5种中草药的不同溶剂提取物对嗜水气单胞菌抑菌活性的研究

为探讨不同有机溶剂对常用中草药的提取效果及其提取物对水产常见病原菌的抑菌活性，以50%乙醇、无水乙醇、氯仿、甲醇、丙酮、乙酸乙酯和石油醚为提取溶剂，根据水浴旋转蒸发器回流提取工作原理，分别对五倍子、乌梅、诃子、大黄和五味子等5种中草药进行固液萃取，并用其提取物对水产高致病性病原菌嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）进行体外抑杀菌试验。结果表明：50%乙醇、无水乙醇、甲醇对5种中草药的提取效果优于其他4种溶剂，尤以甲醇的提取效果最佳，其提取率分别为五倍子46.09%、乌梅27.58%、诃子29.55%、大黄50.34%、五味子30.88%;提取效果最差的是石油醚，其提取率分别为五倍子1.98%、乌梅1.73%、诃子2.21%、大黄0.89%、五味子3.40%。体外抑菌试验结果显示，嗜水气单胞菌对五倍子的3种醇提物均表现为极度敏感，对大黄的甲醇提取物表现为高度敏感，对五倍子、大黄和五味子的氯仿提取物以及对乌梅、大黄和五味子的石油醚提取物呈低度敏感，对五倍子的丙酮提取物等共25种提取物表现为中度敏感；五倍子、大黄的醇提物对供试菌的抑杀菌效果明显优于其他3种中草药的任何一种...     

浒苔对赤潮异湾藻的克生作用

研究了浒苔对赤潮微藻—— 赤潮异湾藻生长的克生效应。结果表明, 浒苔新鲜组织对赤潮异湾藻的生长具有强烈的克生效应; 一次性添加浒苔培养过滤液对赤潮异湾藻生长没有显著的抑制作用, 而半连续添加浒苔培养过滤液对赤潮异湾藻生长具有显著的克生作用; 浒苔干粉末和甲醇抽提液均对赤潮异湾藻的生长产生显著的抑制作用。试验结果表明, 抑制赤潮异湾藻生长的物质很可能更多地存在于浒苔组织内, 向环境中分泌的克生物质较少。因而, 克生物质的连续分泌是有效克制赤潮异湾藻生长的关键。同时, 克生作用存在着明显的浓度效应, 当抑制物浓度达到一定阈值才表现出明显的克生作用, 在阈值之上浓度越高克生作用越强。     

条斑紫菜提取物对4种赤潮微藻生长的抑制作用

研究条斑紫菜水溶性抽提液对前沟藻、中肋骨条藻、米氏凯伦藻和塔玛亚历山大藻等4种赤潮微藻生长的影响,在此基础上,利用甲醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿和石油醚等有机溶剂浸泡条斑紫菜干粉,经抑藻圈方法检测条斑紫菜水溶性抽提液的抑藻活性。通过测定藻细胞密度和细胞体积,观察藻细胞形态,分析藻细胞内叶绿素、蛋白质和多糖等生理生化指标的变化,对抑藻活性最大的提取物对前沟藻、米氏凯伦藻、中肋骨条藻和塔玛亚历山大藻赤潮微藻生长的抑制作用进行分析,并依次以石油醚、乙酸乙酯和正丁醇为提取溶剂,采用液液分离法对此提取物做了进一步分离。结果表明,当条斑紫菜水溶性抽提液浓度超过16g/L时能显著抑制4种赤潮微藻的生长,尤其是对前沟藻和米氏凯伦藻具有很强的抑制作用。在5种有机溶剂提取物中,甲醇提取物的抑制作用最为明显。进一步研究发现此提取物对4种赤潮微藻的生长抑制显著且具有浓度效应,在16g/L时,此提取物对前沟藻、米氏凯伦藻、中肋骨条藻和塔玛亚历山大藻的生长抑制率分别为70.5%、79.9%、67.1%和65.1%。同时,致使米氏凯伦藻、中肋骨条藻和塔玛亚历山大藻等3种赤潮微藻体积变小,运动能力下降,藻细胞出现空洞、细胞破碎和色素减褪等现象;...     

