介绍效果更好的鱼类催产合剂——高效鱼类催产合剂2号和3号

鱼类促性腺激素(GtH)的分泌和生殖活动已经证明为双重的神经内分泌系统所调节，即促性腺激素释放激素(GnRH)刺激GtH分泌和多巴胺作为促性腺激素释放的抑制因素(GRIF)抑制GnRH的作用以及GtH的自行释放。我们先前对养殖鱼类的研究已证明多巴胺受体的拮抗物(如pimozide，PIM)，排除剂(如reserpine，RES)和多巴胺合成抑制剂都能显著增强LRH-A诱导GtH分泌和排卵的作用。     

GnRH_A和紫萁抑制大黄鱼性腺早熟的机制

应用脑垂体组织生理学和免疫组织化学方法，对GnRH-A和紫萁抑制大黄鱼性早熟的作用机制进行了研究。结果表明，性早熟大黄鱼脑垂体许多促性腺激素分泌细胞的胞质出现空泡，提示性早熟的原因可能是由于GtH细胞提早进入分泌活动所致。长期服用促性腺激素释放激素类似物的养殖大黄鱼（没有性早熟），它的脑垂体GtH细胞对GnRH抗独特型发生弱的免疫阳性反应，而对照组性早熟鱼仍出现强的反应，表明实验组大黄鱼脑垂体GtH细胞对GnRH-A的应答能力下降，出现脱敏效应，这可能与GnRH-A抑制大黄鱼性早熟有关。养殖大黄鱼长期服用紫萁，它的脑垂体GtH细胞膜上GnRH受体则没有出现脱敏现象，提示紫萁抑制大黄鱼性早熟的机制不同于GnRH类似物，确切机制有待进一步研究。     

鱼类芳香化酶活性研究的进展

鱼类的生殖活动受外部环境因素和神经内分泌的双重调节。下丘脑、脑垂体和性腺通过相互调节 ,促进和制约着鱼类生殖细胞的发生、性别分化和性腺发育成熟及其繁殖活动。如下丘脑产生促性腺激素释放激素 (ＧｎＲＨ)可刺激脑垂体分泌促性腺激素 (ＧｔＨ)作用于性腺 ,促使性腺组织产生类固醇激素直接作用于生殖细胞 ,引起生殖细胞发育成熟和排卵。同时 ,类固醇激素也会反馈抑制ＧｎＲＨ和ＧｔＨ的分泌。在类固醇激素的代谢过程中 ,需要多种酶参与催化 ,其中一种酶称为芳香化酶 (ａｒｏｍａｔａｓｅ) ,在其中起着关键的作用。许多研究表明 ,芳香…     

鱼类下丘脑—垂体神经分泌系统功能综述

鱼类的生殖是受环境影响的。感觉器官把外界环境的刺激(如温度、光照等)传送到脑,使下丘脑分泌促性腺激素释放激素(GnRH),激发脑垂体分泌促性腺激素作用于性腺并促使性腺分泌性甾类激素,以促使性腺发育成熟及排出精子和卵子。     

高效鱼类催产合剂（RES＋LRH-A）应用的进展

中山大学鱼类研究室生殖内分泌生理研究组和加拿大Alberta大学动物系R.E.Peter教授合作,近三年来对鱼类生殖机理的研究,已经证明下丘脑神经分泌细胞产生的多巴胺,既能抑制脑下垂体分泌促性腺激素(GTH),也能抑制LRH-A对GTH分泌的促进作用;同时也已证明儿茶酚胺排除剂Reserpine(简称RES)能将多巴胺对GTH分泌的抑制作用减弱以至消除,从而显著增强LRbI-A促进GTH分泌和诱导排卵作用。根据上述理论,结合前二年实践获得的最新研究成果,中山大学鱼类研究室和浙江宁波市激素制品     

