香菇菌粗酶液对猪场雾霾颗粒中菲的作用研究

目的:近5年以来,我国雾霾污染十分严重,猪场也同受其害,雾霾中包括菲等有害物质危害猪和养殖人员的健康;而香菇菌分泌的漆酶等可以降解多种有害物质,因此实验研究香菇菌粗酶液对雾霾中菲的作用,为消除雾霾中菲对人和动物的危害提供借鉴。方法:本实验首先采用L_93~4正交实验,研究流速(0.6 mL/min、0.8 mL/min、1.0 mL/min),波长(210 nm、220 nm、254 nm),柱温(25℃、30℃、40℃),有机相甲醇和水相之比(75:25、70:30、85:15)来确定高效液相色谱仪器检测雾霾中的菲的条件参数。然后采用L_93~4正交实验,研究温度(35℃、40℃、30℃),酶处理时间(10h、20h、30h),pH(4.0、4.4、4.8),加入酶的量(5mL、10mL、15mL)对香菇粗酶液降解雾霾中菲的影响。结果:发现最适条件:温度40℃,pH值4.0,处理时间30 h,加入酶的量10 mL;在此条件下菲含量为0.351846±0.047246 ng/m~3,降解前雾霾样品中的菲含量为108.3298 ng/m~3,降解率达到99.68%。结论:可以用香菇菌粗酶液来降解雾霾中的菲,香菇菌粗酶液可以被开发成为有潜力的解毒剂。     

五种食用菌降解小麦秸秆木质素的比较研究

目的:我国每年小麦秸秆产量达2亿t,其开发利用的难点在于木质素的降解,为了有效开发利用小麦秸秆,实验对云芝等5种食用菌降解小麦秸秆木质素的产酶能力进行研究。方法:用云芝、灵芝、香菇、平菇、鸡腿菇分别降解小麦秸秆,在温度23℃~25℃、湿度58%~60%的最佳条件下扩大培养,离心提取以上5种菌种的粗酶液,采用考马斯亮蓝法、用分光光度法等对粗酶液的蛋白质含量和酶活性质进行研究。结果:得到线性方程Y=6.659X+0.3312,相关系数R~2=0.9904,发现5种菌种在培养的过程中蛋白质含量逐渐增加,且在第10天含量都趋于稳定。云芝产锰过氧化物酶(MnP)和漆酶(Lac)效果最佳,第7天时,MnP的酶活最高为313330U/L,Lac的酶活最高为2230U/L。结论:可以用云芝菌的高效产MnP和Lac能力,开发利用小麦秸秆木质素资源。     

复合酶法提取石花菜粗多糖工艺的响应面优化

为优化复合酶法[m (木瓜蛋白酶)∶m (纤维素酶)=2∶1]提取石花菜(Gelidium amansii)粗多糖的工艺条件,在单因素实验基础上进行三因素三水平的Box-Benhnken中心组合实验,并根据回归分析确定石花菜粗多糖的复合酶法最佳提取工艺为复合酶添加量2.30%、酶解温度60.43℃、料液比1∶32 (g·mL-1)。在此条件下酶解120 min,石花菜粗多糖的提取率可达15.98%。     

斜带石斑鱼消化道乳酸菌在模拟胃肠道环境中的存活

从斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)幼鱼消化道分离到3株乳酸菌,通过抑菌试验筛选出抑菌效果较好的2株菌(MM1和MM4),经生理生化鉴定结合16SrRNA基因测序分析,MM1菌株鉴定为乳酸乳球菌(Lactococcus lactis),MM4菌株鉴定为屎肠球菌(Enterococcus faecium)。进一步研究了MM1和MM4的体外生长特性,及其对不同pH值的人工胃液、含有不同浓度胆盐的人工肠液及高温的耐受能力。结果表明,MM1和MM4均在培养6h左右进入对数生长期。对人工胃液的耐受能力相似,pH4.0和3.0的人工胃液对2株菌存活的影响较小,而pH2.0的人工胃液对2株菌的影响较大,经2h处理后两者的存活数即下降到105CFU/mL,经4h处理后的存活数低于5.0×103CFU/mL。MM1和MM4对含不同浓度胆盐的人工肠液均具有较好的耐受能力,含中低浓度胆盐(0.1%～0.3%)的人工肠液对2株菌的存活影响很小,处理3h后2株菌的存活数均维持在107CFU/mL以上;高浓度胆盐(0.5%～0.7%)处理3h后2株菌的存活数明显下降,但活菌数仍维持在105CFU/mL以上。MM1和MM4具有一定的耐高温能力,60℃处理30min二者存活数在107CFU/mL以上;80℃处理30min二者存活数在106CFU/mL以上。结论认为,2株乳酸菌具有生长速度快、抑菌能力强、对胃肠道环境和高温耐受能力较强的特点,具有作为益生菌的应用潜力。     