海洋大型绿藻条浒苔与微藻三角褐指藻相生相克作用的研究

以种群密度为变量,采用实验生态学手段研究了大型海藻条浒苔与赤潮藻类三角褐指藻间的生长竞争关系,以及条浒苔水溶性抽提液对三角褐指藻生长的影响。结果表明,在无营养盐限制条件下,低密度条浒苔(0.3~0.7 g/L)均能抑制三角褐指藻(起始浓度104cell/ml)的生长,最大抑制率为74.5%;低起始浓度(102~103cell/ml)的三角褐指藻,对条浒苔具有促生长效应,而高起始浓度(104~105cell/ml)的三角褐指藻在一定程度上抑制条浒苔的生长。条浒苔水溶性抽提液(0.3~0.7 g/L)对三角褐指藻的生长皆表现出明显的抑制效应,平均抑制率为75.2%,抑制效果较条浒苔鲜组织更为明显;其最大抑制效应(84.8%)表现在接种后的第8天,三角褐指藻的生长抑制量随条浒苔水溶性抽提液浓度的增加而增大。表明条浒苔可能通过相生相克作用影响共培养体系中三角褐指藻的生长。     

七叶树外种皮不同溶剂提取物杀灭中型指环虫研究

为研究七叶树外种皮不同极性溶液提取物的药效,为其在水产寄生虫病防治中的利用提供参考,以感染中型指环虫的金鱼为寄生动物模型,分别用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、甲醇和水提取七叶树外种皮的有效成分,并检测其杀灭中型指环虫的生物活性,确定七叶树外种皮杀虫的活性部位。结果显示,七叶树外种皮甲醇提取物和水提取物显示出良好的杀虫活性,供试寄主动物药物暴露48 h后的EC_(50)、EC_(90)分别为5.23、7.33 mg/L和6.48、12.29 mg/L。     

浒苔ITS区的扩增和分析

对来自东海-黄海海区10个站位以及青岛沿岸4个站位共14个站位的浒苔样品依据形态学特征,归类分离获得70个样品,对其ITS 5.8SrDNA区进行PCR扩增、测序和分析,并与NCBI数据库中相应序列进行了比对.结果表明,70个样品具有完全相同的ITS和5.8SrDNA序列,说明青岛沿岸漂浮的大量浒苔与东海-黄海海区的浒苔为同一个来源.聚类分析显示,浒苔ITS区的变异程度与地理间隔距离呈正相关,我国海域浒苔与日本海域浒苔聚类一起,与英国海域浒苔相聚较远,与美国海域浒苔距离最远.     

不同溶剂及配比对轮虫脂肪提取的影响

研究了提取溶剂、次数以及溶剂的配比对轮虫脂肪提取的影响。分别用氯仿甲醇体积比为2:1、1:1、1:2,苯石油醚体积比2:1、1:1、1:2,丙酮石油醚1:4、3:7、2:3作为提取溶剂,提取冻干轮虫(Brachionus rotundiformis)样品脂肪,测定脂肪含量与皂化值,筛选得出3种提取溶剂的最佳配比;比较提取次数为1～3次间脂肪含量的差异,得出最佳提取次数;将3种最佳配比与索氏提取法(国标)提取样品脂肪进行比较,测定脂肪含量与皂化值。结果显示,在冻干轮虫脂肪提取中,提取次数对样品脂肪含量没产生显著影响(P>0.05);3种溶剂的最佳配比分别为氯仿甲醇2:1、苯石油醚1:2、丙酮石油醚2:3;其中丙酮石油醚2:3处理组的脂肪含量和皂化值分别达到9.71%和198,均显著高于索氏提取法(国标)和其余处理组(P<0.05)。故轮虫脂肪提取1次为宜,最佳溶剂及配比为丙酮石油醚体积比2:3,本方法具有提取高、时间短、安全性高、成本低等优点,具有一定的实际应用价值。     