LHRH-A、DA对施氏鲟脑垂体碎片释放GtH的影响

为了探讨在古老的软骨硬鳞鱼中促性腺激素(GtH)的双重内分泌调节作用,本实验设计用离体灌流的方法研究促黄体素释放激素类似物(LHRH-A)和多巴胺(DA)对施氏鲟脑垂体碎片分泌GtH的影响。引入10、100和1 000 nmol/L 3个浓度的LHRH-A对施氏鲟脑垂体碎片3次脉冲式刺激实验;每次间隔1 h,持续5 min,研究不同剂量LHRH-A对鲟鱼脑垂体释放GtH的作用;用200 nmol/L DA对施氏鲟脑垂体碎片持续2 h灌流后引入5 min的1 000nmol/L LHRH-A刺激实验,研究DA如何抑制鲟鱼脑垂体释放GtH。每5 min收集一管灌流液,用放射免疫测定法(RIA)检测灌流液中GtH的含量。结果显示,低剂量LHRH-A随着刺激引入脑垂体释放GtH出现波浪式的增加,中、高剂量出现释放延后现象。LHRH-A在10nmol/L到1 000 nmol/L范围内对刺激脑垂体释放GtH没有剂量依存关系。DA对施氏鲟脑垂体碎片GtH的分泌没有显著影响,但是可以抑制LHRH-A引起的GtH分泌,即DA不能抑制施氏鲟GtH的基础分泌,而只能抑制LHRH-A诱导的GtH分泌。研究结果证明,在高等硬骨鱼类中存在的双重神经内分泌调节在古老的鲟鱼中也存在。     

硬骨鱼下丘脑对腺垂体的控制

<正> 鱼类的性腺发育和生殖活动是由脑下垂体控制和调节的,而脑下垂体又在下丘脑控制之下。脑受到刺激和冲动又影响下丘脑分泌激素释放因子的活动。神经冲动通过单胺类神经递质调节激素的分泌。故而研究下丘脑和脑垂体之间的关系对鱼类的性腺发育和繁殖是极其重要的。一下丘脑和脑垂体解剖学上的联系从形态解剖来看,鱼类的下丘脑通过垂体柄与脑垂体相连。神经垂体的分泌细胞位于下丘脑内,神经纤维广泛分布于腺垂体内,从而把脑和腺垂体联系起来。硬骨鱼有由正中隆起和门脉系统合成的神经垂体咀部(Holmes,Ball,1974)。正中隆起的毛细血管丛是供给神经垂体的纵行毛细管丛。     

大黄鱼脑垂体组织学与免疫组织化学

用组织学和免疫组织化学方法研究不同发育时期大黄鱼（Pseudosciaena crocea）脑垂体的形态结构和各种促激素分泌细胞的分布。结果表明：（1）大黄鱼脑垂体呈“鸡心“形,由神经垂体和腺垂体组成,腺垂体可分为前外侧部（RPD）、中外侧部（PPD）和垂体中间部（PI）。（2）RPD部有3种细胞,分别为催乳激素（PRL）细胞,促肾上腺皮质激素（ACTH）细胞,促性腺激素（GtH）细胞。（3）PPD部位于腺垂体腹面,也有3种细胞,其中1种为促生长激素（GH）分泌细胞,呈嗜酸性,另2种呈嗜碱性,分别为GtH细胞与促甲状腺激素（TSH）分泌细胞。（4）垂体中间部有2种细胞,1种为促黑激素（MSH）细胞,呈嗜酸性,另1种为GtH细胞,呈嗜碱性。随性腺发育成熟,大黄鱼GtH细胞的分布从中外侧部扩展至前外侧部和中间部背面;GtH细胞胞质空泡可作为其分泌活动的标志。     

促黄体素释放激素和多巴胺拮抗物对鲇促性腺激素释放的作用

以珠江流域鲇为研究对象，分别在性腺发育早期、性腺发育晚期、性腺发育成熟与产卵前期、性腺退化期注射促黄体素释放激素类似物和多巴胺D2受体拮抗物，处理后6h、12h、24h测定血液中的促性腺激素水平变化。结果表明，在性腺发育的各个时期，促黄体素释放激素类似物和多巴胺D2受体拮抗物联合注射能显著剂激鲇促性腺激素分泌；鲇脑垂体促性腺激素的分泌受下丘脑释放的促性腺素释放激素和多巴胺的双重调节，多巴胺只能抑制促性腺素释放激素诱导的促性腺激素分泌。在建立鲇人工繁殖技术时，可采用促黄体素释放激素类似物和多巴胺D2受体拮抗物联合注射方法。     

