0.05），但在48 h后有所回升；CYP1A表达在处理后24 h有显著上调（P<0.05），在48 h后有极显著上调（P<0.01）。50 mg·kg-1 4-NP处理组在24 h ER表达与对照组比较有极显著性增加（P<0.01），在48 h有显著性增加（P<0.05），E2浓度在24 h和48 h与对照组比较有极显著性下降（P<0.01）；CYP1A表达在处理后24 h有显著上调（P<0.05），在48 h后有极显著上调（P<0.01）。100 mg·kg-1 4-NP处理组ER表达在24 h和48 h与对照组比较有极显著性增加（P<0.01），E2浓度在24 h与对照组比较有显著性下降（P<0.05），在48 h有极显著性下降（P<0.01）；CYP1A表达有极显著上调（P<0.01）。随着4-NP注射量的增加，ER表达也逐渐增加，而E2浓度逐渐减少。ER表达上调效应：E2>100 mg·kg-1 4-NP >50 mg·kg-1 4-NP >1 mg·kg-1 4-NP，100 mg·kg-1的4-NP对ER表达的上调效果接近于1 mg·kg-1E2的效果。E2下降效应：100 mg·kg-14-NP >50 mg·kg-1 4-NP>1 mg·kg-1 4-NP。NP对CYP1A表达有上调作用，并且表达随注射浓度上升而增强（具剂量-依赖效应）。以上结果表明,4-NP具有弱雌激素样效应，并且能抑制鲫鱼血清中E2的水平并使ER表达上调，为4-NP在鲫鱼体内通过ER途径实现内分泌扰乱效应的可能性提供了支持。图2表1参30     

胡子鲇脑型芳香化酶基因全长cDNA克隆及表达

采用RT-PCR和RACE法,克隆了胡子鲇(Clarias fuscus)脑型芳香化酶基因Cyp19a1b,应用荧光实时定量PCR检测其在前脑、下丘脑、脑垂体、肝、精巢和卵巢6种组织,以及性腺分化前后(出膜后12～30 d)全鱼中的mRNA表达。结果表明,Cyp19a1b cDNA全长2 347 bp,5′端非编码区219 bp,3′端[不包括poly(A)]596 bp,开放阅读框(ORF)1 503 bp,编码500个氨基酸,推测其编码蛋白质分子量为56.388 kD。序列分析及分子系统进化树结果表明,胡子鲇Cyp19a1b氨基酸序列与非洲鲇(Clarias gariepinus)Cyp19a1b同源性最高,达95.6%;与南方大口鲇(Silurusmeridionalis)、黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)、斑马鱼(Danio rerio)、斑点叉尾(Ictalurus punctatus)、赤点石斑鱼(Epinephelus akaara)、鲤(Cyprinus carpio)、鲫(Carassius auratus)及稀有鲫(Gobiocypris rarus)Cyp19a1b同源性达75%以上,但与上述鱼类的性腺型芳香化酶基因(Cyp19a1a)同源性低于62%,表明其为脑型芳香化酶,同源性分析结果与根据传统形态学和生化特征分类的结果相一致。荧光实时定量PCR结果显示,Cyp19a1b在胡子鲇上述组织中均有表达,其中下丘脑中表达量最高,肝和精巢最低,在脑部的表达存在明显的性别差异(P<0.05)。此外,在胡子鲇性腺分化前(出膜后12 d)Cyp19a1b即开始表达,但分化前后表达量无显著性差异(P>0.05)。结果暗示Cyp19a1b可能不是引起胡子鲇性腺分化的直接因素,但其可能通过"下丘脑垂体性腺轴"对性腺分化过程产生间接影响。     