低渗诱导太平洋牡蛎三倍体以及与其他诱导方法的比较

通过低渗方法抑制受精卵第二极体(PB2)的释放,诱导太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)三倍体.在水温为23～25℃的条件下,分别采用不同低渗海水(盐度分别为4、6、8、10、12、14、16),在不同处理时机,即第1个第一极体(PB1)出现、30%的PB1出现、40%的PB1出现、50%的PB1出现以及第1个第二极体(PB2)出现时,对太平洋牡蛎受精卵进行10 min、15 min、20 min、25 min持续处理.处理后,于正常盐度海水中孵化,收集D形幼虫,通过流式细胞仪进行倍性测定,确定最佳诱导条件.结果表明,当太平洋牡蛎受精卵PB1出现40%时,在盐度为8的低渗海水中,持续处理15 min,得到最高三倍体诱导率为(89.16±1.39)%.与对照组相比,低渗诱导获得的三倍体幼虫表现出明显的生长优势.将低渗方法同高温(32℃)、低温(2℃)和6-DMAP(450μmo1/L)处理等多倍体诱导方法进行比较,结果显示,低渗组的卵裂率和孵化率显著高于高温、低温和6-DMAP诱导的太平洋牡蛎三倍体(P＜0.05).6-DMAP诱导的三倍体率虽略高于低渗诱导,但差异不显著(P＞0.05).通过综合评价指数(Ie)比较,认为低渗诱导多倍体的方法比高温、低温和6-DMAP诱导具有明显的优势.     

温度、盐度和pH对双齿围沙蚕受精卵孵化

为了解温度、盐度和pH对双齿围沙蚕受精卵孵化及幼虫存活的影响,设置不同的温度、盐度和pH值梯度进行了双齿围沙蚕受精卵孵化及幼虫培育试验.结果表明,在23℃时受精卵的孵化率和幼虫的存活率都最高,35℃时受精卵不能孵化,受精卵孵化的最佳温度为23℃,幼虫存活的适宜温度为23-26℃;受精卵孵化的适宜盐度为23-26,幼虫存活的适宜盐度为23-35;受精卵孵化的最佳pH值为7.0,而幼虫存活的适宜pH值为 7.0-8.0.     

浒苔染色体制备及核型初步分析

由于浒苔染色体制备难度较大,至今还没有准确染色体数目及核型分析报道。以引发我国黄海绿潮优势种浒苔(Ulva prolifera)为研究对象,采用酶解-荧光法制备浒苔染色体,并比较分析染色体制备过程中秋水仙素预处理时间、酶解时间和滴片高度等3个关键因素对染色体制片效果的影响,以建立浒苔染色体制备方法。结果表明:用质量浓度为0.2%的秋水仙素处理12 h,染色体浓缩程度适宜,分散均匀,形态清晰;用质量浓度为2%的纤维素酶、果胶酶、离析酶,混合酶解20 h效果最好,能去除细胞壁、细胞膜和多糖物质;30 cm高度下滴片,能使细胞分散均匀,可以获得质量较高的浒苔染色体。核型分析显示,浒苔雌、雄配子体染色体数目为9条,孢子体染色体数目为18条。研究结果可为未来浒苔遗传特征分析以及浒苔功能基因定位研究奠定基础。     

4株细菌代谢产物增强鲫鱼免疫功能有效活性部位的研究

分别以蕈状芽孢杆菌(Bacillus mycoides)、皮杆菌(Dermabactersp)、噬菌蛭弧菌(Bdell ovibro bacteriovorus)和蜂房芽孢杆菌(Bacillus alvei)4株细菌代谢产物不同溶剂(石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇)的提取物腹腔注射鲫鱼(Carassius auratus),通过测定注射提取物后鲫鱼的血清凝集抗体效价、离体白细胞吞噬活性、吞噬细胞杀菌活性,研究不同代谢产物、不同提取物对鲫鱼免疫功能的影响,以确定代谢产物中活性物质的有效活性部位。结果表明:蕈状芽孢杆菌代谢产物中的活性物质主要集中在石油谜和乙酸乙酯提取物中;噬菌蛭弧菌代谢产物中的活性物质主要集中在石油醚和三氯甲烷提取物中;蜂房芽孢杆菌代谢产物中的活性物质主要集中在石油醚提取物中;而皮杆菌代谢产物中的活性物质则集中在乙酸乙酯和石油醚提取物中。试验结果为进一步追踪分离活性单体提供了基础资料。     