17β-雌二醇和甲基睾酮对离体长臀(鱼危)脑垂体促性腺激素分泌的影响

性类固醇激素对性腺发育期间的鱼类促性腺激素(GTH)分泌有负反馈作用,而对性未成熟的鱼类GTH分泌有正反馈作用.本实验选取性腺发育中期的长臀(鱼危)(Cranoglanis bouderius)进行研究,将实验用鱼分成4组(实验重复3次,每组共用6尾鱼,):①持续性17β-雌二醇(17β-Estradiol,E2)处理;②E2在注入促性腺激素释放激素类似物(Analogue of gonadotropin-releasing hormone,GnRH-A)脉冲刺激的处理;③持续性甲基睾酮(17α-methyltestosterone,MT)处理;④MT在注入GnRH-A脉冲刺激的处理;采用离体灌流孵育和GTH放射免疫测定的方法研究E2和MT对长臀(鱼危)脑垂体GTH分泌的影响.持续性的E2(1μmol/L)处理能显著性地抑制长臀(鱼危)脑垂体碎片基础GTH的分泌,而持续性的MT(1μmmol/L)处理能抑制长臀(鱼危)3脑垂体碎片基础GTH的分泌,同时E2和MT处理能抑制GnRH-A刺激的GTH分泌,而高浓度的E2和MT处理(10μmol/L)要比低浓度的E2和MT处理(0.1μmol/L)对长臀(鱼危)脑垂体碎片基础GTH释放抑制能力强.这些结果表明,在离体实验中,E2和MT对性腺发育中期的长臀(鱼危)脑垂体的GTH的分泌具有负反馈的作用,并且可能直接参与了长臀(鱼危)脑垂体的GTH调节.     

17β-雌二醇和甲基睾酮对离体长臀脑垂体促性腺激素分泌的影响

性类固醇激素对性腺发育期间的鱼类促性腺激素(GTH)分泌有负反馈作用,而对性未成熟的鱼类GTH分泌有正反馈作用.本实验选取性腺发育中期的长臀(鱼危)(Cranoglanis bouderius)进行研究,将实验用鱼分成4组(实验重复3次,每组共用6尾鱼,)①持续性17β-雌二醇(17β-Estradiol,E2)处理;②E2在注入促性腺激素释放激素类似物(Analogue of gonadotropin-releasing hormone,GnRH-A)脉冲刺激的处理;③持续性甲基睾酮(17α-methyltestosterone,MT)处理;④MT在注入GnRH-A脉冲刺激的处理;采用离体灌流孵育和GTH放射免疫测定的方法研究E2和MT对长臀(鱼危)脑垂体GTH分泌的影响.持续性的E2(1μmol/L)处理能显著性地抑制长臀(鱼危)脑垂体碎片基础GTH的分泌,而持续性的MT(1μmmol/L)处理能抑制长臀(鱼危)3脑垂体碎片基础GTH的分泌,同时E2和MT处理能抑制GnRH-A刺激的GTH分泌,而高浓度的E2和MT处理(10μmol/L)要比低浓度的E2和MT处理(0.1μmol/L)对长臀(鱼危)脑垂体碎片基础GTH释放抑制能力强.这些结果表明,在离体实验中,E2和MT对性腺发育中期的长臀(鱼危)脑垂体的GTH的分泌具有负反馈的作用,并且可能直接参与了长臀(鱼危)脑垂体的GTH调节.     

17β－雌二醇和甲基睾酮对离体长臀鮠脑垂体促性腺激素分泌的影响

性类固醇激素对性腺发育期间的鱼类促性腺激素(GTH)分泌有负反馈作用，而对性未成熟的鱼类GTH分泌有正反馈作用。本实验选取性腺发育中期的长臀鮠(Cranoglanis bouderius)进行研究，将实验用鱼分成4组(实验重复3次，每组共用6尾鱼，)：①持续性17β-雌二醇(17β-Estradiol，E2)处理；②E2在注入促性腺激素释放激素类似物(Analogue of gonadotropin—releasing hormone，GnRH-A)脉冲刺激的处理；③持续性甲基睾酮(17α-methyltestosterone，MT)处理；④MT在注入GnRH-A脉冲刺激的处理；采用离体灌流孵育和GTH放射免疫测定的方法研究E2和MT对长臀鮠脑垂体GTH分泌的影响。持续性的E2(1μmol／L)处理能显著性地抑制长臀鮠脑垂体碎片基础GTH的分泌，而持续性的MT(1μmmol／L)处理能抑制长臀鮠脑垂体碎片基础GTH的分泌，同时E2和MT处理能抑制GnRH-A刺激的GTH分泌，而高浓度的E2和MT处理(10μmol／L)要比低浓度的E2和MT处理(0．1μmol／L)对长臀鮠脑垂体碎片基础GTH释放抑制能力强。这些结果表明，在离体实验中，E2和MT对性腺发育中期的长臀鮠脑垂体的GTH的分泌具有负反馈的作用，并且可能直接参与了长臀鮠脑垂体的GTH调节。     