许氏平鲉幼鱼对饲料中维生素B6需求量的研究

本实验旨在研究饲料中维生素B6含量对许氏平鲉(Sebastes schlegeli)幼鱼生长、体成分、肝脏酶活和转氨酶基因表达的影响，以确定其对维生素B6的需求量。配制6组维生素B6实际含量分别为2.08(对照组)、3.25、4.16、6.32、10.17和31.14 mg/kg的实验饲料，饲喂初始体重为(36.35± 0.06) g的许氏平鲉幼鱼63 d。结果显示，随着维生素B6含量的增加，实验鱼的增重率(WGR)和特定生长率(SGR)均呈先升高后降低的趋势，4.16 mg/kg组达到最高。4.16 mg/kg组脏体比(VSI)显著高于对照组(P<0.05)，3.25?10.17 mg/kg组的肝体比(HSI)和肠体比(ISI)显著高于对照组(P<0.05)。3.25?31.14 mg/kg组的肌肉水分含量显著低于对照组(P<0.05)，全鱼和肌肉的粗蛋白和粗脂肪均呈先升后降的趋势。肝脏超氧化物歧化酶(SOD)活力先升高后降低，4.16?10.17 mg/kg组显著高于对照组(P<0.05)；丙二醛含量(MDA)先降低后升高，3.25?31.14 mg/kg组显著低于对照组(P<0.05)；肝脏维生素B6含量先升高后平稳；3.25?31.14 mg/kg组谷草转氨酶(GOT)和谷丙转氨酶(GPT)活力显著高于对照组(P<0.05)。谷草转氨酶(GOT1和GOT2)基因相对表达量先升后降，3.25?31.14 mg/kg组显著高于对照组(P<0.05)；谷丙转氨酶(GPT1和GPT2)基因相对表达量先升后降，均在6.32 mg/kg组达到最大值；酪氨酸转氨酶(TAT)基因相对表达量先升后降，4.16?10.17 mg/kg组显著高于其他组(P<0.05)；丝氨酸转氨酶(SerC)基因相对表达量呈下降趋势，4.16?31.14 mg/kg组显著低于对照组和3.25 mg/kg组(P<0.05)。以WGR、肝脏维生素B6含量和GPT为评价指标，经折线回归分析表明，体重36 g的许氏平鲉幼鱼维生素B6的需求量为3.53?6.32 mg/kg饲料。     

海藻酸钠-HCG制剂对雌性金鱼(Carassius auratus)生殖激素水平的影响

采用海藻酸钠(Na Alg)-HCG缓释制剂进行激素埋植实验。实验开始时,雌性金鱼(Carassius auratus)卵母细胞处于Ⅲ期。实验期间记录雌性金鱼性腺发育、放免(RIA)法测定血清性激素含量并且通过RT-PCR检测激素相关基因表达。结果表明,埋植Na Alg-HCG缓释激素后,雌性金鱼性成熟系数(GSI)在6-21 d显著高于对照组,血清睾酮(T)和雌二醇(E2)水平在6-30 d显著高于对照组;性腺芳香化酶基因(CYP19A基因)和雌激素受体基因(ERα基因)m RNA相对表达量分别在2-21 d、14-30 d内显著高于对照组,其性腺GH基因m RNA相对表达量变化不显著。研究结果显示,一次性埋植Na Alg-HCG缓释制剂,与雌性金鱼繁殖相关的生物学指标、激素水平、基因表达量较对照组产生明显变化,同时这种缓释制剂可以作为埋植激素的载体。     

三苯基锡对褐菖鲉脑雌激素受体和视黄酸X受体表达的影响(英文)

尽管三苯基锡(triphenyltin,TPT)能够影响鱼类生殖功能以及性腺的发育,但其作用机制并不十分清楚。由于鱼脑在生殖调控中具有重要作用,本研究以海洋鱼类褐菖鲉(Sebastiscus marmoratus)为研究对象,研究TPT对脑中芳香化酶(Cyp19b)、雌激素受体(ERα和ERβ)、视黄酸X受体α(RXRα)和过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)基因表达的影响。暴露48 d后,TPT对雌性和雄性褐菖鲉脑中Cyp19b和PPARγ的表达均未产生显著性影响。TPT诱导了雄性褐菖鲉脑中ERα的表达并抑制了ERβ的表达;尽管TPT也抑制雌性褐菖鲉脑中ERβ的表达,但对ERα的表达却未产生显著性影响。另外,TPT诱导了雄性褐菖鲉脑中RXRα的表达,而在雌鱼脑中却产生了相反的作用,抑制了RXRα的表达。因此,TPT对褐菖鲉脑中ER和RXR表达的影响可能具有性别差异性,表明TPT具有复杂的内分泌干扰效应。另外,结果表明,TPT可能通过干扰鱼脑ER和RXR产生生殖毒性。     