Chemical Characterization,Temperature Stability,and Enzymatic Studies on Edible Marine Algae Kappaphycus alvarezii (Doty)

Antioxidant activity of the marine alga Kappaphycus alvarezii was investigated. Methanol, acetone, petroleum ether, aqueous methanol, ethyl acetate, and chloroform extracts (1 mg/mL) of K. alvarezii were tested for their 2, 2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) radical scavenging activity. The values were compared with those of Vitamin C and butylated hydroxytoluene (BHT). Extracts showing positive results, when tested for DPPH free radical scavenging, were examined for dose effect, in-vivo hydrogen peroxide (H₂O₂) and hydroxyl radical scavenging assays. All extracts showed dose-dependent DPPH scavenging and significant hydroxyl radical scavenging activities (> 82.6%). The acetone, aqueous methanol, and methanol extracts of K. alvarezii showed the highest scavenging activity. Ethyl acetate extract showed a moderate activity of 62.9%. In the DPPH method, petroleum ether and hexane extracts showed less activity with IC₅₀ values of 118.58 ± 8.94 and 116.25 ± 7.14 μg/mL, respectively. Acetone, methanol, and ethyl acetate extracts exhibited IC₅₀ values of 57.32 ± 1.07, 61.31 ± 0.67, and 79.50 ± 1.59 μg/mL, respectively. K. alvarezii showed higher antioxidant activity in both in vitro and in vivo studies. Proton NMR studies revealed signals in the region 0.5 to 2.0 ppm suggesting the presence of steroidal identity in the extracts.     

Inhibitory effects of edible marine algae extracts on degranulation of RBL-2H3 cells and mouse eosinophils

Inhibitory effects on degranulation of rat basophilic leukemia (RBL-2H3) cells and mouse eosinophils by marine algae extracts were examined. More than 50% of the degranulation of RBL-2H3 cells was inhibited by water extracts of Ecklonia cava and Chrysymenia wrightii at a concentration of 100 μg/mL. More than 50% of the degranulation of RBL-2H3 cells was inhibited by methanol extracts of Petalonia binghamiae, Scytosiphon lomentaria, Undaria pinnatifida, Porphyra dentata, Codium fragile and Ulva japonica at a concentration of 200 μg/mL. Most inhibitory substances in the methanol extracts were partitioned into ethyl acetate and hexane layers. The ethyl acetate-partitioned layer of methanol extract of Petalonia binghamiae had higher inhibitory effects than the hexane-partitioned layer on the degranulation of RBL-2H3 cells. By contrast, the hexanepartitioned layer of the same extract had a higher inhibitory effect than the ethyl acetate-partitioned layer on the degranulation of mouse eosinophils. The ethyl acetate-partitioned layer of methanol extract of Petalonia binghamiae was further separated into eight fractions by silica gel column chromatography. Most inhibited the degranulation of RBL-2H3 cells, but not that of mouse eosinophils significantly. These results suggest methanol extract of Petalonia binghamiae contains materials that inhibit the degranulation of basophils and eosinophils differentially.     