海洋低温蛋白酶生产菌YS-9412-130原生质体的制备与再生

以海洋低温蛋白酶生产菌株YS-9412-130为研究对象，从传代、菌龄、溶菌酶浓度与酶解时间、甘氨酸与EDTA预处理以及稳定剂对该菌原生质体形成与再生的影响进行研究。结果表明，在相同条件下，第一代菌至第五代菌原生质体的形成率分别为86．9％、70．3％、66．8％、63．4％、60．2％，再生率分别为10．5％、18．6％、17．9％、18．2％、17．8％；取该菌对数生长前期、对数生长中后期、稳定期部分菌液制备原生质体，原生质体的形成率分别为72．1％、70．4％、60．5％，再生率为13．4％、18．9％、10．4％；溶菌酶浓度为2．5mg／mL、5mg／mL、10mg／mL、20mg／mL，酶解60min，原生质体的形成率分别为40．6％、70．8％、81．8％、95．6％，原生质体的再生率为19．0％、19．2％、19．0％、10．6％；使用10mg／mL溶菌酶酶解YS-9412-130菌30min、60min、90min、120min，原生质体的形成率分别为30．8％、81．3％、81．7％、82．9％，原生质体的再生率分别为19．2％、19．3％、16．9％、11．2％；在细菌培养液中添加终质量浓度为5mg／mL、10mg／mL、20mg／mL和40mg／mL的甘氨酸，培养该菌16h后制备原生质体，原生质体的形成率分别为81．0％、81．1％、90．3％、90．8％、90．6％，再生率为19．1％、19．0％、19．3％、12．0％、9．0％；EDTA对原生质体的形成稍有促进作用，但作用超过30min会影响原生质体的再生；分别以0．6mol／L Kcl、0．3mol／L KCl＋0．3mol／L蔗糖、0．6mol／L蔗糖作为稳定剂，原生质体的再生率分别为10．9％、19．6％、25．9％。结论认为，YS-9412-130原生质体制备的最佳条件为选用第2代YS-9412-130菌，在培养基中添加终质度浓度为10mg／mL的甘氨酸培养16h后，再将菌体置于含有0．05mol／LEDTA的高渗溶液中30℃预处理30min，用10mg／mL溶菌酶，30℃酶解60min，再用0．6mol／L蔗糖作为原生质体再生培养稳定剂，比较适合于YS-9412-130原生质体的制备与再生。这一试验结果将为通过原生质体技术对YS-9412-130菌进行遗传改良提供重要参数。     

鳕鱼下颌肉水解蛋白制备工艺优化

通过单因素实验(蛋白酶种类、加酶量、料液比、水解时间、温度和pH值),对鳕鱼下颌肉进行酶解分析,以水解度(DH)为指标,确定最适蛋白酶为复合风味蛋白酶,其单因子最佳水解条件为:加酶量为1 400 U/g(相对于鱼糜质量)、料液比为1:3、水解时间为5 h、温度为43℃、pH 7.6。经正交试验验证,复合风味蛋白酶的最佳酶解工艺条件为:pH7.0,料液比1∶2,加酶量为1 400 U/g,水解8 h,DH可达42.62%。     

海洋酶法利用海产品下脚料制取活性胶原肽的研究

以富含胶原成分的海产品下脚料为原料,经脱除杂蛋白、脂肪后,用海洋碱性蛋白酶水解,以Feton法检测水解产物的羟自由基清除率,提取具有抗氧化活性的胶原肽。通过温度T(℃),pH值,酶料比([E]∶[S]),料水比([S]∶[W]),时间(min)单因素实验,选取合理水平,做L18(37)正交实验,最终优化得到最佳提取条件为:温度45℃、酶料比1∶150、pH8·0、料水比1∶4、反应30min,所得胶原肽的羟自由基清除率为60·42%。与同浓度Vc、谷胱甘肽(GSH)相比,均具有较高的抗氧化活性,有着良好的开发应用前景。     

草鱼肠道-菌株产纤维素酶的分离纯化及性质研究

从草鱼肠道分离出1株枯草芽孢杆菌,有较强的活性.该菌产生的纤维素酶粗酶液,经盐析、透析,并通过葡聚糖凝胶层析柱Sephadex G-75分离纯化,经SDS-PAGE后表明第2峰已纯化,得到一种相对分子质量约为62.43 kD纤维素酶.分离纯化后该酶的比活力提高了2.924倍,回收率为6.38%.酶学试验研究表明:该酶的最适反应温度为55℃,最适pH值为7.0;Lineweaver-Burk法求得动力学参数,Km和Bmax分别为1.02×10-3g/mL、2.727×10-2mg/(mL·min).     