急性铜胁迫对暗纹东方鲀组织铜积累、氧化应激、消化酶、组织病变及脂代谢相关基因表达的影响

通过96 h急性毒性实验研究水体铜暴露对暗纹东方鲀(Takifugu fasciatus)生理生化及脂代谢相关基因表达的影响。实验设置对照组、0.1 mg/L和0.2 mg/L (96-h LC_(50)) 3个铜处理组。结果表明,铜在暗纹东方鲀肝、肌肉和全鱼中的积累量随着处理浓度的提高而提高。同等浓度处理下,铜的积累量为肝脏全鱼肌肉。随着铜处理浓度的提高,肝脏中丙二醛(MDA)含量及抗氧化酶活性[谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX),总超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)]显著上升。急性铜暴露诱发肝脏血细胞沉积以及血窦扩张的症状。在鳃中,诱发上皮细胞增生,顶部棒状以及产生动脉瘤等症状。急性铜胁迫后,暗纹东方鲀肠道中的淀粉酶活性显著上升,但脂肪酶活性显著下降。在肝脏中,随着处理浓度的提高,淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶活性显著降低。在0.1 mg/L处理组,脂肪合成相关基因(G6PD、6PGD、LPL、Fas和Acc)的表达量最高。但在0.2mg/L处理组中,脂肪分解相关基因(HSL和CPT1)的表达最高。急性铜胁迫后对转运因子PPARα的影响不显著,但转运因子PPARγ的表达量显著上升。本实验表明铜对暗纹东方鲀生理生化指标及脂代谢相关基因的表达均产生显著影响,本研究为暗纹东方鲀养殖过程中铜的合理使用提供有益的指导价值,也为生产中更好地监控重金属污染提供一定的技术指标参考。     

红鳍东方鲀AFP、CIRP、HMGB1和YB-1基因对低温胁迫的响应

鱼类的生长和繁殖受环境条件的调节,冬季的低温会给红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)产业带来不利影响。为研究红鳍东方鲀耐低温机制,本研究利用实时荧光定量PCR技术,分析抗冻蛋白(AFP)基因、冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)基因、高速迁移蛋白家族蛋白(HMGB1)基因、Y-box结合蛋白(YB-1)基因在不同温度条件下(18℃、13℃、8℃和5℃),在红鳍东方鲀的肝、脾、肾、脑、心、肠、肌肉、性腺和皮肤中的表达情况。结果显示,AFP基因呈广泛性表达,在肌肉中表达量最高(P<0.05),随着温度的降低,各组织中AFP基因的表达量基本呈显著升高的趋势,在5℃组达到最高值,显著高于对照组(P<0.05)。CIRP基因在肌肉中表达量最高(P<0.05),随着温度的降低,各组织中CIRP基因的表达量的升降程度有所不同,在肝、肾、脑、心、肠、皮肤中的表达量呈先升高后降低再升高的趋势,在脾、肌肉和性腺中表达量呈上升趋势。HMGB1基因在肌肉中表达量最高(P<0.05),在脑、心、肝和皮肤中也有较高的表达量;随着温度的降低,除肝脏外,各组织中HMGB1基因的表达量基本呈先升高后降低的趋势,并在8℃组达到最大值,显著高于其他各组(P<0.05)。YB-1基因在肌肉中表达量最高(P<0.05),在其他组织中表达量较低;随着温度的降低,大部分组织中(脑、心、肠、肾、肝、肌肉和脾)表达量呈先升高后降低再升高的趋势,在8℃组达到最小值(P<0.05)。以上结果表明,4种基因表达水平因组织、温度的不同而不同,反映了这4种基因的功能特异性;在低温胁迫下,4种基因积极响应,表达量均发生不同程度的变化,表明4种基因在红鳍东方鲀低温环境适应中可能具有潜在的重要作用。另外,从表达变化规律来看,8℃可能是红鳍东方鲀应对低温胁迫的关键调控点,过低的温度会造成其调控紊乱,这可为研究红鳍东方鲀低温应答调控机制提供相关依据。     

