大西洋牙鲆冷冻精子×褐牙鲆卵杂交胚胎的发育及胚后发育

利用大西洋牙鲆冷冻精子与褐牙鲆卵授精，培育出了生长健康的杂交鱼苗。并对杂交后代的胚胎发育、胚后发育和不同温度下的生长特征进行了研究。利用OLIMPUS显微镜连续观察和描述了冷冻精子受精杂交胚胎的发育，在水温15～17.1 ℃，其受精卵经过卵裂、囊胚、原肠胚、胚孔封闭、肌节胚、尾芽胚、心跳胚、出膜胚等时期的发育，经历65 h 57 min完成胚胎发育进入胚后发育，发现胚胎搐动15 min后心脏开始跳动。利用OLIMPUS解剖镜每天观察和记录一次鱼苗的生长形态，并测定其体全长；将杂交鱼苗的胚后发育划分为卵黄囊吸收期（出膜后1～6 d）、变态前期（出膜后7～25 d）、变态期（出膜后25～30 d）和变态后生长期（出膜30 d以后）4个时期。对16～17 ℃、18～19 ℃、20 ℃和22～23 ℃4个温度环境下胚胎发育的研究结果显示，杂交胚胎宜于在16～20 ℃的水温下发育，鱼苗在22～24 ℃孵化出膜后2～3 d大量死亡。对18～19 ℃、20 ℃、22 ℃、和24 ℃ 4个温度下稚鱼的生长研究结果显示，变态期稚鱼在22～24 ℃水温下饲养时变态和生长速度较18～19 ℃快。     

牙鲆的胚胎发育

在牙鲆胚胎玻璃化冷冻中,为了准确选择胚胎的冷冻时期,掌握胚胎发育进程,同时为牙鲆苗种培育提供一定的依据,对海水工厂化养殖牙鲆的胚胎发育进行了研究。牙鲆受精卵培养在14-16℃、盐度29．9的海水中,利用Olympus显微镜对牙鲆胚胎发育过程连续观察,对各个胚胎时期的发育时间进行了记录,并对每一时期的特征用Olympus照像机进行了拍摄。实验记录了从受精卵到出膜后5d的29个具体发育时期的特征和发育时间,拍摄了30张具有代表性的胚胎和鱼苗图片,将牙鲆胚胎发育划分为卵裂期、囊胚期、原肠期、神经胚期、肌节期、尾芽期、心跳期、胚体转动期、出膜前期、出膜期10个连续的典型时期。在此培养条件下牙鲆胚胎历时93h完成整个胚胎发育,孵化出膜,再经96h的胚后发育卵黄囊完全吸收,之后进入变态期,向成鱼转化。     

褐牙鲆♀×大西洋牙鲆♂杂交育种研究

为探讨褐牙鲆和大西洋牙鲆杂交育种的可行性,通过繁殖调控使褐牙鲆和大西洋牙鲆同步性成熟,采取正反交试验,获得了褐牙鲆(♀)×大西洋牙鲆(♂)杂交F1代——花美牙鲆(Paralichthys olivaceus♀×P.dentatus♂)。花美牙鲆受精卵卵径平均1.01mm;孵化适宜温度15～21℃,盐度25～35,孵化率平均71.3%,初孵仔鱼全长2.5～2.7mm;仔鱼在16～20℃下36d后伏底变态,变态个体全长平均11mm,育成率32.5%;反交受精率和孵化率极低,未获得杂交后代。简述了其发育时序和形态特征,探讨温度、盐度对花美牙鲆胚胎和仔鱼发育的影响,比较亲本与杂交鱼早期生长特征,初步分析反交不成功的原因。     

温度、盐度对褐牙鲆(♀)×犬齿牙鲆(♂)杂交子一代胚胎发育和仔鱼存活的影响

探讨了温度、盐度对褐牙鲆(♀)×犬齿牙鲆(♂)杂交子一代(杂交F1)胚胎和初孵仔鱼发育的影响。结果表明,杂交F1受精卵孵化适宜温度范围和最适温度分别为15～21℃和18℃,在适宜温度范围内胚胎发育时间随温度的升高而缩短,二者符合乘幂函数关系式N=115.99T-0.7668(R2=0.9769)。胚胎发育的生物学零度和有效积温分别是7.54℃和540.1℃.h,积算温度(A)与试验水温间呈乘幂函数相关,表达式:A=1328.1T-0.3149(R2=0.9624)。胚胎发育的最低盐度界限为10,孵化的适宜盐度范围和最适盐度范围分别为10～45、25～35;初孵仔鱼生存发育的适宜盐度范围、最适盐度范围分别为10～40和10～20。     