雄烯二酮和甲基睾酮诱导雌性日本鳗鲡性腺发育的反馈调节作用

采用间隔15d多次埋植雄激素雄烯二酮(4-androstene-3,17-dine,ADSD)或甲基睾酮(17α-methyl-testosterone,MT)诱导雌性日本鳗鲡(Anguilla japonica)性腺发育成熟;并着重研究埋植雄激素后,雌鳗血清中促性腺激素(GtH)及脑和垂体中哺乳类促性腺激素释放激素(mGnRH)含量的动态变化.一次或多次埋植ADSD后,1～5d的血清GtH含量上升,然后下降;并且,血清GtH含量上升的幅度随埋植次数的增加而增加;对于MT处理组,只在埋植7次后第15天测得血清GtH水平显著高于对照组,但仍显著低于ADSD处理组.这表明埋植ADSD和MT可促进GtH的分泌,但两者促进GtH分泌的作用存在显著差异.埋植ADSD 1d后,脑和垂体中mGnRH含量明显增加,第2天后和对照组无明显差别,表明ADSD促进了mGnRH的合成,并可能有一定程度的释放.研究表明雄激素对性腺未发育成熟的雌性日本鳗鲡在脑和垂体两个水平存在正反馈调节作用.     

各地水产报刊文摘

中山大学研制成功高效新型鱼类催产合剂。合剂由促排卵素2号(LHRH—A)和多巴胺合成抑制剂(RES)组成,用于诱导鱼类人工繁殖。这种催产合剂能有效地促进鱼类GtH 的分泌和诱导排卵,效果比单一使用排卵素2号或人体绒毛膜促进腺激素有明显     

卵巢不同成熟期的白鲢雌鱼脑垂体中促性腺激素含量的动态

当前，激素刺激鱼类性腺机能的方法已广泛用于养鱼实践中。可是，在激素调节鱼类性周期这一方面，虽然有大量新资料，但是性腺激素对各不同发育和成熟时期性细胞的作用机制问题，仍有很多争论。众所周知，鱼类脑垂体的促性腺激素活性与卵巢中发生的性周期过程密切相关。脑垂体激素的积累、     

不同激素对雌性花鳗鲡性体指数和发育过程中促性腺激素基因(GtHα,FSHβ,LHβ)表达的影响

为评估不同激素诱导花鳗鲡卵巢发育的效果并探究促性腺激素在花鳗鲡发育过程中的作用,实验比较了不同激素组合处理后花鳗鲡性体指数(gonadosomatic index,GSI)的变化,并采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对处于不同发育阶段雌鱼脑垂体中促性腺激素基因GtHα(促性腺激素亚基),LHβ(促黄体生成素亚基)及FSHβ(卵泡刺激素亚基)的表达进行了定量研究.结果发现,鲤脑垂体萃取液(CPE)与人类绒毛膜促性腺激素(hCG)组合能够有效促使雌性花鳗鲡性腺发育成熟,GSI平均达22.9％,与对照组相比差异显著.单独注射雄烯二酮(ADSD)和注射ADSD、CPE、hCG混合制剂诱导效果不明显,GSI仅为1％ ～3％.荧光定量发现,经CPE与hCG处理的亲鱼LHβ和GtHα的表达量不断上调,其中发育早期GtHα的表达量极显著升高,而FSHβ的表达量呈现下调趋势.研究表明,CPE与hCG组合注射能够成功诱导花鳗鲡卵巢发育成熟,而ADSD对花鳗鲡卵巢发育无明显促进作用.LH在花鳗鲡卵巢发育整个过程中扮演重要角色;FSH在花鳗鲡性腺发育早期作用显著,可能是诱导鳗鲡性腺早期发育的关键因素.     