海藻酸钠-HCG制剂对雌性金鱼(Carassius auratus)生殖激素水平的影响

采用海藻酸钠(Na Alg)-HCG缓释制剂进行激素埋植实验。实验开始时,雌性金鱼(Carassius auratus)卵母细胞处于Ⅲ期。实验期间记录雌性金鱼性腺发育、放免(RIA)法测定血清性激素含量并且通过RT-PCR检测激素相关基因表达。结果表明,埋植Na Alg-HCG缓释激素后,雌性金鱼性成熟系数(GSI)在6-21 d显著高于对照组,血清睾酮(T)和雌二醇(E2)水平在6-30 d显著高于对照组;性腺芳香化酶基因(CYP19A基因)和雌激素受体基因(ERα基因)m RNA相对表达量分别在2-21 d、14-30 d内显著高于对照组,其性腺GH基因m RNA相对表达量变化不显著。研究结果显示,一次性埋植Na Alg-HCG缓释制剂,与雌性金鱼繁殖相关的生物学指标、激素水平、基因表达量较对照组产生明显变化,同时这种缓释制剂可以作为埋植激素的载体。     

草鱼PGC-1β基因克隆及高糖高脂饲料对其表达的影响

为探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子-1β(peroxisome proliferator-activated receptor-γ coactivator-1 beta, PGC-1β)基因在草鱼能量代谢中的作用,本研究克隆了草鱼PGC-1β基因的核心序列,并对其进行了生物信息学分析;利用Real-time PCR技术检测了PGC-1β在不同组织的表达状况;同时研究了饥饿、饥饿再投喂及高糖(糖含量45%)高脂(脂含量8%)饲料对草鱼肝胰脏PGC-1β表达的影响。结果显示,所获得的草鱼PGC-1β基因部分cDNA片段长为885bp(GenBank登录号为：KM580493.1),共编码293个氨基酸,与斑马鱼的同源性为81%;该基因在脑中的表达量最高,肠和肝胰脏次之;与正常投喂组相比,饥饿(7d)导致PGC-1β在肝脏中的mRNA水平显著升高(P<0.05),再投喂后几乎恢复到对照组的表达水平。饲喂高脂以及高糖高脂饲料(65d)后,与对照组相比,草鱼肝胰脏中PGC-1β的mRNA水平显著升高(P<0.05)。研究结果表明,PGC-1β基因在草鱼能量代谢旺盛的组织中高表达,同时饥饿处理、饲料糖和脂肪水平等营养状况显著影响PGC-1β mRNA的表达。以上提示,PGC-1β在草鱼能量代谢过程中可能起到重要作用。     

条斑星鲽CYP19a基因克隆及其在雄鱼生殖周期中的表达

细胞色素P450芳香化酶(P450arom)作为P450细胞色素酶超家族中的一员,是性类固醇生成途径中的末端酶,能够将雄激素转化为雌激素。在大多数脊椎动物中,P450arom由CYP19单基因编码。但是在鱼类中存在两种P450芳香化酶,分为性腺型芳香化酶(P450aromA)和脑型芳香化酶(P450aromB),它们由不同的基因(CYP19a和CYP19b)编码,分布在不同的组织。通过简并引物扩增及RACE cDNA扩增克隆,在国内外首次获得全长为2167bp的条斑星鲽CYP19a cDNA序列,并将推测的氨基酸序列与其它物种P450arom氨基酸序列进行多重比较,发现存在跨膜螺旋区、I-螺旋区、Ozol肽区、芳香化酶特异保守区以及血红素结合区。通过RT-PCR分析了P450aromA mRNA在条斑星鲽不同组织中的表达情况,结果表明,CYP19a基因主要在脑、卵巢和精巢中表达,其次在肠、肝脏、肾脏也有少量表达。同时也分析了P450aromA mRNA在处于不同发育期的精巢中的表达情况,发现在Ⅱ期精巢中表达量最高,在Ⅴ期精巢中表达量最低。     