褐牙鲆♀×大西洋牙鲆♂杂交育种研究

为探讨褐牙鲆和大西洋牙鲆杂交育种的可行性，通过繁殖调控使褐牙鲆和大西洋牙鲆同步性成熟，采取正反交试验，获得了褐牙鲆（♀）×大西洋牙鲆（♂）杂交F1代——花关牙鲆（Paralichthysolivaceus早×Pdentatus6）。花关牙鲆受精卵卵径平均1．01mm；孵化适宜温度15—21℃，盐度25～35，孵化率平均71．3％，初孵仔鱼全长2．5～2．7mm；仔鱼在16—20℃下36d后伏底变态，变态个体全长平均11mm，育成率32．5％；反交受精率和孵化率极低，未获得杂交后代。简述了其发育时序和形态特征，探讨温度、盐度对花关牙鲆胚胎和仔鱼发育的影响，比较亲本与杂交鱼早期生长特征，初步分析反交不成功的原因。     

牙鲆（♀）×圆斑星鲽（♂）杂交子代的胚胎及仔鱼发育

以牙鲆(Paralichthys olivaceus)为母本,圆斑星鲽(Verasper variegatus)为父本进行科间远缘杂交,观察和记录了杂交受精卵胚胎及胚后仔鱼的发育情况,描述了各时期的形态特征。杂交受精卵为浮性卵,其受精率和孵化率分别为(71.18±0.14)%和(61.65±0.19)%,胚胎发育的畸形率为(17.00±0.06)%,4日龄仔鱼出苗率为(58.63±0.19)%,35日龄仔鱼的成活率为(57.08±0.20)%。在水温为(15±0.5)℃、海水盐度为29~30的条件下,受精卵经74 h孵化。孵化后4 d开口摄食,17 d开始变态,35 d完成变态。变态时,37%的仔鱼向右偏转,63%的仔鱼向左偏转。结果表明,牙鲆和星鲽杂交不存在配子不亲和,受精卵可以正常发育,杂交子代可以正常成活和生长。本研究旨为下一步杂交育种奠定基础。     

褐牙鲆(♀)×犬齿牙鲆(♂)杂交F1及其亲本肌肉营养成分分析与比较

褐牙鲆(Paralichthys olivaceus)为东亚地区重要的海水养殖鱼类,在中国、日本和韩国海水养殖业中占有重要的地位.目前,褐牙鲆经过连续多代缺乏选择的人工繁育和养殖,造成养殖群体种质发生退化,生长速度和抗逆性下降,极大制约了牙鲆养殖业发展.以选育生长迅速、抗逆性强、饵料转化率高的牙鲆类养殖新品种为目的,作者对褐牙鲆(♀)×犬齿牙鲆(Paralichthys dentatus)(♂)的杂交育种进行了研究.本实验对褐牙鲆(♀)×犬齿牙鲆(♂)杂交F1及其亲本肌肉营养成分进行测定.结果显示,杂交F1含水率显著低于双亲(P＜0.05),粗蛋白含量显著高于双亲(P＜0.05),粗脂肪含量介于二者之间;杂交F1的氨基酸总量、必需氨基酸、非必需氨基酸、半必需氨基酸与鲜味氨基酸总量都显著高于褐牙鲆与犬齿牙鲆(P＜0.05);脂肪酸含量方面,脂肪酸总量、不饱和脂肪酸总量3种鱼由高到低排列顺序为褐牙鲆、犬齿牙鲆、杂交F1,三者饱和脂肪酸总量差异不显著(P＜0.05).对3种鱼肌肉的营养品质进行了评价,杂交F1的必需氨基酸指数EAAI(90.30)明显高于褐牙鲆(77.75)与犬齿牙鲆(79.34),在蛋白质品质上表现出一定杂种优势.上述结果表明,杂交F1的肌肉具有蛋白和氨基酸含量较高、脂肪酸含量较低的特点.     