养殖鱼类生殖内分泌调控相关功能基因的研究和应用

新型的神经内分泌因子kisspeptin与GnIH(gonadotropin-inhibitory hormone)对哺乳动物的生殖轴起着直接而相反的调控作用,kisspeptin刺激脑垂体促性腺激素(GtH,gonadotropin)的合成与释放,而GnIH抑制GtH的合成与释放。然而,在鱼类中,相关研究甚少。本研究室利用比较基因组学技术,通过同线性分析结合分子生物学手段,在斑马鱼(Danio rerio)、金鱼(Carassius auratus)中克隆得到了kisspeptin(kiss1、kiss2)与GnIH以及它们相关受体的基因cDNA序列。氨基酸序列同源比对结果显示:在脊椎动物中,kisspeptin的核心肽相对保守,而GnIH的核心肽在不同物种中则有较大的差异。比较基因组分析显示kisspeptin与GnIH基因在鱼类、两栖类、鸟类和哺乳类都维持着保守的同线性结构;并且,同线性的结果表明,鱼类kiss1与kiss2基因来源于早期的基因组复制,在漫长的进化过程中,哺乳类丢失了kiss2基因。通过配体受体结合实验,证明2种kisspeptins均能激活其相关受体GPR54(GPR54a、GPR54b),启动下游通路,但却存在一定的配体-受体选择性差异。金鱼、斑马鱼组织表达模式研究显示:kisspeptins与GnIH以及它们相关受体在生殖相关组织或区域(下丘脑、垂体、性腺)均有丰富的表达,提示kisspeptins与GnIH可能参与鱼类的生殖调控。通过化学合成金鱼kisspeptins与GnIH的核心肽,在体注射成熟的雌性金鱼,发现kiss1能显著刺激金鱼LH的分泌,并且能诱导金鱼排卵,而kiss2不能;在高剂量的状况下,GnIH亦能有效抑制金鱼LH的分泌。然而,在离体实验中,2种kisspeptin与GnIH对金鱼垂体细胞LH的分泌均没有显著的影响,提示kisspeptins与GnIH对金鱼的LH调控可能发生于下丘脑水平。以上结果表明:与哺乳动物相类似,在鱼类生殖轴中也存在kisspeptins与GnIH的正负调控系统。本文侧重对这项研究以及相关的研究成果进行归纳与分析,旨为深入探讨鱼类生殖内分泌调控相关功能基因提供参考。     

鱼类促性腺激素抑制激素及其受体的研究进展

促性腺激素抑制激素是2000年由日本学者首次从鹌鹑脑中分离出的一种新型下丘脑神经肽,通过其受体介导参与机体的生长、生殖以及摄食等生理过程。迄今,只在金鱼、斑马鱼、星点东方鲀、罗非鱼以及斜带石斑鱼等几种鱼中鉴定出促性腺激素抑制激素。目前,鱼类促性腺激素抑制激素的生理学功能研究相对较少,且存在争议。鱼类促性腺激素抑制激素及其受体的表达调控以及其他生理学功能仍有待进一步研究。本研究简要总结鱼类促性腺激素抑制激素及其受体的研究进展,并对促性腺激素抑制激素的生理学功能进行概括讨论,旨在加深对鱼类促性腺激素抑制激素的认识和了解,为进一步研究做铺垫。     

促性腺激素释放激素类似物促进鱼类生长激素分泌和生长

采用离体灌流孵育和腹腔注射方法,研究鲑鱼促性腺激素释放激素(GnRH)类似物 sGnRH-A(Arg~6Trp~?Leu~3Pro~?NEt-LHRH)和哺乳类GnRH类似物LHRH-A(Ala~5Pro~?-NEt-LHRH)对鲤鱼脑垂体生长激素(GH)分泌的直接刺激作用以及对草鱼鱼种 GH 分流和生长的促进作用。2分钟脉冲式 sGnRH-A 和 LHRH-A 以剂量依存形式直接刺激离体灌流孵育的鲤鱼脑垂体 GH分泌,且 sGnRH-A 刺激GH 分泌活性显著高于 LHRH-A。腹腔注射两种剂量(0.01μg/g 体重/周和0.001μg/g 体重/周)的 sGnRH-A 或LHRH-A(每周一次,共 6周)都能显著提高草鱼鱼种相对体重和相对体长生长率,并促进草鱼鱼种血清 GH 水平提高。sGnRH-A 和 LHRH-A 促进生长的作用是剂量依存的,且sGnRH-A的促进生长作用显著高于 LHRH-A。     

GnRH及其受体在2种真骨鱼消化系统中存在的免疫细胞化学证据

用链霉亲和素—生物素化过氧化物酶复合物(strept avidin biotin—peroxidase complex，SABC)免疫细胞化学方法，使用促性腺激素释放激素(gonadotropin—releasing hormone，GnRH)，促性腺激素释放激素受体(gonadotropinreleasing hormone receptor，GnRHR)2种抗血清对黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)和鲇(Silurus asotus)的食道、贲门、胃底、幽门、前肠、中肠、后肠和胰中的免疫活性内分泌细胞进行了定位。结果表明：在鲇的食道、胃、肠、肠固有膜、肠肌间神经丛、胰腺和胰岛中均存在着GnRH和GnRHR免疫活性阳性反应；黄颡鱼消化系统中除了在食道和胰岛中未见GnRH和GnRHR的免疫活性阳性反应外，其他部位均有阳性反应，而且GnRH和GnRHR分泌细胞的分布模式相类似。说明胃肠道中GnRH分泌细胞可能以自分泌或旁分泌方式参与消化功能的调节。本研究首次证实在鱼类的消化系统中存在着GnRH及其受体的免疫活性内分泌细胞，可为GnRH功能的多样性等研究领域提供新的形态学依据。