哈氏弧菌胞外产物对红鳍东方鲀的致病性

采用平板玻璃纸覆盖技术提取哈氏弧菌(Vibrio harveyi)H-06091菌株的胞外产物(ECP),通过肌肉和腹腔注射2种方式研究其对红鳍东方鲀(Fugu obscurus)的致病性。采用双层纸片法对其主要酶成份进行初步研究;测定其对绵羊红细胞和红鳍东方鲀红细胞的溶血活性;将哈氏弧菌在不同温度下(15℃、20℃、25℃、30℃、35℃、40℃)培养36h和25℃下培养不同时间(12h、18h、24h、36h、48h、60h、72h)后提取其胞外产物并对其蛋白质含量进行测定;经SDS-PAGE分离粗提胞外产物中蛋白成分,并用Dot-ELISA和Western-blot方法对其成分进行分析。实验结果显示,该胞外产物对红鳍东方鲀具有致病性;具有淀粉酶和酪蛋白酶活性,不具有卵磷脂酶、脂肪酶和明胶酶活性;对红鳍东方鲀红细胞有溶血活性,对绵羊红细胞无溶血活性;胞外产物蛋白质总含量在35℃培养36h后出现高值,与温度变化无明显相关性;25℃下培养24h、36h和48h的粗提胞外产物经SDS-PAGE分离,有3条蛋白质条带最明显,分子量分别约为31kD、38kD、60kD;其中分子量约为60kD蛋白条带,经Dot-ELISA和Western-blot方法证实其为半胱氨酸蛋白酶-1。根据以上结果认为哈氏弧菌H-06091菌株胞外产物含有多种毒力因子,与该菌的致病性密切相关。     

驼海燕内脏中蛋白酶的提取及其酶学性质的研究

以驼海燕为原料,用丙酮沉淀法制备蛋白酶粗酶,并对其酶学性质进行研究。试验结果表明,提取蛋白粗酶的最佳条件为:原酶液与丙酮的体积比为1∶1.6;蛋白酶反应的最适温度为45℃,最适pH值为8.1;pH为7～9时可保持较高的酶活力;蛋白酶的酶活力在20～50℃基本稳定。酶促反应结果表明,Na+、K+、Li+、Mg2+对蛋白酶活力具有促进作用,而Zn2+、Cu2+、Hg2+能抑制蛋白酶的活力,EDTA对蛋白酶活力的影响甚微。酶动力学方程表明,最大反应速度vmax=5.99U/mL,米氏常数Km=0.69g/mL。     

复合酶提取牡蛎抗氧化肽的工艺研究

以牡蛎为原料,首先从木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶中筛选出胰蛋白酶为内切酶,以水解度为指标,得到最佳的酶解工艺条件:时间4h,温度50℃,pH8.0,料水比1∶2,加酶量3％(7 500 U/g),水解度为49.50％;同时以水解度为指标,得到外切酶风味蛋白酶的最佳酶解工艺:时间5h,温度50℃,pH8.0,料水比1∶2,加酶量3％ (450 U/g),实际水解度50.95％.最后,以清除羟自由基能力和水解度为指标,探讨内切酶(胰蛋白酶)和外切酶(风味蛋白酶)不同复合酶解方式的抗氧化能力.最终确定,复合酶解制备牡蛎抗氧化肽效果最好,其酶解条件为胰蛋白酶为3％(7 500 U/g)、风味蛋白酶加酶量为3％ (450 U/g),pH8.0,时间5h,料水比1∶2,温度50℃时,水解度高达53.94％,体外清除·OH的EC50为0.56 mg/mL.     

1株亚硝酸盐降解菌的筛选、鉴定、降解条件及效果

从养殖水体中筛选出1株对哑硝酸盐具有高效降解能力、增殖速度快、稳定和安全的优良菌株,经细菌学常规榆测和16S rRNA序列分析确定为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium,),并命名为SZ-3.对SZ-3菌株降解条件的单因素实验发现,其最佳降解条件是:pH 7.0,温度33℃,降解所需的最低葡萄糖含量为0.01 mg/L,在24 h内对亚硝酸盐的降解率达69.58%.在哑硝酸盐质量浓度为5 mg/L的100 L污染水体养殖实验中,添加1 000 mL,含量为1×108 CFU/mL的SZ-3培养菌液离心后的纯菌体,在28℃的水温条件下经96 h,SZ-3菌株对亚硝酸盐的降解率可达91.78%.表明该菌株对污染水体中的亚硝酸盐具有较强的降解效果.本研究旨在为研发高效实用的降解亚硝酸盐微生态活性菌奠定基础.     

