微生物在饲料开发中的应用

1 用于饲料开发的微生物 微生物种类多,其代谢特征各异,菌体蛋白质含量较高, 能利用的物质也很丰富,这就奠定了其在饲料开发中的重要 地位.因为饲料是动物要进食的,所以用于饲料生产的微生物 必须无毒,同时,动物饲用其代谢产物或菌体后应该有益并且 要适于生产过程中的各种环境.细菌、放线菌、酵母菌和丝状 真菌中的许多种都已用于饲料生产.酵母菌中的酿酒酵母、假 丝酵母、白地霉等用于生产SCP或生理活性物质,细菌中的 乳酸菌、链球菌、肠道细菌、芽胞杆菌、光合细菌等已制成微生 态制剂,用于畜禽饲料生产的芽胞杆菌有枯草芽胞杆菌、地衣 芽胞杆菌、凝结芽胞杆菌、缓慢芽胞杆菌、短小芽胞杆菌、蜡样 芽胞杆菌、环状芽胞杆菌、巨大芽胞杆菌、坚强芽胞杆菌、东洋 芽胞杆菌、纳豆芽胞杆菌、芽胞乳杆菌、丁酸梭菌等,丝状真菌 已用于纤维素等难利用物质的处理和生产饲用酶制剂,放线 菌也已用于生产饲料添加剂.     

一种复方中草药消毒液杀菌效果试验

选择几种体外有良好杀菌效果的中草药制成一种复方制剂,研究其对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、链球菌、枯草芽胞杆菌作灭活效果。实验结果表明:其3.30%稀释液作用3min对金黄色葡萄球菌杀灭率达99.96%,作用5min对大肠杆菌杀灭率达99.95%,作用5min对白色念珠菌杀灭率达99.98%;作用3min对链球菌和枯草芽胞杆菌杀灭率均≥99.94%,在有机物存在下杀菌效果不受影响。置54℃温箱14天后,杀菌效果基本不变。     

浅谈枯草芽胞杆菌在水产养殖上的应用

水产养殖中,养殖水体微生态环境起着养殖生物排泄物及残饵的分解、转化、水质因子的调节与稳定等作用。它的正常与否决定着水质的优劣,进而影响养殖生物能否健康成长。我国的水产养殖多以静水为主,池塘老化严重,自净与调节能力较差,急需治理,这是预防病害的关键。目前,相对于物理和化学方法,应用微生物治理养殖水体已成为研究的热点。枯草芽胞杆菌分解转化和适应能力强,对养殖生物和人体无害,因而目前被大量的用于水产养殖中。1枯草芽胞杆菌的生物学性质与作用机理枯草芽胞杆菌(Bacillussubtilis)是一种短杆状、无荚膜能运动的革兰氏阳性细…     

大豆胰蛋白酶抑制剂微生物发酵灭活研究

采用乳酸菌、枯草芽胞杆菌发酵大豆粉,均能有效消除、灭活大豆中胰蛋白酶抑制剂的活性。乳酸菌发酵未加乳酸菌培养基的大豆粉,乳酸菌接种量为5%、10%时,胰蛋白酶抑制剂的活性灭活优于15%的菌种接种量;枯草芽胞杆菌发酵大豆粉,菌种接种量为5%时,胰蛋白酶抑制剂的活性灭活优于菌种接种量为10%、15%。     

中华绒螯蟹血淋巴抗菌活性的初步研究

主要研究了中华绒螯蟹血清和血细胞破碎上清液(HLS)对大肠杆菌、嗜水气单胞菌、蜡状芽胞杆菌和金黄色葡萄球菌的抗菌活性、不同浓度HLS对抗菌活性的影响以及血清中抗菌活性的诱导作用。结果显示,只有HLS对大肠杆菌、嗜水气单胞菌表现出显著的抗菌活性,而血清对4种菌、HLS对蜡状芽胞杆菌和金黄色葡萄球菌均未表现出抗菌活性;随着HLS浓度的降低,大肠杆菌的细菌存活指数(SI)迅速上升,抗菌活性迅速下降,HLS浓度高低直接影响抗菌活性的强弱;通过注射灭活大肠杆菌,血清在1~24h内表现出抗菌活性的诱导作用,在6h时抗菌活性最强。     