Recovery of Aliphatic Fatty Acids from Red Seaweed Champia parvula (C. Agardh) and Its Antifungal Action

The aim of the present study was to evaluate the antifungal activity of seaweed Champia parvula and identification of active compounds for this action. In this regard, C. parvula crude extracts were obtained from n-hexane, ethyl acetate, chloroform, methanol, and water used to study the antifungal action. Results showed that methanolic extract had potent action against C. albicans, C. tropicalis, T. mentagrophytes, and A.flavus, with the highest inhibition of 16.7 mm found against C. tropicalis. Minimum inhibition concentration at 12.5 and minimum fungal concentration at 25 μg/mL were found in the methanolic extract. Therefore, to identify the bioactive compound for this antifungal action in the methanolic extract, thin-layer chromatography (TLC) and reverse-phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC) were used. The RP-HPLC had three peaks with retention times at 3.30, 3.86, and 4.73 min, showing the presence of ester fatty acid compound. Further, these compounds were characterized by nuclear magnetic resonance (NMR), gas chromatography (GC), and liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS), which showed the presence of long-chain aliphatic fatty acid like eicosanoic acid with formation of oct-1-en-3-ol compounds attached.     

丁香酚的分离及其杀多子小瓜虫活性研究

利用不同极性大小的溶剂石油醚、乙酸乙酯、氯仿、甲醇回流提取丁香制备粗提物,进行杀灭多子小瓜虫幼虫和包囊的药效活性追踪,确定丁香杀虫的活性部位为石油醚提取部分,进而利用硅胶柱层析和中压制备液相等分离技术结合活性追逐试验追踪分离丁香石油醚提取物(对多子小瓜虫幼虫和包囊的100%致死质量浓度分别为50mg/L和80mg/L),最终分离获得一种杀虫活性物质,经质谱、核磁氢谱、核磁碳谱等多种波谱分析技术确定该活性物质为丁香酚。体外杀虫结果表明,丁香酚对多子小瓜虫具有较强的杀灭作用,其对幼虫15min、1h、2h、3h和4h的半数致死质量浓度分别为6.21(5.85~6.65)mg/L、3.50(3.24~3.84)mg/L、2.90(2.62~3.22)mg/L、2.33(2.10~2.50)mg/L和2.15(1.98~2.32)mg/L,对幼虫4h的100%杀灭的质量浓度为3.5mg/L,对包囊6h的100%杀灭质量浓度为3.5mg/L。结果表明,丁香酚是一种具有较好开发前景的杀多子小瓜虫药物。     

肉桂活性成分肉桂醛杀灭离体多子小瓜虫效果

研究从肉桂中分离纯化出具有抑杀多子小瓜虫活性的化合物。以乙醇为提取剂,用索氏超声提取法从肉桂中提取浸膏,再用石油醚、乙酸乙酯、甲醇为萃取剂,萃取不同有效组分,以不同浓度分别进行杀灭离体多子小瓜虫实验,发现石油醚萃取物的杀虫效果最优。然后对石油醚萃取物采用硅胶层析柱和制备型高效液相色谱进行分离纯化,利用质谱和核磁波谱分析,最终鉴定其杀虫活性成分为肉桂醛;将肉桂醛溶于二甲基亚砜并用二倍梯度稀释法配成不同浓度的药液测试其对离体小瓜虫的杀灭活性。结果表明,100%杀灭滋养体和感染性幼虫的剂量分别为50和8 mg/L,半数有效浓度分别为13.9和1.8 mg/L;使用剂量在50 mg/L可完全抑制小瓜虫包囊孵化。     

羊栖菜和裙带菜中抗凝血活性物质的初步筛选

Components with blood-anticoagulant activity were fractionated from marine algae Sargassumfusiforrne and Undaria pinnatifida and the activity of the components was investigated by using the method of bioassay. It was found that the 80% ethanol soluble fraction of Sargassumfusiforme exhibited no blood-anticoagulant activity, while the components obtained from the 80 % ethanol insoluble fraction (hot water extract) gave obvious bloodanticoagulant activity. A further study suggests that the principal component in the hot water extract from Sargassumfusiforrne with high blood-anticoagulant activity should be sulfated polysaccharides, in which the activity was positively correlated with the content of total sugar and fucose in sulfated polysaccharides. As for Undaria pinnatifida, the n-butanol extract fractionated from the 80% ethanol soluble fraction had blood anticoagulant activity, while the petroleum ether, ether, ethyl acetate, or water extract showed no bloodanticoagulant activity.