产β-1,3-葡聚糖酶海洋细菌的筛选及其酶学性质研究

依据从海水中分离、筛选得到的β-1,3葡聚糖酶活较高的菌株SY-3之形态、生理及生化特性,初步鉴定为气单胞菌.该菌发酵产生的粗酶液经过硫酸铵沉淀、透析除盐后,对其酶学性质进行了初步研究.经测定,SY-3所产β-1,3葡聚糖酶的最适作用温度、pH分别为30 ℃、7.5.通过Lineweaver-Burk做图,得到其米氏常数(Km)为1.21 mg/ml.K+、Na+和Ca2+对酶促反应有促进作用,而Mg2+、Mn2+、Cu2+和Zn2+等有不同程度的抑制作用.     

甲壳低聚糖酶法制备工艺的优化

为制备具有较好水溶性和生理活性的甲壳低聚糖,本实验选用纤维素酶对壳聚糖进行降解,以还原糖浓度作为衡量降解效果的指标,通过单因素实验和正交实验优化酶解制备工艺,获得最佳酶解条件为:酶浓度1600U/g、温度55℃、反应时间7h、pH值5.4,在该条件下获得的酶解产物还原糖浓度为2.52mmol/L。得到的酶解液通过超滤分离,获得分子量小于10KDa的甲壳低聚糖,其产率达到69.51%。     

酶法由罗非鱼加工废弃物制取调味料的研究

为了解决大量的罗非鱼加工废弃物的出路,采用酶技术将罗非鱼加工废弃物进行酶解,制备营养型高档调味料。通过正交试验,确定了以菠萝酶和Flavourzyme混合水解,其最适条件为:固液比1∶1,自然pH,50℃下,菠萝酶(酶活力6·8万U·g-1)加入量为2250U·g-1,水解3h,再加入Flavourzyme(酶活力0·37万U·g-1),加入量为750U·g-1水解2h,水解度达到80%。将酶解液30%与淀粉6·5%,黄原胶0·2%、老抽酱油8%等辅料相调配,制成风味独特,高附加值的新型营养调味料。     

溶壁酶体外抗同丝水霉活性研究

为探究溶壁酶对水产动物水霉病的预防和治疗效果,以同丝水霉(Saprolegnia monoica)为研究对象,溶壁酶设0、5、10、20、40、80 mg/m L共计6个浓度处理组,取浓度为103个/m L的水霉孢子菌悬液0.1 m L,涂布于不同溶壁酶浓度的马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)上,25℃培养5 d,以最低抑菌浓度为判定指标,研究溶壁酶溶解同丝水霉孢子的抑菌活性;在此基础上,以溶壁酶最低抑菌浓度30℃分别水浴2 h和4 h处理同丝水霉菌丝块,PDA培养基上25℃培养5 d,通过用体外抑菌试验、菌丝显微结构观察等方法,研究溶壁酶最低抑菌浓度对同丝水霉菌丝的抑菌活性,为进一步开发水产动物抗真菌(替代孔雀石绿)药物提供科学依据。结果显示,溶壁酶对同丝水霉孢子的最低抑菌浓度为20 mg/m L,通过间隔添加溶壁酶该浓度,72 h能够有效抑制同丝水霉菌丝的生长;溶壁酶30℃水浴处理同丝水霉菌丝块的时间(2 h和4 h)与溶壁酶溶解菌丝效果呈正相关。     