有益微生物在高密度养虾的应用研究

通过对几种常见有益微生物芽胞杆菌、光合细菌PSB或EM的特性及使用方法的介绍,来为降低高密度养虾对养殖环境的污染影响提供一种行之有效的方法。     

枯草芽孢杆菌在水产养殖中的应用及研究现状

枯草芽胞杆菌在动物肠道内代谢、增殖,可以调节肠道菌群、提高机体消化能力、增强免疫力和抗病力,国内外有众多研究单位和学者对此菌的性能有过深入系统的研究,也积累了丰富的研究资料.近年来,枯草芽孢杆菌不仅在工业、制造业、等方面的得到了广泛应用,而且在农业方面,枯草芽孢杆菌的各项性能也得到了全面体现.对枯草芽孢杆菌当前在水产中的研究背景、研究现状、作用以及应用过程中的影响和未来的展望进行了相关的综述,以便在未来加强对枯草芽孢杆菌的推广和应用.     

小球藻锌结合类金属硫蛋白的结构表征及抗菌活性

小球藻经60μmol/L的锌胁迫培养5d后,离心收集藻泥,经超声波细胞破碎后,离心得到上清液即蛋白质粗提液,再经葡聚糖凝胶层析柱G-75及脱盐柱G-25分离、纯化后,收集的蛋白组分经真空冷冻干燥后获得小球藻锌结合蛋白。通过Tricine-SDS-PAGE电泳、氨基酸组成及紫外光谱等方法进行表征,测得该蛋白的分子量约为8.2ku,半胱氨酸含量为15.4%,具有金属硫蛋白典型的紫外光谱特征,称为类金属硫蛋白(Zn-MT-like proteins)。试验采用琼脂糖孔穴扩散法,研究了小球藻Zn-MT-like蛋白对3种细菌(大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽胞杆菌)和3种真菌(青霉菌、曲霉菌、酵母菌)的抗菌活性,并与兔肝Zn-MTs的抗菌能力进行比较。结果表明,小球藻Zn-MT-like蛋白对革兰氏阳性菌(金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌)和霉菌(青霉、曲霉)具有显著的抗菌活性,1mg/mL的Zn-MT-like蛋白对金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌、青霉和曲霉的抑菌圈直径分别为13.2、17.4、7.2和9.8mm;而对大肠杆菌、酵母菌则无抗菌活性。同样条件下,未加锌胁迫的小球藻蛋白质本身和兔肝Zn-MTs并不具有这些抗菌...     

梅花鹿“猝死症”病原诊断及药敏试验

本文报道的是鹿场发生的不明原因的“猝死症”导致在较短的时间内死亡13只，病死率达100％，为进一步查明原因、对其病原进行了检查，经生化试验、小白鼠致病性试验确定为凝结芽胞杆菌并做了药敏试验，筛选出了对致病苗敏感的药物，为进一步控制该项疾病创造了条件。     

益生菌的应用对鳗鲡池塘水质变化的影响

在鳗鲡养殖池中应用益生菌,研究其对池塘水质变化的影响。结果表明,在鳗鲡养殖池中添加芽胞杆菌、光合菌及EM菌,能有效降低养殖水体的氨氮(NH4+-N)、亚硝酸盐氮(NO2--N)及化学耗氧量,有利于水质净化和微生态环境的修复。     