MITF基因在B16-F10细胞中的表达分析

实验研究B16-F10细胞增殖、分化过程中MITF基因的表达情况，探究小眼畸形相关转录因子(MITF)对黑色素细胞增殖、分化的影响。结果显示：在增殖阶段前期，B16-F10细胞快速生长，MITF基因相对表达量也快速增加，在3 d、5 d、7 d的表达量极显著高于1 d(P<0.01);在分化阶段，B16-F10细胞的数量越来越少，黑色素分泌越来越多，MITF基因相对表达量先下降后上升，5 d时极显著低于1 d和3 d(P<0.01),显著低于7 d(P<0.05)。推测MITF基因高表达对黑色素细胞的增殖和分化均有促进作用。     

红鳍东方鲀3个白介素基因的序列特征及表达分析

本试验分析体质量(190.34±2.13)g的红鳍东方鲀白介素基因IL-1b、IL-8和IL-10的序列特征,检测其在红鳍东方鲀脑、鳃、心脏、肌肉、肝脏和脾脏中的表达,以及每尾红鳍东方鲀注射密度1×10^7 cfu/mL的哈维氏弧菌菌液0.1 mL后0、12、24、48 h在肝脏和脾脏中的表达。试验结果表明,IL-1b、IL-8和IL-10基因的序列全长分别为771、822 bp和844 bp。3个基因在健康成鱼脑、鳃、心脏、肌肉、肝脏、脾脏中均有表达,其中肝脏和脾脏表达显著(P<0.05)。感染哈维氏弧菌后12 h,IL-1b基因在肝脏中显著上调,12 h和48 h在脾脏中显著升高(P<0.05)。感染哈维氏弧菌后12 h和24 h IL-8基因在肝脏和脾脏中均显著上调(P<0.05);而感染后24 h和48 h IL-10基因在肝脏中显著升高,在脾脏中12 h和48 h显著升高(P<0.05)。笔者首次探讨红鳍东方鲀IL-1b、IL-8和IL-10基因的序列特性及表达特征,为研究3个基因的原核表达提供了试验信息,将为进一步深入探究重组蛋白活性及其在红鳍东方鲀健康养殖中的应用奠定基础。     

低盐胁迫对红鳍东方鲀幼鱼肝脏的酶活性、组织结构及免疫基因表达的影响

为探讨低盐胁迫下肝脏在红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)机体免疫中的作用,在肝脏酶活性、组织结构和基因表达水平3个方面进行了研究。结果表明,低盐(盐度4‰)胁迫下红鳍东方鲀肝脏中总超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、酸性磷酸酶(ACP)和碱性磷酸酶(AKP)的酶活性显著高于对照组(P0.05);肝脏组织结构中肝细胞发生肿大,形状变形;肝脏IL15和TLR3基因的表达量显著升高(P0.05),而IRF2基因的表达量却未有显著性差异(P0.05)。     

银鲳ERα基因片段的克隆及卵黄发生期间饲料n-3LC-PUFA对其组织表达的影响

本研究克隆获得银鲳(Pampus argenteus)雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)基因的部分c DNA序列,长度196 bp,编码65个氨基酸。经BLAST比对,与其它鱼类ERα基因序列的一致性在89%~93%之间,证明实验所得序列为银鲳ERα基因的部分片段。以1年龄雌性银鲳为实验对象,配制了4组等氮、等能及等脂的实验饲料,分别以100%鱼油(FO组)、70%鱼油和30%大豆油(FSO组)、30%鱼油和70%大豆油(SFO组)、100%大豆油(SO组)为脂肪源,研究银鲳在卵黄发生期间组织中ERα基因表达量的变化以及饲料n-3LC-PUFA对其组织表达的影响,实验周期185 d。结果表明,在卵黄发生中期与后期,肝脏与卵巢中ERα基因表达量均显著高于卵黄发生前期(P0.05);卵黄发生后期肝脏组织中ERα基因表达量虽较卵黄发生中期呈升高趋势,但除了SO组之外,两者之间无显著性差异(P0.05);而卵巢组织中ERα基因表达量在整个卵黄发生期间均呈现显著升高趋势(P0.05)。饲料n-3LC-PUFA对肝脏与卵巢ERα基因表达量的影响在卵黄发生前期均未表现出明显的组间差异,但在卵黄发生中期与后期,饲料中较高的n-3LC-PUFA含量显著提高了组织中ERα基因表达量。在卵黄发生中期与后期,FO与FSO组肝脏与卵巢组织中ERα基因表达量均分别显著高于SO组(P0.05)。双因素方差分析结果表明,饲料n-3LC-PUFA与卵黄发生时期对银鲳组织中ERα基因表达量均具有显著性影响,且两者对组织中ERα基因表达量存在显著性的交互作用。     