微波辅助萃取生姜中的有效成分及其抑菌作用研究

本实验以生姜为原料,先用乙醚、正己烷、乙酸、乙酸乙脂、丙酮、乙醇为供试溶剂,确定了乙醇为生姜提取的最佳溶剂。分别以40%、50%、60%、70%、80%的乙醇进行了单因素实验,确定了70%乙醇为最佳提取浓度;再以功率为160w、320w、640w的微波,固液比为1∶10、1∶13、1∶16,对生姜进行150s、180s、210s的辐射处理。所进行的正交实验表明:生姜提取的最佳工艺条件分别为:乙醇浓度70%、微波功率320w、固液比1∶16、提取时间180s。所得生姜提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母和黑曲霉的抑菌实验表明:供试菌的抑菌圈分别为:金黄色葡萄球菌12.3mm、大肠杆菌11.7mm、枯草芽孢杆菌12.1mm、酿酒酵母13.5mm、黑曲霉15.2mm,生姜提取物对供试菌的抑菌效果依次为:黑曲霉>酿酒酵母>枯草芽孢杆菌>金黄色葡萄球菌>大肠杆菌。得到各种供试菌的最低抑菌浓度分别为:金黄色葡萄球菌10.938mg/mL、大肠杆菌43.75mg/mL、枯草杆菌43.75mg/mL、酿酒酵母菌5.469mg/mL、黑曲霉为2.734mg/mL。     

欧洲鳗鲡淋巴细胞转化试验条件的建立

通过对培养时间、培养温度、刀豆蛋白A(ConA)质量浓度和鳗鲡血清质量分数4个参数的测定,确定欧洲鳗鲡(Anguilla anguilla)外周血淋巴细胞转化试验四甲基偶氮唑(MTT)法的实验条件。结果表明,在培养时间为42-90 h,培养温度分别为15.0℃、20.0℃、25.0℃和30.0℃时,细胞培养液中ConA质量浓度分别为0、10μg/mL、20μg/mL和30μg/mL,鳗鲡血清质量分数分别为0、5%、10%和15%时,淋巴细胞于20.0℃、含10μg/mL ConA,10%鳗鲡血清的RPMI1640细胞培养液中培养66 h后可获得最好的淋巴细胞转化效果。方差分析结果显示,4个因素中仅鳗鲡血清水平对淋巴细胞转化试验OD值具有极显著影响(P<0.01),而温度、时间和ConA对其影响均不显著(P>0.05)。本研究建立的鳗鲡外周血淋巴细胞转化试验条件为鳗鲡的细胞免疫建立了研究方法。     

一株溴氰菊酯降解菌的分离鉴定及降解特性研究

为建立有效地去除淡水养殖环境中溴氰菊酯残留的微生物修复技术,通过采集长期受菊酯类农药污染土壤样品,以溴氰菊酯为唯一碳源配制基础盐培养基对土样进行富集培养,筛选分离出1株溴氰菊酯降解菌(SW),根据形态、生理生化分析及16S rRNA序列分析,将其鉴定为多食鞘氨醇杆菌(Sphingobacterium multivorum)。通过改变温度、pH、接种量、药物初始浓度等外部条件研究菌株最适降解条件。结果显示:在pH为7的基础盐培养基中,30℃、180 r/min摇床培养120 h,SW对1.0 mg/L溴氰菊酯的降解率达76.4%。溴氰菊酯可作为该菌生长的唯一碳源。SW降解溴氰菊酯的最优条件为30℃、pH 6.0、接种量4%。在溴氰菊酯浓度为0.1、0.5和1.0 mg/L时,降解过程基本符合一级动力学方程模型,降解半衰期(T_(1/2))分别为4.5、2.3和2.0 d。生物修复试验中SW对养殖淡水中0.5、5.0和50μg/L溴氰菊酯作用5 d后的降解率为21.6%,26.4%和53.8%。     

草鱼肠道、肝胰脏对饲料蛋白质酶解速度的比较

草鱼样品体重(1543±213)g。采用离体消化培养和茚三酮比色方法,以草鱼前肠、中肠、后肠和肝胰脏的粗酶液作为酶源,对鱼粉、豆粕、菜粕和棉粕进行酶解,并测定酶解14h内,豆粕酶解液中氨基酸生成量随时间的变化,以及0至4h,内4种饲料蛋白质酶解液中氨基酸的生成量。结果表明,(1)在0至4h内,4种饲料酶解液OD570随时间变化的线性关系较好。(2)对于同种蛋白质饲料原料,以中肠组织粗酶液的酶解速度最大,其余依次为前肠、后肠及肝胰脏粗酶液。表明草鱼中肠对饲料蛋白质的酶解能力强于前肠和后肠,同时,肠道酶液的酶解速度均大于肝胰脏。(3)对于4种不同的蛋白质饲料原料,以鱼粉酶解氨基酸生成速度最大,其他依次为豆粕、菜粕、棉粕。(4)草鱼肝胰脏粗酶液对豆粕的酶解氨基酸生成速度最大,表明草鱼对豆粕进行酶解消化的能力较强。实验证实,饲料原料种类的差异和饲料蛋白质组成与性质的差异使其酶解氨基酸生成量和生成速度有差异。