漠斑牙鲆胚胎及仔稚鱼发育的形态学观察

对漠斑牙鲆(Paralichthys lethostigma)胚胎及胚后发育进行观察,描述各发育时期的发育时序和形态特征.在水温18.5±0.5℃,盐度32～33的条件下,受精卵历时49 h脱膜而出,孵化后仔鱼在水温20.5±0.5℃时,4日龄开口摄食,26日龄进入变态期,45日龄左右完成变态成为幼鱼.漠斑牙鲆的卵子为浮性卵,油球一个.刚孵化仔鱼的消化道细直,3日龄肛门开通,4日龄卵黄囊消耗殆尽,开口摄食.在原肠期胚体下包约1/2时,在视囊和胚盘上出现点状星状的黑色素细胞.孵化后体两侧菊花状黑色素均匀分布;进入变态期后,体两侧的幼体色素逐渐收缩消失,同时在有眼侧出现个体较小的圆形成体色素细胞.在早期发育过程中,伴随着冠状鳍条的发生、伸长和缩短吸收.无鳔器官的发生.     

温度、盐度对褐牙鲆（♀）×犬齿牙鲆（♂）杂交子一代胚胎发育和仔鱼存活的影响

探讨了温度、盐度对褐牙鲆（♀）×犬齿牙鲆（♂）杂交子一代（杂交F1）胚胎和初孵仔鱼发育的影响。结果表明，杂交F1受精卵孵化适宜温度范围和最适温度分别为15～21℃和18℃，在适宜温度范围内胚胎发育时间随温度的升高而缩短，二者符合乘幂函数关系式N=115．99T^-0.768.8（R^2=0．9769）。胚胎发育的生物学零度和有效积温分别是7．54℃和540．1℃·h，积算温度（A）与试验水温间呈乘幂函数相关，表达式：A=1328．1T^-0.3149。（R^2=0．9624）。胚胎发育的最低盐度界限为10，孵化的适宜盐度范围和最适盐度范围分别为10～45、25～35；初孵仔鱼生存发育的适宜盐度范围、最适盐唐范围分别为10～40和10～20。     

半滑舌鳎胚胎发育及稚鱼变态过程观察

利用显微镜对半滑舌鳎胚胎发育及稚鱼变态过程进行连续观察，对各个时期的发育时间进行了记录，并对不同时期的特征用进行了拍摄。结果表明：半滑舌鳎成熟卵子呈球形，为多油球浮性卵。受精卵培养在水温21．6—22．8℃，pH值7．0～8．2。盐度30的海水中，历时39h仔鱼孵出。与其他硬骨鱼类基本相似，半滑舌鳎胚胎发育属于盘状卵裂，发育过程可分为：受精卵、卵裂期、囊胚期、原肠期、神经胚期、器官分化期、出膜期和初孵仔鱼。仔鱼孵化出膜进入胚后发育阶段，之后进入变态期，向成鱼转化。与牙鲆、大菱鲆等鲆鲽鱼类不同，半滑舌鳎稚鱼变态初期是在头顶两眼前上方形成一个横裂，右眼由此横列穿过，最终到达身体左侧，此后横裂逐渐愈合，变态完成，该过程历时3-4d，其形成机制有待进一步深入研究。     

大西洋牙鲆雄鱼与漠斑牙鲆雌鱼杂交的初步研究

从山东引进全长3-5cm的美国大西洋牙鲆和漠斑牙鲆幼鱼到宁德市飞鸾镇海鑫育苗场，经2年6个月养殖后，从养殖群体中挑选出大西洋牙鲆雄鱼为父本，漠斑牙鲆雌鱼2为母本，在生殖季节通过埋植激素和人工调控环境条件催熟亲鱼，采用人工受精方法，获得杂交受精卵478．6g，受精率为62．9％，孵化率为75．3％，获得初孵仔鱼36万尾。经过65d的培育，育出平均全长4．20cm的杂交鱼苗22万尾，育苗成活率61．1％。鱼苗生长迅速，初步表现出杂交子代的优势性状。     

杂交鲆(牙鲆♀×夏鲆♂)网箱养殖技术研究

引进杂交鲆苗种在宁德市三都海区,经过385d的网箱养殖,达到商品规格,平均全长36.3cm,平均体重606g,成活率达71%,饵料系数为8.3.研究表明,杂交鲆在生长速度、抗逆性、适应性等方面有较明显的优越性,能适应闽东海域夏季高温和冬季持续的低温.以Keys氏公式W=aLb,拟合养殖13个月杂交鲆的平均全长L(cm)...     