斜带石斑鱼GtHRs在卵巢发育过程中的表达模式

对斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)卵巢进行组织学分析,根据卵母细胞的发育阶段将卵巢发育划分为7个时期(I-VII),检测斜带石斑鱼不同发育时期卵巢中两种促性腺激素受体(gonadotropin receptors,GtHRs),即卵泡刺激素受体(follicle-stimulating hormone receptor,FSHR)和促黄体素受体(luteinizing hormone receptor,LHR)的mRNA水平,同步分析下游卵巢型芳香化酶基因(Cyp19a)的表达模式。实时荧光定量PCR(Real-time PCR)结果显示,FSHR的mRNA水平在I、II时期的卵巢中较低,在III时期开始上调,在IV、V时期显著升高,在VI时期显著下降。相比之下,LHR的转录水平在卵巢发育早期(I-IV)表达较低,在V时期开始有所升高,在VI时期达到峰值。卵巢内Cyp19a的mRNA在I III时期保持较低水平,在IV、V时期的表达显著增强,在VI时期表达明显减弱。在卵巢发育过程中,Cyp19a的整体表达模式与FSHR较为相似。上述结果表明,斜带石斑鱼FSHR和LHR均参与了卵巢发育的调控,但在不同发育时期功能不同。在卵巢发育过程中,FSHR可能是介导Cyp19a正调控的主要因子。本研究旨为阐明斜带石斑鱼GtH/GtHR信号系统在生殖调控过程中的作用提供基础依据。     

饲料中添加串叶松香草对团头鲂幼鱼生长性能、抗氧化能力和脂肪代谢的影响

[目的]本实验旨在探讨饲料中添加串叶松香草对团头鲂幼鱼生长性能、抗氧化能力和脂代谢的影响。[方法]实验选取240尾初始体重为(3.85±0.5)g团头鲂幼鱼,随机分为4组,每组3个重复,每重复20尾鱼。各组分别投喂串叶松香草添加水平为0%(对照组)、2%、4%和6%的实验饲料,饲喂8周后测定鱼体生长性能、肌肉组成、血液生化、肝肠抗氧化和肝脏脂代谢相关基因表达。[结果]研究发现,相较于对照组,4%和6%串叶松香草组的增长率、特定生长率显著降(P<0.05),6%组的终末均重显著降低(P<0.05),饵料系数显著增加(P<0.05)。在抗氧化能力方面,2%串叶松香草组肠道过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)显著高于对照组(P<0.05)。在脂肪沉积和代谢方面,4%和6%串叶松香草组肌肉粗脂肪含量显著高于对照组(P<0.05)。4%和6%串叶松香草组肠道脂肪酶活性显著低于对照组(P<0.05)。6%串叶松香草组血清中的甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)均显著高于对照组(P<0.05)。4%和6%串叶松香草组肝脏中脂肪合成基因fas、srebp1c的表达量显著升高(P<0.05)。同时,6%串叶松香草组肝脏中脂肪分解基因lpl、cpt1a、pparβ的表达量显著下降(P<0.05)。应激24h后2%串叶松香草组累积死亡率低于对照组,肝脏SOD活性显著高于对照组(P<0.05)。[结论]总之,在饲料中添加2%的串叶松香草对团头鲂幼鱼的生长和饲料利用无不利影响,并且能够提高肠道的抗氧化能力,而当添加量增加至4%和6%时会抑制鱼体生长,并引起团头鲂幼鱼脂肪沉积。[意义]本研究结果为串叶松香草在水产动物饲料中的应用提供了参考。