饲料中添加复合芽孢杆菌对凡纳滨对虾抗病毒感染能力及抗病基因表达的影响

自健康凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)分离到枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、地衣芽孢杆菌(B. licheniformis)和短小芽孢杆菌(B. pumilus)，将上述芽孢杆菌以单一和3株复合的方式包裹在基础饲料表面，制成益生菌饲料；每日投喂对虾，3周后进行白斑综合征病毒(WSSV)人工感染。统计实验组和对照组的累积死亡率，测定对虾鳃组织内WSSV拷贝数，分析对虾肠道组织含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶基因(Caspase)和硫氧还原蛋白基因(Trx)的相对表达量。结果显示，感染实验结束时，A组(枯草芽孢杆菌)、B组(地衣芽孢杆菌)、C组(短小芽孢杆菌)和D组(枯草芽孢杆菌+地衣芽孢杆菌+短小芽孢杆菌复合益生菌)的对虾累积死亡率分别为(73.3±7.0)%、(63.3±5.5)%、(75.0±7.9)%和(50.0±5.3)%，显著低于对照组(PBS组)(100%)；在整个感染阶段，各实验组的病毒拷贝数呈先上升后下降的趋势，但对照组呈现一直上升趋势，且显著高于实验组。抗病基因表达结果显示，WSSV感染后，各组对虾肠道Caspase相对表达量随感染时间的延长呈先上调再下调的趋势，且在18 h各组对虾肠道Caspase表达量达到最大值；益生菌摄取和WSSV感染都能刺激Trx的表达，益生菌的刺激相对平缓，且各实验组对虾肠道Trx相对表达量在WSSV感染后的18 h时陡升到最大值，极显著高于对照组，且以D组的激活能力最强。研究证实，枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和短小芽孢杆菌均可提高对虾抗WSSV感染能力，复合芽孢杆菌抗病毒能力最突出。对虾抗病力的提高可能与芽孢杆菌减缓了病毒在靶组织的增殖速率、提高了Caspase和Trx基因表达水平相关。     

Determination of poly-β-hydroxybutyrate production by <Emphasis Type="Italic">Bacillus</Emphasis> spp. isolated from the intestines of various fishes

In this study, 30 strains of the genus Bacillus were isolated from various fresh fishes obtained from fish markets in Ankara, Turkey. They were identified as Bacillus pasteurii, Bacillus badius, Bacillus circulans, Bacillus licheniformis, Bacillus megaterium, Bacillus thuringiensis, Bacillus brevis, Bacillus cereus, Bacillus sphaericus, Bacillus subtilis, Bacillus coagulans, Bacillus lentus, and Bacillus pumilus. When poly-β-hydroxybutyrate (PHB) production by these strains was determined by spectrophotometry, it was found that PHB production ranged from 0.81–23.38% (w/v). PHB production and productivity were highest for B. pasteurii P2 (20.58% w/v) and B. lentus P18 (23.38% w/v). Furthermore, B. pasteurii P2 and B. lentus P18 were examined for PHB production using different carbon and nitrogen sources and in combined medium containing both carbon and nitrogen sources. The amounts of PHB produced by the strains in these media were more different than the amounts of PHB produced in nutrient broth medium.     

两种芽孢杆菌体外体内拮抗气单胞菌的试验

将蜡样芽孢杆菌Y1和巨大芽孢杆菌BM1259混合培养,结合平板活菌计数、抑菌活性测定及体内拮抗试验,研究其对水产动物气单胞菌的抑菌效果。体外拮抗试验结果表明,这两种芽孢杆菌均能明显抑制嗜水气单胞菌NQ的增殖,抑制率分别为53.74%和56.12%。不同温度下的抑菌活性试验显示,2种芽孢杆菌的抑菌活性温度分别为32℃和29℃。体内拮抗试验结果表明,巨大芽孢杆菌能显著降低异育银鲫肠道气单胞菌的数量。提示巨大芽孢杆菌可作为潜在的水产专用微生态制剂。     

Selection of probiotic bacteria for use in shrimp larviculture

Three candidate probiotics, Bacillus foraminis, Bacillus cereus biovar toyoi and Bacillus fusiformis , were isolated from hydrogen-producing fermented solution and identified using 16S rRNA sequence analysis. Bacillus foraminis and B. cereus biovar toyoi exhibited strong antagonism against Streptococcus iniae and Photobacterium damselae subsp. piscicida in in vitro co-culture for competitive exclusion assay and then were conducted in the larviculture system of Penaeus monodon reared from zoea 1 to postlarva 1. The daily addition of B. cereus biovar toyoi resulted in significantly deleterious effects on survival ( P <0.01) whereas the daily addition of B. fusiformis showed highest survival rate (88.7±0.7%) but no statistically significant difference from control (73.3±12.1%). Bacillus fusiformis was continuously applied in the larviculture system of Litopenaeus vannamei . Administration of B. fusiformis significantly increased survival ( P <0.01) in both treatments added daily (87.9±1.7%) and every other day (54.7±1.2%), respectively, at a concentration of 10⁵ CFU mL⁻¹ over control (41.2±1.3%).     