漠斑牙鲆染色体组型研究

以体长6cm左右的漠斑牙鲆幼鱼为材料,采用秋水仙素浸泡的方法,取鳃和鳍经低渗处理,空气干燥制片法制作染色体标本,最后经Giemsa染液染色进行核型分析。结果表明,漠斑牙鲆的染色体核型为2n=48,48t,染色体臂数为NF=48,未发现有多倍体的现象,也未发现性染色体和随体。     

漠斑牙鲆人工育苗技术探讨

报道了2006年12月12日、17日和2007年1月15日分三批次从山东引进1.1kg漠斑牙鲆受精卵进行人工育苗研究的结果.获受精卵110万粒,孵出仔鱼70万尾,孵化率64%.在育苗水温为18.1～23℃,盐度为32～34,光照50～2000lx,经100天左右培育,育出全长3.8～5.4cm鱼苗17万尾,成活率24.3%.     

漠斑牙鲆引进种群同工酶的遗传多态性分析

采用聚丙烯酰胺不连续凝胶垂直板电泳技术对引进种漠斑牙鲆（Paralichthys lethostigma）子一代的同工酶进行检测。分析了48个样本的15种同工酶在漠斑牙鲆肌肉和肝脏两种组织或器官中的表达情况，以期为其种质资源的保护和开发以及遗传育种方面的研究提供基础资料。15种同工酶共记录了33个基因座位，其中Me-1、Adh—1、Sdh—1、Sdh-2、Gdh—1、G6pd-1、Pgm—I1ldh—1、Cat—1、Pod—1和Pgi—1共11个座位呈多态，多态座位百分数是33．3％。平均每个座位的等位基因有效数值Ae为1．2196，预期杂合度He为0．1219，实际杂合度Ho为0．1547。同时还分析了漠斑牙鲆各个多态座位的Hardy-Weinberg遗传偏离指数d。这些数据说明，漠斑牙鲆群体拥有较高的遗传变异水平，还处于种质资源维持较好的状态，有利于对其资源进行开发以及对其遗传育种工作的展开。     

牙鲆的养殖与饲料

介绍了牙鲆亲鱼、苗种及养成各阶段的养殖方式、养殖条件发展情况，讨论了微颗粒饲料、硬颗粒饲料、膨化颗粒饲料、软湿颗粒饲料、鲜杂鱼生鲜料、粉末饲料等多种饲料在牙鲆的全养殖过程的应用情况，总结了牙鲆配合饲料及营养研究的进展情况，列出了行业标准中的牙鲆饲料的营养要求。     

褐牙鲆(♀)×犬齿牙鲆(♂)杂交子代及亲本群体形态和外周血红细胞DNA含量

2006～2007年进行了犬齿牙鲆Paralichthys dentatus(♂)×褐牙鲆P.olivaceus(♀)杂交,获得杂交子代苗种养殖至全长27～33cm时随机取样,测定形态学特征。与父、母本相同规格成鱼相比,杂交子代的有眼侧体色和花纹与父、母本都存在较大差异,是区分杂交子代最突出的特征。杂交子代的多数可比、可量性状同父、母本相近,但在体长/总高比等方面表现出较明显的杂交优势。聚类分析表明,杂交子代的表型与犬齿牙鲆更为接近。尾静脉采血,使用流式细胞仪检测杂交子代和父、母本外周血红细胞的DNA含量,发现杂交子代、犬齿牙鲆和褐牙鲆的DNA含量分别为1.51±0.02、1.50±0.04、1.43±0.16pg,杂交子代的DNA含量与犬齿牙鲆接近,较褐牙鲆略高,表明杂交子代为二倍体。     

牙鲆室内人工养殖试验

报道了室内养殖牙鲆的试验结果,１９９２年－１９９５年进行的小规模试验。将受精卵培育至鱼苗、成鱼直至成熟亲鱼。在水温为２－２５℃范围内,经过３６个月将全长为５．３ｃｍ鱼苗培育至全长为４６．８ｃｍ、体重为１７８０ｇ的商品鱼,成活率为５０．６％。１９９７年－１９９８年进行的生产性养殖试验,在水温为１０－３３℃范围内。经过１０个月将全长为５．４ｃｍ鱼苗养至全长为３３．４ｃｍ、体篝为３５６ｇ的商品鱼、成活率