一株具水霉抑制特性的芽孢杆菌筛选及其分子生物学鉴定

以水霉菌(Saprolegnia ferax)的生物防治为切入点,通过对本实验室保存的9株芽孢杆菌(Bacillus spp.)与水霉菌JL菌株进行对峙拮抗试验,筛选出具有明显抑制水霉菌JL菌株的芽孢杆菌BA1(P<0.05)。经进一步测定菌株BA1对不同来源水霉菌株试验,结果显示菌株BA1对水霉菌株6#、10#、S2也有明显的抑制作用(P<0.05)。通过测定菌株BA1的16 S rDNA,利用BLAST软件进行同源性比对,发现与蜡样芽孢杆菌的同源性在99%以上。由此推测,菌株BA1为蜡样芽孢杆菌菌株,且具有明显抑制水霉菌作用,可以作为水产养殖上水霉病防治的生物制剂使用。     

纳豆菌抗菌肽APNT-6对凡纳滨对虾的低温保鲜效果

为了解决因凡纳滨对虾货架期短而滥用化学保鲜剂等问题,实验通过微生物发酵,柱状色谱纯化得到一种新型生物保鲜剂——纳豆菌抗菌肽APNT-6,采用牛津杯法测定了其对凡纳滨对虾腐败菌的抑菌效果,并用浸保鲜剂方式将抗菌肽应用于凡纳滨对虾保鲜,通过测定对照组和保鲜剂组在(4±1)℃贮藏过程中的pH、挥发性盐基氮(TVB-N)、细菌总数、感官评分等鲜度指标的变化规律,评价了抗菌肽对凡纳滨对虾在(4±1)℃贮藏条件下保鲜效果。结果表明,纳豆菌抗菌肽APNT-6对凡纳滨对虾中Pseudomonas、Shewanella等8株腐败菌有良好的抑菌效果,经0.5 mg/mL抗菌肽保鲜剂处理后,保鲜剂组在(4±1)℃贮藏过程中pH、挥发性盐基氮(TVB-N)和细菌总数增加缓慢,货架期延长了2～3 d。     

芽孢杆菌对草鱼生长和肠粘膜抗氧化功能及养殖水质的影响

本试验研究了饲料中添加芽孢杆菌对草鱼生长、肠粘膜抗氧化功能及养殖水体水质的影响。选取平均体重为（51.0±2.3）g的健康草鱼300尾,随机分成3组（对照组、处理组1和处理组2）,每组3个重复,每个重复50尾鱼。其中对照组饲喂基础日粮,处理组1和2分别饲喂含复合芽孢杆菌（105 cfu/克饲料,枯草芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌以1:1比例混合）和枯草芽孢杆菌（105 cfu/克饲料）的基础日粮。试验期为45d。结果表明,饲料中添加芽孢杆菌对养殖水体pH和硝酸盐氮含量无显著影响,但显著降低了从第21d到试验结束期间水体中亚硝酸盐氮的含量（处理组1第35d除外）。芽孢杆菌的添加同时显著降低草鱼的死亡率（P<0.05）,并提高了草鱼的增重率和特定生长率。与对照组相比,处理组1和2草鱼的增重率分别提高了52.93%（P<0.01）和21.78%（P<0.05）,特定生长率分别提高了44.44%（P<0.01）和16.67%（P<0.05）;而且处理组1草鱼增重率和特定生长率分别比处理组2提高了25.58%（P<0.01）和23.81%（P<0.01）。肠粘膜抗氧化活性研究表明,与对照组相比,饲料中添加芽孢杆菌能提高草鱼肠粘膜超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）的活性。以上结果提示,饲料中添加芽孢杆菌可以改善养殖水质和草鱼肠粘膜抗氧化功能,并显著促进草鱼生长并降低死亡率。     

Comparison of four antibiotics with indigenous marine Bacillus spp. in controlling pathogenic bacteria from shrimp and Artemia

Use of antibiotics for the control of bacterial diseases in shrimp culture has caused several adverse impacts to the industry. This has resulted in the search for alternative environment friendly approaches to overcome bacterial infections. This study was conducted to investigate the use of beneficial bacteria as an alternative to antibiotics. Ten pathogenic bacterial species isolated from shrimp, Penaeus monodon, and Artemia cysts were tested for susceptibility to indigenous marine Bacillus subtilis AB65, Bacillus pumilus AB58, Bacillus licheniformis AB69 and compared with oxytetracycline, chloramphenicol, gentamicin and bacitracin, which are common antibiotics used in Asian aquaculture. The Bacillus spp. were isolated from the local marine environment for bioremediation use in shrimp hatcheries and were proven to reduce total ammonium nitrogen. The pathogenic bacterial isolates were 90% susceptible to B. subtilis AB65, 70% susceptible to B. pumilus AB58 and B. licheniformis AB69 and 100% susceptible to oxytetracycline, chloramphenicol and gentamicin but only 40% to bacitracin. Two representative isolates of the vibrio group, Vibrio alginolyticus VaM11 and Vibrio parahaemolyticus VpM1, when tested for competitive exclusion by a common broth method using the marine Bacillus spp., showed decreased viable counts from 10(8) to 10(2) cfu mL(-1). The results suggest that the action of the marine bacteria appears to be significant in protecting the host shrimp against pathogenic bacteria. In addition to the alternative use of antibiotics, the selected marine bacteria had additional bioremediation properties of reducing ammonia.     

MIDI自动鉴定系统在贻贝菌相分析中的应用

以7—10月的新鲜紫贻贝为试验材料优化培养基,从中分离纯化出各种细菌,并采用MIDI微生物自动鉴定系统结合PCR的方法分析贻贝整体及各部位的优势菌相。试验结果表明,选用加5%贻贝汁和2.5%营养琼脂作为培养基较好;新鲜贻贝的优势菌主要由弧菌、芽孢杆菌和腐败希瓦氏菌组成,而弧菌和腐败希瓦氏菌集中在表面,芽孢杆菌在肠腺占82%;对分离的蜡样芽孢杆菌菌株进行16SrDNA序列分析,发现其与GeneBank中的4,5,6,7株蜡样芽孢杆菌的16SrDNA序列相似性均达到99%,因此,应用MIDI微生物自动鉴定系统鉴定贻贝中优势细菌是可行的。     

微波辅助萃取生姜中的有效成分及其抑菌作用研究

本实验以生姜为原料,先用乙醚、正己烷、乙酸、乙酸乙脂、丙酮、乙醇为供试溶剂,确定了乙醇为生姜提取的最佳溶剂。分别以40%、50%、60%、70%、80%的乙醇进行了单因素实验,确定了70%乙醇为最佳提取浓度;再以功率为160w、320w、640w的微波,固液比为1∶10、1∶13、1∶16,对生姜进行150s、180s、210s的辐射处理。所进行的正交实验表明:生姜提取的最佳工艺条件分别为:乙醇浓度70%、微波功率320w、固液比1∶16、提取时间180s。所得生姜提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母和黑曲霉的抑菌实验表明:供试菌的抑菌圈分别为:金黄色葡萄球菌12.3mm、大肠杆菌11.7mm、枯草芽孢杆菌12.1mm、酿酒酵母13.5mm、黑曲霉15.2mm,生姜提取物对供试菌的抑菌效果依次为:黑曲霉>酿酒酵母>枯草芽孢杆菌>金黄色葡萄球菌>大肠杆菌。得到各种供试菌的最低抑菌浓度分别为:金黄色葡萄球菌10.938mg/mL、大肠杆菌43.75mg/mL、枯草杆菌43.75mg/mL、酿酒酵母菌5.469mg/mL、黑曲霉为2.734mg/mL。